DB43T-漁業(yè)水體中無機硒形態(tài)分析 液相色譜-原子熒光聯(lián)用法

Q/LB.□XXXXX-XXXXDB43/TXXXX—2025目次TOC\o"1-1"\h前言 II1范圍 12規(guī)范性引用文件 13術(shù)語和定義 14方法原理 15試劑與材料 16儀器與設(shè)備 27樣品 38測定步驟 49結(jié)果計算和表述 410檢測方法的靈敏度、準(zhǔn)確度和精密度 4附錄A無機硒標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖 5前言本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機構(gòu)不承擔(dān)識別專利的責(zé)任。本文件由湖南省農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳提出。本文件由湖南省農(nóng)業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會歸口。本文件起草單位：湖南省水產(chǎn)研究所（湖南省水產(chǎn)原種場）、農(nóng)業(yè)農(nóng)村部漁業(yè)產(chǎn)品質(zhì)量檢驗測試中心（長沙）、北京吉天儀器有限公司。本文件主要起草人：雷琴、索紋紋、謝玉昆、萬譯文、李小玲、黃華偉、楊霄、許燦、尹升福、洪波、劉伶俐、陳湘藝、何詠、曾春芳。漁業(yè)水體中無機硒形態(tài)分析液相色譜-原子熒光聯(lián)用法范圍本文件描述了漁業(yè)水體中無機硒形態(tài)分析的液相色譜—原子熒光聯(lián)用的測定方法。本文件適用于漁業(yè)水體中無機硒[四價硒Se（IV）、六價硒Se（VI）]的測定。規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法SC/T9102.3漁業(yè)生態(tài)環(huán)境監(jiān)測規(guī)范第3部分：淡水術(shù)語和定義本文件沒有需要界定的術(shù)語和定義。方法原理水試樣中的無機硒經(jīng)磷酸二氫鉀—硫酸銅溶液浸提后，使用C18反相色譜柱分離，色譜流出液進入在線紫外消解系統(tǒng)，在紫外燈照射下Se(VI)與I-發(fā)生電子轉(zhuǎn)移現(xiàn)象，被還原為Se(IV)。在酸性環(huán)境中Se(IV)與硼氫化鉀在線反應(yīng)，生成硒化氫(H?Se)，由載氣(氬氣)帶入原子化器中進行原子化，在硒空心陰極燈的發(fā)射光激發(fā)下產(chǎn)生原子熒光，其熒光強度在固定條件下與被測溶液中的硒濃度成正比，與標(biāo)準(zhǔn)樣品比較，以保留時間定性，外標(biāo)法定量。試劑與材料除非另有說明，本方法所用試劑均為優(yōu)級純，水為GB/T6682規(guī)定的一級水。試劑磷酸二氫鉀（KH2PO4）：分析純。磷酸氫二銨（(NH4)2HPO4）：分析純。五水硫酸銅（CuSO4·5H2O）：分析純四丁基溴化銨（TBAB，C16H36BrN）。碘化鉀（KI）。氫氧化鉀（KOH）。硼氫化鉀（KBH4）。甲酸（HCOOH）。鹽酸（HCl）。甲醇（CH3OH）：色譜純。氬氣：純度≥99.99%。溶液配制5.2.1浸提液0.1mol/L磷酸二氫鉀溶液+1.56mmol/L的硫酸銅溶液：稱取13.61g磷酸二氫鉀，用少量水溶解后，再加入65mg五水硫酸銅，溶解后用純水定容至1000mL。配制后4℃保存≤7天，避免Cu2?氧化生成Cu(OH)?沉淀。5.2.2流動相2%甲醇+30mmol/L磷酸氫二銨+0.5mmol/L四丁基溴化銨溶液(pH=6.0)：稱取3.9618g磷酸氫二銨、0.1612g四丁基溴化銨，溶于水中，加入20mL甲醇，用水定容至1000mL，之后用甲酸調(diào)節(jié)pH=6.0,0.45μm濾膜(水相)過濾，臨用前超聲脫氣。5.2.3還原劑0.5%氫氧化鉀溶液+2%硼氫化鉀+0.2%碘化鉀：稱取5g氫氧化鉀、20g硼氫化鉀、2g碘化鉀，用水溶解并定容至1000mL?，F(xiàn)配現(xiàn)用。5.2.4載流10%鹽酸溶液：量取100mL鹽酸，用水定容至1000mL。需在使用前配制。標(biāo)準(zhǔn)品5.3.1Se（IV）標(biāo)準(zhǔn)溶液：亞硒酸根標(biāo)準(zhǔn)溶液（GBW10032），濃度為42.86μg/mL（以硒計）。5.3.2Se（VI）標(biāo)準(zhǔn)溶液：硒酸根標(biāo)準(zhǔn)溶液（GBW10033），濃度為41.5μg/mL（以硒計）。