《烏飯樹組織培養(yǎng)工廠化育苗技術(shù)規(guī)程（征求意見稿）》

ICSCCS點擊此處添加CCS號32CultureofVacciniumbracteat在提交反饋意見時，請將您知道的相關(guān)專利連同支持性文件一并附上。IDB32/TXXXX—XXXX 2規(guī)范性引用文件 3術(shù)語和定義 4母株選擇 5外植體選擇與滅菌 5.1外植體采集 5.2外植體表面滅菌 6培養(yǎng)基配置及滅菌 26.1培養(yǎng)基成分 26.2母液配置 26.3培養(yǎng)基配置 26.4培養(yǎng)基滅菌 26.5培養(yǎng)基保存 27接種 27.1準(zhǔn)備工作 27.2接種操作 27.3接種方法 38誘導(dǎo)培養(yǎng) 39繼代增殖 310瓶外生根 310.1培養(yǎng)基質(zhì) 310.2插穗處理 310.3生根培養(yǎng) 3 312苗木移栽和管理 412.1基質(zhì) 412.2容器 412.3移栽 412.4管理 412.5苗圃分級和出圃 錯誤！未定義書簽。12.6裝車及運輸 413苗圃檔案管理 4DB32/TXXXX—XXXX本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機構(gòu)不承擔(dān)識別專利的責(zé)任。本文件由江蘇省林業(yè)科學(xué)研究院提出。本文件由江蘇省林業(yè)局歸口。本文件起草單位：江蘇省林業(yè)科學(xué)研究院。本文件主要起草人：張敏、孫海楠、周鵬、李飛、陳亞輝、王磊、陳陽、蔣澤平、黃婧。1DB32/TXXXX—XXXX烏飯樹組織培養(yǎng)工廠化育苗技術(shù)規(guī)程本文件規(guī)定了烏飯樹組織培養(yǎng)的母株選擇、外植體選擇與滅菌、培養(yǎng)基配制及滅菌、接種、不定芽/腋芽誘導(dǎo)培養(yǎng)、不定芽/腋芽增殖繼代培養(yǎng)、瓶外生根、移栽和管理的技術(shù)要求。本文件適用于烏飯樹的組培工廠化快繁。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T6001育苗技術(shù)規(guī)程LY/T1000容器育苗技術(shù)LY/T1882林木組織培養(yǎng)育苗技術(shù)規(guī)程。3術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。3.1烏飯樹VacciniumbracteatumThunb.一種常綠灌木或小喬木，江南地區(qū)用其葉子制作烏米，因此得名。《中國植物志》和《中國植物物種名錄2024版》給出的規(guī)范中名為“南燭”。4母株選擇外植體的供體母株應(yīng)是生長健壯且無病蟲害的烏飯樹植株。5外植體選擇與滅菌5.1外植體采集5.1.1采集時間宜在春季或夏季晴好天氣采集。5.1.2采集部位及方法剪取半木質(zhì)化、生長健壯、無病蟲害的當(dāng)生枝條，亦可選擇根頸部或莖基部萌生的幼嫩莖段為外植體。5.2外植體表面滅菌5.2.1清洗2DB32/TXXXX—XXXX將所選取的外植體剪切成2cm~4cm長的小段，使用少量中性洗潔劑溶液洗凈外植體表面，用流水沖洗30min~60min。5.2.2滅菌在超凈工作臺上，用75%的乙醇溶液浸泡外植體0.5min，倒去乙醇溶液后用無菌水沖洗2次，每次1min；再用0.1%的升汞消毒8min，用無菌水沖洗5次，每次5min，最后置于無菌濾紙上吸干表面水分。6培養(yǎng)基配置及滅菌6.1培養(yǎng)基成分外植體誘導(dǎo)培養(yǎng)基與增殖培養(yǎng)基見附錄1。6.2母液配置按照LY/T1882執(zhí)行。6.3培養(yǎng)基配置根據(jù)培養(yǎng)基配方，按比例吸取母液培養(yǎng)基溶液，并加入定量的卡拉膠和蔗糖，加水定容后充分?jǐn)嚢枞芙?。將配置好的培養(yǎng)基溶液加熱至完全溶解，然后用1.0mol/L鹽酸或1.0mol/L氫氧化鉀調(diào)整pH至5.2~5.6。接著定量分裝到透光玻璃培養(yǎng)瓶內(nèi)，進(jìn)行密封。6.4培養(yǎng)基滅菌將分裝好的培養(yǎng)基放入高壓滅菌鍋內(nèi)消毒，滅菌氣壓采用0.105MPa，溫度采用121℃,滅菌時間25min~30min，使用高壓滅菌鍋應(yīng)符合其操作技術(shù)規(guī)范。培養(yǎng)基滅菌完成后應(yīng)置于干凈無風(fēng)的環(huán)境中冷卻，待凝固后方可使用。6.5培養(yǎng)基保存培養(yǎng)基盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。