2025年高考生物一輪總復(fù)習(xí)考點(diǎn)培優(yōu)訓(xùn)練45

提能訓(xùn)練練案[45]

A組

一、選擇題

1.（2025?高中生物規(guī)范訓(xùn)練）下列關(guān)于基因工程的敘述錯(cuò)誤的是（）

A.基因的“剪刀”是限制酶

B.基因的“針線”是DNA聚合酶

C.常用的運(yùn)載體有質(zhì)粒、噬菌體和動(dòng)植物病毒

D.基因工程操作的核心步驟是基因表達(dá)載體的構(gòu)建

答案：B

解析：限制酶能識(shí)別DNA分子中特定的堿基序列進(jìn)而在該部位對(duì)DNA分子實(shí)現(xiàn)剪切，

因而被稱為基因的“剪刀”，A正確；DNA連接酶能夠?qū)蓚€(gè)DNA片段通過磷酸二酯鍵連接

起來，因而被稱為基因的“針線”，B錯(cuò)誤；目前常用的運(yùn)載體有質(zhì)粒、噬菌體和動(dòng)植物病毒,

C正確；基因工程的操作一般有四個(gè)步驟，目的基因的篩選與獲取、基因表達(dá)載體的構(gòu)建、將

目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞、目的基因的檢測(cè)與鑒定，其中基因表達(dá)載體的構(gòu)建是基因工程的核心

步驟，D正確。

2.（2024.北師大附中隨堂檢測(cè)）下列有關(guān)限制性內(nèi)切核酸酶的敘述，正確的是（）

A.用限制酶切割DNA分子獲得一個(gè)目的基因時(shí)，被水解的磷酸二酯鍵有2個(gè)

B.限制酶識(shí)別序列越短，則該序列在DNA中出現(xiàn)的概率就越大

C.—CATG'—和一G’GATCC一序列被限制酶切出的黏性末端可用DNA連接酶連接

D.只有用相同的限制酶處理含目的基因的片段和質(zhì)粒，才能形成重組質(zhì)粒

答案：B

解析：用限制性內(nèi)切核酸酶切割一個(gè)DNA分子獲得一個(gè)目的基因時(shí)，需要切割目的基因

的兩側(cè)，因此要斷裂4個(gè)磷酸二酯鍵，即被水解的璘酸二酯鍵有4個(gè)，A錯(cuò)誤；限制性內(nèi)切核

酸酶能夠識(shí)別雙鏈DNA分子的某種特定核甘酸序列，其識(shí)別序列越短，則該序列在DNA中

出現(xiàn)的概率就越大，B正確；一CATG，一和一G'GATCC一序列被限制酶切出的黏性末端不同，

分別為CATG和GATC,不能用DNA連接酶連接，C錯(cuò)誤；用不同的限制性內(nèi)切核酸酶處理

含目的基因的DNA片段和質(zhì)粒，若產(chǎn)生的黏性末端相同，也能形成重組質(zhì)粒，D錯(cuò)誤。

3.（2025?北師大附中模擬）在重組DNA技術(shù)中，將外源基因?qū)胧荏w細(xì)胞，通常是利用質(zhì)

粒作為載體，下列關(guān)于質(zhì)粒的說法正確的是（）

A.質(zhì)粒是獨(dú)立于原核細(xì)胞擬核DNA之外的雙鏈DNA分子

B.沒有限制酶就無法使用質(zhì)粒，其復(fù)制和表達(dá)不遵循中心法則

C.質(zhì)粒只有把目的基因整合到受體細(xì)胞的DNA中才能表達(dá)

D.真正被用作載體的質(zhì)粒都是對(duì)天然質(zhì)粒進(jìn)行過人工改造的

答案：D

解析：質(zhì)粒是存在于許多細(xì)菌擬核DNA之外以及酵母菌（真核細(xì)胞）細(xì)胞核外的、有自主

復(fù)制能力的小型環(huán)狀DNA分子，A錯(cuò)誤；質(zhì)粒的復(fù)制和表達(dá)都遵循中心法則，B錯(cuò)誤；只需

要將含有目的基因的質(zhì)粒導(dǎo)入受體細(xì)胞，無需整合到受體細(xì)胞的DNA中也能表達(dá)，C錯(cuò)誤；

天然的質(zhì)粒不能直接作為載體，基因工程中用到的質(zhì)粒都是在天然質(zhì)粒的基礎(chǔ)上進(jìn)行過人工改

造的，D正確。

4.如表列舉了幾種限制酶的識(shí)別序列及其切割位點(diǎn)（箭頭表示相關(guān)酶的切割位點(diǎn)）。圖是

酶切后產(chǎn)生的幾種末端。下列說法正確的是（）

限制酶AluIBamHISmaISQM3AI

識(shí)另UAG^CTG'GATCCI

CCCGGGGATC

TCGACCTAGIGGGG產(chǎn)CCTAG

序列t

11I11I|

—TCT——GGGG——ACTAG

①②③④⑤

A.3劭汨1切割的是氫鍵，A/MI切割的是磷酸二酯鍵

B.San3AI和BamHI切割產(chǎn)生的片段能夠相連，但連接后的片段兩者都不能再切割

C.②④⑤對(duì)應(yīng)的識(shí)別序列均能被Saw3AI識(shí)別并切割

D.T4DNA連接酶即能連接①③，也能連接②⑤，但后者連接效率低

答案：C

解析I與4Ml切割的均是磷酸二酯鍵，A錯(cuò)誤；及wiHI切割G'GATCC,Sau3AI

切割,GATC,故二者切割后產(chǎn)生的黏性末端是相同的，因此二者切割后產(chǎn)生的黏性末端能夠

相連，連接后仍然存在GATC的序列，能被Sau3AI切割，但是BamHI不一定能切割，B錯(cuò)

誤；②④⑤對(duì)應(yīng)的識(shí)別序列都存在GATC,都能被RM3Al識(shí)別并切割，C正確；T4DNA連

接酶既可以連接黏性末端也可以連接平末端，而圖中①③屬于平末端，②⑤是黏性末端，T4

DNA連接酶連接平末端時(shí)效率較低，D錯(cuò)誤。

5.（2025?東北育才學(xué)校適應(yīng)性測(cè)試）常規(guī)PCR只能擴(kuò)增兩引物間的DNA區(qū)段，要擴(kuò)增已

知DNA序列兩側(cè)的未知DNA序列，可用反向PCR技術(shù)。反向PCR技術(shù)擴(kuò)增的原理如圖所

示。下列敘述正確的是（)

