高考生物真題分項(xiàng)匯編 專題19 發(fā)酵工程-：五年（2019-2023）高考生物真題分項(xiàng)匯編（全國(guó)）（解析版）

專題19發(fā)酵工程考點(diǎn)1微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用〖2023年高考真題〗1．（2023·北京·統(tǒng)考高考真題）高中生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中，下列實(shí)驗(yàn)操作能達(dá)成所述目標(biāo)的是（）A．用高濃度蔗糖溶液處理成熟植物細(xì)胞觀察質(zhì)壁分離B．向泡菜壇蓋邊沿的水槽中注滿水形成內(nèi)部無(wú)菌環(huán)境C．在目標(biāo)個(gè)體集中分布的區(qū)域劃定樣方調(diào)查種群密度D．對(duì)外植體進(jìn)行消毒以杜絕接種過(guò)程中的微生物污染【答案】A【詳解】A、成熟的植物細(xì)胞有中央大液泡，用高濃度蔗糖溶液處理，細(xì)胞會(huì)失水，成熟植物細(xì)胞能發(fā)生質(zhì)壁分離，因此用高濃度蔗糖溶液處理成熟植物細(xì)胞觀察質(zhì)壁分離，A正確；B、向泡菜壇蓋邊沿的水槽中注滿水形成內(nèi)部無(wú)氧環(huán)境，不能創(chuàng)造無(wú)菌環(huán)境，B錯(cuò)誤；C、在用樣方法調(diào)查種群密度時(shí)，應(yīng)該做到隨機(jī)取樣，而不是在目標(biāo)個(gè)體集中分布的區(qū)域劃定樣方調(diào)查種群密度，C錯(cuò)誤；D、對(duì)外植體進(jìn)行消毒可以減少外植體攜帶的微生物，但不能杜絕接種過(guò)程中的微生物污染，D錯(cuò)誤。故選A。2．（2023·山東·高考真題）平板接種常用在微生物培養(yǎng)中。下列說(shuō)法正確的是（

）A．不含氮源的平板不能用于微生物培養(yǎng)B．平板涂布時(shí)涂布器使用前必須進(jìn)行消毒C．接種后未長(zhǎng)出菌落的培養(yǎng)基可以直接丟棄D．利用以尿素為唯一氮源的平板能分離出合成脲酶的微生物【答案】D【詳解】A、不含氮源的平板可用于固氮菌的培養(yǎng)，A錯(cuò)誤；B、平板涂布時(shí)涂布器使用前必須浸在酒精中，然后在火焰上灼燒滅菌，這種操作屬于滅菌，不屬于消毒，B錯(cuò)誤；C、使用后的培養(yǎng)基即使未長(zhǎng)出菌落也要在丟棄前進(jìn)行滅菌處理，不能直接丟棄，以免污染環(huán)境，C錯(cuò)誤；D、脲酶可以催化尿素分解，在以尿素為唯一氮源的平板上，能合成脲酶的微生物可以分解尿素獲得氮源而進(jìn)行生長(zhǎng)繁殖，但是不能合成脲酶的微生物因缺乏氮源而無(wú)法生長(zhǎng)，因此以尿素為唯一氮源的平板能分離出合成脲酶的微生物，D正確。故選D。3．（2023·廣東·統(tǒng)考高考真題）研究者擬從堆肥中取樣并篩選能高效降解羽毛、蹄角等廢棄物中角蛋白的嗜熱菌。根據(jù)堆肥溫度變化曲線（如圖）和選擇培養(yǎng)基篩選原理來(lái)判斷，下列最可能篩選到目標(biāo)菌的條件組合是（

）

A．a(chǎn)點(diǎn)時(shí)取樣、尿素氮源培養(yǎng)基B．b點(diǎn)時(shí)取樣、角蛋白氮源培養(yǎng)基C．b點(diǎn)時(shí)取樣、蛋白胨氮源培養(yǎng)基D．c點(diǎn)時(shí)取樣、角蛋白氮源培養(yǎng)基【答案】D【詳解】研究目的是篩選能高效降解羽毛、蹄角等廢棄物中角蛋白的嗜熱菌，因此既要耐高溫，又要能夠高效降解角蛋白，所以在c點(diǎn)取樣，并且用角蛋白氮源培養(yǎng)基進(jìn)行選擇培養(yǎng)，所以D正確，ABC錯(cuò)誤。故選D。4．（2023·浙江·統(tǒng)考高考真題）某同學(xué)想從泡菜汁中篩選耐高鹽乳酸菌，進(jìn)行了如下實(shí)驗(yàn)：取泡菜汁樣品，劃線接種于一定NaCl濃度梯度的培養(yǎng)基，經(jīng)培養(yǎng)得到了單菌落。下列敘述正確的是（

）A．培養(yǎng)基pH需偏堿性 B．泡菜汁需多次稀釋后才能劃線接種C．需在無(wú)氧條件下培養(yǎng) D．分離得到的微生物均為乳酸菌【答案】C【詳解】A、因?yàn)槿樗峋?jīng)過(guò)無(wú)氧呼吸產(chǎn)生乳酸，故其生活的環(huán)境是酸性，培養(yǎng)基pH需偏酸性，A錯(cuò)誤；B、平板劃線接種時(shí)不需要稀釋，B錯(cuò)誤；C、乳酸菌是厭氧型微生物，所以需在無(wú)氧條件下培養(yǎng)，C正確；D、參與泡菜發(fā)酵的微生物有乳桿菌、短乳桿菌和明串珠菌等，所以分離得到的微生物除了乳酸菌，還會(huì)有其他耐高鹽的微生物，D錯(cuò)誤。故選C。5．（2023·北京·統(tǒng)考高考真題）自然界中不同微生物之間存在著復(fù)雜的相互作用。有些細(xì)菌具有溶菌特性，能夠破壞其他細(xì)菌的結(jié)構(gòu)使細(xì)胞內(nèi)容物釋出?？茖W(xué)家試圖從某湖泊水樣中分離出有溶菌特性的細(xì)菌。(1)用于分離細(xì)菌的固體培養(yǎng)基包含水、葡萄糖、蛋白胨和瓊脂等成分，其中蛋白胨主要為細(xì)菌提供和維生素等。(2)A菌通常被用做溶菌對(duì)象。研究者將含有一定濃度A菌的少量培養(yǎng)基傾倒在固體培養(yǎng)平板上，凝固形成薄層。培養(yǎng)一段時(shí)間后，薄層變渾濁（如圖），表明。(3)為分離出具有溶菌作用的細(xì)菌，需要合適的菌落密度，因此應(yīng)將含菌量較高的湖泊水樣后，依次分別涂布于不同的渾濁薄層上。培養(yǎng)一段時(shí)間后，能溶解A菌的菌落周圍會(huì)出現(xiàn)。采用這種方法，研究者分離、培養(yǎng)并鑒定出P菌。(4)為探究P菌溶解破壞A菌的方式，請(qǐng)?zhí)岢鲆粋€(gè)假設(shè)，該假設(shè)能用以下材料和設(shè)備加以驗(yàn)證（主要實(shí)驗(yàn)材料和設(shè)備：P菌、A菌、培養(yǎng)基、圓形濾紙小片、離心機(jī)和細(xì)菌培養(yǎng)箱）?！敬鸢浮?1)氮源、碳源(2)A菌能在培養(yǎng)平板中生長(zhǎng)繁殖(3)稀釋溶菌圈(4)假設(shè)P菌通過(guò)分泌某種化學(xué)物質(zhì)使A菌溶解破裂【詳解】（1）蛋白胨主要為細(xì)菌提供氮源、碳源和維生素等。（2）將含有一定濃度A菌的少量培養(yǎng)基傾倒在固體培養(yǎng)平板上，凝固形成薄層。培養(yǎng)一段時(shí)間后，薄層變渾濁，表明A菌能在培養(yǎng)平板中生長(zhǎng)繁殖。（3）將含菌量較高的湖泊水樣稀釋后，依次分別涂布于不同的渾濁薄層上。培養(yǎng)一段時(shí)間后，能溶解A菌的菌落周圍會(huì)出現(xiàn)溶菌圈。（4）根據(jù)實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)材料和設(shè)備，圓形濾紙小片可用于吸收某種物質(zhì)，離心機(jī)可用于分離菌體和細(xì)菌分泌物，為探究P菌溶解破壞A菌的方式，可假設(shè)P菌通過(guò)分泌某種化學(xué)物質(zhì)使A菌溶解破裂。6．（2023·湖南·統(tǒng)考高考真題）某些植物根際促生菌具有生物固氮、分解淀粉和抑制病原菌等作用?；卮鹣铝袉?wèn)題：(1)若從植物根際土壤中篩選分解淀粉的固氮細(xì)菌，培養(yǎng)基的主要營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)包括水和。(2)現(xiàn)從植物根際土壤中篩選出一株解淀粉芽孢桿菌H，其產(chǎn)生的抗菌肽抑菌效果見表。據(jù)表推測(cè)該抗菌肽對(duì)的抑制效果較好，若要確定其有抑菌效果的最低濃度，需在μg·mL-1濃度區(qū)間進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)。測(cè)試菌抗菌肽濃度/（μg?mL-1）55.2027.6013.806.903.451.730.86金黃色葡萄球菌-----++枯草芽孢桿菌-----++禾谷鐮孢菌-++++++假絲酵母-++++++注：“+”表示長(zhǎng)菌，“-”表示未長(zhǎng)菌。(3)研究人員利用解淀粉芽孢桿菌H的淀粉酶編碼基因M構(gòu)建高效表達(dá)質(zhì)粒載體，轉(zhuǎn)入大腸桿菌成功構(gòu)建基因工程菌A。在利用A菌株發(fā)酵生產(chǎn)淀粉酶M過(guò)程中，傳代多次后，生產(chǎn)條件未變，但某子代菌株不再產(chǎn)生淀粉酶M。分析可能的原因是（答出兩點(diǎn)即可）。(4)研究人員通過(guò)肺上皮干細(xì)胞誘導(dǎo)生成肺類器官，可自組裝或與成熟細(xì)胞組裝成肺類裝配體，如圖所示。肺類裝配體培養(yǎng)需要滿足適宜的營(yíng)養(yǎng)、溫度、滲透壓、pH以及（答出兩點(diǎn)）等基本條件。肺類裝配體形成過(guò)程中是否運(yùn)用了動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)（填“是”或“否”）。

(5)耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（MRSA）是一種耐藥菌，嚴(yán)重危害人類健康?？蒲腥藛T擬用MRSA感染肺類裝配體建立感染模型，來(lái)探究解淀粉芽孢桿菌H抗菌肽是否對(duì)MRSA引起的肺炎有治療潛力。以下實(shí)驗(yàn)材料中必備的是。①金黃色葡萄球菌感染的肺類裝配體

②MRSA感染的肺類裝配體

③解淀粉芽孢桿菌H抗菌肽

④生理鹽水

⑤青霉素（抗金黃色葡萄球菌的藥物）

⑥萬(wàn)古霉素（抗MRSA的藥物）【答案】(1)無(wú)機(jī)鹽、淀粉(2)金黃色葡萄球菌和枯草芽孢桿菌1.73~3.45(3)淀粉酶編碼基因M發(fā)生突變；重組質(zhì)粒在大腸桿菌分裂過(guò)程中丟失(4)無(wú)菌、無(wú)毒環(huán)境，含95%空氣和5%CO2的氣體環(huán)境否(5)②③④⑥【詳解】（1）由題意可知，根際促生菌具有固氮作用，可利用空氣中的氮?dú)庾鳛榈矗虼擞糜诤Y選根際促生菌的培養(yǎng)基的主要營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)包括水、無(wú)機(jī)鹽和淀粉。（2）由題表可知，在抗菌肽濃度為3.45-55.20μg·mL-1范圍內(nèi)，金黃色葡萄球菌和枯草芽孢桿菌均不能生長(zhǎng)，表明該抗菌肽對(duì)它們的抑菌效果較好；因?yàn)榭咕牡臐舛葹?.73μg·mL-1時(shí)，它們均能生長(zhǎng)，所以要確定抗菌肽抑菌效果的最低濃度，應(yīng)在1.73~3.45μg·mL-1的濃度區(qū)間進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)。（3）在利用A菌株發(fā)酵生產(chǎn)淀粉酶M過(guò)程中，傳代多次后，生產(chǎn)條件未變，但某子代菌株不再產(chǎn)生淀粉酶M，可能的原因是淀粉酶編碼基因M發(fā)生突變；或者是重組質(zhì)粒在大腸桿菌分裂過(guò)程中丟失。（4）肺類裝配體培養(yǎng)需要滿足適宜的營(yíng)養(yǎng)、溫度、滲透壓、pH以及無(wú)菌、無(wú)毒環(huán)境，含95%空氣和5%CO2的氣體環(huán)境等基本條件；由圖示可知，肺類裝配體形成的過(guò)程中沒(méi)有運(yùn)用動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)，只涉及了細(xì)胞的分裂和分化等內(nèi)容。（5）科研人員擬用MRSA感染肺類裝配體建立感染模型，來(lái)探究解淀粉芽孢桿菌H抗菌肽是否對(duì)MRSA引起的肺炎有治療潛力，必備實(shí)驗(yàn)材料為：②MRSA感染的肺類裝配體、③解淀粉芽孢桿菌H抗菌肽、④生理鹽水（設(shè)置對(duì)照實(shí)驗(yàn)使用）、⑥萬(wàn)古霉素（抗MRSA的藥物，比較解淀粉芽孢桿菌H抗菌肽的療效），故選②③④⑥?！?022年高考真題〗7．（2022·天津·高考真題）下圖所示實(shí)驗(yàn)方法的應(yīng)用或原理，不恰當(dāng)?shù)氖牵?/p>

