JJF 2202-2025 便攜式熒光免疫分析儀校準規(guī)范

中華人民共和國國家計量技術(shù)規(guī)范JJF2202—2025便攜式熒光免疫分析儀校準規(guī)范CalibrationSpecificationforPortableFluorescenceImmunoassayAnalyzers2025-02-08發(fā)布2025-08-08實施國家市場監(jiān)督管理總局發(fā)布JJF2202—2025便攜式熒光免疫分析儀校準規(guī)范CalibrationSpecificationforPortableFluorescenceImmunoassayAnalyzers→→→→→→→→→→→→→→JJF2202—2025→→→→→→→→→→→→→→→歸口單位:全國生物計量技術(shù)委員會主要起草單位:中國計量科學(xué)研究院廣東省計量科學(xué)研究院參加起草單位:基蛋生物科技股份有限公司廣州萬孚生物技術(shù)股份有限公司本規(guī)范委托全國生物計量技術(shù)委員會負責(zé)解釋JJF2202—2025本規(guī)范主要起草人:彭濤(中國計量科學(xué)研究院)謝潔(中國計量科學(xué)研究院)武利慶(中國計量科學(xué)研究院)張國強(中日友好醫(yī)院)黃彥捷(廣東省計量科學(xué)研究院)參加起草人:王路海(基蛋生物科技股份有限公司)關(guān)麗晶(廣州萬孚生物技術(shù)股份有限公司)Ⅰ (1)2引用文件 (1) (1)4概述 (1)5計量特性 (2)6校準條件 (2)6.1環(huán)境條件 (2)6.2測量標準及其他設(shè)備 (2)7校準項目和校準方法 7.1重復(fù)性 (2)7.2示值誤差 (3)7.3線性 (3)8校準結(jié)果表達 (3)8.1校準結(jié)果處理 (3)8.2校準結(jié)果的測量不確定度 (4)9復(fù)校時間間隔 (4)附錄A校準用熒光校準條的質(zhì)控要求及熒光標準卡的制備方法 (5)附錄B校準用標準物質(zhì)的選擇原則 (6)附錄C校準原始記錄格式 (7)附錄D校準證書(內(nèi)頁)格式 (8)附錄E測量不確定度評定示例 (9)ⅡJJF1059.1《測量不確定度評定與表示》共同構(gòu)成支撐本規(guī)范制定工作的基礎(chǔ)性系列規(guī)范。本規(guī)范的校準方法及計量特性等主要參考了YY/T1533—2017《全自動時間分辨熒光免疫分析儀》、YY/T1792—2021《熒光免疫層析分析儀》。本規(guī)范為首次發(fā)布。1便攜式熒光免疫分析儀校準規(guī)范本規(guī)范適用于基于熒光免疫層析技術(shù)原理的便攜式熒光免疫分析儀的校準,不適用于采用上轉(zhuǎn)換熒光材料標記的免疫層析試劑的儀器的校準。2引用文件本規(guī)范引用了下列文件:YY/T1533—2017全自動時間分辨熒光免疫分析儀YY/T1792—2021熒光免疫層析分析儀凡是注日期的引用文件,僅注日期的版本適用于本規(guī)范;凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改單)適用于本規(guī)范。熒光免疫層析試紙條上用于指示目標物是否存在的區(qū)域,簡稱T線。熒光免疫層析試紙條上用于質(zhì)控試紙條是否有效的區(qū)域,簡稱C線。3.3互換性commutability對于給定標準物質(zhì)的規(guī)定量,由兩個給定測量程序所得測量結(jié)果之間關(guān)系與另一個指定物質(zhì)所得測量結(jié)果之間關(guān)系一致程度表示的標準物質(zhì)特性。4概述熒光免疫層析技術(shù)中,根據(jù)待測目標物的不同,可以采用“三明治”夾心或競爭抑制的模式對待測物進行定性或定量分析。以“三明治”夾心模式為例,將含有待測物的樣品加入到熒光免疫層析試紙條的加樣孔中,熒光標記的檢測抗體與待測物結(jié)合,然后被包被在硝酸纖維素膜上的捕獲抗體捕獲,形成“檢測抗體-待測物-捕獲抗體”的“三明治”夾心結(jié)構(gòu),在一定波長激發(fā)光的照射下,熒光標記抗體發(fā)射出特定波長的光,其強度與樣品中待測物的含量成正相關(guān)。