A.酶切階段，L中不能含有酶切時(shí)所選限制酶的識(shí)別序列

B.環(huán)化階段，可選E.co〃DNA連接酶而不能選T4DNA連接酶

C.應(yīng)選擇引物2和引物3進(jìn)行PCR,且二者不能互補(bǔ)配對(duì)

D.PCR擴(kuò)增，每輪循環(huán)前應(yīng)加入限制酶將環(huán)狀DNA切割成線狀

答案：A

解析：在酶切階段，已知序列L中不能含有酶切時(shí)所選限制酶的識(shí)別序列，不然會(huì)將已

知序列L切斷，造成序列識(shí)別混亂，A正確；T4DNA連接酶或E.co〃DNA連接酶都可以用

來連接黏性末端，因此環(huán)化階段，可選用Eco〃DNA連接酶或T4DNA連接酶，B錯(cuò)誤；PCR

過程需要兩種引物，能分別與目的基因兩條鏈的3,端通過堿基互補(bǔ)配對(duì)結(jié)合，為保證延伸的

是已知序列兩側(cè)的未知序列，應(yīng)該選擇引物1和引物4,且二者間不能互補(bǔ)配對(duì)，C錯(cuò)誤；PCR

的擴(kuò)增只需要第一次循環(huán)前加入足夠的限制酶，并不需要每輪都加入，D錯(cuò)誤。

6.（2024.山東日照校際聯(lián)合考試）下列關(guān)于“DNA的粗提取與鑒定”實(shí)驗(yàn)的敘述，錯(cuò)誤的

是（）

A.可選用在液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)的大腸桿菌作為實(shí)驗(yàn)材料

B.向含DNA的濾液中加入2moi/L的NaCl溶液，有利于去除雜質(zhì)

C.將過濾液放入4℃冰箱或加入預(yù)冷的酒精都可抑制DNA酶的活性

D.鑒定DNA時(shí)，將二苯胺試劑加入到含DNA的溶液中即可出現(xiàn)藍(lán)色

答案：D

解析：大腸桿菌是細(xì)菌，含有擬核和質(zhì)粒，DNA含量也較多，適合提取DNA,故可選用

在液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)的大腸桿菌作為實(shí)驗(yàn)材料，A正確；在2moi/L的NaCl溶液中DNA的溶

解度較高，攪拌過濾后，DNA存在于濾液中，有利于去除雜質(zhì)，B正確；酶活性的發(fā)揮需要

適宜的溫度等條件，將過濾液放入4。。冰箱或加入預(yù)冷的酒精的目的是抑制DNA酶的活性，

避免DNA被水解，C正確；向DNA溶液中加入二苯胺試劑后還需要沸水浴加熱才可出現(xiàn)藍(lán)

色，D錯(cuò)誤。

7.用A和B兩種限制酶同時(shí)和分別處理同一DNA片段，限制酶對(duì)應(yīng)切點(diǎn)一定能切開。

兩種酶切位點(diǎn)及酶切產(chǎn)物電泳分禺結(jié)果如圖1和圖2所示。下列敘述錯(cuò)誤的是（）

限制酶A限制酶BY

111

3500X1500500

圖1

電泳方向A+B一①②

?-8000

一)-6000

玄-4500

?

-3500

?

-2000

?1500

-500

圖2

A.圖1中限制酶A、B識(shí)別的核昔酸序列不相同

B.圖1中X代表的堿基對(duì)數(shù)為4500

C.推測(cè)圖1中Y是限制酶B的酶切位點(diǎn)

D.推測(cè)圖2中①是限制酶A處理得到的酶切產(chǎn)物

答案：C

解析：酶具有專一性，不同的限制酶識(shí)別并切割不同的核甘酸序列，A正確；從圖2的A

+B酶一組結(jié)果可知，限制酶A和B切完后總共有4個(gè)片段，長度分別為500、1500、3500、

4500,而圖1表示酶A和B切割時(shí)只會(huì)得到3個(gè)片段，長度應(yīng)該是3500、X、2000,所以

可推測(cè)Y是限制酶A或限制酶B的酶切位點(diǎn)，X代表的堿基對(duì)數(shù)為4500,B正確，C錯(cuò)誤；

根據(jù)以上結(jié)論，圖1中有兩個(gè)限制酶A的酶切位點(diǎn)，切割完后得到三個(gè)長度的片段：3500、

（4500+1500）、500,正好與圖2的①結(jié)果相符，故推測(cè)圖2中①是限制酶A處理得到的酶切

產(chǎn)物，D正確。

二、非選擇題

8.（2024.遼寧高三聯(lián)考三模）某真菌的W基因可編碼一種高效降解纖維素的酶：已知圖中

W基因轉(zhuǎn)錄方向?yàn)閺淖笸?。為使放線菌產(chǎn)生該酶，以圖1中質(zhì)粒為載體，進(jìn)行轉(zhuǎn)基因。不

同限制酶的識(shí)別序列及切割位點(diǎn)如下表所示。請(qǐng)回答下列問題：

限制酶BamHIEcoRIMfeIKpnIHmdIII

識(shí)別序

列及切G’GATTCG*AATTCC*AATTGGGTAC'CA*AGCTT

割位點(diǎn)