）實(shí)驗(yàn)方法應(yīng)用原理A．分離綠葉中的色素B．不同色素在層析液中溶解度不同C．細(xì)菌計(jì)數(shù)D．逐步稀釋A．A B．B C．C D．D【答案】C【詳解】AB、圖示為分離綠葉中的色素，常用層析法，原理是各色素隨層析液在濾紙上擴(kuò)散速度不同，從而分離色素，溶解度大，擴(kuò)散速度快;溶解度小，擴(kuò)散速度慢，AB正確；CD、圖示為平板劃線法，是分離微生物的一種方法，不能用于細(xì)菌計(jì)數(shù)，是指把混雜在一起的微生物或同一微生物群體中的不同細(xì)胞，用接種環(huán)在平板表面上作多次由點(diǎn)到線的劃線稀釋而獲得較多獨(dú)立分布的單個(gè)細(xì)胞，并讓其成長(zhǎng)為單菌落的方法，C錯(cuò)誤，D正確。故選C。8．（2022·遼寧·統(tǒng)考高考真題）為避免航天器在執(zhí)行載人航天任務(wù)時(shí)出現(xiàn)微生物污染風(fēng)險(xiǎn)，需要對(duì)航天器及潔凈的組裝車間進(jìn)行環(huán)境微生物檢測(cè)。下列敘述錯(cuò)誤的是（

）A．航天器上存在適應(yīng)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)匱乏等環(huán)境的極端微生物B．細(xì)菌形成菌膜粘附于航天器設(shè)備表面產(chǎn)生生物腐蝕C．在組裝車間地面和設(shè)備表面采集環(huán)境微生物樣品D．采用平板劃線法等分離培養(yǎng)微生物，觀察菌落特征【答案】D【詳解】A、嗜極微生物適應(yīng)極端環(huán)境的特性使它們有在空間暴露環(huán)境或地外星球環(huán)境中存活的可能，因此航天器上存在適應(yīng)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)匱乏等環(huán)境的極端微生物，A正確；B、細(xì)菌形成菌膜粘附于航天器設(shè)備表面產(chǎn)生生物腐蝕，會(huì)腐蝕艙內(nèi)材料以及設(shè)備線路、元器件，B正確；C、對(duì)航天器及潔凈的組裝車間進(jìn)行環(huán)境微生物檢測(cè)，需要在組裝車間地面和設(shè)備表面采集環(huán)境微生物樣品，C正確；D、航天器及潔凈的組裝車間環(huán)境微生物很少，分離培養(yǎng)微生物，觀察菌落特征，不需要采用平板劃線法，D錯(cuò)誤。故選D。9．（2022·江蘇·統(tǒng)考高考真題）航天員葉光富和王亞平在天宮課堂上展示了培養(yǎng)的心肌細(xì)胞跳動(dòng)的視頻。下列相關(guān)敘述正確的是（

）A．培養(yǎng)心肌細(xì)胞的器具和試劑都要先進(jìn)行高壓蒸汽滅菌B．培養(yǎng)心肌細(xì)胞的時(shí)候既需要氧氣也需要二氧化碳C．心肌細(xì)胞在培養(yǎng)容器中通過(guò)有絲分裂不斷增殖D．心肌細(xì)胞在神經(jīng)細(xì)胞發(fā)出的神經(jīng)沖動(dòng)的支配下跳動(dòng)【答案】B【詳解】A、培養(yǎng)心肌細(xì)胞的器具要先進(jìn)行高壓蒸汽滅菌，但是試劑并不都需要滅菌，如動(dòng)物血清不能進(jìn)行高壓蒸汽滅菌，否則會(huì)使其中的成分失活，A錯(cuò)誤；B、培養(yǎng)心肌細(xì)胞的時(shí)候既需要氧氣（有助于進(jìn)行有氧呼吸）也需要二氧化碳（有助于維持培養(yǎng)液的pH），B正確；C、在體外培養(yǎng)條件下，細(xì)胞會(huì)因接觸抑制、細(xì)胞密度過(guò)大、代謝廢物積累、營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)消耗而停止分裂，C錯(cuò)誤；D、心肌細(xì)胞節(jié)律性收縮，受植物性神經(jīng)的支配，是不隨意的，在神經(jīng)細(xì)胞釋放的神經(jīng)遞質(zhì)的支配下跳動(dòng)，D錯(cuò)誤。故選B。10．（2022·江蘇·統(tǒng)考高考真題）下列有關(guān)實(shí)驗(yàn)方法的描述合理的是（

）A．將一定量胡蘿卜切碎，加適量水、石英砂，充分研磨，過(guò)濾，獲取胡蘿卜素提取液B．適當(dāng)濃度蔗糖溶液處理新鮮黑藻葉裝片，可先后觀察到細(xì)胞質(zhì)流動(dòng)與質(zhì)壁分離現(xiàn)象C．檢測(cè)樣品中的蛋白質(zhì)時(shí)，須加熱使雙縮脲試劑與蛋白質(zhì)發(fā)生顯色反應(yīng)D．用溴麝香草酚藍(lán)水溶液檢測(cè)發(fā)酵液中酒精含量的多少，可判斷酵母菌的呼吸方式【答案】B【詳解】A、提取胡蘿卜素的實(shí)驗(yàn)流程：胡蘿卜→粉碎→干燥→萃取→過(guò)濾→濃縮→胡蘿卜素，A錯(cuò)誤；B、黑藻葉片含有葉綠體，呈綠色，所以適當(dāng)濃度蔗糖溶液處理新鮮黑藻葉裝片可以先在顯微鏡下觀察葉綠體的運(yùn)動(dòng)情況，觀察細(xì)胞質(zhì)的流動(dòng)，同時(shí)黑藻葉片是成熟的植物細(xì)胞，可以發(fā)生質(zhì)壁分離，以葉綠體為觀察指標(biāo)，B正確；C、檢測(cè)樣品中的蛋白質(zhì)時(shí)，雙縮脲試劑與蛋白質(zhì)發(fā)生顯色反應(yīng)，不需要加熱，C錯(cuò)誤；D、酵母菌呼吸產(chǎn)生的二氧化碳可使溴麝香草酚藍(lán)水溶液由藍(lán)變綠再變黃，不能用來(lái)檢測(cè)酒精含量，D錯(cuò)誤。故選B。11．（2022·江蘇·統(tǒng)考高考真題）下列是某同學(xué)分離高產(chǎn)脲酶菌的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，不合理的是（

）A．選擇農(nóng)田或公園土壤作為樣品分離目的菌株B．在選擇培養(yǎng)基中需添加尿素作為唯一氮源C．適當(dāng)稀釋樣品是為了在平板上形成單菌落D．可分解酚紅指示劑使其褪色的菌株是產(chǎn)脲酶菌【答案】D【詳解】A、農(nóng)田或公園土壤中含有較多的含脲酶的微生物，A正確；B、為了篩選可分解尿素的細(xì)菌，配置的培養(yǎng)基應(yīng)選擇尿素作為唯一氮源，含脲酶的微生物在該培養(yǎng)基上能生長(zhǎng)，B正確；C、當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的一個(gè)菌落，來(lái)源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌，C正確；D、在細(xì)菌分解尿素的化學(xué)反應(yīng)中，細(xì)菌合成的脲酶將尿素分解成氨，氨會(huì)使培養(yǎng)基的pH升高，酚紅指示劑將變紅，因此在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，能對(duì)分離的菌種做進(jìn)一步鑒定，D錯(cuò)誤。故選D。12．（2022·海南·統(tǒng)考高考真題）為探究校內(nèi)植物園土壤中的細(xì)菌種類，某興趣小組采集園內(nèi)土壤樣本并開展相關(guān)實(shí)驗(yàn)。下列有關(guān)敘述錯(cuò)誤的是（

