DB22-T2964-2019-飼料中壬基酚的測定液相色譜-質(zhì)譜-質(zhì)譜法-吉林省

ICS65.120DB22B46吉林省地方標(biāo)準(zhǔn)DB22/T2964—2019飼料中壬基酚的測定液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法DeterminationofNonylPhenolinfeeds—LC-MS/MSmethod吉林省市場監(jiān)督管理廳發(fā)布DB22/T2964—2019前言本標(biāo)準(zhǔn)按照GB/T1.1-2009和GB/T20001.4-2015給出的規(guī)則起草。本標(biāo)準(zhǔn)由吉林出入境檢驗(yàn)檢疫局提出并歸口。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：吉林出入境檢驗(yàn)檢疫局檢驗(yàn)檢疫技術(shù)中心、白城海關(guān)、吉林大學(xué)。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：王岸英、胡婷婷、馮博、李玲、宋翱、劉洋、李嘉慧、李愛軍。IDB22/T2964—2019飼料中壬基酚的測定液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法1范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了飼料中壬基酚的液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜測定方法的原理、試劑或材料、儀器設(shè)備、樣品、試驗(yàn)步驟、試驗(yàn)數(shù)據(jù)處理、精密度及試驗(yàn)報(bào)告。本標(biāo)準(zhǔn)適用于配合飼料、預(yù)混合飼料及濃縮飼料中壬基酚的測定。本方法飼料中壬基酚的檢出限為50.0g/kg，定量限為150.0g/kg。2規(guī)范性引用文件下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法。GB/T14699.1飼料采樣GB/T20195動物飼料試樣的制備3原理試樣中的壬基酚用乙腈提取，飽和乙酸鉛溶液除蛋白，經(jīng)PSA（N-丙基乙二胺）固相萃取柱凈化，液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜儀測定，外標(biāo)法定量。除另有規(guī)定，僅用分析純試劑。4.5乙腈（CH3CN）：色譜級。4.7正己烷（C6H14）：色譜級。4.9飽和乙酸鉛溶液：在50mL水中加入一定量的三水合乙酸鉛（4.3），超聲5min，直至固體不再溶解。4.103%甲酸-甲醇溶液：量取3mL甲酸（4.8）和97mL甲醇（4.4），混勻備用。4.1135%乙腈溶液：量取65mL水（4.1）和35mL乙腈（4.5），混勻備用。4.12標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液：準(zhǔn)確稱取壬基酚標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)100mg（精確到0.1mg），用甲醇（4.4）溶解并定容于100mL棕色容量瓶中，配制成濃度為1000μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲備液，-18℃條件下保存6個(gè)月。4.13空白樣品提取液：用不含壬基酚的樣品，參照7.1制備空白樣品提取液。4.14標(biāo)準(zhǔn)工作液：根據(jù)需要將壬基酚標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液用空白樣品提取液（4.13）稀釋成適用濃度的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。該溶液在0℃～4℃冰箱中保存。1DB22/T2964—20194.15PSA固相萃取柱：即N-丙基乙二胺固相萃取柱，500mg/6mL或相當(dāng)者。使用前依次用5mL丙酮（4.6）、5mL正己烷（4.7）活化。4.16濾膜：0.22μm，有機(jī)系。5儀器設(shè)備5.1液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜儀：配備電噴霧離子源（ESI）。5.2天平：感量為0.01g和0.0001g。5.3樣品粉碎機(jī)。5.4高速離心機(jī)：10000r/min。5.5超聲波清洗機(jī)。5.6渦旋混合器。5.7旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀。6樣品6.1按GB/T14699.1的規(guī)定抽取有代表性的樣品，用四分法縮減取樣。6.2按照GB/T20195的規(guī)定制備樣品，粉碎過0.45mm孔徑篩，混合均勻，裝入磨口瓶中備用。