(1)限制酶主要是從中分離純化出來的。應(yīng)使用限制酶___________切割圖1

中質(zhì)粒，使用限制酶切割圖2中含W基因的DNA片段，以獲得能正確表達(dá)W

基因的重組質(zhì)粒。

(2)與質(zhì)粒中啟動(dòng)子結(jié)合的酶是。啟動(dòng)子通常具有物種特異性，在質(zhì)粒中插

入W基因，其上游啟動(dòng)子應(yīng)選擇啟動(dòng)子(選填“植物”“真菌”或“放線菌”)。

(3)W基因轉(zhuǎn)錄的模板鏈?zhǔn)?選填“甲鏈”或“乙鏈”)。利用PCR技術(shù)對(duì)W基因

進(jìn)行擴(kuò)增的原理是，子鏈的延伸方向是。

(4)研究人員欲對(duì)W基因的mRNA進(jìn)行RT-PCR,已知其mRNA的序列為5,一

UGAACGCUA…(中間序歹U)…GUCGACUCG—3'。為了便于將擴(kuò)增后的基因和載體成功構(gòu)建

成重組質(zhì)粒，用于PCR擴(kuò)增的引物應(yīng)為0

A.5'-TGAACGCTA-

B.5'一CCAGTCGAC…

C.5'一GAATTCTGA…

D.5'-AAGCTTCGA-

答案：⑴原核生物MfeI>HmdIIIEcoRI.HmdIII(2)RNA聚合酶放線菌(3)乙

鏈DNA半保留復(fù)制5‘一3’(4)A

解析：(1)限制酶主要是從原核生物分離純化出來的。根據(jù)題圖信息“圖中W基因轉(zhuǎn)錄方

向是從左往右”“質(zhì)粒啟動(dòng)子到終止子方向?yàn)轫槙r(shí)針”，故重組質(zhì)粒的啟動(dòng)子應(yīng)在W基因左

側(cè)，終止子應(yīng)在W基因右側(cè)，W基因右側(cè)只能用印“din切割，W基因左側(cè)有BamH1、Kpn1、

EcoRi三種酶切位點(diǎn)，結(jié)合質(zhì)粒情況及切割位點(diǎn)識(shí)別序列，應(yīng)使用限制酶順I(yè)、切割

圖中質(zhì)粒，使用限制酶EcoR1(切割出的黏性末端與Mfe\相同)、H%din切割圖中含W基因

的DNA片段，以獲得能正確表達(dá)W基因的重組質(zhì)粒，因?yàn)橄拗泼疙?xiàng)I和限制酶EcoRI切

割露出相同的黏性末端。

（2）啟動(dòng)子啟動(dòng)基因的轉(zhuǎn)錄，故與質(zhì)粒中啟動(dòng)子結(jié)合的酶是RNA聚合酶;根據(jù)題干信息“啟

動(dòng)子通常具有物種特異性”，目標(biāo)是使放線菌產(chǎn)生高效降解纖維素的酶，故應(yīng)選擇放線菌的質(zhì)

粒，在質(zhì)粒中插入W基因，其上游啟動(dòng)子應(yīng)選擇放線菌啟動(dòng)子。

（3）W基因轉(zhuǎn)錄方向是從左向右，mRNA鏈的合成方向?yàn)?,-3',與乙鏈從左向右

3,一5'互補(bǔ)，故W基因轉(zhuǎn)錄的模板鏈?zhǔn)且益?。利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因的原理是DNA

半保留復(fù)制，子鏈延伸方向?yàn)?,一3,。

（4）引物與模板鏈的3'端結(jié)合，mRNA也與模板鏈結(jié)合，因此引物與mRNA序列相似，

不同的是引物是一段DNA,因此將mRNA中的U替換成T即是引物序列，即5,-UGAAC

-CCUA-（中間序列）-GUCCACUCG—3'=5,一TGAACCCTA-（中間序

列）…GTCCACTCG—3',與A相同。故選A。

B組

一、選擇題

1.（2025?高中生物北師大版同步訓(xùn)練）如表為幾種限制酶的切割位點(diǎn)，相關(guān)敘述不正確的

是（）

限制酶BamHIBellSQM3AI

識(shí)別序列及GGATCCT*GATCA*GATC

切割位點(diǎn)CCTAG,GACTAGtTCTAG,

A.限制酶能夠水解DNA上特定的磷酸二酯鍵

B.BamHI切割的序列一定能被Sau3AI切割

C.Bell切割的序列一定能被Sau3AI切割

D.以上信息說明限制酶沒有特異性和專一性

答案：D

解析：限制酶能夠水解DNA上特定的璘酸二酯鍵，形成黏性末端或平末端，A正確；

Sau3AI識(shí)別的序列為,GATC,BamHI識(shí)別的序列為G*GATCC,后者識(shí)別序列中包含前者,

因此BamHI切割的序列一定能被Sau3AI切割，B正確；BelI識(shí)別序列包含Sau3AI的識(shí)別

序列，因此Be/1切割的序列一定能被RM3Al切割，C正確；限制酶需要識(shí)別特定的序列后

進(jìn)行切割，以上信息說明限制酶有特異性和專一性，D錯(cuò)誤。

2.（2024.沈陽二中三模）將熒光蛋白基因與目的基因連接后導(dǎo)入植物體細(xì)胞中，其表達(dá)產(chǎn)

物既具有熒光蛋白的特性，又保持了目的基因表達(dá)產(chǎn)物的活性，因此可以通過檢測(cè)熒光強(qiáng)度來

檢測(cè)目的基因的表達(dá)水平。下列有關(guān)該技術(shù)的說法錯(cuò)誤的是（）

A.可使用同種限制酶切割熒光蛋白基因和目的基因以便連接

B.需要將熒光蛋白基因和目的基因分別連接在不同的啟動(dòng)子后面

C.熒光強(qiáng)度高的細(xì)胞，目的基因的表達(dá)水平一般也高

D.熒光蛋白還可用于檢測(cè)目的基因表達(dá)產(chǎn)物的轉(zhuǎn)移和分布情況

答案：B

解析：使用同種限制酶切割熒光蛋白基因和目的基因，可以形成相同的末端，以便連接，

A正確；需要將熒光蛋白基因和目的基因連接在相同的啟動(dòng)子后面，B錯(cuò)誤；熒光蛋白基因進(jìn)

入受體細(xì)胞后會(huì)表達(dá)出熒光蛋白，熒光強(qiáng)度高的細(xì)胞，目的基因的表達(dá)水平一般也高，C正確；

熒光蛋白基因與目的基因連接后導(dǎo)入植物體細(xì)胞中，其表達(dá)產(chǎn)物具有熒光蛋白的特性，可以通

過檢測(cè)熒光強(qiáng)度來檢測(cè)目的基因表達(dá)產(chǎn)物的轉(zhuǎn)移和分布情況，D正確。

3.（2024.大連市高三二模）將棉花的酶D基因與擬南芥的轉(zhuǎn)運(yùn)肽基因相連，導(dǎo)入雙子葉植

物油菜的葉片細(xì)胞，可培育出高產(chǎn)轉(zhuǎn)基因油菜品種。下圖是需要用到的Ti質(zhì)粒。下列敘述錯(cuò)

誤的是（）

A.必須用相同的限制酶對(duì)目的基因和T-DNA進(jìn)行切割

B.四環(huán)素抗性基因不可檢測(cè)目的基因是否表達(dá)成功

C.將重組Ti質(zhì)粒導(dǎo)入農(nóng)桿菌后，再用其侵染油菜葉片細(xì)胞

D.兩個(gè)基因的表達(dá)產(chǎn)物不能影響油菜葉片細(xì)胞的存活

答案：A

解析：對(duì)目的基因和T—DNA進(jìn)行切割需要形成相同的黏性末端，除用相同的限制酶外,

也可用同尾酶（不同的限制酶，卻能形成相同的黏性末端）切割，A錯(cuò)誤；四環(huán)素抗性基因?qū)儆?/p>

標(biāo)記基因，可用于重組質(zhì)粒的初步篩選，但不能用于檢測(cè)目的基因是否表達(dá)成功，B正確；將

目的基因?qū)胫参锛?xì)胞常用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法，將重組Ti質(zhì)粒導(dǎo)入農(nóng)桿菌后，再用其侵染油菜葉