便攜式熒光免疫分析儀是將熒光免疫層析試紙條上T線和C線上熒光信號轉(zhuǎn)換成電信號并進行分析的一類便攜式檢測儀器。便攜式熒光免疫分析儀由主機(如控制主板、激發(fā)光源、光電檢測系統(tǒng)、機械掃描控制電路、液晶顯示器、外殼等)、隨機軟件、電源及信息采集裝置(如二維條碼掃描此外在食品安全領(lǐng)域中的農(nóng)獸藥殘留、真菌毒素檢測中也有應(yīng)用。JJF2202—202525計量特性便攜式熒光免疫分析儀的計量特性指標見表1。表1便攜式熒光免疫分析儀的主要計量特性指標計量特性計量特性指標重復(fù)性熒光標準卡T線C線配套試劑T線C線示值誤差±20%線性r≥0.975注:重復(fù)性計量特性指標二選一;表中技術(shù)指標不用于合格性判別,僅供參考。6校準條件6.1環(huán)境條件6.1.2相對濕度:≤70%;6.1.3儀器應(yīng)遠離振動、紫外光線干擾。6.2測量標準及其他設(shè)備6.2.1裝置:高、中、低不同熒光強度的熒光校準條1、2、3,其均勻性和穩(wěn)定性均不大于2%,校準用熒光校準條的質(zhì)控要求及熒光標準卡的制備方法見附錄A。6.2.2試劑:配套體外診斷試劑盒。6.2.3標準物質(zhì):C反應(yīng)蛋白、甲胎蛋白等有證標準物質(zhì)。校準用標準物質(zhì)的選擇原則見附錄B。7校準項目和校準方法7.1重復(fù)性可選用以下方法之一:1)測試熒光標準卡:測試兩個梯度熒光標準卡的T線和C線熒光信號;2)使用配套試劑測試有證標準物質(zhì):測試線性范圍內(nèi)高、低兩個標準物質(zhì)濃度的T線和C線熒光信號。每個卡連續(xù)測10次,分別計算T線、C線熒光信號10次測量結(jié)果的算術(shù)平均值(M)和標準差(SD),并按公式(1)計算相對標準偏差(RSD)作為重復(fù)性的表征。-JJF2202—20253式中:SD—10次測量結(jié)果的標準差;7.2示值誤差示值誤差的校準宜采用便攜式熒光免疫分析儀規(guī)定檢測項目的有證標準物質(zhì)。通常情況下,檢測項目的校準點至少應(yīng)包括1個低值點和1個高值點,低值點和高值點至少應(yīng)相差一個數(shù)量級,且低值點和高值點應(yīng)覆蓋客戶要求校準區(qū)間;當(dāng)客戶要求時,也可進行單點校準。分別測量選定檢測項目的校準點,每個校準點分別重復(fù)測量3次,計算3次測量結(jié)果的平均值。根據(jù)公式(2)計算示值相對誤差。式中:B—示值相對誤差;M—3次測量結(jié)果的平均值,單位與標準物質(zhì)標準值的單位一致;T—標準物質(zhì)的量值。7.3線性線性的校準宜采用便攜式熒光免疫分析儀規(guī)定檢測項目的有證標準物質(zhì)。在低值至高值范圍內(nèi),對至少5個濃度的標準物質(zhì)(或配制的校準溶液)進行測量,每個濃度重復(fù)測量3次,取其平均值。將測量結(jié)果的平均值與標準物質(zhì)的標準值(或校準溶液的配制值)進行線性回歸,按公式(3)計算相關(guān)系數(shù)r。式中:r—相關(guān)系數(shù);xi—被分析項目各個濃度水平標準溶液的標準值;—x—標準物質(zhì)標準值的平均值,單位為標準物質(zhì)標準值的單位;yi—被分析項目各個濃度水平標準溶液的測量值;-y—測量結(jié)果的平均值,單位為標準物質(zhì)標準值的單位;8校準結(jié)果表達8.1校準結(jié)果處理經(jīng)校準后的分析儀應(yīng)核發(fā)校準證書,校準證書應(yīng)符合JJF1071—2010中5.12的要求,并給出各校準項目名稱和測量結(jié)果以及擴展不確定度。校準原始記錄格式(推薦性4表格)見附錄C,校準證書內(nèi)頁格式(推薦性表格)見附錄D。8.2校準結(jié)果的測量不確定度分析儀校準結(jié)果的測量不確定度按JJF1059.1—2012的要求評定,校準結(jié)果測量不確定度評定示例見附錄E。9復(fù)校時間間隔由于復(fù)校時間間隔的長短是由儀器的使用情況、使用者、儀器本身質(zhì)量等諸因素所決定的,因此送校單位可根據(jù)實際使用情況自主決定復(fù)校時間間隔,復(fù)校時間間隔建議JJF2202—20255附錄A校準用熒光校準條的質(zhì)控要求及熒光標準卡的制備方法成。