）A．采樣時(shí)應(yīng)隨機(jī)采集植物園中多個(gè)不同地點(diǎn)的土壤樣本B．培養(yǎng)細(xì)菌時(shí)，可選用牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基C．土壤溶液稀釋倍數(shù)越低，越容易得到單菌落D．鑒定細(xì)菌種類時(shí)，除形態(tài)學(xué)鑒定外，還可借助生物化學(xué)的方法【答案】C【詳解】A、采集植物園中土壤樣本的原則之一是要隨機(jī)采樣，A正確；B、牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基中含有細(xì)菌生長(zhǎng)所需的碳源、氮源、水、無(wú)機(jī)鹽等，可用于細(xì)菌的培養(yǎng)，B正確；C、土壤溶液稀釋倍數(shù)足夠高時(shí)，才能將聚集的細(xì)菌分散開，有助于在培養(yǎng)基表面形成單菌落，C錯(cuò)誤；D、不同種類細(xì)菌的理化特性一般不同，鑒定細(xì)菌種類時(shí)，除根據(jù)菌落特征進(jìn)行形態(tài)學(xué)鑒定外，還可以借助生物化學(xué)的方法進(jìn)行鑒定，D正確。故選C。13．（2022·湖北·統(tǒng)考高考真題）滅菌、消毒、無(wú)菌操作是生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中常見的操作。下列敘述正確的是（）A．動(dòng)、植物細(xì)胞DNA的提取必須在無(wú)菌條件下進(jìn)行B．微生物、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)基中需添加一定量的抗生素以防止污染C．為防止蛋白質(zhì)變性，不能用濕熱滅菌法對(duì)牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌D．可用濕熱滅菌法對(duì)實(shí)驗(yàn)中所使用的微量離心管、細(xì)胞培養(yǎng)瓶等進(jìn)行滅菌【答案】D【詳解】A、動(dòng)、植物細(xì)胞DNA的提取不需要在無(wú)菌條件下進(jìn)行，A錯(cuò)誤；B、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)基中需添加一定量的抗生素以防止污染，保證無(wú)菌環(huán)境，而微生物的培養(yǎng)不能加入抗生素，B錯(cuò)誤；C、一般用濕熱滅菌法對(duì)牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌，以防止雜菌污染，C錯(cuò)誤；D、可用濕熱滅菌法對(duì)實(shí)驗(yàn)中所使用的微量離心管、細(xì)胞培養(yǎng)瓶等進(jìn)行滅菌，以防止雜菌污染，D正確。故選D。14．（2022·湖北·統(tǒng)考高考真題）滅菌、消毒、無(wú)菌操作是生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中常見的操作。下列敘述正確的是（）A．動(dòng)、植物細(xì)胞DNA的提取必須在無(wú)菌條件下進(jìn)行B．微生物、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)基中需添加一定量的抗生素以防止污染C．為防止蛋白質(zhì)變性，不能用濕熱滅菌法對(duì)牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌D．可用濕熱滅菌法對(duì)實(shí)驗(yàn)中所使用的微量離心管、細(xì)胞培養(yǎng)瓶等進(jìn)行滅菌【答案】D【詳解】A、動(dòng)、植物細(xì)胞DNA的提取不需要在無(wú)菌條件下進(jìn)行，A錯(cuò)誤；B、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)基中需添加一定量的抗生素以防止污染，保證無(wú)菌環(huán)境，而微生物的培養(yǎng)不能加入抗生素，B錯(cuò)誤；C、一般用濕熱滅菌法對(duì)牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌，以防止雜菌污染，C錯(cuò)誤；D、可用濕熱滅菌法對(duì)實(shí)驗(yàn)中所使用的微量離心管、細(xì)胞培養(yǎng)瓶等進(jìn)行滅菌，以防止雜菌污染，D正確。故選D。15．（2022·浙江·高考真題）回答下列（一）、（二）小題：（一）回答與產(chǎn)淀粉酶的枯草桿菌育種有關(guān)的問(wèn)題：(1)為快速分離產(chǎn)淀粉酶的枯草桿菌，可將土樣用制成懸液，再將含有懸液的三角瓶置于80℃的中保溫一段時(shí)間，其目的是。(2)為提高篩選效率，可將菌種的過(guò)程與菌種的產(chǎn)酶性能測(cè)定一起進(jìn)行：將上述懸液稀釋后涂布于淀粉為唯一碳源的固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)，采用顯色方法，根據(jù)透明圈與菌落直徑比值的大小，可粗略估計(jì)出菌株是否產(chǎn)酶及產(chǎn)酶性能。(3)為了獲得高產(chǎn)淀粉酶的枯草桿菌，可利用現(xiàn)有菌種，通過(guò)后再篩選獲得，或利用轉(zhuǎn)基因、等技術(shù)獲得。（二）回答與植物轉(zhuǎn)基因和植物克隆有關(guān)的問(wèn)題：(4)在用農(nóng)桿菌侵染的方法進(jìn)行植物轉(zhuǎn)基因過(guò)程中，通常要使用抗生素，其目的一是抑制生長(zhǎng)，二是篩選轉(zhuǎn)化細(xì)胞。當(dāng)選擇培養(yǎng)基中抗生素濃度時(shí)，通常會(huì)出現(xiàn)較多假陽(yáng)性植株，因此在轉(zhuǎn)基因前需要對(duì)受體進(jìn)行抗生素的檢測(cè)。(5)為提高培育轉(zhuǎn)基因植株的成功率，植物轉(zhuǎn)基因受體需具有較強(qiáng)的能力和遺傳穩(wěn)定性。對(duì)培養(yǎng)的受體細(xì)胞遺傳穩(wěn)定性的早期檢測(cè)，可通過(guò)觀察細(xì)胞內(nèi)形態(tài)是否改變進(jìn)行判斷，也可通過(guò)觀察分裂期染色體的，分析染色體組型是否改變進(jìn)行判斷。(6)植物轉(zhuǎn)基因受體全能性表達(dá)程度的高低主要與受體的基因型、培養(yǎng)環(huán)境、繼代次數(shù)和長(zhǎng)短等有關(guān)。同時(shí)也與受體的取材有關(guān)，其中受體為時(shí)全能性表達(dá)能力最高?！敬鸢浮?1)無(wú)菌水水浴殺死不耐熱微生物(2)分離KI-I2(3)人工誘變?cè)|(zhì)體融合(4)農(nóng)桿菌過(guò)低敏感性(5)再生細(xì)胞核形態(tài)特征和數(shù)量(6)培養(yǎng)時(shí)間受精卵【詳解】（1）產(chǎn)生淀粉酶的枯草桿菌的最適溫度為50-75℃，要快速分離枯草桿菌，先將土樣加入無(wú)菌水制成枯草桿菌懸液，再將含有懸液的三角瓶置于80℃的水浴中保溫一段時(shí)間，殺死不耐熱的微生物。（2）將菌種的分離過(guò)程與菌種的產(chǎn)酶性能測(cè)定同時(shí)進(jìn)行可以提高篩選效率。用稀釋涂布平板法可以分離枯草桿菌，在培養(yǎng)基中添加淀粉作為唯一碳源，并且在培養(yǎng)基中添加KI-I2，能合成淀粉酶的枯草桿菌因?yàn)槟芾玫矸鄱婊?，同時(shí)淀粉由于被分解在菌落周圍會(huì)出現(xiàn)透明圈，比較透明圈與菌落直徑比值的大小，比值大的說(shuō)明該菌株產(chǎn)酶性能較高。（3）要獲得高產(chǎn)淀粉酶的枯草桿菌，可利用誘變育種，由于變異的不定向性，人工誘變后還需要再篩選才能獲得高產(chǎn)淀粉酶的枯草桿菌。也可以利用轉(zhuǎn)基因、原生質(zhì)體融合等技術(shù)，從其他生物那里獲得與高產(chǎn)淀粉酶有關(guān)的基因，進(jìn)而獲得相應(yīng)的高產(chǎn)性狀。（4）野生的農(nóng)桿菌沒(méi)有抗性基因，用于轉(zhuǎn)化植物細(xì)胞的農(nóng)桿菌一般在其T—DNA中插入一種抗生素抗性基因?？股氐淖饔檬且种萍?xì)菌生長(zhǎng)，農(nóng)桿菌屬于細(xì)菌，在其侵染植物過(guò)程中，可以用另一種抗生素抑制農(nóng)桿菌的生長(zhǎng)，從而達(dá)到在后續(xù)實(shí)驗(yàn)中消除轉(zhuǎn)化植物細(xì)胞中農(nóng)桿菌的作用。具有T-DNA中抗性基因的細(xì)胞能在含有相應(yīng)抗生素的培養(yǎng)基上存活。當(dāng)培養(yǎng)基中抗生素濃度過(guò)低時(shí)，很多沒(méi)有抗性的細(xì)胞也存活下來(lái)，因此出現(xiàn)假陽(yáng)性，故在轉(zhuǎn)基因前要對(duì)受體進(jìn)行抗生素的敏感性檢測(cè)。（5）轉(zhuǎn)基因植株要經(jīng)過(guò)植物組織培育，要提高培育轉(zhuǎn)基因植株的成功率，應(yīng)該選再生能力和遺傳穩(wěn)定性較強(qiáng)的受體，這種受體全能性較高，能保持生物的性狀。對(duì)培養(yǎng)的受體細(xì)胞遺傳穩(wěn)定性的早期檢測(cè)，可通過(guò)觀察細(xì)胞核形態(tài)是否改變進(jìn)行判斷，也可以直接在光學(xué)顯微鏡下觀察分裂期染色體的形態(tài)特征和數(shù)量，分析染色體組型是否改變。（6）植物轉(zhuǎn)基因受體全能性表達(dá)程度高低除了與受體基因型、培養(yǎng)環(huán)境、繼代次數(shù)有關(guān)外，還與培養(yǎng)時(shí)間長(zhǎng)短和受體的取材有關(guān)，受精卵是沒(méi)分化的細(xì)胞，分裂和分化能力都很強(qiáng)，故受體為受精卵時(shí)全能性表達(dá)能力最高。16．（2022·重慶·統(tǒng)考高考真題）研究發(fā)現(xiàn)柑橘精油可抑制大腸桿菌的生長(zhǎng)。某興趣小組采用水蒸氣蒸餾法和壓榨法提取了某種橘皮的精油（分別簡(jiǎn)稱為HDO和CPO），并研究其抑菌效果的差異。(1)為便于精油的提取，壓榨前需用浸泡橘皮一段時(shí)間。在兩種方法收集的油水混合物中均加入NaCl，其作用是；為除去油層中的水分，需加入。(2)無(wú)菌條件下，該小組制備了兩個(gè)大腸桿菌平板，用兩片大小相同的無(wú)菌濾紙分別蘸取HDO和CPO貼于含菌平板上，37℃培養(yǎng)24h，抑菌效果見如圖。有同學(xué)提出該實(shí)驗(yàn)存在明顯不足：①未設(shè)置對(duì)照，設(shè)置本實(shí)驗(yàn)對(duì)照的做法是，其作用是；②不足之處還有（答兩點(diǎn)）。(3)若HDO的抑菌效果低于CPO，從提取方法的角度分析，主要原因是?！敬鸢浮?1)石灰水增加鹽的濃度，利于水油分層無(wú)水硫酸鈉(2)用一片大小相同的無(wú)菌濾紙蘸取等量的蒸餾水貼于含菌平板上排除無(wú)關(guān)變量對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響，增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可信度違背平行重復(fù)原則，每個(gè)實(shí)驗(yàn)組中的樣本太少；實(shí)驗(yàn)組精油的含量沒(méi)有遵循等量原則(3)橘皮精油的有效成分在用水蒸氣蒸餾時(shí)會(huì)發(fā)生部分水解【詳解】（1）新鮮柑橘皮中含有大量的果蠟、果膠和水分，如果直接壓榨，出油率較低，為了提高出油率，需要將柑橘皮干燥去水，并用石灰水浸泡。為了將水油分層，只需加入氯化鈉，增加鹽濃度，就會(huì)出現(xiàn)明顯的分層，再用分液漏斗將這兩層分開。分離的油層還會(huì)含有一定的水分，一般可以加入一些無(wú)水硫酸鈉吸水。（2）本實(shí)驗(yàn)缺乏對(duì)照組，無(wú)法排除其他無(wú)關(guān)變量對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響，可用一片大小相同的無(wú)菌濾紙蘸取等量的蒸餾水貼于含菌平板上作為對(duì)照組。另外，每個(gè)實(shí)驗(yàn)組中只利用了一張無(wú)菌濾紙，樣本太少，容易出現(xiàn)偶然性誤差；而且兩個(gè)實(shí)驗(yàn)組蘸取的精油沒(méi)有遵循等量原則。（3）橘皮精油的有效成分在用水蒸氣蒸餾時(shí)會(huì)發(fā)生部分水解，所以HDO的抑菌效果低于CPO。17．（2022·河北·統(tǒng)考高考真題）番茄灰霉病菌嚴(yán)重影響番茄生產(chǎn)，枯草芽孢桿菌可以產(chǎn)生對(duì)多種病原菌具有抑制作用的蛋白質(zhì)。為探究枯草芽孢桿菌能否用于番茄灰霉病的生物防治，研究者設(shè)計(jì)了相關(guān)實(shí)驗(yàn)?；卮鹣铝袉?wèn)題：(1)檢測(cè)枯草芽孢桿菌對(duì)番茄灰霉病菌的抑制作用時(shí)，取適量菌液涂布于固體培養(yǎng)基上，將無(wú)菌濾紙片（直徑5mm）在菌液中浸泡后覆蓋于固體培養(yǎng)基中心，數(shù)秒后取出濾紙片，培養(yǎng)皿倒置培養(yǎng)后測(cè)量大小以判定抑菌效果。(2)枯草芽孢桿菌為好氧微生物，液體培養(yǎng)時(shí)應(yīng)采用（填“靜置”或“搖床震蕩”）培養(yǎng)。培養(yǎng)過(guò)程中抽樣檢測(cè)活菌數(shù)量時(shí)，應(yīng)采用（填“稀釋涂布平板法”或“顯微鏡直接計(jì)數(shù)法”），其原因是。(3)電泳分離蛋白質(zhì)混合樣品的原理是。利用SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳測(cè)定枯草芽孢桿菌的抗菌蛋白分子量時(shí)，SDS的作用是。(4)枯草芽孢桿菌長(zhǎng)期保藏時(shí)，常以其作為保藏對(duì)象?！敬鸢浮?1)番茄灰霉病菌枯草芽孢桿菌抑菌圈(2)搖床震蕩稀釋涂布平板法用稀釋涂布平板法在培養(yǎng)基上看到的每一個(gè)菌落都來(lái)自一個(gè)活細(xì)胞，而顯微鏡直接計(jì)數(shù)法會(huì)將死亡的枯草芽孢桿菌也計(jì)算在內(nèi)(3)利用待分離樣品中各種分子帶電性質(zhì)的差異及分子本身的大小、形狀的不同，使帶電分子產(chǎn)生不同的遷移速度，從而實(shí)現(xiàn)樣品中各種分子的分離SDS帶有大量的負(fù)電荷，且能使蛋白質(zhì)變性成為肽鏈，使蛋白質(zhì)的遷移速率只與蛋白質(zhì)的相對(duì)分子質(zhì)量有關(guān)，而與所帶電荷性質(zhì)無(wú)關(guān)(4)菌液【詳解】（1）分析題意，要檢測(cè)枯草芽孢桿菌對(duì)番茄灰霉病菌的抑制作用，先把適量的番茄灰霉病菌菌液涂布于固體培養(yǎng)基上，將無(wú)菌濾紙片在枯草芽孢桿菌菌液中浸泡后覆蓋于固體培養(yǎng)基中心，若對(duì)番茄灰霉病菌有抑制作用，被覆蓋的位置的番茄灰霉病菌就會(huì)被殺死，培養(yǎng)皿倒置培養(yǎng)后會(huì)出現(xiàn)抑菌圈，測(cè)量抑菌圈大小以判定抑菌效果強(qiáng)弱。（2）枯草芽孢桿菌為好氧微生物，采用搖床震蕩培養(yǎng)可增大培養(yǎng)液的溶氧量，有利于枯草芽孢桿菌的生長(zhǎng)繁殖。培養(yǎng)過(guò)程中要抽樣檢測(cè)活菌數(shù)量，應(yīng)該采用稀釋涂布平板法，用稀釋涂布平板法在培養(yǎng)基上看到的每一個(gè)菌落都來(lái)自一個(gè)活細(xì)胞，而顯微鏡直接計(jì)數(shù)法會(huì)將死亡的枯草芽孢桿菌也計(jì)算在內(nèi)。（3）電泳分離蛋白質(zhì)混合樣品的原理是：利用待分離樣品中各種分子帶電性質(zhì)的差異及分子本身的大小、形狀的不同，使帶電分子產(chǎn)生不同的遷移速度，從而實(shí)現(xiàn)樣品中各種分子的分離。SDS帶有大量的負(fù)電荷，且能使蛋白質(zhì)變性成為肽鏈，使蛋白質(zhì)的遷移速率只與蛋白質(zhì)的相對(duì)分子質(zhì)量有關(guān)，而與所帶電荷性質(zhì)無(wú)關(guān)。（4）長(zhǎng)期保藏枯草芽孢桿菌，應(yīng)該將培養(yǎng)的菌液轉(zhuǎn)移到滅菌好的甘油瓶中，與甘油充分混合，放在-20℃的冷凍箱中保存。18．（2022·北京·統(tǒng)考高考真題）人體細(xì)胞因表面有可被巨噬細(xì)胞識(shí)別的“自體”標(biāo)志蛋白C，從而免于被吞噬。某些癌細(xì)胞表面存在大量的蛋白C，更易逃脫吞噬作用。研究者以蛋白C為靶點(diǎn)，構(gòu)建了可感應(yīng)群體密度而裂解的細(xì)菌菌株，擬用于制備治療癌癥的“智能炸彈”。(1)引起群體感應(yīng)的信號(hào)分子A是一種脂質(zhì)小分子，通常以的方式進(jìn)出細(xì)胞。細(xì)胞內(nèi)外的A隨細(xì)菌密度的增加而增加，A積累至一定濃度時(shí)才與胞內(nèi)受體結(jié)合，調(diào)控特定基因表達(dá)，表現(xiàn)出細(xì)菌的群體響應(yīng)。(2)研究者將A分子合成酶基因、A受體基因及可使細(xì)菌裂解的L蛋白基因同時(shí)轉(zhuǎn)入大腸桿菌，制成AL菌株。培養(yǎng)的AL菌密度變化如圖1。其中，AL菌密度驟降的原因是：AL菌密度增加引起A積累至臨界濃度并與受體結(jié)合，。(3)蛋白K能與蛋白C特異性結(jié)合并阻斷其功能。研究者將K基因轉(zhuǎn)入AL菌，制成ALK菌株，以期用于腫瘤治療。為驗(yàn)證ALK菌能產(chǎn)生蛋白K，應(yīng)以菌株裂解的上清液為對(duì)照進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。請(qǐng)從下列選項(xiàng)中選取所需材料與試劑的序號(hào)，完善實(shí)驗(yàn)組的方案。實(shí)驗(yàn)材料與試劑：①ALK菌裂解的上清液②帶熒光標(biāo)記的K的抗體③帶熒光標(biāo)記的C的抗體④腫瘤細(xì)胞實(shí)驗(yàn)步驟：先加入保溫后漂洗，再加入保溫后漂洗，檢測(cè)熒光強(qiáng)度。(4)研究者向下圖2所示小鼠左側(cè)腫瘤內(nèi)注射ALK菌后，發(fā)現(xiàn)ALK菌只存在于該側(cè)瘤內(nèi)，兩周內(nèi)即觀察到雙側(cè)腫瘤生長(zhǎng)均受到明顯抑制。而向瘤內(nèi)單獨(dú)注射蛋白K或AL菌，對(duì)腫瘤無(wú)明顯抑制作用。請(qǐng)應(yīng)用免疫學(xué)原理解釋“智能炸彈”ALK菌能有效抑制對(duì)側(cè)腫瘤生長(zhǎng)的原因?！敬鸢浮?1)自由擴(kuò)散(2)啟動(dòng)L蛋白表達(dá)引起AL菌短時(shí)間內(nèi)大量裂解(3)AL①④②/③(4)注入瘤內(nèi)的ALK菌群體裂解后釋放的蛋白K與蛋白C結(jié)合，且釋放的細(xì)菌產(chǎn)物激活巨噬細(xì)胞，從而增強(qiáng)了巨噬細(xì)胞對(duì)腫瘤細(xì)胞的吞噬作用，巨噬細(xì)胞加工呈遞腫瘤抗原，激活細(xì)胞免疫，腫瘤細(xì)胞被特異性殺傷，因此有效抑制對(duì)側(cè)腫瘤生長(zhǎng)?！驹斀狻浚?）引起群體感應(yīng)的信號(hào)分子A是一種脂質(zhì)小分子，脂溶性的小分子物質(zhì)通常以自由擴(kuò)散的方式進(jìn)出細(xì)胞。（2）由圖可知，AL菌密度達(dá)到相應(yīng)的值后會(huì)驟降，而L蛋白可使細(xì)菌裂解。可推測(cè)AL菌密度驟降的原因是，AL菌密度增加引起A積累至臨界濃度并與受體結(jié)合，啟動(dòng)L蛋白表達(dá)引起AL菌短時(shí)間內(nèi)大量裂解。（3）AL菌株不含K基因，ALK菌株含K基因，因此，為驗(yàn)證ALK菌能產(chǎn)生蛋白K，應(yīng)以AL菌株裂解的上清液為對(duì)照進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。某些癌細(xì)胞表面存在大量的蛋白C，蛋白K能與蛋白C特異性結(jié)合并阻斷其功能，為驗(yàn)證ALK菌能產(chǎn)生蛋白K，可用帶熒光標(biāo)記的K的抗體，如果有K蛋白生成，則K蛋白與K的抗體結(jié)合，可發(fā)出熒光；由于蛋白K能與蛋白C特異性結(jié)合，因此也可用帶熒光標(biāo)記的C的抗體，如果有蛋白K生成，對(duì)照組與實(shí)驗(yàn)組熒光強(qiáng)度會(huì)有差異。具體的實(shí)驗(yàn)步驟為，先加入①ALK菌裂解的上清液和④腫瘤細(xì)胞，保溫后漂洗，再加入②帶熒光標(biāo)記的K的抗體或加入③帶熒光標(biāo)記的C的抗體，保溫后漂洗，檢測(cè)熒光強(qiáng)度。（4）“智能炸彈”ALK菌能有效抑制對(duì)側(cè)腫瘤生長(zhǎng)是因?yàn)樽⑷肓鰞?nèi)的ALK菌群體裂解后釋放的蛋白K與蛋白C結(jié)合，且釋放的細(xì)菌產(chǎn)物激活巨噬細(xì)胞，從而增強(qiáng)了巨噬細(xì)胞對(duì)腫瘤細(xì)胞的吞噬作用，巨噬細(xì)胞加工呈遞腫瘤抗原，激活細(xì)胞免疫，腫瘤細(xì)胞被特異性殺傷，因此有效抑制對(duì)側(cè)腫瘤生長(zhǎng)。而單獨(dú)注射蛋白K不能有效激活細(xì)胞免疫，單獨(dú)注射AL菌也無(wú)法阻斷蛋白C的功能。19．（2022·廣東·高考真題）研究深海獨(dú)特的生態(tài)環(huán)境對(duì)于開發(fā)海洋資源具有重要意義。近期在“科學(xué)號(hào)”考察船對(duì)中國(guó)南?？瓶贾?，中國(guó)科學(xué)家采集了某海域1146米深海冷泉附近沉積物樣品，分離、鑒定得到新的微生物菌株并進(jìn)一步研究了其生物學(xué)特性。回答下列問(wèn)題：(1)研究者先制備富集培養(yǎng)基，然后采用法滅菌，冷卻后再接入沉積物樣品，28℃厭氧培養(yǎng)一段時(shí)間后，獲得了含擬桿菌的混合培養(yǎng)物，為了獲得純種培養(yǎng)物，除了稀釋涂布平板法，還可采用法。據(jù)圖分析，擬桿菌新菌株在以為碳源時(shí)生長(zhǎng)狀況最好。(2)研究發(fā)現(xiàn)，將采集的樣品置于各種培養(yǎng)基中培養(yǎng)，仍有很多微生物不能被分離篩選出來(lái)，推測(cè)其原因可能是。（答一點(diǎn)即可）(3)藻類細(xì)胞解體后的難降解多糖物質(zhì)，通常會(huì)聚集形成碎屑沉降到深海底部。從生態(tài)系統(tǒng)組成成分的角度考慮，擬桿菌對(duì)深海生態(tài)系統(tǒng)碳循環(huán)的作用可能是。(4)深海冷泉環(huán)境特殊，推測(cè)此環(huán)境下生存的擬桿菌所分泌的各種多糖降解酶，除具有酶的一般共性外，其特性可能還有?！敬鸢浮?1)高壓蒸汽滅菌平板劃線纖維素(2)某些微生物只有利用深海冷泉中的特有物質(zhì)才能生存（或需要在深海冷泉的特定環(huán)境中才能存活）(3)擬桿菌作為分解者，將沉降到深海底部的難降解多糖物質(zhì)分解為無(wú)機(jī)物，歸還到無(wú)機(jī)環(huán)境中，有利于碳循環(huán)的順利進(jìn)行(4)耐低溫【詳解】（1）培養(yǎng)基通常采用高壓蒸汽滅菌法進(jìn)行滅菌。可以采用稀釋涂布平板法或平板劃線法，將單個(gè)微生物分散在固體培養(yǎng)基上，經(jīng)過(guò)培養(yǎng)得到單菌落，從而獲得純凈培養(yǎng)物。分析圖12可知，在以纖維素為碳源的培養(yǎng)基中，細(xì)胞數(shù)量最多，可推知擬桿菌新菌株在以纖維素為碳源時(shí)生長(zhǎng)狀況最好。（2）深海冷泉中可能存在某些微生物，只有利用冷泉中的特有物質(zhì)才能生存（或需要在深海冷泉的特定環(huán)境中才能存活），故將采集的樣品置于各種培養(yǎng)基中培養(yǎng)，仍可能有很多微生物不能被分離篩選出來(lái)。（3）擬桿菌為異養(yǎng)生物，作為該生態(tài)系統(tǒng)的分解者，能將沉降到深海底部的難降解多糖物質(zhì)分解為無(wú)機(jī)物，歸還到無(wú)機(jī)環(huán)境中，有利于碳循環(huán)的順利進(jìn)行。（4）深海冷泉溫度較低，故生活在其中的擬桿菌所分泌的各種多糖降解酶，應(yīng)具有耐低溫的特性，才能高效降解多糖，保證擬桿菌的正常生命活動(dòng)所需。20．（2022·全國(guó)·統(tǒng)考高考真題）化合物S被廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥、食品和化工工業(yè)、用菌株C可生產(chǎn)S，S的產(chǎn)量與菌株C培養(yǎng)所利用的碳源關(guān)系密切。為此，某小組通過(guò)實(shí)驗(yàn)比較不同碳源對(duì)菌體生長(zhǎng)和S產(chǎn)量的影響，結(jié)果見表。碳源細(xì)胞干重（g/L）S產(chǎn)量（g/L）葡萄糖3.120.15淀粉0.010.00制糖廢液2.300.18回答下列問(wèn)題。(1)通常在實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)微生物時(shí)，需要對(duì)所需的玻璃器皿進(jìn)行滅菌，滅菌的方法有（答出2點(diǎn)即可）。(2)由實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，菌株C生長(zhǎng)的最適碳源是；用菌株C生產(chǎn)S的最適碳源是。菌株C的生長(zhǎng)除需要碳源外，還需要（答出2點(diǎn)即可）等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。(3)由實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，碳源為淀粉時(shí)菌株C不能生長(zhǎng)，其原因是。(4)若以制糖廢液作為碳源，為進(jìn)一步確定生產(chǎn)S的最適碳源濃度，某同學(xué)進(jìn)行了相關(guān)實(shí)驗(yàn)。請(qǐng)簡(jiǎn)要寫出實(shí)驗(yàn)思路：。(5)利用制糖廢液生產(chǎn)S可以實(shí)現(xiàn)廢物利用，其意義是（答出1點(diǎn)即可）?！敬鸢浮?1)高壓蒸汽滅菌、干熱滅菌(2)葡萄糖制糖廢液氮源、無(wú)機(jī)鹽、水(3)缺少淀粉酶(4)分別配制一系列不同濃度梯度的以制糖廢液為唯一碳源的培養(yǎng)基，培養(yǎng)菌株C，其他條件相同且適宜，一段時(shí)間后，測(cè)定并比較不同濃度制糖廢液中的S的產(chǎn)量，S產(chǎn)量最高時(shí)對(duì)應(yīng)的制糖廢液濃度即為生產(chǎn)S的最適碳源濃度(5)減少污染、節(jié)省原料、降低生產(chǎn)成本【詳解】（1）通常在實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)微生物時(shí)，為防止實(shí)驗(yàn)用的玻璃器皿等物品中原有的微生物污染培養(yǎng)物，需要使用強(qiáng)烈的理化因素殺死物體內(nèi)外一切微生物的細(xì)胞、芽孢和孢子，即對(duì)所需的玻璃器皿進(jìn)行滅菌，玻璃器皿常用的滅菌的方法有干熱滅菌、高壓蒸汽滅菌等。（2）由實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，與以制糖廢液為碳源相比，以葡萄糖為碳源時(shí)菌株C的細(xì)胞干重最大，說(shuō)明最適于菌株C生長(zhǎng)的碳源是葡萄糖；而以制糖廢液為碳源時(shí)，用菌株C生產(chǎn)S的產(chǎn)量高于以葡萄糖為碳源時(shí)的產(chǎn)量，說(shuō)明最適于生產(chǎn)S的碳源是制糖廢液。微生物的生長(zhǎng)一般都需要水、碳源、氮源和無(wú)機(jī)鹽，還需要滿足微生物生長(zhǎng)對(duì)pH、氧氣以及特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的要求，故菌株C的生長(zhǎng)除需要碳源外，還需要氮源、無(wú)機(jī)鹽、水等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。（3）分析題圖表格可以看出在以淀粉為碳源的培養(yǎng)基中，菌株C不能生長(zhǎng)，原因可能是菌株C不能合成淀粉酶或菌株C不能分泌淀粉酶，因而不能利用淀粉。（4）要測(cè)定生產(chǎn)S的最適制糖廢液為碳源的濃度，實(shí)驗(yàn)自變量為制糖廢液的濃度，可分別配制一系列不同濃度梯度的以制糖廢液為唯一碳源的培養(yǎng)基，培養(yǎng)菌株C，其他條件相同且適宜，一段時(shí)間后，測(cè)定并比較不同濃度制糖廢液中的S的產(chǎn)量，S產(chǎn)量最高時(shí)對(duì)應(yīng)的制糖廢液濃度，即為生產(chǎn)S的最適碳源濃度。（5）利用制糖廢液生產(chǎn)S可以實(shí)驗(yàn)廢物利用，既有利于減少污染、節(jié)省原料，又能降低生產(chǎn)成本。21．（2022·全國(guó)·高考真題）某同學(xué)從被石油污染的土壤中分離得到A和B兩株可以降解石油的細(xì)菌，在此基礎(chǔ)上采用平板培養(yǎng)法比較二者降解石油的能力，并分析兩個(gè)菌株的其他生理功能。實(shí)驗(yàn)所用的培養(yǎng)基成分如下。培養(yǎng)基Ⅰ：K2HPO4，MgSO4，NH4NO3，石油。培養(yǎng)基Ⅱ：K2HPO4，MgSO4，石油。操作步驟：①將A、B菌株分別接種在兩瓶液體培養(yǎng)基Ⅰ中培養(yǎng)，得到A、B菌液；②液體培養(yǎng)基Ⅰ、Ⅱ中添加瓊脂，分別制成平板Ⅰ、Ⅱ，并按圖中所示在平板上打甲、乙兩孔?；卮鹣铝袉?wèn)題。菌株透明圈大小平板Ⅰ平板ⅡA+++++B++-(1)實(shí)驗(yàn)所用培養(yǎng)基中作為碳源的成分是。培養(yǎng)基中NH4NO3的作用是為菌株的生長(zhǎng)提供氮源，氮源在菌體內(nèi)可以參與合成（答出2種即可）等生物大分子。(2)步驟①中，在資源和空間不受限制的階段，若最初接種N0個(gè)A細(xì)菌，繁殖n代后細(xì)菌的數(shù)量是。(3)為了比較A、B降解石油的能力，某同學(xué)利用步驟②所得到的平板Ⅰ、Ⅱ進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，結(jié)果如表所示（“+”表示有透明圈，“+”越多表示透明圈越大，“-”表示無(wú)透明圈），推測(cè)該同學(xué)的實(shí)驗(yàn)思路是。(4)現(xiàn)有一貧氮且被石油污染的土壤，根據(jù)上表所示實(shí)驗(yàn)結(jié)果，治理石油污染應(yīng)選用的菌株是，理由是?！敬鸢浮?1)石油DNA、RNA、蛋白質(zhì)(2)N0?2n(3)在無(wú)菌條件下，將等量等濃度的A菌液和B菌液分別接種到平板Ⅰ的甲和乙兩孔處，平板Ⅱ也進(jìn)行同樣的操作，在相同且適宜條件下培養(yǎng)一段時(shí)間，比較兩個(gè)平板的兩孔處的透明圈大小并作記錄，根據(jù)透明圈大降解能力強(qiáng)，透明圈小降解能力弱，進(jìn)而比較A、B降解石油的能力(4)AA菌株降解石油的能力高于B菌株，并且在沒(méi)有添加氮源的培養(yǎng)基中也能生長(zhǎng)【詳解】（1）培養(yǎng)基的成分有碳源、氮源、無(wú)機(jī)鹽和水等，從組成培養(yǎng)基的物質(zhì)所含化學(xué)元素可知，作為碳源的成分是石油。生物大分子DNA、RNA、蛋白質(zhì)都含有N元素，故氮源在菌體內(nèi)可以參與合成這些物質(zhì)。（2）由題意“資源和空間不受限制”可知，細(xì)菌的種群數(shù)量呈J型曲線增長(zhǎng)，由于細(xì)菌進(jìn)行二分裂，細(xì)菌每繁殖一代就是上一代的2倍，根據(jù)公式Nt=N0?λt，λ=2，繁殖n代后細(xì)菌的數(shù)量是N0?2n。（3）分析表格數(shù)據(jù)可知，實(shí)驗(yàn)的結(jié)果是：在平板Ⅰ上，A菌株降解石油的能力高于B菌株；在平板Ⅱ上，A菌株仍然能降解石油，而B菌株不能降解，根據(jù)實(shí)驗(yàn)的單一變量和對(duì)照原則，推測(cè)該同學(xué)的思路是：在無(wú)菌條件下，將等量等濃度的A菌液和B菌液分別接種到平板Ⅰ的甲和乙兩孔處，平板Ⅱ也進(jìn)行同樣的操作，在相同且適宜條件下培養(yǎng)一段時(shí)間，比較兩個(gè)平板的兩孔處的透明圈大小并作記錄，根據(jù)透明圈大降解能力強(qiáng)，透明圈小降解能力弱，進(jìn)而比較A、B降解石油的能力。（4）由表格數(shù)據(jù)可知，在平板Ⅱ（無(wú)氮源的培養(yǎng)基）上，A菌株仍然能降解石油，而B菌株不能降解，所以要治理貧氮且被石油污染的土壤，應(yīng)該選用A菌株，因?yàn)锳菌株降解石油的能力高于B菌株，并且在沒(méi)有添加氮源的培養(yǎng)基中也能生長(zhǎng)?！?021年高考真題〗22．（2021·天津·統(tǒng)考高考真題）下列操作能達(dá)到滅菌目的的是（