片細(xì)胞，C正確；目的基因不能影響植物正常的生長，故兩個(gè)基因的表達(dá)產(chǎn)物不能影響油菜葉

片細(xì)胞的存活，D正確。

4.（2024.沈陽市第二中學(xué)五模）下圖為基因工程部分操作步驟，質(zhì)粒的外側(cè)鏈為a鏈，內(nèi)

側(cè)鏈為b鏈。基因A”/■轉(zhuǎn)錄的模板鏈屬于a鏈的片段。ALDH2基因編碼區(qū)首端到末端（其中

一條鏈）的序列為5,—ATCCATGCGCTC…（中間核昔酸序列）“yAGTGAGTAGCG—3,。四

種限制酶的識(shí)別序列及切割位點(diǎn)見下表。以下說法不正確的是（）

BamVl

注：A呻，為氨羊青霉素抗性基因，嶷，為四環(huán)素抗性基因

限制酶BamHIPstIXhoIXbaI

識(shí)別序列和切

G*GATCCCTGCAGC*TCGAGT*CTAGA

割位點(diǎn)（5,一3'）

A.質(zhì)粒復(fù)制的模板鏈?zhǔn)恰癮和b”，基因嶷〃轉(zhuǎn)錄的模板鏈?zhǔn)莃鏈的片段

B.過程②是基因工程的核心步驟，過程④的培養(yǎng)基具有鑒定作用

C.為擴(kuò)增目的基因，需選擇的引物對(duì)為：5,一TCTAGACGCTACTCACTG—3,和5'

-GGATCCATCCATGCGCTC—3'

D.根據(jù)選定的引物，經(jīng)過5次循環(huán)，即可獲得32個(gè)符合要求的目的基因

答案：D

解析:質(zhì)粒的a和b兩條鏈都作為模板進(jìn)行復(fù)制，亮〃的轉(zhuǎn)錄方向與的轉(zhuǎn)錄方向相反,

說明寬〃的轉(zhuǎn)錄模板和Amp，轉(zhuǎn)錄模板不在一條鏈上，Amh轉(zhuǎn)錄的模板鏈屬于a鏈的片段，則

竟〃的轉(zhuǎn)錄模板鏈屬于b鏈的片段，A正確；過程②表示基因表達(dá)載體的構(gòu)建，是基因工程的

核心步驟，過程④表示目的基因的檢測(cè)與鑒定，所以該培養(yǎng)基具有鑒定作用，B正確；擴(kuò)增目

的基因需要兩種引物，能分別與目的基因兩條鏈的3,端通過堿基互補(bǔ)配對(duì)結(jié)合。根據(jù)ALZ汨2

基因編碼區(qū)首端到末端的序列為5,-ATCCATGCGGCTC-（中間核甘酸序

列）…CAGTGAGTAGCG—3,，且引物5,端需要添加瓦/機(jī)HI、XbaI的識(shí)別序列，可推測(cè)

引物鏈為5'-TCTAGACGCTACTCACTG-3z,5'—GGATCCATCCATGCGCTC—3,，C

正確；利用PCR技術(shù)可以擴(kuò)增目的基因，根據(jù)DNA半保留復(fù)制的特點(diǎn)，根據(jù)PCR反應(yīng)原理,

前兩次循環(huán)無法得到符合要求的目的基因，第3次循環(huán)可以得到等長雙鏈，這樣的雙鏈DNA

分子的兩端兩條鏈均有限制酶識(shí)別序列。3次循環(huán)可以得到2個(gè)，4次循環(huán)后有8個(gè)符合要求

的目的基因，以此類推，可推知，經(jīng)過6次循環(huán)，可獲得32個(gè)符合要求的目的基因，D錯(cuò)誤。

5.（2024.山東德州一中三模）研究人員用酶M和酶N兩種限制酶同時(shí)處理某DNA分子和

質(zhì)粒，得到的DNA片段如圖所示。圖中DNA片段只注明了黏性末端處的堿基種類，其他堿

基的種類未注明。下列敘述錯(cuò)誤的是（）

同時(shí)用酶M..............

某DNA分子幽型卻飛和W—I利瘢廠

CACGTGTCGCGA

?1?1?_j11111_j

片段甲片段乙片段丙

"盟"懈乂和哈利

康桓ACACGTGTCGCG

??i?i????i?i

片段丁片段戌

A.該DNA分子和質(zhì)粒上均含有酶M的一個(gè)切割位點(diǎn)和酶N的一個(gè)切割位點(diǎn)

B.根據(jù)圖示信息不能確定圖中形成的不同黏性末端與這兩種限制酶的對(duì)應(yīng)關(guān)系

C.用T4DNA連接酶或E.coliDNA連接酶均可以將片段乙和片段丁連接起來

D.片段乙、片段丁、片段戊可依次連接形成一個(gè)環(huán)狀DNA分子

答案：D

解析：該DNA分子經(jīng)酶M和酶N兩種限制酶切割后，產(chǎn)生了三個(gè)DNA片段且兩個(gè)切口

形成的黏性末端不同，說明該DNA分子含有酶M的一個(gè)切割位點(diǎn)和酶N的一個(gè)切割位點(diǎn)；

質(zhì)粒為環(huán)狀DNA,其經(jīng)酶M和酶N兩種限制酶切割后，產(chǎn)生了兩個(gè)DNA片段，觀察兩個(gè)切

口形成的黏性末端，可推出質(zhì)粒含有酶M的一個(gè)切割位點(diǎn)和酶N的一個(gè)切割位點(diǎn)，A正確;

AGCGCT或GTGCAC

根據(jù)圖中黏性末端可知，酶M和酶N識(shí)別的序列可能是TCCCCA贄CACGTG,但無法確定其對(duì)應(yīng)

