枸杞多糖檢測(cè)方法科研申報(bào)

2010年研究生《科研項(xiàng)目申報(bào)技巧與途徑》選修課考試題學(xué)號(hào)：200930130439姓名：王暢所屬班級(jí)：英語(yǔ)六班所屬專業(yè)：藥物分析入學(xué)年份：2009導(dǎo)師姓名：於洪建一、課題名稱：枸杞多糖質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究二、關(guān)鍵詞：枸杞多糖;指紋圖譜;高效液相色譜法;柱前衍生化中文摘要：枸杞多糖的單糖組成測(cè)定是控制枸杞多糖質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)和提供多糖基本信息的最重要環(huán)節(jié)。本實(shí)驗(yàn)因單糖存在互變異構(gòu)體、差向異構(gòu)體、結(jié)構(gòu)相似等特征,而且往往同一待測(cè)樣品,如多糖、寡糖、糖肽、糖蛋白等,可能含有許多類型的單糖。所以采用PMP柱前衍生化反相高效液相色譜(HPLC)法,通過(guò)梯度洗脫建立了9種常見(jiàn)單糖的分離模式做對(duì)照,并將95%純度的枸杞多糖水解用同樣的衍生化成功地分離枸杞多糖的單糖組成分,分離效果好，具有良好的重復(fù)性。結(jié)果表明枸杞多糖由甘露糖、鼠李糖、葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖及阿拉伯糖7種單糖組成,摩爾比為2.05∶1.20∶1∶0.90∶0.85∶0.38。該HPLC方法是簡(jiǎn)單，快速，靈敏，方便的分析技術(shù),可用于枸杞多糖的質(zhì)量控制。課題立項(xiàng)依據(jù)：1.枸杞多糖單糖組分復(fù)雜枸杞多糖（Lyciumbarbarumpolysaccharide）簡(jiǎn)稱LBP，是茄科植物枸杞的活性成份之一，由雜多糖的糖鏈與蛋白質(zhì)的肽鏈以共價(jià)鍵的形式結(jié)合的含肽糖類，是天然存在的大分子物質(zhì)[1-3]。因?yàn)榻M成多糖的單糖品種繁多，而且即使只有一種單糖組成的多糖，因其連接方式的不同并可能有分支，也有可能得到結(jié)構(gòu)很復(fù)雜的多糖，所以多糖結(jié)構(gòu)分析比蛋白質(zhì)或核酸要復(fù)雜得多。此外，由于多糖結(jié)構(gòu)的微觀不均一性，或分子量發(fā)散，使多糖結(jié)構(gòu)分析很難得出完全準(zhǔn)確的結(jié)構(gòu)式。多糖結(jié)構(gòu)的分析包括單糖組成[4-5]，單糖間的連接方式、糖苷鍵構(gòu)型、分支位點(diǎn)及分支數(shù)目，最終確定其重復(fù)結(jié)構(gòu)單元。多糖結(jié)構(gòu)分析的手段分為物理手段、化學(xué)降解法、酶降解和免疫化學(xué)法等。其中物理手段有IR、NMR和MS等；化學(xué)降解法有完全酸水解、部分酸水解和氧化性裂解等。但由于多糖結(jié)構(gòu)的復(fù)雜性，目前還沒(méi)有一種方法可以單獨(dú)完成其結(jié)構(gòu)分析，必須將多種方法結(jié)合使用[6-8]。儀器分析法是在化學(xué)分析法的基礎(chǔ)上更進(jìn)一步地了解和研究多糖的結(jié)構(gòu)特性。與化學(xué)分析法相比，儀器分析法具有快速、準(zhǔn)確、靈敏和操作方便等優(yōu)點(diǎn)，是糖鏈分析不可缺少的手段。目前，在此方面應(yīng)用較多的有UV、HPLC、IR、GC、MS、NMR及電泳等。這些現(xiàn)代分析技術(shù)的出現(xiàn)和發(fā)展以及儀器的聯(lián)用，大大促進(jìn)了糖鏈結(jié)構(gòu)研究工作的發(fā)展。制定統(tǒng)一的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)需要結(jié)合枸杞多糖本身的實(shí)際特點(diǎn)才能得以實(shí)施，從而保護(hù)消費(fèi)者的權(quán)益。2.多糖的生物活性近年來(lái)，在對(duì)免疫物質(zhì)以及新藥物資源的研究過(guò)程中，人們發(fā)現(xiàn)糖類參與了生命科學(xué)中細(xì)胞的各種活動(dòng)，具有多種多樣的生物學(xué)功能。枸杞多糖及其綴合物對(duì)多種危害人類健康的疾病，如免疫紊亂、肝炎、高血壓、癌癥、糖尿病、血栓等，都具有顯著的療效[9-10],其中最引人注目的是它們的免疫修飾和抗腫瘤活性。多糖還具有抗輻射、抗衰老、抗凝血等功效。因此，枸杞多糖的研究與開(kāi)發(fā)已日益引人注目。3.枸杞多糖的研究意義目前糖生物學(xué)及糖工程己成為繼基因工程和蛋白質(zhì)工程之后的第三大生工程，是當(dāng)今最前沿的生物學(xué)科之一[11-13]。由于多糖多種多樣的生物活性以及在保健和疾病治療領(lǐng)域的廣泛使用，使多糖生物資源的開(kāi)發(fā)利用和研究日益活躍，成為天然藥物、生物化學(xué)和生命科學(xué)等的研究熱點(diǎn)。到目前為止，已有300多種多糖類化合物從天然產(chǎn)物中被分離出來(lái)[14]。4.國(guó)內(nèi)外枸杞多糖的研究現(xiàn)狀我國(guó)近年來(lái)對(duì)枸杞多糖藥物活性已有廣泛報(bào)道，例如：報(bào)道枸杞多糖有降血糖，抗衰老、抗病毒、抗遺傳損傷、抗腫瘤、抗放射、抗突變、等藥物活性，但弄清結(jié)構(gòu)說(shuō)明構(gòu)效關(guān)系尚少見(jiàn)，由于產(chǎn)地的不同全國(guó)范圍內(nèi)還沒(méi)有報(bào)道過(guò)枸杞多糖質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究，特別是枸杞多糖的HPLC指紋圖譜。中草藥作為藥物開(kāi)發(fā)及理論研究，我國(guó)已落后于