）A．用免洗酒精凝膠擦手 B．制作泡菜前用開水燙洗容器C．在火焰上灼燒接種環(huán) D．防疫期間用石炭酸噴灑教室【答案】C【詳解】A、用免洗酒精凝膠擦手屬于消毒，A錯(cuò)誤；B、制作泡菜前用開水燙洗容器屬于消毒過(guò)程，B錯(cuò)誤；C、在火焰上灼燒接種環(huán)能達(dá)到滅菌目的，C正確；D、防疫期間用石炭酸噴灑教室，屬于消毒，D錯(cuò)誤。故選C。23．（2021·北京·統(tǒng)考高考真題）野生草本植物多具有根系發(fā)達(dá)、生長(zhǎng)較快、抗逆性強(qiáng)的特點(diǎn)，除用于生態(tài)治理外，其中一些可替代木材栽培食用菌，收獲后剩余的菌渣可作肥料或飼料。相關(guān)敘述錯(cuò)誤的是（）A．種植此類草本植物可以減少水土流失B．菌渣作為農(nóng)作物的肥料可實(shí)現(xiàn)能量的循環(huán)利用C．用作培養(yǎng)基的草本植物給食用菌提供碳源和氮源D．菌渣作飼料實(shí)現(xiàn)了物質(zhì)在植物、真菌和動(dòng)物間的轉(zhuǎn)移【答案】B【詳解】A、此類草本植物根系發(fā)達(dá)可以固定更多的土壤，故種植此類草本植物可以減少水土流失，A正確；B、能量可多級(jí)利用，但不能循環(huán)利用，B錯(cuò)誤；C、草本植物含有蛋白質(zhì)和纖維素，可給食用菌提供碳源和氮源，C正確；D、草本植物可栽培食用菌，而菌渣可作肥料或飼料，故實(shí)現(xiàn)了物質(zhì)在植物、真菌和動(dòng)物間的轉(zhuǎn)移，D正確。故選B。24．（2021·北京·統(tǒng)考高考真題）人體皮膚表面存在著多種微生物，某同學(xué)擬從中分離出葡萄球菌。下述操作不正確的是（）A．對(duì)配制的培養(yǎng)基進(jìn)行高壓蒸汽滅菌B．使用無(wú)菌棉拭子從皮膚表面取樣C．用取樣后的棉拭子在固體培養(yǎng)基上涂布D．觀察菌落的形態(tài)和顏色等進(jìn)行初步判斷【答案】C【詳解】A、為避免雜菌污染干擾，需對(duì)配制的培養(yǎng)基進(jìn)行高壓蒸汽滅菌，A正確；B、葡萄球菌需從人體皮膚的微生物中分離，為避免雜菌污染，故需要使用無(wú)菌棉拭子從皮膚表面取樣，B正確；C、用取樣后的棉拭子浸出液在固體培養(yǎng)基上涂布，C錯(cuò)誤；D、根據(jù)微生物在固體平板培養(yǎng)基表面形成的菌落的形狀、大小、隆起程度和顏色等特征進(jìn)行鑒別，D正確。故選C。25．（2021·山東·統(tǒng)考高考真題）解脂菌能利用分泌的脂肪酶將脂肪分解成甘油和脂肪酸并吸收利用。脂肪酸會(huì)使醇溶青瓊脂平板變?yōu)樯钏{(lán)色。將不能直接吸收脂肪的甲，乙兩種菌分別等量接種在醇溶青瓊脂平板上培養(yǎng)。甲菌菌落周圍呈現(xiàn)深藍(lán)色，乙菌菌落周圍不變色，下列說(shuō)法錯(cuò)誤的是（