IIIIIIIIIIII

關(guān)系，B正確；圖中經(jīng)酶切后形成的片段均是黏性末端，T4DNA連接酶既可以“縫合”雙鏈

DNA片段互補(bǔ)的黏性末端，也可以“縫合”雙鏈DNA片段的平末端，而E.co/zDNA連接酶

只能將具有互補(bǔ)黏性末端的DNA片段連接起來，片段乙和片段丁黏性末端互補(bǔ)，C正確；根

據(jù)圖中黏性末端可知，片段乙、片段丁、片段戊三個(gè)片段不能連接成環(huán)狀DNA分子，D錯(cuò)誤。

6.（2025?遼寧省朝陽市期末試題）花粉管通道法是我國科學(xué)家獨(dú)創(chuàng)的介導(dǎo)植物基因轉(zhuǎn)化的

一種方法，其原理是在植物受粉的特定時(shí)期，將外源DNA溶液涂于柱頭上，利用植物在開花、

受精過程中形成的花粉管通道，將外源DNA導(dǎo)入受精卵細(xì)胞，并進(jìn)一步整合到受體細(xì)胞的基

因組中，過程如圖所示。下列相關(guān)說法錯(cuò)誤的是（）

A.外源DNA需要構(gòu)建基因表達(dá)載體才能借助圖示方法實(shí)現(xiàn)轉(zhuǎn)化

B.構(gòu)建的基因表達(dá)載體必須含有起始密碼子，以作為轉(zhuǎn)錄的起始位點(diǎn)

C.外源DNA進(jìn)入圖中的受精卵后，可以整合到其染色體的DNA上

D.相比于農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法，花粉管通道法可省去植物組織培養(yǎng)這一操作

答案：B

解析：要讓目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞后能穩(wěn)定存在并得到復(fù)制和表達(dá)，不管采用什么導(dǎo)入方

法，都需要構(gòu)建基因表達(dá)載體才能實(shí)現(xiàn)，外源DNA也需要構(gòu)建基因表達(dá)載體才能借助圖示方

法實(shí)現(xiàn)轉(zhuǎn)化，A正確；起始密碼子存在于mRNA上，不在基因表達(dá)載體（DNA）上，B錯(cuò)誤；

外源DNA進(jìn)入圖中的受精卵后，可以整合到染色體的DNA上，從而實(shí)現(xiàn)復(fù)制和表達(dá)，C正

確；花粉管通道法可以直接實(shí)現(xiàn)轉(zhuǎn)基因植物的自然生成，而農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法需要對(duì)成功導(dǎo)入目的

基因的受體細(xì)胞進(jìn)行植物組織培養(yǎng)獲得轉(zhuǎn)基因植物，而花粉管通道法避免了植物組織培養(yǎng)這一

操作，D正確。

7.（2024.東北師大附中模擬）“DNA粗提取與鑒定”的操作步驟為研磨一去雜一析出一鑒

定。某研究組欲探究不同去雜方法對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響（如下表）。下列敘述不正確的是（）

DNA濃度

去雜質(zhì)方式沉淀質(zhì)量（g）OD260/OD280二苯胺鑒定

(ng-|iL-1)

離心0.068081.501.53藍(lán)色

4℃冰箱靜置0.1028336.41.41藍(lán)色

注：OD260與OD280的比值可檢查DNA純度；純DNA的OD260/OD280為1.8,當(dāng)存在蛋白

質(zhì)污染時(shí)，這一比值會(huì)明顯降低。

A.豬肝、菜花、草莓均可作為提取DNA的材料

B.對(duì)研磨液進(jìn)行離心的目的是加速DNA的沉淀

C.離心法可以獲得更高純度的DNA

D.析出時(shí)的離心轉(zhuǎn)速明顯高于去雜質(zhì)時(shí)

答案：B

解析：DNA粗提取與鑒定的實(shí)驗(yàn)中，應(yīng)選擇富含DNA的材料，豬肝、菜花、草莓均可作

為提取DNA的材料，A正確；離心研磨液的目的是加速沉淀，離心能夠加速細(xì)胞膜、細(xì)胞器、

一些較大雜質(zhì)的沉淀，離心法可以獲得更高純度的DNA,B錯(cuò)誤，C正確；據(jù)表可知，離心

時(shí)DNA濃度是8L5ngpLf4℃冰箱靜置時(shí)是336.4華翌11,說明靜置時(shí)蛋白質(zhì)含量較多，沉

淀質(zhì)量離心時(shí)是0.068g,4℃冰箱靜置時(shí)是0.1028g,比較可知DNA的沉淀質(zhì)量小，故析出時(shí)

的離心轉(zhuǎn)速明顯高于去雜質(zhì)時(shí)，D正確。

二、非選擇題

8.（2025?湖南九校聯(lián)盟）在未斷奶的小牛胃中存在一種凝乳酶，被廣泛應(yīng)用于奶酪和酸奶

的生產(chǎn)?？茖W(xué)家將編碼牛凝乳酶的基因（長度1.5kb）導(dǎo)入大腸桿菌獲得工程菌，再通過工業(yè)發(fā)

酵批量生產(chǎn)凝乳酶。

（1）提取小牛胃黏膜組織中的mRNA,經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄得到cDNA,選擇合適的引物進(jìn)行PCR擴(kuò)

增，PCR引物堿基數(shù)一般在20?30個(gè)之間，過短則導(dǎo)致。

（2）如表為操作過程中可能用到的限制酶，圖1為獲得的目的基因及末端（除黏性末端序列

外，其他堿基序列省略），圖2為要使用的質(zhì)粒，其中的竟八A”/■分別為四環(huán)素抗性基因和

氨茉青霉素抗性基因。對(duì)質(zhì)粒進(jìn)行切割時(shí)，選用的兩種限制酶為。目的基因和質(zhì)

粒能連接成重組質(zhì)粒的原因是,導(dǎo)入的目的基因在受體細(xì)胞中能

成功表達(dá)的理論基礎(chǔ)是__________________________________o

限制酶BamH1BellSmaISau3AI

識(shí)別位點(diǎn)及

—G'GATCC——T*GATCA——CCbGGG——,GATC—

切割位點(diǎn)

BamlII

Jt

CTAG

凝乳酶基因

圖1

（3）將轉(zhuǎn)化后的大腸桿菌接種在含^_______,的培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)，隨機(jī)挑取菌落（分別編號(hào)

為1、2、3、4）培養(yǎng)并提取質(zhì)粒，用⑵中選用的兩種限制酶進(jìn)行酶切，酶切產(chǎn)物經(jīng)電泳分離，

結(jié)果如下圖，號(hào)菌落的質(zhì)粒很可能是含目的基因的重組質(zhì)粒。

M1234

注：M為指示分子大小的標(biāo)準(zhǔn)參照物；小于0.2kb的DNA分子條帶未出現(xiàn)在圖中

(4)已知凝乳酶第20、24位氨基酸變成半胱氨酸，其活性可顯著提高。科研人員希望運(yùn)用

蛋白質(zhì)工程技術(shù)獲得活性更強(qiáng)的凝乳酶，請(qǐng)選用合適的措施編號(hào)并排序：。

(用箭頭表示)

①重組DNA分子導(dǎo)入大腸桿菌

②隨機(jī)改變凝乳酶基因的序列

③分析突變蛋白功能，設(shè)計(jì)結(jié)構(gòu)

