DB22-T3312-2021-柞蠶蛹蟲草菌種生產(chǎn)技術規(guī)程-吉林省

ICS65.020.01CCSB3922吉林省地方標準DB22/T3312—2021柞蠶蛹蟲草菌種生產(chǎn)技術規(guī)程CodeofpracticeforspawnproductionofCordycepsmilitarisinAntheraeapernyi吉林省市場監(jiān)督管理廳發(fā)布DB22/T3312—2021前言本文件按照GB/T1.1—2020《標準化工作導則第1部分：標準化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機構(gòu)不承擔識別專利的責任。本文件由吉林省農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳提出并歸口。本文件起草單位：吉林省蠶業(yè)科學研究院。本文件主要起草人：周影、李森、朱興友、祝長杰、王芹、劉娟。IDB22/T3312—2021柞蠶蛹蟲草菌種生產(chǎn)技術規(guī)程1范圍本文件確立了柞蠶蛹蟲草菌種生產(chǎn)的程序，規(guī)定了生產(chǎn)條件、菌種來源、母種生產(chǎn)、液體菌種生產(chǎn)、包裝、貯存和運輸階段的操作指示，描述了生產(chǎn)記錄等追溯方法。本文件適用于柞蠶蛹蟲草母種和液體菌種（栽培種）的生產(chǎn)。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T12728—2006食用菌術語NY/T528—2010食用菌菌種生產(chǎn)技術規(guī)程3術語和定義GB/T12728—2006界定的以及下列術語和定義適用于本文件。蛹蟲草菌（Cordycepsmilitaris（L.exFr.）Link）寄生于柞蠶蛹上形成的子實體與蛹的復[來源：GB/T12728—2006，2.5.7，有修改]菌絲轉(zhuǎn)色myceliumchangecolour1DB22/T3312—2021[來源：GB/T12728—2006，2.2.7]4柞蠶蛹蟲草菌種生產(chǎn)程序的構(gòu)成柞蠶蛹蟲草菌種的生產(chǎn)程序包括5個階段。程序流程圖如圖1所示。1生產(chǎn)條件（見5.1）2菌種來源（見5.2）3母種生產(chǎn)（見5.3）4液體菌種生產(chǎn)（見5.4）5包裝貯存運輸（見6）圖1柞蠶蛹蟲草菌種生產(chǎn)程序5應設有原料準備室、洗刷室、滅菌間、冷卻室、接種室、培養(yǎng)室、菌種檢驗室、菌種貯存室和出草試驗室等，并合理布局。母種在擴繁之前應進行出草試驗，性狀穩(wěn)定的方可投入生產(chǎn)使用,出草試驗設3次重復，每次接種柞蠶蛹后，僵化率和出草率應在70%以上，培養(yǎng)40d～45d時，子實體長度應在4cm～8cm之間，且直立、整齊、多且密、橙黃。2DB22/T3312—20215.3.1試管擴繁5.3.1.1培養(yǎng)基配制配方及配制方法見附錄A.1。5.3.1.2分裝配制好的培養(yǎng)基分裝至18mm×180mm或20mm×200mm的玻璃試管中，分裝量為試管長度的四分之一；試管口保持干凈，塞入棉塞，并用牛皮紙包扎。5.3.1.3滅菌將分裝好的試管直立置于高壓蒸汽滅菌鍋，121℃維持30min，當溫度降至80℃～90℃時，滅菌鍋放氣閥無蒸汽排出時，方可開啟鍋蓋，取出試管。5.3.1.4冷卻趁熱將試管的一端斜放在1cm厚的木條上擺出斜面，斜面的長度為試管長度的三分之二，斜面頂端距棉塞的距離為4cm～5cm，進行冷卻、凝固。5.3.1.5接種無菌條件下，用經(jīng)火焰消毒并冷卻后的接種耙切取3mm～5mm×3mm～5mm的一塊母種迅速轉(zhuǎn)接于待接試管斜面培養(yǎng)基中央，接種后塞好棉塞。在（22±2）℃條件下避光培養(yǎng)7d～10d，菌絲長滿斜面后見光培養(yǎng)，菌絲轉(zhuǎn)色后保藏于4℃冰箱中。接種后第3d、第6d和菌絲體長滿培養(yǎng)基后逐個進行檢驗，挑出未活、污染和生長不良的培養(yǎng)物，質(zhì)量應符合表1的要求。