）A．甲菌屬于解脂菌B．實(shí)驗(yàn)中所用培養(yǎng)基以脂肪為唯一碳源C．可將兩種菌分別接種在同一平板的不同區(qū)域進(jìn)行對(duì)比D．該平板可用來(lái)比較解脂菌分泌脂肪酶的能力【答案】B【詳解】A、根據(jù)題干信息“甲菌菌落周圍呈現(xiàn)深藍(lán)色”，說(shuō)明甲可以分泌脂肪酶將脂肪分解成甘油和脂肪酸，脂肪酸會(huì)使醇溶青瓊脂平板變?yōu)樯钏{(lán)色，因此甲菌屬于解脂菌，A正確；B、乙菌落周圍沒(méi)有出現(xiàn)深藍(lán)色，說(shuō)明乙菌落不能產(chǎn)生脂肪酶，不能利用脂肪為其供能，但乙菌落也可以在培養(yǎng)基上生存，說(shuō)明該培養(yǎng)基不是以脂肪為唯一碳源，B錯(cuò)誤；C、可將兩種菌分別接種在同一平板的不同區(qū)域進(jìn)行對(duì)比，更加直觀，C正確；D、可以利用該平板可用來(lái)比較解脂菌分泌脂肪酶的能力，觀察指標(biāo)可以以菌落周圍深藍(lán)色圈的大小，D正確。故選B。26．（2021·浙江·統(tǒng)考高考真題）下列關(guān)于原生質(zhì)體和細(xì)胞計(jì)數(shù)的敘述，錯(cuò)誤的是（）A．測(cè)定植物原生質(zhì)體的密度時(shí)，可用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板B．紅墨水不能進(jìn)入活細(xì)胞，可用于檢測(cè)細(xì)胞的存活狀態(tài)并計(jì)數(shù)C．涂布分離法和劃線分離法均能得到單菌落，都可用于細(xì)胞計(jì)數(shù)D．酵母菌在液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)一段時(shí)間后，可用比濁計(jì)測(cè)定其密度【答案】C【詳解】A、可用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板對(duì)原生質(zhì)體進(jìn)行計(jì)數(shù)，一般計(jì)數(shù)總數(shù)不少于300個(gè)細(xì)胞，A正確；B、活細(xì)胞的細(xì)胞膜具有選擇透過(guò)性，紅墨水中的色素分子不能透過(guò)細(xì)胞膜，當(dāng)細(xì)胞死亡后，細(xì)胞膜失去選擇透過(guò)性，紅墨水中的色素分子能進(jìn)入細(xì)胞，所以可用紅墨水檢測(cè)細(xì)胞的存活狀態(tài)并計(jì)數(shù)，B正確；C、劃線分離法不能用于細(xì)胞計(jì)數(shù)，C錯(cuò)誤；D、酵母細(xì)胞的密度與渾濁度指標(biāo)存在一定的數(shù)量關(guān)系，所以酵母菌在液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)一段時(shí)間后，可用比濁計(jì)測(cè)定其密度，D正確。故選C。27．（2021·江蘇·高考真題）為提高一株石油降解菌的凈化能力，將菌涂布于石油為唯一碳源的固體培養(yǎng)基上，以致死率為90%的輻照劑量誘變處理，下列敘述不合理的是（