④改變凝乳酶基因的特定序列

⑤培養(yǎng)細(xì)胞后提純突變蛋白

⑥將改變后的凝乳酶基因與質(zhì)粒重組

答案：(1)特異性降低(2*&1和52。1有相同的黏性末端可發(fā)生堿基互補(bǔ)配對(duì)遺傳

信息的傳遞都遵循中心法則或生物界共用一套遺傳密碼

(3)四環(huán)素2(4)③一④一⑥一①一⑤

解析：(1)引物與模板之間遵循堿基互補(bǔ)配對(duì)原則，若引物太短則特異性降低。

(2)基因表達(dá)載體構(gòu)建時(shí)，需要將目的基因和載體切出相同的黏性末端，圖示BomHl會(huì)破

壞目的基因，故對(duì)質(zhì)粒進(jìn)行切割時(shí)，選用的兩種酶為3&I和S/nal。目的基因和質(zhì)粒能連接

成重組質(zhì)粒的原因是有相同的黏性末端可發(fā)生堿基互補(bǔ)配對(duì)，導(dǎo)人的目的基因在受體細(xì)胞中能

成功表達(dá)的理論基礎(chǔ)是遺傳信息的傳遞都遵循中心法則或生物界共用一套遺傳密碼。

(3)圖中構(gòu)建目的基因表達(dá)載體時(shí)，氨節(jié)青霉素抗性基因被限制酶破壞，故將轉(zhuǎn)化后的大

腸桿菌接種在四環(huán)素的培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)及篩選；如果用3&I和S/nal兩種酶切割重組質(zhì)粒，

電泳后將獲得分別含有質(zhì)粒和目的基因的兩條條帶，2、3含有兩條條帶，2中其中一條條帶為

1.5kb,3中其中一條條帶為Ikb,由于牛凝乳酶的基因大小為1.5kb,所以對(duì)應(yīng)電泳圖是菌落2

很可能是含目的基因的重組質(zhì)粒。

(4)蛋白質(zhì)工程的過程為：預(yù)期蛋白質(zhì)功能一設(shè)計(jì)預(yù)期的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)一推測(cè)應(yīng)有氨基酸序

列一找到對(duì)應(yīng)的脫氧核甘酸序列(基因)，其前提是基因工程，故運(yùn)用蛋白質(zhì)工程技術(shù)從大腸桿

菌中獲得活性更強(qiáng)的凝乳酶，具體過程為：③分析突變蛋白功能，設(shè)計(jì)結(jié)構(gòu)一④改變凝乳酶基

因的特定序列一⑥將改變后的凝乳酶基因與質(zhì)粒重組一①重組DNA分子導(dǎo)入大腸桿菌一⑤培

養(yǎng)細(xì)胞后提純突變蛋白。

C組

一、選擇題

1.（2025?北師大附中模擬）限制性內(nèi)切酶介導(dǎo)的整合技術(shù)（REMI）是一種研究基因的新方法。

用限制酶切得到的線性質(zhì)粒與該酶組成的轉(zhuǎn)化混合物進(jìn)入并轉(zhuǎn)化細(xì)胞時(shí)，會(huì)切割受體細(xì)胞基因

組，產(chǎn)生與線性質(zhì)?；パa(bǔ)的黏性末端，線性質(zhì)粒通過堿基配對(duì)插入基因組。如果插入發(fā)生在一

個(gè)已知基因的內(nèi)部，則該基因的功能可能改變或喪失，即發(fā)生了基因突變。下列相關(guān)敘述，不

正確的是（）

A.當(dāng)外源質(zhì)粒帶有抗性基因時(shí)，可根據(jù)其在受體細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)情況篩選轉(zhuǎn)化細(xì)胞

B.REMI技術(shù)使基因突變具有隨機(jī)性，且限制酶識(shí)別序列越長，隨機(jī)性越大

C.所有的限制酶都具有專一性

D.限制酶、DNA連接酶、載體是REMI技術(shù)的三種分子工具

答案：B

解析：抗性基因?qū)儆跇?biāo)記基因，標(biāo)記基因可將含有目的基因的重組質(zhì)粒篩選出來，故當(dāng)外

源質(zhì)粒帶有抗性基因時(shí)，可根據(jù)其在受體細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)情況篩選轉(zhuǎn)化細(xì)胞，A正確；分析題意

