DB42-T 2227.1-2024 食用菌菌種質(zhì)量檢驗(yàn)規(guī)范 第1部分：羊肚菌

DB42湖北省市場(chǎng)監(jiān)督管理局發(fā)布 V 2 4 6 8 9 本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定本文件實(shí)施應(yīng)用中的疑問，可咨詢湖北省農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳，聯(lián)系電話郵箱郵箱：wangzhuoren@hbaas.cV菌品種的不同，亦便于該文件各部分單獨(dú)使用。DB42/T2227《食用菌菌種質(zhì)量檢驗(yàn)規(guī)范》擬由以下部——第1部分：羊肚菌。本文件規(guī)定了羊肚菌菌種簽、標(biāo)志、包裝、運(yùn)輸、貯存等。本文件僅適用于梯棱羊肚菌、六妹羊肚菌和七妹羊肚菌等——第2部分：荷葉離褶傘。本文件規(guī)定了荷葉離褶傘菌種的質(zhì)量要求、抽樣、檢及標(biāo)簽、標(biāo)志、包裝、運(yùn)輸、貯存等。本文件適用于荷——第3部分：斑玉蕈。本文件規(guī)定了斑玉蕈菌種的術(shù)語和定義、質(zhì)量要樣、判定及標(biāo)簽、標(biāo)志、包裝、運(yùn)輸、貯存等。本文件適用于斑玉蕈菌種的生產(chǎn)、流通和使1食用菌菌種質(zhì)量檢驗(yàn)規(guī)范GB/T37671—2019金針菇NY/T528—2010食用菌菌種生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程N(yùn)Y/T1742—2009食用菌菌種通用技術(shù)要求GB/T12728—2006、GB/T37671—20193.13.23.33.423.53.63.74.2菌種分類4.3母種均勻，平整，表面允許有少量淺黃色（或黃褐無無4.3.3接種量：接種塊大小控制在（3mm～54.3.4母種培養(yǎng)條件和時(shí)間：參考附錄A中A1培養(yǎng)基的配方，15℃~18℃避光恒溫培養(yǎng)，應(yīng)在54.3.6母種栽培性狀：母種需經(jīng)出菇試驗(yàn)，確證34,4原種無無）～），菌絲長(zhǎng)滿培養(yǎng)基的時(shí)間：采用附錄A中規(guī)定的配方在15℃~18℃避光恒溫培養(yǎng)，菌絲長(zhǎng)滿4.4.2液體原種（搖瓶液體菌種）培養(yǎng)基裝液量：容器的搖床上，溫度15℃~18℃,避光培養(yǎng)，菌絲長(zhǎng)滿培養(yǎng)基的時(shí)間為4d～6d。無4無培養(yǎng)基裝液量：容器的液體菌種接種量：與培養(yǎng)基投料量的體積比為罐壓保持在0.02MPa～0.04MPa之間，溫度15℃~18℃,菌絲長(zhǎng)滿培養(yǎng)基的時(shí)間為4d～6d。4.5栽培種無無核4.5.4菌絲長(zhǎng)滿培養(yǎng)基時(shí)間：采用附錄A中規(guī)定的配方在15℃~18℃避光恒溫培養(yǎng)，菌絲長(zhǎng)滿培養(yǎng)基5.1.1母種按品種、培養(yǎng)條件、接種時(shí)間分批編號(hào)，原種和栽培種按菌種來源、制種方法和接種時(shí)間5.2檢驗(yàn)似性達(dá)97%以上為相應(yīng)類別的種類。參考5在ITS序列檢測(cè)確定相關(guān)菌株為栽培羊肚菌相應(yīng)種類的基礎(chǔ)上，參考附錄C操作，對(duì)測(cè)試菌株的DNA產(chǎn)物分別使用羊肚菌交配型特異性引物對(duì)Mat1-1-1TF/R、MAT1-2-1TF/R進(jìn)行PCR擴(kuò)增，根據(jù)擴(kuò)增條帶的//母種：PDA培養(yǎng)基，參考附錄A中的配方在15℃~18℃條件下培養(yǎng)，觀測(cè)菌絲長(zhǎng)滿斜面所需原種和栽培種:參考附錄A中的配方任選其一在15℃~18℃培養(yǎng)，觀測(cè)菌絲長(zhǎng)滿培養(yǎng)基所需65.3留樣a)產(chǎn)品名稱（菌種類別、菌種名稱、菌株代號(hào)）；a)產(chǎn)品名稱（菌種類別、菌種名稱、菌株代號(hào)）；6.2包裝6.2.1母種外包裝采用木盒或有足夠6.3運(yùn)輸6.3.3氣溫達(dá)26℃以上時(shí)，應(yīng)用2℃~6℃的冷藏車運(yùn)輸。6.4貯存6.4.1母種在3℃±1℃冰箱中貯存，貯存期不超過60d。89待測(cè)菌種固體培養(yǎng)基：馬鈴薯200.0g，葡萄糖20.0g，硫酸鎂1.0g，磷酸二氫鉀1.0g，酵母膏平板中，冷卻，接種，16℃±2℃黑暗培養(yǎng)5d～10）；f)小心棄去上清液，將離心管壓在干凈的吸水紙上，吸干殘留的上清液；TCCTCCGCTTATTGATATGC)對(duì)提取的基因組DPCR擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)1.5%的瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)后,使用DNA純化回收試劑盒回收600bp大小的片段，與Gal的LB平板上進(jìn)行藍(lán)白斑篩選，并進(jìn)行菌落PCR篩選出陽性克隆，陽性克