DB22-T2946-2018-野生大豆抗胞囊線蟲鑒定技術(shù)規(guī)范-吉林省

ICS65.020DB22B05吉林省地方標(biāo)準(zhǔn)DB22/T2946—2018野生大豆抗胞囊線蟲鑒定技術(shù)規(guī)范Technicalspecificationsforbioassayofwildsoybeanresistancetosoybeancystnematode(Heteroderaglycines)吉林省市場監(jiān)督管理廳發(fā)布DB22/T2946—2018前言本標(biāo)準(zhǔn)按照GB/T1.1—2009給出的規(guī)則起草。本標(biāo)準(zhǔn)由吉林省農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳提出并歸口。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：吉林省農(nóng)業(yè)科學(xué)院。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：袁翠平、董英山、王玉民、趙洪錕、劉曉冬、齊廣勛、王英男、李玉秋、顏秀娟。IDB22/T2946—2018野生大豆抗胞囊線蟲鑒定技術(shù)規(guī)范1范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了野生大豆對大豆胞囊線蟲抗性的鑒定方法和抗性評(píng)價(jià)。本標(biāo)準(zhǔn)適用于野生大豆種質(zhì)資源對大豆胞囊線蟲的抗性鑒定與評(píng)價(jià)。2術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。2.12.22.3胞囊cyst大豆胞囊線蟲雌蟲，每個(gè)胞囊內(nèi)約含200粒～600粒卵，從胞囊中孵化出來即為二齡幼蟲。胞囊指數(shù)（雌蟲指數(shù)）femaleIndex（FI）接種后28d~30d，供試植株根系上的胞囊數(shù)占感病對照植株根系上胞囊數(shù)的百分比。在形態(tài)上沒有差異，但在寄主上具有顯著致病性差異的大豆胞囊線蟲群體，需采用特定的一套鑒別3.1.1.1宜使用本地區(qū)優(yōu)勢HGtype或混合大豆胞囊線蟲群體。3.1.1.2將含有大于30個(gè)/100g胞囊的病土裝入高度16cm～25cm，盆口徑15cm～25cm的塑料盆中，播種高感大豆品種，每盆3株～5株。3.1.1.3出苗后30d～35d，將大豆根系輕輕拔出，用高壓水槍沖洗根系，將根系上的胞囊收集于干凈的塑料桶內(nèi)。3.1.2胞囊和二齡幼蟲懸浮液的制備3.1.2.1將含有胞囊的懸液倒入自上而下依次為20目,40目,60目的套篩上，將胞囊收集在60目網(wǎng)篩上。3.1.2.2將3.1.2.1收集到的胞囊用橡膠棒碾碎，使之釋放出卵和少數(shù)的二齡幼蟲。用洗瓶沖洗卵和二齡幼蟲，將其沖入自上而下依次為200目，500目的套篩上，將卵和二齡幼蟲收集在500目網(wǎng)篩上。用洗瓶將500目網(wǎng)篩上的卵和幼蟲轉(zhuǎn)移到燒杯中，加水配制成卵和幼蟲懸浮液。1DB22/T2946—20183.1.2.4搖勻并用100μL的移液器吸取一定量的卵和幼蟲懸浮液置于載玻片上，通過40倍顯微鏡觀察計(jì)數(shù)卵和幼蟲，配制成2000個(gè)/mL卵和幼蟲的懸浮液，備接種用。3.2接種植物的準(zhǔn)備3.2.1種子消毒將健康飽滿待鑒定的野生大豆、感病對照種子，用1%次氯酸鈉溶液浸泡3min，期間攪動(dòng)2次～3次，然后用滅菌的蒸餾水沖洗3次～4次。3.2.2種子萌發(fā)3.2.2.1消毒后的野生大豆種子在萌發(fā)前用無菌刀片在遠(yuǎn)胚芽處劃破種皮。3.2.2.2將滅菌的濾紙放置在滅菌的培養(yǎng)皿內(nèi)，然后將種子放置在濕潤的濾紙上，于光照培養(yǎng)箱中25℃發(fā)芽3d，期間保持濾紙濕潤。3.2.3幼苗移栽3.2.3.1抗胞囊線蟲鑒定試驗(yàn)在溫度保持在27℃±2℃溫室內(nèi)進(jìn)行。3.2.3.2試驗(yàn)完全隨機(jī)或隨機(jī)區(qū)組設(shè)計(jì)，設(shè)3次重復(fù)，每個(gè)重復(fù)5株。3.2.3.3在直徑27cm，高30cm的塑料桶中放入5cm厚的滅菌細(xì)砂，然后將直徑4cm，長25cm兩端通透的PVC管插入細(xì)砂中，每個(gè)桶約插入20個(gè)PVC管，PVC管內(nèi)和管間填好細(xì)砂，且高度一致，細(xì)砂距離上管口2cm。3.2.3.4將萌發(fā)3d健壯的幼苗移栽于PVC管中，每管移栽1株，將移栽后的塑料桶置于27℃～28℃的自動(dòng)恒溫水浴箱中。在距離供試植株1cm處用玻棒扎一個(gè)深4cm～5cm的孔，用移液器向孔中注射1mL的卵和幼蟲懸浮液，用滅菌的細(xì)砂將孔填平。苗期及時(shí)澆水，保持細(xì)砂濕潤，溫室溫度保持在27℃±2℃，每個(gè)處理定期施用等量營養(yǎng)液。3.5.2.1.1將PVC管連同細(xì)砂和植株從桶中輕輕拔出，用高壓水槍沖洗PVC管，將細(xì)砂和植株沖洗2DB22/T2946—20183.5.2.1.2將含有胞囊和細(xì)砂的懸濁液過20目,40目,60目的套篩，再向塑料桶注入自來水，搖勻，將含有胞囊和細(xì)砂的懸濁液再過20目,40目,60目的套篩，如此重復(fù)2次，將胞囊收集在60目網(wǎng)篩上，將收集的胞囊用自來水沖洗轉(zhuǎn)移到15mL塑料管中保存。3.5.2.2胞囊計(jì)數(shù)將收集在15mL塑料管的胞囊混合液倒入計(jì)數(shù)培養(yǎng)皿中，并用少量水沖洗塑料管內(nèi)壁，倒入計(jì)數(shù)培養(yǎng)皿中，然后于20倍顯微鏡計(jì)數(shù)，即為該供試植株的根系胞囊數(shù)。3.5.2.3記載方法分別記載每個(gè)重復(fù)每個(gè)供試品種和感病對照的胞囊數(shù)（表1）。表1野生大豆抗胞囊線蟲鑒定調(diào)查匯總表胞囊數(shù)平均胞囊數(shù)個(gè)供試材料感病對照重復(fù)胞囊指數(shù)抗性級(jí)別個(gè)12345ⅠⅡⅢⅠⅡⅢⅠⅡⅢⅠⅡⅢ3DB22/T2946—2018根據(jù)胞囊指數(shù)確定供試野生大豆種質(zhì)的抗性水平。按照下列公式（1）計(jì)算。FIT100.....................................(1)C式中：T——供試種質(zhì)的平均胞囊數(shù)，單位為個(gè)每株（個(gè)/株）；C——感病對照