）A．將培養(yǎng)基分裝于培養(yǎng)皿中后滅菌，可降低培養(yǎng)基污染的概率B．涂布用的菌濃度應(yīng)控制在30~300個(gè)/mLC．需通過(guò)預(yù)實(shí)驗(yàn)考察輻射時(shí)間對(duì)存活率的影響，以確定最佳誘變時(shí)間D．挑取培養(yǎng)基上長(zhǎng)出的較大單菌落，給純化后進(jìn)行降解效率分析【答案】AB【詳解】A、培養(yǎng)基應(yīng)先滅菌再分裝于培養(yǎng)皿中，A符合題意；B、涂布用的菌液體積為0.1mL，培養(yǎng)皿中菌落數(shù)要求在30~300個(gè)，則涂布用的菌濃度應(yīng)控制在300~3000個(gè)/mL，B符合題意；C、輻射劑量和誘變時(shí)間都是正式實(shí)驗(yàn)的無(wú)關(guān)變量，可通過(guò)預(yù)實(shí)驗(yàn)確定，C不符合題意；D、石油降解菌能分解石油獲得碳源，形成菌落，挑取培養(yǎng)基上長(zhǎng)出的較大單菌落，經(jīng)純化后進(jìn)行降解效率分析，以獲得能高效降解石油的菌種，D不符合題意。故選AB。28．（2021·山東·統(tǒng)考高考真題）含硫蛋白質(zhì)在某些微生物的作用下產(chǎn)生硫化氫導(dǎo)致生活污水發(fā)臭。硫化氫可以與硫酸亞鐵銨結(jié)合形成黑色沉淀。為探究發(fā)臭水體中甲、乙菌是否產(chǎn)生硫化氫及兩種菌的運(yùn)動(dòng)能力，用穿刺接種的方法，分別將兩種菌接種在含有硫酸亞鐵銨的培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)，如圖所示。若兩種菌繁殖速度相等，下列說(shuō)法錯(cuò)誤的是（