表1完整、潔凈、無破損、無裂紋干燥、潔凈，松緊適中，透氣頂端距棉塞4cm～5cm3DB22/T3312—20215.3.2.1培養(yǎng)基配制配方及配制方法見附錄A.1。5.3.2.2分裝將配制好的培養(yǎng)基分裝于150mL無色耐高溫玻璃三角瓶中，每瓶分裝量為40mL，瓶口保持干凈，塞好棉塞，并用牛皮紙包扎，培養(yǎng)基上表面距棉塞5cm～5.5cm。5.3.2.3滅菌分裝后置于高壓蒸汽滅菌鍋，121℃維持30min，當溫度降至80℃～90℃時，滅菌鍋放氣閥無蒸汽排出時，方可開啟鍋蓋，取出三角瓶。5.3.2.4冷卻趁熱擺放于潔凈臺面上進行冷卻、凝固。5.3.2.5接種無菌條件下，用經(jīng)火焰消毒并冷卻后的接種耙切取3mm～5mm×3mm～5mm大小的菌塊置于培養(yǎng)基上，每管試管擴接40瓶～50瓶三角瓶。5.3.2.6培養(yǎng)在（22±2）℃條件下避光培養(yǎng)8d～11d，菌絲長滿后見光培養(yǎng)，菌絲轉(zhuǎn)色后保藏于4℃冰接種后第3d、第7d和菌絲體長滿培養(yǎng)基后逐個進行檢驗，挑出未活、污染和生長不良的培養(yǎng)物，質(zhì)量應符合表2的要求。表2完整、潔凈、無破損、無裂紋干燥、潔凈，松緊適中，透氣潔白、粗壯、濃密、絨毛狀氣生菌絲，見光后菌絲24h內(nèi)變?yōu)槌赛S或橙色，均勻、無角變，無原基，無子實體，表面無分泌物，無雜菌4DB22/T3312—20215.4.2分裝將液體培養(yǎng)基分裝至500mL無色耐高溫玻璃三角瓶中，每瓶分裝量為200mL，并加入20?！?5粒玻璃珠，瓶口保持干凈，瓶塞選用無棉塑料蓋，培養(yǎng)基上表面距離瓶口14cm～15cm。5.4.3滅菌分裝后置于高壓蒸汽滅菌鍋，121℃維持30min，當溫度降至80℃～90℃時，滅菌鍋放氣閥無蒸汽排出時，方可開啟鍋蓋。5.4.4冷卻將液體培養(yǎng)基擺放于潔凈臺面上，待冷卻至30℃以下進行接種。5.4.5接種無菌條件下，用經(jīng)火焰消毒并冷卻后的接種耙切取4塊～6塊大小為3mm～5mm×3mm～5mm的母種接種于液體培養(yǎng)基中，每個三角瓶擴接10瓶～15瓶的液體菌種。5.4.6培養(yǎng)置于（22±2）℃條件下避光靜止培養(yǎng)24h后，在150r/min、(22±2）℃條件下，避光震蕩培養(yǎng)96h，液體菌種應隨制隨用。5.4.7檢驗每天對液體菌種逐個檢驗，挑出未萌發(fā)、渾濁和生長不良的培養(yǎng)物，液體菌種質(zhì)量應符合表3的要求。表3完整、潔凈、無破損、無裂紋干燥、潔凈，松緊適中，透氣6每管或瓶用防震撞的材料進行包裝，注意間隔，以防破損，外包裝選用抗擠壓包裝材料。5DB22/T3312—2021母種在4℃～10℃貯存不超過60d，液體菌種不宜貯存。6.3運輸運輸不得擠壓，碰撞，在4℃～25℃條件下運輸。7記錄與檔案7.1記錄母種、液體菌種生產(chǎn)過程中菌種來源、僵化率、出草率、生產(chǎn)時間、培養(yǎng)條件、數(shù)量、技術負責人、質(zhì)量檢驗、出廠日期及菌種流向等內(nèi)容。7.2記錄應及時歸檔，檔案保存期限為2年，做到可追溯。6DB22/T3312—2021附錄A（規(guī)范性）培養(yǎng)基配方及配制方法A.1母種培養(yǎng)基配制培養(yǎng)基配方A.1.1馬鈴薯200g、葡萄糖10g、蛋白胨10g、磷酸二氫鈉2.5g，磷酸二氫鉀1.5g、硫酸鎂0.7g、瓊脂20g、水1000mL，pH自然。A.1.2配制方法以配制1000mL培養(yǎng)基為例，將馬鈴薯洗凈去皮，稱取200g切成1cm×1cm×1cm小塊，加蒸餾水1000mL，置于不銹鋼鍋內(nèi)煮沸15min，用4層紗布過濾，然后加入其他成分，邊加熱邊攪拌，直到瓊脂完全溶解，定容至1000mL。A.2液體菌種培養(yǎng)基配制A.2.1培養(yǎng)基配方馬鈴薯200g、葡萄糖10g、蛋白胨10g、磷酸二氫鈉2.5g、磷酸二氫鉀