標(biāo)準(zhǔn)溶液配制無機硒混合標(biāo)準(zhǔn)使用液（1μg/mL）：準(zhǔn)確稱取0.2331gSe（IV）標(biāo)準(zhǔn)溶液（5.3.1）、0.2409gSe（VI）（5.3.2）標(biāo)準(zhǔn)溶液于10mL聚丙烯容量瓶中，用水稀釋定容，配制成濃度為1μg/mL的無機硒混合標(biāo)準(zhǔn)使用液。4℃以下避光保存，有效期1個月。材料容量瓶：10mL，聚丙烯材質(zhì)。樣品瓶：500mL，聚丙烯材質(zhì)。離心管：10mL，聚丙烯材質(zhì)。進樣瓶：2mL，聚丙烯材質(zhì)。儀器與設(shè)備注：實驗中所用玻璃儀器均需以硝酸(1+4)浸泡過夜，用水反復(fù)沖洗，最后用去離子水沖冼干凈。液相色譜-原子熒光聯(lián)用儀（LC-AFS）：由液相色譜儀（包括液相色譜泵和進樣閥）與原子熒光光譜儀組成。分析天平：感量0.01g和0.00001g。高速離心機：轉(zhuǎn)速≥8000r/min。電熱板。超級恒溫混勻儀。pH計：精度為0.01。針筒式過濾器：5mL。濾膜:0.45μm。樣品樣品采集水樣按照SC/T9102.3規(guī)定的方法進行采集。試樣制備水樣采樣量應(yīng)不少于500mL，置于樣品瓶中，0℃～4℃避光保存?？瞻自嚇又苽溥x取不含無機硒的同類樣品，按照7.2進行制備。測定步驟試樣前處理準(zhǔn)確吸取試樣30mL(精確到0.01mL)于100mL短頸小燒杯中，在150℃左右加熱濃縮至1mL以下，轉(zhuǎn)入10mL離心管中，用浸提液(5.2.1)定容至5mL，在超級恒溫混勻儀上于70℃、1500r/min條件下振蕩浸提30min后，3000r/min離心10min,用0.45μm濾膜(水相)過濾，濾液裝入聚丙烯進樣瓶待測。浸提液體積按5mL計算。按同一操作方法作空白實驗。儀器參考條件液相色譜參考條件液相色譜參考條件如下：色譜柱：C18分析柱（250mm×4.6mm，粒徑5μm），或性能相當(dāng)者；C18預(yù)柱（4.0mm×20mm，粒徑5μm），或性能相當(dāng)者；等度洗脫流動相：2%甲醇+30mmol/L磷酸氫二銨+0.5mmol/L四丁基溴化銨溶液(pH=6.0)，流動相流速1.0mL/min；進樣量：100μL；柱溫：20℃。原子熒光檢測參考條件原子熒光檢測參條件如下：負(fù)高壓：300V；硒燈電流：主電流100mA、輔助電流50mA；原子化方式：火焰原子化；載液：10%鹽酸溶液；還原劑：0.5%氫氧化鉀溶液+2%硼氫化鉀+1%碘化鉀；氧化劑：水；爐高：8mm；載氣流速：500mL/min；屏蔽氣流速：800mL/min；標(biāo)準(zhǔn)曲線制作取7支10mL容量瓶，分別準(zhǔn)確加入1μg/mL混合標(biāo)準(zhǔn)使用液0.00mL、0.03mL、0.050mL、0.10mL、0.20mL、0.40mL、0.60mL、0.80mL、1.0mL，加水稀釋至刻度，配制成濃度分別為0.0ng/mL、3.0ng/mL、5.0ng/mL、10ng/mL、20ng/mL、40ng/mL、60ng/mL、80ng/mL、100ng/mL的標(biāo)準(zhǔn)系列溶液。吸取標(biāo)準(zhǔn)系列溶液100μL注入液相色譜—原子熒光聯(lián)用儀進行分析，得到色譜圖，以保留時間定性。以標(biāo)準(zhǔn)溶液系列溶液中目標(biāo)化合物的濃度為橫坐標(biāo)，色譜峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖見附錄A中的圖A.1。試樣溶液的測定吸取試樣溶液100μL注入液相色譜-原子熒光光譜聯(lián)用儀中，得到色譜圖，以保留時間定性，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線得到試樣溶液中Se（IV）與Se（VI）含量，平行測定次數(shù)不少于2次。結(jié)果計算和表述按式（1）計算試樣中無機硒的含量； X=(C?C0)×V1式中：X——試樣中無機硒的含量，單位為毫克每升（mg/L）；C——從標(biāo)準(zhǔn)工作曲線得到的待測物溶液濃度，單位為微克每升（μg/L）；C0——空白溶液中無機硒的質(zhì)量濃度，單位為（μg/L）；V1——試樣提取液體積，單位毫升（mL）；V2——試樣移取液體積，單位毫升（mL）；1000——換算系數(shù)?？偀o機硒含量等于Se（IV）含量與Se（VI）含量的加和。當(dāng)無機硒含量≥1.00mg/L時，計算結(jié)果保留三位有效數(shù)字，當(dāng)無機硒含量<1.00mg/L時，計算結(jié)果保留兩位有效數(shù)字。檢測方法的靈敏度、準(zhǔn)確度和精密度靈敏度本方法Se(IV)檢出限為