可知，REMI技術(shù)是一種切割基因的方法，其本質(zhì)是基因工程，該技術(shù)可引發(fā)基因突變；由于

限制酶能夠識(shí)別特定序列，并在特定位點(diǎn)進(jìn)行切割，故限制酶識(shí)別序列越長，隨機(jī)性越小，B

錯(cuò)誤；限制酶能識(shí)別特定的核甘酸序列，并在特定位點(diǎn)進(jìn)行切割，即所有的限制酶都具有專一

性，C正確；結(jié)合題意可知，REMI技術(shù)需要用限制酶切割質(zhì)粒，且需要進(jìn)入受體細(xì)胞發(fā)揮作

用，則其本質(zhì)是基因工程技術(shù)，基因工程中需要用到限制酶、DNA連接酶、載體三種工具，

D正確。

2.CRISPR-Cas9是近年來生物學(xué)科研的熱門技術(shù)，該技術(shù)是細(xì)菌的一種防御機(jī)制。如

圖所示，當(dāng)細(xì)菌感知到噬菌體侵入時(shí)，會(huì)通過gRNA識(shí)別噬菌體DNA,并通過Cas9蛋白切斷

目標(biāo)DNA,從而起到防御作用。下列關(guān)于該機(jī)制的敘述正確的是（）

A.噬菌體DNA的變化體現(xiàn)了基因突變的不定向性

B.gRNA與目標(biāo)DNA結(jié)合片段中最多含有5種核昔酸

C.Cas9蛋白可破壞DNA分子的磷酸二酯鍵

D.高倍光學(xué)顯微鏡可觀察到該現(xiàn)象

答案：C

解析：噬菌體被細(xì)菌gRNA識(shí)別并被Cas9蛋白切割屬于特定位點(diǎn)的切割，不是基因突變，

不能體現(xiàn)基因突變的不定向性，A錯(cuò)誤；gRNA為RNA,最多含有4種核糖核甘酸，DNA含

有4種脫氧核甘酸，故gRNA與目標(biāo)DNA結(jié)合片段中最多含有8種核甘酸，B錯(cuò)誤；Cas9蛋

白可切斷目標(biāo)DNA,該過程破壞的是DNA分子的磷酸二酯鍵，C正確；該過程屬于分子水平

的改變，光學(xué)顯微鏡下無法觀察到該現(xiàn)象，D錯(cuò)誤。

3.（2025?山東濰坊安丘一中模擬）大腸桿菌經(jīng)溶菌酶和洗滌劑處理后，擬核DNA就會(huì)纏繞

在細(xì)胞壁碎片上，靜置一段時(shí)間，質(zhì)粒分布在上清液中，利用上述原理可初步獲得質(zhì)粒DNA。

用三種限制酶處理提取的產(chǎn)物，電泳結(jié)果如圖所示。下列關(guān)于質(zhì)粒的粗提取和鑒定的敘述錯(cuò)誤

的是（）

■1限制酶I

?■2限制酶n

———3限制酶IB

23

A.提取DNA時(shí)可加入酒精，使溶于酒精的蛋白質(zhì)等物質(zhì)溶解

B.將提取的DNA溶于2mol/LNaCl溶液后可用二苯胺試劑進(jìn)行鑒定

C.電泳鑒定DNA利用了DNA在電場(chǎng)中會(huì)向著它所帶電荷相反的電極移動(dòng)的原理

D.根據(jù)電泳結(jié)果，質(zhì)粒上一定沒有限制酶I和n的切割位點(diǎn)，而有限制酶HI的切割位點(diǎn)

答案：D

解析：由于蛋白質(zhì)可溶于酒精，而DNA在冷酒精中溶解度很低，所以在提取DNA時(shí)加

入酒精，使溶于酒精的蛋白質(zhì)等物質(zhì)溶解，而讓DNA析出，A正確；由于DNA在2moi/LNaCl

溶液中溶解度較大，DNA遇二苯胺試劑會(huì)呈現(xiàn)藍(lán)色，所以將提取的DNA溶于2mol/LNaCl

溶液后，可用二苯胺試劑在沸水浴條件下進(jìn)行鑒定，B正確；DNA帶負(fù)電，電泳鑒定DNA利

用了DNA在電場(chǎng)中會(huì)向著它所帶電荷相反的電極移動(dòng)的原理，C正確；因?yàn)橘|(zhì)粒的本質(zhì)是環(huán)

狀的DNA,限制酶I和H處理后電泳只有一條條帶，可能是該質(zhì)粒上有一個(gè)切割位點(diǎn)，也可

能沒有切割位點(diǎn)，D錯(cuò)誤。

4.（2024.沈陽第120中學(xué)第十次質(zhì)量監(jiān)測(cè)）菊花是兩性花，LfT基因是控制植物花分生組

織形成的基因。過量表達(dá)LFY導(dǎo)致植物提早開花。為使菊花花期提前，科學(xué)家制備了含有過

量表達(dá)的LfY基因的轉(zhuǎn)基因菊花。重組Ti質(zhì)粒的部分信息及實(shí)驗(yàn)流程如下圖所示，其中啟動(dòng)

子均為真核細(xì)胞啟動(dòng)子。下列敘述正確的是（）

A.在含潮霉素的培養(yǎng)基上存活的農(nóng)桿菌才可用于侵染菊花葉片

B.過程①②③所使用的培養(yǎng)基中植物激素的濃度和配比可以相同

C.I是一團(tuán)具有一定組織結(jié)構(gòu)松散的薄壁細(xì)胞團(tuán)，具有較強(qiáng)的分裂和分化能力

D.誘導(dǎo)出芽和根的試管苗要先煉苗以適應(yīng)外界的低濕強(qiáng)光環(huán)境才可進(jìn)行移栽

答案：D

解析：重組質(zhì)粒中含有潮霉素抗性基因，能表達(dá)出潮霉素抗性物質(zhì)，在含潮霉素的培養(yǎng)基

上存活的農(nóng)桿菌不一定是導(dǎo)入LRy基因的農(nóng)桿菌，還有可能是只導(dǎo)入質(zhì)粒的農(nóng)桿菌，因此只

有在含潮霉素的培養(yǎng)基上存活并導(dǎo)入Lfy基因的農(nóng)桿菌才可用于侵染菊花葉片，A錯(cuò)誤；植

物組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基中的生長素和細(xì)胞分裂素的含量和比例會(huì)影響愈傷組織的生長和分化，在

脫分化形成愈傷組織的過程中要求生長素和細(xì)胞分裂素的比例相當(dāng)，而在再分化過程中生長素

和細(xì)胞分裂素比例高有利于根的分化，比例低有利于芽的分化，B錯(cuò)誤；愈傷組織是一團(tuán)排列

疏松而無規(guī)則、高度液泡化的、呈無定形狀態(tài)的、具有分生能力的薄壁細(xì)胞，不具有特定的結(jié)

構(gòu)和功能，c錯(cuò)誤；誘導(dǎo)出芽和根的試管苗要先煉苗有助于試管苗逐漸適應(yīng)室外環(huán)境，并減少

在移栽后因氣候和土壤變化而造成的傷害，適應(yīng)外界的低濕強(qiáng)光環(huán)境才可進(jìn)行移栽，D正確。

5.（2024.山東省實(shí)驗(yàn)中學(xué)二模）由于PCR擴(kuò)增出的目的基因末端為平末端，且無合適的限

制酶識(shí)別序列，需借助中間載體P將目的基因接入載體E。下圖為兩種載體的結(jié)構(gòu)和相關(guān)限制

酶的識(shí)別序列，下列敘述正確的是（）

—GAGCTC--------CTATAG——GACGTC——GG野C——（XATGG—

XhoIEcoRVPsiISina1KpnI

A.構(gòu)建重組載體P時(shí)，應(yīng)選擇EcoRV進(jìn)行酶切，再用T4DNA連接酶連接

B.為了便于該目的基因接入載體E,可用限制酶EcoRV或Smal切割載體P

C.載體P不能作為基因表達(dá)載體，是因?yàn)樗缓鹗济艽a子和終止密碼子

D.若受體細(xì)胞表現(xiàn)出抗性基因的相應(yīng)性狀，表明重組載體成功導(dǎo)入受體細(xì)胞

答案：A

解析：由于載體E只有產(chǎn)生黏性末端的酶切位點(diǎn)，要使中間載體P接入載體E,同時(shí)防止

載體E自身環(huán)化，需要用兩種限制酶分別切割載體E和中間載體P,據(jù)圖可知，中間載體P

和載體E均含有XhoI和PstI酶識(shí)別序列，故可選用XhoI和PstI酶進(jìn)行酶切，載體P的這

兩種酶識(shí)別序列中含有EcoRV識(shí)別位點(diǎn)，并且其切割的為平末端，可以用于連接目的基因，

SmaI酶雖然也能切割得到平末端，但是其識(shí)別位點(diǎn)沒有位于X/z。I和Ps/I酶識(shí)別位點(diǎn)之間，

故不能選擇其對(duì)中間載體P進(jìn)行切割，連接平末端只能用T4DNA連接酶，A正確，B錯(cuò)誤；

由圖可知，不直接選擇P構(gòu)建表達(dá)載體是因?yàn)樗缓瑔?dòng)子與終止子，C錯(cuò)誤；受體細(xì)胞表現(xiàn)