PDMS屬于有機硅家族,具有透明性好、生物相容性良好、柔韌性強(楊氏彈性模量約為1MPa~3MPa)、介電常數(shù)低、表面張力和溶解度低等特點。油溶性CdTe/CdSe/ZnS量子點是以CdTe為核心、CdSe和ZnS為殼層,表面由疏水配體包裹的核/膠,將含有3種不同濃度量子點的凝膠灌注到毛細管中制備成熒光校準條1、2、3,制備的熒光校準條具有透明性好、熒光強度高而穩(wěn)定、具有柔韌性等優(yōu)勢。A.2熒光校準條的質(zhì)控要求使用通過校準后的熒光分光光度計對本規(guī)范中使用的熒光校準條熒光信號的均勻性和穩(wěn)定性等性能進行測量,測量方法如下。均勻性:不同濃度量子點與PDMS混合后形成熒光凝膠,在灌注到毛細管中之前,分別從不同位置(n≥10)取等量的熒光凝膠用熒光分光光度計進行熒光信號測量,測量結(jié)果的相對標準偏差不高于2%。穩(wěn)定性:將制備好的熒光標準條在室溫避光條件下儲存,6個月內(nèi)每隔1個月用熒光分光光度計進行熒光信號測量,測量結(jié)果的相對標準偏差不高于2%。A.3熒光標準卡的制備方法將熒光校準條1、2、3分別剪成適當(dāng)長度正好卡在不同廠家便攜式熒光免疫分析儀配套的試劑卡殼上,建議選熒光校準條2作為標準卡的C線,同時在T線位置分別放置3個不同濃度的熒光校準條,形成3個不同梯度的熒光標準卡1、2、3,進行重復(fù)性校準。JJF2202—20256附錄B校準用標準物質(zhì)的選擇原則B.1標準物質(zhì)的選擇C反應(yīng)蛋白、甲胎蛋白等有證標準物質(zhì)不可獲得或客戶要求時,可選用其他檢驗項目的有證標準物質(zhì)進行校準。B.2校準示值誤差的標準物質(zhì)校準示值誤差的標準物質(zhì)應(yīng)具有互換性,由于免疫分析存在基質(zhì)效應(yīng),校準示值誤差時不建議將有證標準物質(zhì)稀釋使用,否則可能影響互換性。B.3校準重復(fù)性和線性的標準物質(zhì)校準重復(fù)性和線性時可采用高純有證標準物質(zhì)按照重量-容量法配制校準溶液,但此時應(yīng)當(dāng)考慮配制過程中引入的不確定度;用于線性校準的標準物質(zhì)的最高濃度與最低濃度應(yīng)最好相差一個數(shù)量級。JJF2202—20257附錄C校準原始記錄格式(推薦性表格)分析儀名稱型號規(guī)格制造廠商出廠編號委托單位地址溫度濕度記錄編號校準日期校準員核驗員一、重復(fù)性熒光標準卡的梯度熒光標準卡T線和C線熒光信號的測量值平均值RSD/%1234567891CT2CT二、示值誤差標準物質(zhì)的量值標準物質(zhì)的測量值平均值測量值與標準值的示值誤差相對示值誤差%123低濃度高濃度標準物質(zhì)的量值標準物質(zhì)的測量值平均值線性相關(guān)系數(shù)r1238校準證書(內(nèi)頁)格式(推薦性表格)序號校準項目校準結(jié)果1重復(fù)性2示值誤差3線性1.校準結(jié)果測量不確定度:2.校準技術(shù)依據(jù):3.校準的環(huán)境條件及地點:環(huán)境溫度:℃,相對濕度:%校準地點:校準員:核驗員:JJF2202—20259附錄E測量不確定度評定示例E.1測量方法采用便攜式熒光免疫分析儀對標準物質(zhì)連續(xù)測定3次,并與標準物質(zhì)標準值進行比較,按公式(E.1)計算相對示值誤差。E.2測量模型B=(M-T)/T×100%(E.1)式中:B—相對示值誤差;M—標準物質(zhì)3次測量結(jié)果的平均值,單位與標準值一致;T—標準物質(zhì)標準值。E.3合成標準不確定度計算公式依據(jù)不確定度傳播律,當(dāng)各不確定度間不相關(guān)時E.4不確定度來源不確定度來源包括:(E.2)a)輸入量M引入的標準不確定度uM,主要是測量重復(fù)性引入的標準不確定度;b)輸入量T引入的標準不確定度uT,主要是標準物質(zhì)引入的標準不確定度。E.5標準不確定度分量評定E.5.1輸入量M引入的標準不確定度uM評定選定一臺便攜式熒光免疫分析儀,對該C反應(yīng)蛋白標準物質(zhì)連續(xù)測量10次,得到計算單次測量結(jié)果