需要保存時，應(yīng)放置在干凈無風(fēng)的環(huán)境中進(jìn)行常溫保存，保存時間不超過77接種7.1準(zhǔn)備工作接種人員應(yīng)著干凈工作服、鞋、帽子和口罩，接種前應(yīng)洗凈雙手。接種器械、物品應(yīng)提前用滅菌鍋滅菌。開啟超凈工作臺、接種室和緩沖室的紫外燈滅菌30min，關(guān)閉紫外燈開啟超凈工作臺通風(fēng)機，通風(fēng)15min后方可操作。7.2接種操作3DB32/TXXXX—XXXX所有操作在超凈工作臺上進(jìn)行。接種人員雙手戴無菌乳膠手套接，使用經(jīng)過者電熱滅菌器高溫消毒并冷卻后的接種工具進(jìn)行接種。每瓶培養(yǎng)材料接種完成后應(yīng)將接種工具高溫消毒1次。7.3接種方法將接種材料置于接種器皿中或無菌紙上進(jìn)行切分，將切分后的材料垂直或略傾斜地接種到新鮮的培養(yǎng)基上。接種的小芽或叢芽的數(shù)量適中，深淺適中，分布均勻。接種完成后在培養(yǎng)器皿上做好相關(guān)的標(biāo)記。8誘導(dǎo)培養(yǎng)將外植體置于接種器皿中或無菌紙上減去接觸消毒液的傷口部位，留1cm~2cm帶芽莖段接種到誘導(dǎo)培養(yǎng)基上。光照強度為1500lx~3000lx，光照時間為8h/d～12h/d。一般培養(yǎng)周期為15d~20d。9繼代增殖將外植體經(jīng)誘導(dǎo)形成的健壯且長度在4cm以上的腋芽或不定芽，齊基部從外植體上剪下，并切成1cm~2cm帶芽莖段轉(zhuǎn)接到增殖培養(yǎng)基中進(jìn)行繼代培養(yǎng)。培養(yǎng)溫度為25℃,光照強度為1500~3000lx，光照時間為15h/d。一般培養(yǎng)周期為25~30d，繼代培養(yǎng)控制在20代以內(nèi)。10瓶外生根10.1培養(yǎng)基質(zhì)基質(zhì)采用珍珠巖，未使用的基質(zhì)可濕潤后直接使用，重復(fù)利用的基質(zhì)需提前使用0.1%的多菌靈或百菌清浸泡基質(zhì)消毒，分裝到干凈的128孔穴盤，穴盤尺寸：上口徑3cm，下口徑1cm，深度4cm。10.2插穗處理從增殖培養(yǎng)的幼苗中選擇生長健壯、高6cm~8cm且葉片展開的無菌苗，取出組培苗，洗凈，按單株剪下，每株剪成3cm~4cm帶芽莖段待扦插；扦插前插穗基部選用激素種類為ABT1號，質(zhì)量濃度為500mg/L，處理時間為5s，扦插深度以0.5cm~1.0cm為宜。10.3生根培養(yǎng)扦插完畢后澆透水，在穴盤上方覆蓋塑料薄膜或保鮮膜。穴盤置于溫室中培養(yǎng)，溫度為25℃,光照強度為1500lx~3000lx，光照時間為12h/d～13h/d。培養(yǎng)10d~15d后撤去塑料薄膜或保鮮膜，每隔3d澆水1次，一般培養(yǎng)周期為30d~60d，幼苗基部會長出大量根系。11煉苗4DB32/TXXXX—XXXX當(dāng)苗高生長至3cm-4cm、不定根長1cm-2cm后可進(jìn)行煉苗。穴盤苗在煉苗室中進(jìn)行光、溫、水、肥等管理?？諝鉂穸缺３衷?0%～90%，環(huán)境溫度控制在22～26℃。培育2~3個月，穴盤苗可長至半木質(zhì)化，生成根系若干條。12苗木移栽和管理12.1基質(zhì)育苗基質(zhì)采用蛭石與泥炭按1：3比例配制。12.2容器規(guī)格為直徑5.0cm-6.0cm，高度10.0cm-12.0cm，無紡布與塑料育苗缽均可。12.3移栽12.3.1移栽時間移苗時間在3月至4月、9月至11月進(jìn)行，避開5月至8月的高溫季節(jié)。12.3.2移栽場地移栽在林地簡易苗圃、專用苗圃或溫室進(jìn)行，對苗圃的要求參見GB/T6001和LY/T1000。在露天苗圃移栽，應(yīng)選擇風(fēng)小、光照弱的天氣進(jìn)行。12.3.3移栽操作當(dāng)穴盤中幼苗生長至高6~8cm、不定根長1~2cm時可進(jìn)行移栽。將已生根的幼苗小心取出，洗凈，移入容器中。移栽前先用0.1%的多菌靈或百菌清浸泡基質(zhì)消毒。移栽動作要輕，避免損傷根莖。12.4管理12.4.1肥水管理移栽后用遮光70%的遮陰網(wǎng)覆蓋遮陰，采用噴霧方式保濕，白天10min-15min噴1次，晚上30min-40min噴1次，每次噴霧3s-5s，保持相對濕度80%-90%。露天苗圃雨天不用淋水。苗木度過緩苗期長出新葉后，每隔10d-15d定期噴施或淋施1次0.05%-0.1%的尿素或復(fù)合肥溶液。12.4.2病蟲害管理病蟲害防治遵照GB/T6001的要求進(jìn)行。出圃前1個月進(jìn)行移袋、斷根、控水、增強光照等措施處理，提高苗木抗性。12.5裝車及運輸裝車過程中應(yīng)輕拿輕放以免損傷植株，造成植株無法正常生長。應(yīng)盡量避免長途運輸，若長