出抗性基因的相應(yīng)性狀，可能是導(dǎo)入了重組質(zhì)粒，也可能只導(dǎo)入了空質(zhì)粒（不含目的基因的質(zhì)

粒），D錯(cuò)誤。

6.（2024.東北三省三校第二次聯(lián)考）熒光定量PCR是通過在PCR體系中添加熒光染料來

記錄PCR產(chǎn)物的累積情況，從而達(dá)到對(duì)PCR過程進(jìn)行實(shí)時(shí)監(jiān)控的目的。CT值表示每個(gè)反應(yīng)

管內(nèi)熒光信號(hào)達(dá)到設(shè)定的熒光閾值時(shí)所經(jīng)歷的循環(huán)數(shù)。通常情況下將已知濃度的DNA標(biāo)準(zhǔn)樣

品經(jīng)過梯度稀釋后分別取樣進(jìn)行熒光定量PCR,得到一系列的CT值，以梯度稀釋后的濃度對(duì)

數(shù)值作為橫坐標(biāo)，濃度所對(duì)應(yīng)的CT值為縱坐標(biāo)繪制曲線，即可得到一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)曲線，如下圖所

示，下列敘述錯(cuò)誤的是（）

A.熒光定量PCR反應(yīng)體系中需要添加耐高溫的DNA聚合酶

B.熒光定量PCR可以用于檢測(cè)樣品中待測(cè)病毒核酸的濃度

C.若兩組樣品中待測(cè)病毒核酸的濃度差了10倍，則兩組CT值的差異在3與4之間

D.若標(biāo)準(zhǔn)樣品的DNA出現(xiàn)降解，則利用所得的標(biāo)準(zhǔn)曲線分析，待測(cè)樣品所測(cè)CT值偏

低

答案：D

解析：PCR的過程包括變性、退火和延伸。DNA的雙鏈主要是靠氫鍵聯(lián)系在一起，高溫

時(shí)，氫鍵很容易就被斷開了，雙鏈變成了單鏈，提供了PCR的模板。熒光定量PCR是反復(fù)多

次進(jìn)行PCR,所以需要添加耐高溫的DNA聚合酶，A正確；根據(jù)題意和圖示可知，熒光定量

PCR的CT值與病毒核酸濃度有關(guān)，病毒核酸濃度越高，循環(huán)數(shù)越少，CT值越小，B正確；

根據(jù)圖中CT值與梯度稀釋后的濃度對(duì)數(shù)值之間的關(guān)系可知，如果PCR產(chǎn)物的濃度增加10倍，

其熒光強(qiáng)度也會(huì)增加10倍，但是CT值會(huì)減少大約3.3個(gè)單位（即1個(gè)對(duì)數(shù)單位），C正確；據(jù)

圖所示，DNA標(biāo)準(zhǔn)樣品的濃度越高，達(dá)到設(shè)定的熒光閾值時(shí)所經(jīng)歷的循環(huán)數(shù)越少，CT值越小，

所以，若標(biāo)準(zhǔn)樣品的DNA出現(xiàn)降解，DNA濃度下降，則標(biāo)準(zhǔn)曲線值偏高，待測(cè)樣品所測(cè)CT

值偏高，D錯(cuò)誤。

7.（2024?福建三校聯(lián)考）20世紀(jì)70年代，F(xiàn)redsanger發(fā)明了雙脫氧終止法對(duì)DNA進(jìn)行測(cè)

序。其原理如圖，在4個(gè)試管中分別加入4種脫氧核甘三磷酸（dNTP）和1種雙脫氧核甘三磷酸

（ddNTP）；ddNTP可以與dNTP競(jìng)爭(zhēng)核昔酸鏈延長位點(diǎn)，并終止DNA片段的延伸。在4個(gè)試

管中DNA鏈將會(huì)分別在A、G、C及T位置中止，并形成不同長度的DNA片段。這些片段隨

后可被電泳分開并顯示出來。下列說法中正確的是（）

5'1I?'

未知序列一

+

dATP,dGTP,dCTP,dTTP1

+(1(1ATP+(1(1GTP+(ldCTP+(1(1TTP

3

A

G

T

C

G

A

G

C

T

T

A

G

A.這種測(cè)序方法需要引物和耐高溫的DNA連接酶

B.電泳圖譜中的箭頭所指的DNA片段以鳥喋吟結(jié)尾

C.測(cè)得未知DNA的序列為5,-GATTCGAGCTGA-3'

D.ddNTP與dNTP競(jìng)爭(zhēng)的延長位點(diǎn)是核甘酸鏈的5,末端

答案：B

解析：這種測(cè)序方法需要引物和耐高溫的DNA聚合酶，A錯(cuò)誤；電泳圖譜中的箭頭所指

的DNA片段以鳥喋吟結(jié)尾，B正確；測(cè)得未知DNA的序列為5,-TCAGCTCGAATC-3z,

C錯(cuò)誤；ddNTP與dNTP競(jìng)爭(zhēng)的延長位點(diǎn)是核甘酸鏈的3,末端，D錯(cuò)誤。

二、非選擇題

8.（2025?山東師大附中適應(yīng)性測(cè)試）Ppastoris（某種能以甲醇為唯一碳源的酵母菌）可作為生

產(chǎn)抗原蛋白的工程菌。研究人員以圖1所示質(zhì)粒為載體，構(gòu)建含乙型肝炎病毒表面抗原蛋白

（HBsAg）基因的重組質(zhì)粒，將重組質(zhì)粒導(dǎo)入組氨酸缺陷型大腸桿菌（在缺失組氨酸的培養(yǎng)基中無

法生存）中進(jìn)行擴(kuò)增，再經(jīng)酶切后導(dǎo)入酵母菌，經(jīng)同源重組整合到其染色體DNA上。請(qǐng)回答下

列問題：

相關(guān)結(jié)構(gòu)

PAOXI:甲醇誘導(dǎo)型啟動(dòng)子

TAOXI:終止子

HIS4：組氨酸脫氫酶基因，其

表達(dá)產(chǎn)物催化組氨酸合成

Ori：復(fù)制原點(diǎn)

Amp1：氨節(jié)吉霉素抗性基因