）A．乙菌的運(yùn)動(dòng)能力比甲菌強(qiáng)B．為不影響菌的運(yùn)動(dòng)需選用液體培養(yǎng)基C．該實(shí)驗(yàn)不能比較出兩種菌產(chǎn)生硫化氫的量D．穿刺接種等接種技術(shù)的核心是防止雜菌的污染【答案】B【詳解】A、從圖中可以看出甲菌在試管中分布范圍小于乙菌，說(shuō)明了乙菌的運(yùn)動(dòng)能力比甲菌強(qiáng)，A正確；B、為不影響菌的運(yùn)動(dòng)需選用半固體培養(yǎng)基，B錯(cuò)誤；C、根據(jù)題意，黑色區(qū)域的面積大小反映兩種菌運(yùn)動(dòng)能力的大小，而不能表示二者產(chǎn)生硫化氫的能力大小，C正確；D、微生物接種技術(shù)的核心是防止雜菌的污染，D正確。故選B。29．（2021·浙江·統(tǒng)考高考真題）回答下列（一）、（二）小題：（一）某環(huán)保公司從淤泥中分離到一種高效降解富營(yíng)養(yǎng)化污水污染物的細(xì)菌菌株，制備了固定化菌株。（1）從淤泥中分離細(xì)菌時(shí)常用劃線分離法或法，兩種方法均能在固體培養(yǎng)基上形成。對(duì)分離的菌株進(jìn)行誘變、和鑒定，從而獲得能高效降解富營(yíng)養(yǎng)化污水污染物的菌株。該菌株只能在添加了特定成分X的培養(yǎng)基上繁殖。（2）固定化菌株的制備流程如下；①將菌株與該公司研制的特定介質(zhì)結(jié)合；②用蒸餾水去除；③檢驗(yàn)固定化菌株的。菌株與特定介質(zhì)的結(jié)合不宜直接采用交聯(lián)法和共價(jià)偶聯(lián)法，可以采用的2種方法是。（3）對(duì)外，只提供固定化菌株有利于保護(hù)該公司的知識(shí)產(chǎn)權(quán)，推測(cè)其原因是。（二）三葉青為蔓生的藤本植物，以根入藥。由于野生三葉青對(duì)生長(zhǎng)環(huán)境要求非?？量蹋约吧鷳B(tài)環(huán)境的破壞和過(guò)度的采挖，目前我國(guó)野生三葉青已十分珍稀。（1）為保護(hù)三葉青的多樣性和保證藥材的品質(zhì)，科技工作者依據(jù)生態(tài)工程原理，利用技術(shù)，實(shí)現(xiàn)了三葉青的林下種植。（2）依據(jù)基因工程原理，利用發(fā)根農(nóng)桿菌侵染三葉青帶傷口的葉片，葉片產(chǎn)生酚類化合物，誘導(dǎo)發(fā)根農(nóng)桿菌質(zhì)粒上vir系列基因表達(dá)形成和限制性核酸內(nèi)切酶等，進(jìn)而從質(zhì)粒上復(fù)制并切割出一段可轉(zhuǎn)移的DNA片段（T-DNA）。T-DNA進(jìn)入葉片細(xì)胞并整合到染色體上，T-DNA上rol系列基因表達(dá)，產(chǎn)生相應(yīng)的植物激素，促使葉片細(xì)胞持續(xù)不斷地分裂形成，再分化形成毛狀根。（3）剪取毛狀根，轉(zhuǎn)入含頭孢類抗生素的固體培養(yǎng)基上進(jìn)行多次培養(yǎng)，培養(yǎng)基中添加抗生素的主要目的是。最后取毛狀根轉(zhuǎn)入液體培養(yǎng)基、置于搖床上進(jìn)行懸浮培養(yǎng)，通過(guò)控制搖床的和溫度，調(diào)節(jié)培養(yǎng)基成分中的，獲得大量毛狀根，用于提取藥用成分?！敬鸢浮客坎挤蛛x單菌落篩選未固定的細(xì)菌降解富營(yíng)養(yǎng)化污水污染物的能力包埋法和吸附法特定介質(zhì)能為菌株繁殖提供X遺傳間種DNA聚合酶愈傷組織繼代殺滅發(fā)根農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)速營(yíng)養(yǎng)元素以及生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的種類和濃度【詳解】（一）分析題意可知，本實(shí)驗(yàn)?zāi)康氖菑挠倌嘀蟹蛛x到一種高效降解富營(yíng)養(yǎng)化污水污染物的細(xì)菌菌株，制備固定化菌株。（1）分離純化細(xì)菌最常用的方法是劃線分離法或涂布分離法，兩種方法均能在固體培養(yǎng)基上形成單菌落。為了獲得能高效降解富營(yíng)養(yǎng)化污水污染物的菌株，還需對(duì)分離的菌株進(jìn)行誘變處理，再經(jīng)篩選和鑒定。（2）固定化的方法有吸附法、共價(jià)偶聯(lián)法、交聯(lián)法和包埋法等。由于菌株與特定介質(zhì)的結(jié)合不宜直接采用交聯(lián)法和共價(jià)偶聯(lián)法，故可以采用的2種方法是包埋法和吸附法。（3）由于該菌株只能在添加了特定成分X的培養(yǎng)基上繁殖，可推測(cè)特定介質(zhì)能為菌株繁殖提供X，故該公司對(duì)外只提供固定化菌株，有利于保護(hù)該公司的知識(shí)產(chǎn)權(quán)。（二）（1）生物多樣性包括遺傳多樣性、物種多樣性和生態(tài)系統(tǒng)多樣性，為保護(hù)三葉青的遺傳多樣性和保證藥材的品質(zhì)；三葉青的林下種植，是利用間種技術(shù)。（2）分析題意可知，從質(zhì)粒上復(fù)制并切割出一段可轉(zhuǎn)移的DNA片段（T-DNA），DNA復(fù)制需要DNA聚合酶，故可知，酚類化合物誘導(dǎo)發(fā)根農(nóng)桿菌質(zhì)粒上vir系列基因表達(dá)，形成DNA聚合酶和限制性核酸內(nèi)切酶等。根據(jù)植物組織培養(yǎng)技術(shù)過(guò)程可知，相應(yīng)植物激素可以促使葉片細(xì)胞脫分化形成愈傷組織，再分化形成毛狀根。（3）剪取毛狀根，轉(zhuǎn)入含頭孢類抗生素的固體培養(yǎng)基上進(jìn)行多次繼代培養(yǎng)，培養(yǎng)基中添加抗生素的主要目的是殺滅發(fā)根農(nóng)桿菌。最后取毛狀根轉(zhuǎn)入液體培養(yǎng)基、置于搖床上進(jìn)行懸浮培養(yǎng)，通過(guò)控制搖床的轉(zhuǎn)速和溫度，調(diào)節(jié)培養(yǎng)基成分中的營(yíng)養(yǎng)元素以及生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的種類和濃度，獲得大量毛狀根，用于提取藥用成分。30．（2021·重慶·高考真題）為了研究PDCD4基因?qū)π∈笞訉m內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞凋亡的影響，進(jìn)行了相關(guān)實(shí)驗(yàn)。(1)取小鼠子宮時(shí)，為避免細(xì)菌污染，手術(shù)器具應(yīng)進(jìn)行處理；子宮取出剪碎后，用處理一定時(shí)間，可獲得分散的子宮內(nèi)膜組織細(xì)胞，再分離獲得基質(zhì)細(xì)胞用于培養(yǎng)。(2)培養(yǎng)基中營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)應(yīng)有（填寫兩種）；培養(yǎng)箱中CO2濃度為5%，其主要作用是。(3)在含PDCD4基因的表達(dá)載體中，啟動(dòng)子的作用是。為了證明PDCD4基因?qū)|(zhì)細(xì)胞凋亡的作用，以含PDCD4基因的表達(dá)載體和基質(zhì)細(xì)胞的混合培養(yǎng)為實(shí)驗(yàn)組，還應(yīng)設(shè)立兩個(gè)對(duì)照組，分別為。經(jīng)檢測(cè)，實(shí)驗(yàn)組中PDCD4表達(dá)水平和細(xì)胞凋亡率顯著高于對(duì)照組，說(shuō)明該基因?qū)|(zhì)細(xì)胞凋亡具有（填“抑制”或“促進(jìn)”）作用。【答案】(1)滅菌胰蛋白酶或膠原蛋白酶(2)無(wú)機(jī)鹽、葡萄糖、氨基酸、微量元素、促生長(zhǎng)因子、血清或血漿（填寫兩種即可）維持培養(yǎng)液的pH值(3)RNA聚合酶的識(shí)別和結(jié)合位點(diǎn)，驅(qū)動(dòng)轉(zhuǎn)錄出相應(yīng)的mRNA基質(zhì)細(xì)胞懸浮液、空載體和基質(zhì)細(xì)胞的混合培養(yǎng)液促進(jìn)【詳解】（1）為避免細(xì)菌污染，手術(shù)器具應(yīng)進(jìn)行滅菌處理；動(dòng)物組織取出剪碎后，用胰蛋白酶或膠原蛋白酶處理一定時(shí)間，可獲得分散的動(dòng)物組織細(xì)胞。（2）動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，培養(yǎng)基中營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)應(yīng)有無(wú)機(jī)鹽、葡萄糖、氨基酸、微量元素、促生長(zhǎng)因子、血清或血漿等；培養(yǎng)箱中為95%的空氣和5%的CO2，其中5%的CO2的主要作用是維持培養(yǎng)液的pH值。（3）啟動(dòng)子是RNA聚合酶的識(shí)別和結(jié)合位點(diǎn)，驅(qū)動(dòng)轉(zhuǎn)錄出相應(yīng)的mRNA。為了證明PDCD4基因?qū)|(zhì)細(xì)胞凋亡的作用，以含PDCD4基因的表達(dá)載體和基質(zhì)細(xì)胞的混合培養(yǎng)為實(shí)驗(yàn)組，還應(yīng)設(shè)立兩個(gè)對(duì)照組，分別為基質(zhì)細(xì)胞懸浮液（空白對(duì)照）、空載體和基質(zhì)細(xì)胞的混合培養(yǎng)液（排除空載體的作用）。經(jīng)檢測(cè)，實(shí)驗(yàn)組中PDCD4表達(dá)水平和細(xì)胞凋亡率顯著高于對(duì)照組，說(shuō)明該基因?qū)|(zhì)細(xì)胞凋亡具有促進(jìn)作用。31．（2021·浙江·統(tǒng)考高考真題）回答下列（一）、（二）小題：（一）回答與甘蔗醋制作有關(guān)的問(wèn)題：（1）為了獲得釀造甘蔗醋的高產(chǎn)菌株，以自然發(fā)酵的甘蔗渣為材料進(jìn)行篩選。首先配制醋酸菌選擇培養(yǎng)基：將適量的葡萄糖、KH2PO4、MgSO4溶解并定容，調(diào)節(jié)pH，再高壓蒸汽滅菌，經(jīng)后加入3%體積的無(wú)水乙醇。然后將10g自然發(fā)酵的甘蔗渣加入選擇培養(yǎng)基，振蕩培養(yǎng)24h。用將少量上述培養(yǎng)液涂布到含CaCO3的分離培養(yǎng)基上，在30℃培養(yǎng)48h。再挑取分離培養(yǎng)基上具有的單菌落若干，分別接種到與分離培養(yǎng)基成分相同的培養(yǎng)基上培養(yǎng)24h后，置于4℃冰箱中保存。（2）優(yōu)良產(chǎn)酸菌種篩選。將冰箱保存的菌種分別接入選擇培養(yǎng)基，培養(yǎng)一段時(shí)間后，取合適接種量的菌液在30℃、150r/min條件下振蕩培養(yǎng)。持續(xù)培養(yǎng)至培養(yǎng)液中醋酸濃度不再上升，或者培養(yǎng)液中含量達(dá)到最低時(shí)，發(fā)酵結(jié)束。篩選得到的優(yōu)良菌種除了產(chǎn)酸量高外，還應(yīng)有（答出2點(diǎn)即可）等特點(diǎn)。（3）制醋過(guò)程中，可將甘蔗渣制作成固定化介質(zhì)，經(jīng)后用于發(fā)酵。其固定化方法為。（二）斑馬魚是一種模式動(dòng)物，體外受精發(fā)育，胚胎透明、便于觀察，可用于水質(zhì)監(jiān)測(cè)，基因功能分析以及藥物毒性與安全性評(píng)價(jià)等。（1）由于人類活動(dòng)產(chǎn)生的生活污水日益增多，大量未經(jīng)處理的污水直接排入河流、湖泊會(huì)引起水體，導(dǎo)致藻類大量繁殖形成水華。取水樣喂養(yǎng)斑馬魚，可用斑馬魚每周的體重和死亡率等指標(biāo)監(jiān)測(cè)水體污染程度。（2）為了研究某基因在斑馬魚血管發(fā)育過(guò)程中的分子調(diào)控機(jī)制，用DNA連接酶將該基因連接到質(zhì)粒載體形成，導(dǎo)入到大腸桿菌菌株DH5α中。為了能夠連接上該目的基因、并有利于獲得含該目的基因的DH5α陽(yáng)性細(xì)胞克隆，質(zhì)粒載體應(yīng)含有（答出2點(diǎn)即可）。提取質(zhì)粒后，采用法，將該基因?qū)氲桨唏R魚受精卵細(xì)胞中，培養(yǎng)并觀察轉(zhuǎn)基因斑馬魚胚胎血管的發(fā)育情況。（3）為了獲取大量斑馬魚胚胎細(xì)胞用于藥物篩選，可用分散斑馬魚囊胚的內(nèi)細(xì)胞團(tuán)，取分散細(xì)胞作為初始材料進(jìn)行培養(yǎng)。培養(yǎng)瓶中添加成纖維細(xì)胞作為，以提高斑馬魚胚胎細(xì)胞克隆的形成率?！敬鸢浮坷鋮s玻璃刮刀較大透明圈斜面乙醇耐酒精度高、耐酸高滅菌吸附法富營(yíng)養(yǎng)化重組DNA分子限制性核酸內(nèi)切酶的識(shí)別序列、抗生素抗性基因顯微注射胰蛋白酶原代飼養(yǎng)層細(xì)胞【詳解】（一）（1）高壓蒸汽滅菌剛結(jié)束時(shí)，培養(yǎng)基溫度較高，要等培養(yǎng)基冷卻后再加入3%體積的無(wú)水乙醇。涂布分離法可用于單菌落分離，使用玻璃刮刀將待分離的菌液涂布到分離培養(yǎng)基的整個(gè)平面上。醋酸菌發(fā)酵產(chǎn)生的醋酸會(huì)使培養(yǎng)基中的CaCO3分解，形成透明圈。菌落小，透明圈大，代表著高產(chǎn)醋酸菌。菌種的貯存方法：在無(wú)菌操作下將單菌落用接種環(huán)取出，再用劃線法接種在斜面培養(yǎng)基上，培養(yǎng)24h后，置于4℃冰箱中保存。（2）醋酸發(fā)酵結(jié)束的標(biāo)志性：產(chǎn)物不再增加（醋酸濃度不再上升）或原料消耗到最低值（乙醇含量達(dá)到最低）。優(yōu)質(zhì)菌種不光要產(chǎn)酸高，還要耐高酸，同時(shí)還要耐酒精（原料）等特點(diǎn)。（3）我們?cè)诶梦⑸飼r(shí)，常常要求所利用的微生物不被其他微生物污染。因此，在培養(yǎng)微生物時(shí)必須進(jìn)行無(wú)菌操作，所以作為固定化介質(zhì)的甘蔗渣需要經(jīng)過(guò)滅菌處理。甘蔗渣類似果醋發(fā)酵裝置中的鋸末，可使醋桿菌吸附在甘蔗渣上進(jìn)行發(fā)酵。（二）（1）生活污水富含N、P，未經(jīng)處理就大量排放，會(huì)導(dǎo)致水體富營(yíng)養(yǎng)化，導(dǎo)致藻類大量繁殖形成水華或赤潮。（2）具有相同黏性末端的目的基因和載體DNA（如質(zhì)粒），經(jīng)DNA連接酶處理后，會(huì)形成重組DNA分子。與目的基因相同的限制性核酸內(nèi)切酶識(shí)別序列，可以確保限制性內(nèi)切酶處理后與目的基因形成相同的黏性末端，以便于和目的基因的連接。標(biāo)記基因（抗生素抗性基因）的存在，便于篩選含有目的基因的受體細(xì)胞。動(dòng)物基因工程，通常采用顯微注射法將重組DNA分子導(dǎo)入動(dòng)物受精卵中。（3）使用胰蛋白酶處理囊胚的內(nèi)細(xì)胞團(tuán)，借助酶的專一性，可分解細(xì)胞間質(zhì)的蛋白質(zhì)，讓細(xì)胞分散，便于培養(yǎng)。將分散的細(xì)胞初次在卡氏瓶中培養(yǎng)，稱之為原代培養(yǎng)。提高細(xì)胞克隆形成率的措施有：選擇適宜的培養(yǎng)基、添加血清（胎牛血清最好）、飼養(yǎng)層細(xì)胞（滋養(yǎng)細(xì)胞如經(jīng)射線照射本身失去增殖力的小鼠成纖維細(xì)胞）支持生長(zhǎng)、激素（胰島素等）刺激、使用CO2培養(yǎng)箱、調(diào)節(jié)pH等。32．（2021·湖南·統(tǒng)考高考真題）大熊貓是我國(guó)特有的珍稀野生動(dòng)物，每只成年大熊貓每日進(jìn)食竹子量可達(dá)12~38kg。大熊貓可利用竹子中8%的纖維素和27%的半纖維素。研究人員從大熊貓糞便和土壤中篩選纖維素分解菌?；卮鹣铝袉?wèn)題：（1）纖維素酶是一種復(fù)合酶，一般認(rèn)為它至少包括三種組分，即。為篩選纖維素分解菌，將大熊貓新鮮糞便樣品稀釋液接種至以為唯一碳源的固體培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)，該培養(yǎng)基從功能上分類屬于培養(yǎng)基。（2）配制的培養(yǎng)基必須進(jìn)行滅菌處理，目的是。檢測(cè)固體培養(yǎng)基滅菌效果的常用方法是。（3）簡(jiǎn)要寫出測(cè)定大熊貓新鮮糞便中纖維素分解菌活菌數(shù)的實(shí)驗(yàn)思路。（4）為高效降解農(nóng)業(yè)秸稈廢棄物，研究人員利用從土壤中篩選獲得的3株纖維素分解菌，在37℃條件下進(jìn)行玉米秸稈降解實(shí)驗(yàn)，結(jié)果如表所示。在該條件下纖維素酶活力最高的是菌株，理由是。菌株秸稈總重(g)秸稈殘重(g)秸稈失重（%）纖維素降解率（%）A2.001.5124.5016.14B2.001.5323.5014.92C2.001.4229.0023.32【答案】C1酶、Cx酶和葡萄糖苷酶纖維素選擇高壓蒸汽為了殺死培養(yǎng)基中的所有微生物（微生物和芽孢、孢子）不接種培養(yǎng)（或空白培養(yǎng)）將大熊貓新鮮糞便樣液稀釋適當(dāng)倍數(shù)后，取0.1mL涂布到若干個(gè)平板（每個(gè)稀釋度至少涂布三個(gè)平板），對(duì)菌落數(shù)在30～300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)，則可根據(jù)公式推測(cè)大熊貓新鮮糞便中纖維素分解菌活菌數(shù)C接種C菌株后秸稈失重最多，纖維素降解率最大【詳解】（1）纖維素酶是一種復(fù)合酶，一般認(rèn)為它至少包括三種組分，即C1酶、Cx酶和葡萄糖苷酶，前兩種酶使纖維素分解成纖維二糖，第三種酶將纖維二糖分解成葡萄糖。在用纖維素作為唯一碳源的培養(yǎng)基中，纖維素分解菌能夠很好地生長(zhǎng)，其他微生物則不能生長(zhǎng)。為篩選纖維素分解菌，將大熊貓新鮮糞便樣品稀釋液接種至以纖維素為唯一碳源的固體培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)；培養(yǎng)基從功能上分類可分為選擇培養(yǎng)基和鑒別培養(yǎng)基，故該培養(yǎng)基從功能上分類屬于選擇培養(yǎng)基。（2）配制培養(yǎng)基的常用高壓蒸汽滅菌，即將培養(yǎng)基置于壓力100kPa、溫度121℃條件下維持15～30分鐘，目的是為了殺死培養(yǎng)基中的所有微生物（微生物和芽孢、孢子）。為檢測(cè)滅菌效果可對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行空白培養(yǎng)，即將未接種的培養(yǎng)基在適宜條件下培養(yǎng)一段時(shí)間，若在適宜條件下培養(yǎng)無(wú)菌落出現(xiàn)，說(shuō)明培養(yǎng)基滅菌徹底，否則說(shuō)明培養(yǎng)基滅菌不徹底。（3）為測(cè)定大熊貓新鮮糞便中纖維素分解菌活菌數(shù)，常采用稀釋涂布平板法，在適宜的條件下對(duì)大熊貓新鮮糞便中纖維素分解菌進(jìn)行純化并計(jì)數(shù)時(shí)，對(duì)照組應(yīng)該涂布等量的無(wú)菌水。將大熊貓新鮮糞便樣液稀釋適當(dāng)倍數(shù)后，取0.1mL涂布到若干個(gè)平板（每個(gè)稀釋度至少涂布三個(gè)平板），對(duì)菌落數(shù)在30～300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)，則可根據(jù)公式推測(cè)大熊貓新鮮糞便中纖維素分解菌活菌數(shù)。（4）測(cè)定酶活力時(shí)可以用單位時(shí)間內(nèi)、單位體積中反應(yīng)物的減少量或產(chǎn)物的增加量來(lái)表示。由表格可知，在適宜的條件下，C菌株在相同的溫度和時(shí)間下，秸稈失重最多，纖維素降解率最大，說(shuō)明該菌株的纖維素分解菌產(chǎn)生的纖維素酶活力最大?！?020年高考真題〗33．（2020·江蘇·統(tǒng)考高考真題）為純化菌種，在鑒別培養(yǎng)基上劃線接種纖維素降解細(xì)菌，培養(yǎng)結(jié)果如圖所示。下列敘述正確的是（

