DB21-T3116-2019-葡寡糖含量的檢測液相色譜法-遼寧省

ICS71.040.01DB21A43遼寧省地方標準DB21/T3116—2018葡寡糖含量的檢測液相色譜法Determinationmethodforglucanoligosaccharides—Liquidchromatographymethod遼寧省市場監(jiān)督管理局發(fā)布DB21/T3116—2018前言本標準是依據(jù)GB/T1.1—2009《標準化工作導則第1部分：標準的結構和編寫》給出的規(guī)則起草的。本標準由大連市質量技術監(jiān)督局提出。本標準由中國科學院沈陽分院歸口。本標準起草單位：中國科學院大連化學物理研究所。本標準主要起草人：陳瑋、尹恒。IDB21/T3116—2018葡寡糖含量的檢測--液相色譜法1范圍本標準規(guī)定了葡寡糖含量檢測的術語和定義、原理、儀器設備、操作步驟、結果表示和重復性。本標準適用于以酵母細胞壁、真菌、褐藻、地衣、谷物以及其熱凝膠等聚糖為原料，經(jīng)加工制成的的葡寡糖產品中β-1,3-葡寡糖（聚合度2-6）含量的測定。2規(guī)范性引用文件下列文件對于本文件的應用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法。3術語和定義下列術語和定義適用于本文件。葡寡糖3.24葡寡糖經(jīng)過色譜柱分離后可得到多個單一聚合度的寡糖組分，分離后的葡寡糖組分進入檢測器進行檢測，在一定濃度范圍內，檢測信號的強度與葡寡糖濃度呈線性關系。通過外標法測定并計算得到葡寡糖產品中不同聚合度葡寡糖組分的濃度和質量。不同聚合度葡寡糖的質量總和與其產品總質量比值的百分比結果，即為葡寡糖的含量。5高效液相色譜儀：配有脈沖式安培檢測器（PAD,pulsedamperometricdetector）。分析天平：感應量為0.0001g。濾膜：聚四氟乙烯膜，0.2μm。1DB21/T3116—20186試劑和材料6.16.26.36.46.5水：符合GB/T6682規(guī)定的一級水的規(guī)定，即電導率（25℃）/（mS/m）≤0.01；氫氧化鈉溶液（ω(NaOH)=50%）：色譜純。三水乙酸鈉：色譜純。100mmol/L氫氧化鈉溶液：量取5.23mL氫氧化鈉溶液（6.2），用水定容至1000mL。800mmol/L三水乙酸鈉/100mmol/L氫氧化鈉溶液：稱取108.86g三水乙酸鈉，用水（6.1）溶解后加入5.23mL氫氧化鈉溶液（6.2），再用水（6.1）定容至1000mL。葡寡糖標準品：昆布二糖，純度≥95%，昆布三糖，純度≥95%；昆布四糖，純度≥95%；昆布五糖，純度≥90%；昆布六糖，純度≥90%；結構式參見附錄A。6.67測定步驟7.1標樣溶液的配置7.1.1標樣溶液A：分別稱取10.00mg經(jīng)105℃干燥至恒重的5種葡寡糖標準品(6.6)于50mL燒杯中，加入20mL水（6.1），振蕩使其充分溶解，轉移至100mL容量瓶中，用水（6.1）定容至刻度，葡寡糖濃度為100μg/mL。7.1.2標樣溶液B：吸取10.00mL標準溶液A轉移至100mL容量瓶中，用水（6.1）定容至刻度，葡寡糖濃度為10μg/mL。7.1.3標樣溶液C：吸取10.00mL標準溶液B轉移至100mL容量瓶中，用水（6.1）定容至刻度，葡將粉末狀樣品在105℃干燥至恒重。稱取25.0mg樣品于50mL燒杯中，加入20mL水（6.1），振蕩使其充分溶解，轉移至100mL容量瓶中，用水（6.1）定容至刻度，搖勻。用液相色譜儀測定前，樣品溶液用0.2μm濾膜過濾。洗脫方式：梯度洗脫：1-30min：0%-37.5%流動相B；30-35min:37.5%-62.5%流動相B；35-40min:62.5%-0%流動相B。2DB21/T3116—20187.4.1標準曲線繪制在上述操作條件下，待儀器基線穩(wěn)定后，將標樣溶液A（7.1.1）、標樣溶液B（7.1.2）、標樣溶液C（7.1.3）進樣10μL。標準溶液的典型色譜圖參見附錄B。根據(jù)已知標樣含量與檢測器響應值建立線性方程：YaXb.......................................(1)式中：a\b—已知系數(shù)；X—溶液中葡寡糖的濃度值（μg/mL）；Y—溶液中葡寡糖的色譜峰面積。7.4.2樣品測定在上述操作條件下，待儀器基線穩(wěn)定后，將樣品溶液（7.2）連續(xù)進樣3次，進樣體積10μL，得到樣品中不同聚合度葡寡糖峰面積Yi。8結果的計算8.1葡寡糖的濃度計算將樣品檢測響應值代入公式（1），計算得到不同聚合度葡寡糖濃度Xi。8.2葡寡糖的含量計算WiXi100Vs100.............................(2)式中：Xi—樣品溶液中葡寡糖的濃度值（μg/mL）；m—樣品的質量，單位為毫克（mg）；Vs—樣品稀釋倍數(shù)；Wi—樣品中葡寡糖的含量，%；9重復性在同一實驗室由同一操作人員完成的三個平行測定結果，相對標準偏差不大于5%；以三次平行測3DB21/T3116—2018AA附錄A（資料性附錄）β-1,3-葡寡糖的化學結構式圖A.