隆送至相關(guān)基因測(cè)序單位采用通用測(cè)序引物（RV-M：GAGCGGATAACAATTTCACACAGG/M13-47：CGCCAGGGTTTTCCCA網(wǎng)站進(jìn)行比對(duì)，待測(cè)菌種與數(shù)據(jù)庫中某菌的序列同源性達(dá)到97%以上時(shí)，判斷待ATCATTACCAAGAACCACACAGAAAAGGGCAGCCGAGGGGCCACCAGGGCTAGTAGCTTTACGTTGTTGAACGTCCTGGCCGGACCCGGAGCCGCCCCCATCTAAACCCTCTGCGTACCTGTCCCGCCTTGCTTCCCCCGGCTACCCGCTGGGGGGAGGAACAACAACCTCTTTGTGAACAAGCCGACGTCAGAATCATAACAAAACAAAAAAGTTAAAACTTTCAACAACGGATCTCTTGGTTCCCACATCGGAACGCAGCGAAATGCGATAAGTAATGTGAATTGCAGAATTCAGTGAATCATCGAATCTTTGAACGCACATTGCGCCCCCTGGTGGGGGGCATGCCTGTTCGAGCGTCATAAAAACCTCCTCCCCCATCGGGTTTGATTACTATCGTTGGGGGGTTTTGGCCTAATGGCGATTGGCAATTAGTTTCCCAATGTCCTAAATAGACGTAGACCCGCCTCCAGATGCGACAGCACCGAGGCCATCAACCGTGGAGGGATATATAGGCTTGCAGTAAAATGCTCACCTTTCTCCATACGCCGATGGCACACCGGTCGCAGTTGCGGGCGTAAATTGGAGCTTTCAGGACCCTCGTGGCCTAGCATCCACCATACACAATTTGACCTCGGATCAGGTAGGGATACCCGCTGAAC六妹羊肚菌對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)種ITS序列的GeneBank登錄號(hào)為OM956369CCTCCCGATGAGGGGGGCCTGCGGAAGGATCATTACCAAGAACCACACAGAAAAGGGCTGCTATAGGGGCCGGCAGGGCCTTTACGTTGTTGAACGTCCTGTTTGGACCCGTTGGCAGCCCCCATCTAAACCCTCTGCGTACCTGTCCCCCCTTGCTTCCCCCGGCACCTCGCTGGGGGGAGGAACAACAACCAAAACTCTTTGTGAACAAACAGACGTCAGAATTACAAAAACAAAAAAAAGTTAAAACTTTCAACAACGGATCTCTTGGTTCCCACATCGATGAAGAACGCAGCGAAATGCGATAAGTAATGTGAATTGCAGAATTCAGTGAATCATCGAATCTTTGAACGCACATTGCGCCCCCTGGTATTCCGGGGGGCATGCCTGTTCGAGCGTCATAAAAACCTCCTCCCCCTTCGGGTTTGATTACTATCGTTGGGGGGTTTTGGCCTAATGGGATAGCGATTGGCAATTAGTTTCCCAATGTCCTAAATAGACGTAGACCCGCCTCCAGATGCGACAGCACCGAGGCCATCAACCGTGGAGTTATGGGATATATAGGCTTGCAGTAAAATGCTCACCTTTCTCCATACGCCGATGGCACACCGGTCGCAGTTGCGGGCGTAAATTGGAGTCCTCTTCAGGACCCTCGTGGCCTAGCATCCACCATACATAATTGACCTCGGATCAGGTAG。七妹羊肚菌對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)種ITS序列的GeneBank登錄號(hào)為JQ618758.1，TGCGGAAGGATCATTACCAAGAACCACACAGAAAAGGGCAGCCGAGGGGCCAACCAGGGCTAGTAGCTTTACGTTGTTGACTGGAACGGACCCGGAGCCGCCCCCATCTAAACACTCTGCGTACCCATCCCACCTTGCTTCCCCCGGCCATCCGCTGGGGGGAGGAACAACAACCAAAACTCTTTGTGAAGAAACAGACGTCAGAATCATAACCAAAAAAAAGTTAAAACTTTCAACAACGGATCTCTTGGTTCCCACATCGATGAAGAACGCAGCGAAATGCGATAAGTAATGTGAATTGCAGAATTCAGTGAATCATCGAATCTTTGAACGCACATTGCGCCCTCTGGTATTCCGGGGGGCATGCCTGTTCGAGCGTCATAAAAACCTCCTCCCCCTTCGGGTTTGATTACTATCGTTGGGGGGTATTGGCCTACTGGGAAAGCGATTTGGCAATTGCCTTCCCACTGTCCTAAATACACTTAGACCCGCCTCCAGATGCGACAGCACCGAGGCCATCAACCGTGGAGTTATGGAATACCGTTCTCCACACGCCGATGGCAAACCGGTCGCAGTTGCGGGCGTAAATTGGAGCCCTCTTCAGGACCCTCGTGGCCTAGCATCCA