）A．倒平板后需間歇晃動(dòng)，以保證表面平整B．圖中Ⅰ、Ⅱ區(qū)的細(xì)菌數(shù)量均太多，應(yīng)從Ⅲ區(qū)挑取單菌落C．該實(shí)驗(yàn)結(jié)果因單菌落太多，不能達(dá)到菌種純化的目的D．菌落周圍的纖維素被降解后，可被剛果紅染成紅色【答案】B【詳解】A、倒平板后無(wú)需晃動(dòng)，A錯(cuò)誤；B、Ⅰ區(qū)、Ⅱ區(qū)沒(méi)有出現(xiàn)單菌落，說(shuō)明細(xì)菌數(shù)量太多，故應(yīng)從Ⅲ區(qū)挑取單菌落，B正確；C、出現(xiàn)單菌落即達(dá)到了菌種純化的目的，C錯(cuò)誤；D、剛果紅是一種染料，它可以與像纖維素這樣的多糖物質(zhì)形成紅色復(fù)合物，但并不和水解后的纖維二糖和葡萄糖發(fā)生這種反應(yīng)，D錯(cuò)誤。故選B。34．（2020·江蘇·統(tǒng)考高考真題）甲、乙兩個(gè)實(shí)驗(yàn)小組分別進(jìn)行了“酵母細(xì)胞固定化技術(shù)”的實(shí)驗(yàn)，結(jié)果如下圖所示。出現(xiàn)乙組實(shí)驗(yàn)結(jié)果的原因可能為（

）A．CaCl2溶液濃度過(guò)高 B．海藻酸鈉溶液濃度過(guò)高C．注射器滴加速度過(guò)慢 D．滴加時(shí)注射器出口浸入到CaCl2溶液中【答案】B【詳解】A、CaCl2溶液濃度過(guò)大，會(huì)導(dǎo)致凝膠珠硬度大，易開裂；A錯(cuò)誤；B、海藻酸鈉溶液濃度過(guò)高會(huì)導(dǎo)致凝膠珠呈蝌蚪狀，B正確；C、注射器滴加速度過(guò)快會(huì)導(dǎo)致凝膠珠呈蝌蚪狀，C錯(cuò)誤；D、注射器離液面過(guò)近會(huì)導(dǎo)致凝膠珠呈蝌蚪狀，而非注射器口侵入到CaCl2溶液中，D錯(cuò)誤故選B。35．（2020·山東·統(tǒng)考高考真題）野生型大腸桿菌可以在基本培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，發(fā)生基因突變產(chǎn)生的氨基酸依賴型菌株需要在基本培養(yǎng)基上補(bǔ)充相應(yīng)氨基酸才能生長(zhǎng)。將甲硫氨酸依賴型菌株M和蘇氨酸依賴型菌株N單獨(dú)接種在基本培養(yǎng)基上時(shí)，均不會(huì)產(chǎn)生菌落。某同學(xué)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中發(fā)現(xiàn)，將M、N菌株混合培養(yǎng)一段時(shí)間，充分稀釋后再涂布到基本培養(yǎng)基上，培養(yǎng)后出現(xiàn)許多由單個(gè)細(xì)菌形成的菌落，將這些菌落分別接種到基本培養(yǎng)基上，培養(yǎng)后均有菌落出現(xiàn)。該同學(xué)對(duì)這些菌落出現(xiàn)原因的分析，不合理的是（

）A．操作過(guò)程中出現(xiàn)雜菌污染B．M、N菌株互為對(duì)方提供所缺失的氨基酸C．混合培養(yǎng)過(guò)程中，菌株獲得了對(duì)方的遺傳物質(zhì)D．混合培養(yǎng)過(guò)程中，菌株中已突變的基因再次發(fā)生突變【答案】B【詳解】A.操作過(guò)程當(dāng)中出現(xiàn)雜菌污染，基本培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的為雜菌，A合理；B.若M、N菌株互為對(duì)方提供所缺失的氨基酸形成的菌落，需要MN混合在一起才能生存，而該菌落來(lái)自于單個(gè)細(xì)菌形成的菌落，而題干中進(jìn)行了充分稀釋，單個(gè)細(xì)菌缺少必須的氨基酸，不能形成菌落，B不合理；C.M、N菌株混合培養(yǎng)后在基本培養(yǎng)基上可以生存。推測(cè)可能是混合培養(yǎng)過(guò)程當(dāng)中，菌株間發(fā)生了基因交流，獲得了對(duì)方的遺傳物質(zhì)，C合理；D.基因突變是不定向的，在混合培養(yǎng)過(guò)程中，菌株當(dāng)中已突變的基因也可能再次發(fā)生突變得到可在基本培養(yǎng)基上生存的野生型大腸桿菌，D合理。故選B。36．（2020·浙江·高考真題）下列關(guān)于微生物培養(yǎng)及利用的敘述，錯(cuò)誤的是（

）A．利用尿素固體培養(yǎng)基可迅速殺死其他微生物，而保留利用尿素的微生物B．配制培養(yǎng)基時(shí)應(yīng)根據(jù)微生物的種類調(diào)整培養(yǎng)基的pHC．酵母菌不能直接利用糯米淀粉發(fā)酵得到糯米酒D．適宜濃度的酒精可使醋化醋桿菌活化【答案】A【詳解】A、利用尿素固體培養(yǎng)基，由于不能利用尿素做氮源的微生物不能生長(zhǎng)繁殖，而保留利用尿素的微生物，并非殺死，A錯(cuò)誤；B、不同的微生物所需的pH不同，所以配置培養(yǎng)基時(shí)應(yīng)根據(jù)微生物的種類調(diào)整培養(yǎng)基的pH，B正確；C、酵母菌不能直接利用淀粉，應(yīng)用酒曲中的根霉和米曲霉等微生物把淀粉糖化，再用酵母菌發(fā)酵得到糯米酒，C正確；D、醋化醋桿菌在有氧條件下利用酒精產(chǎn)生醋酸，D正確。故選A。37．（2020·浙江·統(tǒng)考高考真題）下列關(guān)于淀粉酶的敘述，錯(cuò)誤的是A．植物、動(dòng)物和微生物能產(chǎn)生淀粉酶B．固相淀粉酶比水溶液中的淀粉酶穩(wěn)定性更高C．枯草桿菌淀粉酶的最適溫度比唾液淀粉酶的高D．淀粉被淀粉酶水解形成的糊精遇碘-碘化鉀溶液不顯色【答案】D【詳解】A、淀粉酶可以分解淀粉，植物、動(dòng)物和微生物都能產(chǎn)生淀粉酶，A正確；B、固相淀粉酶不溶于水，比水溶液中的淀粉酶穩(wěn)定性更高，可以反復(fù)利用，B正確；C、枯草桿菌淀粉酶的最適溫度為50～75℃，比唾液淀粉酶的高，C正確；

D、淀粉水解時(shí)一般先生成糊精（遇碘顯紅色），再生成麥芽糖（遇碘不顯色），最終生成葡萄糖，D錯(cuò)誤。故選D。38．（2020·浙江·統(tǒng)考高考真題）回答下列（一）、（二）小題：（一）回答與泡菜制作有關(guān)的問(wèn)題：（1）用蘿卜等根菜類蔬菜制作泡菜，用熱水短時(shí)處理，可抑制某些微生物產(chǎn)生，從而使成品泡菜口感較脆。同時(shí)，該處理也會(huì)使泡菜發(fā)酵時(shí)間縮短，其原因是。（2）泡菜發(fā)酵初期，由于泡菜罐加蓋并水封，會(huì)使菌被逐漸抑制。發(fā)酵中期，乳酸菌大量繁殖，會(huì)使菌受到抑制。發(fā)酵后期，乳酸生產(chǎn)過(guò)多，會(huì)使乳酸菌受到抑制。（3）從泡菜汁中可分離制作酸奶的乳酸菌，首先對(duì)經(jīng)多次發(fā)酵的泡菜汁進(jìn)行過(guò)濾，然后取濾液進(jìn)行，再用的方法在某種含牛乳的專用的培養(yǎng)基中進(jìn)行初步篩選。該培養(yǎng)基必須含有，以便于觀察是否產(chǎn)酸。（4）自然界中醋桿菌常與乳酸菌共同生長(zhǎng)。若要篩選出醋桿菌，則其專用的培養(yǎng)基中應(yīng)添加。（二）回答與基因工程和植物克隆有關(guān)的問(wèn)題：（1）為了獲取某植物葉片無(wú)菌的原生質(zhì)體，先將葉片經(jīng)表面消毒并去除下表皮，再將其置于經(jīng)處理的較高滲透壓的混合酶液中。酶解后，經(jīng)多次離心獲得原生質(zhì)體。然后測(cè)定該原生質(zhì)體的活性，可采用的方法有（答出2點(diǎn)即可）。（2）若要獲得已知序列的抗病基因，可采用或PCR的方法。為了提高目的基因和質(zhì)粒重組的成功率，選擇使用，對(duì)含目的基因的DNA片段進(jìn)行處理，使其兩端形成不同的黏性末端，對(duì)質(zhì)粒也進(jìn)行相同的處理，然后用DNA連接酶連接形成重組質(zhì)粒。通過(guò)在大腸桿菌中，以獲得大量的重組質(zhì)粒，最終將其導(dǎo)入原生質(zhì)體中。（3）原生質(zhì)體在培養(yǎng)過(guò)程中，只有重新形成后，才可進(jìn)行有絲分裂。多次分裂形成的小細(xì)胞團(tuán)可通過(guò)或器官發(fā)生的途徑再生植株?！敬鸢浮抗z酶細(xì)胞破裂，細(xì)胞內(nèi)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)外流使乳酸菌快速地獲得營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)喜好氧的不耐酸的稀釋涂布分離酸堿指示劑乙醇過(guò)濾滅菌染色法，滲透吸水或失水化學(xué)合成兩種限制性核酸內(nèi)切酶擴(kuò)增細(xì)胞壁胚胎發(fā)生【詳解】（一）（1）用蘿卜等根菜類蔬菜制作泡菜時(shí)，為抑制某些微生物產(chǎn)生果膠酶，從而使成品泡菜口感較脆，可用熱水短時(shí)處理。同時(shí)，該處理也會(huì)使細(xì)胞破裂，細(xì)胞內(nèi)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)外流使乳酸菌快速地獲得營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，從而使泡菜發(fā)酵時(shí)間縮短。（2）泡菜發(fā)酵初期，由于泡菜罐加蓋并水封，形成無(wú)氧環(huán)境，會(huì)使喜好氧的菌被逐漸抑制。發(fā)酵中期，乳酸菌大量繁殖，產(chǎn)生乳酸，會(huì)使不耐酸的菌受到抑制。發(fā)酵后期，乳酸生產(chǎn)過(guò)多，又會(huì)抑制乳酸菌。（3）從泡菜汁中可分離制作酸奶的乳酸菌，首先對(duì)經(jīng)多次發(fā)酵的泡菜汁進(jìn)行過(guò)濾，然后取濾液進(jìn)行稀釋，再用涂布分離的方法在某種含牛乳的專用的培養(yǎng)基中進(jìn)行初步篩選。為了便于觀察是否產(chǎn)酸，該培養(yǎng)基必須含有酸堿指示劑。（4）自然界中醋桿菌常與乳酸菌共同生長(zhǎng)。由于醋酸桿菌可以利用乙醇產(chǎn)生醋酸，若要篩選出醋桿菌，則其專用的培養(yǎng)基中應(yīng)添加乙醇。（二）（1）為了獲取某植物葉片無(wú)菌的原生質(zhì)體，先將葉片經(jīng)表面消毒并去除下表皮，再將其置于經(jīng)過(guò)濾滅菌處理的較高滲透壓的混合酶液中。酶解后，經(jīng)多次離心獲得原生質(zhì)體。可采用染色法、滲透吸水或失水的方法測(cè)定該原生質(zhì)體的活性。（2）可采用人工合成或PCR的方法獲得已知序列的抗病基因。對(duì)含目的基因的DNA片段進(jìn)行處理，為使其兩端形成不同的黏性末端，需要選擇使用兩種限制性核酸內(nèi)切酶，對(duì)質(zhì)粒也進(jìn)行相同的處理，為了提高目的基因和質(zhì)粒重組的成功率，然后用DNA連接酶連接形成重組質(zhì)粒。