7試驗(yàn)步驟7.1提取稱取5g（精確至0.01g）飼料樣品于50mL具塞離心管中，加入20mL乙腈（4.5），充分渦旋混合1min，超聲提取10min，于10000r/min速率下離心5min，收集上清液于雞心瓶中；殘?jiān)性偌尤?0mL乙腈（4.5）重復(fù)提取1次，合并兩次提取液，于35℃下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至近干后，加入3mL正己烷（4.7）渦旋溶解，將提取液移至玻璃試管中，再用2mL正己烷（4.7）充分洗滌雞心瓶，合并提取液，在提取液中加入100μL飽和乙酸鉛溶液（4.9），渦旋、離心后，取上清液，待凈化。將7.1中的待凈化液轉(zhuǎn)移至活化后的PSA固相萃取柱（4.15）中，棄去流出液，然后依次用5mL甲醇（4.4）和5mL3%甲酸-甲醇溶液（4.10）洗脫，收集洗脫液，整個(gè)固相萃取過程流速不超過1mL/min。洗脫液于35℃下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至近干，殘留物中準(zhǔn)確加入1.0mL35%乙腈溶液（4.11），混合均勻后，過0.22m濾膜，供液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜儀（5.1）測定。7.3空白試驗(yàn)流動相：A:水；B：乙腈；梯度洗脫條件參見表1；2DB22/T2964—2019c)流速：0.25mL/min；d)進(jìn)樣量：10L。表1梯度洗脫條件時(shí)間min0.02.05.07.07.111.0A%B%6510035901001003535065657.4.2質(zhì)譜參考條件本標(biāo)準(zhǔn)所使用的質(zhì)譜參考條件如下：a)電離方式：電噴霧電離（ESI）；b)掃描方式：負(fù)離子掃描，多反應(yīng)監(jiān)測（MRM）；c)電離電壓：-4.5kV；d)離子源溫度：550℃；e)氣簾氣壓力（CUR）：0.75MPa；f)霧化氣壓力：1.5MPa；分子式精確分子量將濃度分別為250.0、300.0、500.0、1000.0、2000.0g/L的壬基酚標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，按參考色譜和質(zhì)譜條件測定。以壬基酚質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，相應(yīng)的峰面積響應(yīng)值為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸分析。在同一色譜/質(zhì)譜條件下進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)溶液和樣品溶液的測定，如果樣品溶液中檢出的色譜峰的保留時(shí)間與標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)色譜峰的保留時(shí)間一致，所選擇的兩對子離子的質(zhì)荷比也一致，而且樣品定性離子的相對3DB22/T2964—2019豐度與濃度相當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的定性離子的相對豐度相比較，相對偏差不超過表3規(guī)定的范圍，則可判定樣品中存在該物質(zhì)。標(biāo)準(zhǔn)溶液的多反應(yīng)監(jiān)測色譜圖參見附錄A。表3定性分析時(shí)相對離子豐度的最大允許偏差相對離子豐度/%＞50±2020～50±2510～20±30≤10±50允許的相對偏差/%7.4.5定量測定平行做兩份測定。標(biāo)準(zhǔn)工作液和樣液中被測組分的響應(yīng)值均應(yīng)在儀器線性響應(yīng)范圍內(nèi)。在上述色譜條件下，壬基酚的參考保留時(shí)間為5.78min，外標(biāo)法定量。標(biāo)準(zhǔn)溶液的多反應(yīng)監(jiān)測色譜圖參見附錄A。8試驗(yàn)數(shù)據(jù)處理用色譜數(shù)據(jù)處理機(jī)或按公式（1）計(jì)算樣品中壬基酚殘留含量，計(jì)算結(jié)果需扣除空白值。XcV……….…(1)m式中：X——樣品中被測組分含量，單位為微克每千克（g/kg）；c——被測組分溶液濃度，單位為微克每升（g/L）；V——樣液最終定容體積，單位為毫升（mL）；在同一實(shí)驗(yàn)室，由同一操作者使用相同設(shè)備，按相同的測試方法，并在短時(shí)間內(nèi)對同一被測對象相互獨(dú)立進(jìn)行測試獲得的兩次獨(dú)立測試結(jié)果的絕對差值不大于這兩個(gè)測定值的算術(shù)平均值的15%，以大于這兩個(gè)測定值的算術(shù)平均值的95%的情況不超過5%為前提。在不同的實(shí)驗(yàn)室，由不同的操作者使用不同的設(shè)備，按相同的測試方法，對同一被測對象相互獨(dú)立進(jìn)行測試獲得的兩次獨(dú)立測試結(jié)果的絕對差值不大于這兩個(gè)測定值的算術(shù)平均值的20%，以大于這兩個(gè)測定值的算術(shù)平均值的95%的情況不超過5%為前提。試驗(yàn)