植物組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)(3) 菊花花瓣組織培養(yǎng)

實(shí)驗(yàn)三菊花花瓣組織培養(yǎng)（一）實(shí)驗(yàn)?zāi)康恼莆站栈ɑò暧鷤M織和不定芽的誘導(dǎo)，進(jìn)一步熟練無(wú)菌操作過(guò)程。（二）實(shí)驗(yàn)原理菊花是異質(zhì)六倍體，遺傳背景復(fù)雜，雜交后代性狀分離嚴(yán)重，并且自交不親和性高，所以通過(guò)自交獲得自交系可能性極小，通過(guò)雜交培育菊花新品種需要的時(shí)間也很長(zhǎng)，因此，組培技術(shù)在菊花品種的改良等方面起著較為重要的作用。離體條件下，菊花花瓣能誘導(dǎo)出愈傷組織和不定芽，然后再分化成完整植株，變異頻率較高，選育效率高，是選育菊花新品種的良好手段。（三）實(shí)驗(yàn)材料和用具

實(shí)驗(yàn)材料：菊花花瓣實(shí)驗(yàn)藥品：MS、1mg/mlNAA

、1mg/ml2,4-D、1mg/ml6-BA、1mol/LHCl、1mol/LNaOH、蒸餾水、燈用酒精、70％酒精、2％次氯酸鈉，吐溫-80，無(wú)菌水。滅菌培養(yǎng)基：MS2：MS+2.0mg/L6-BA+0.1mg/LNAAMS3：MS+2.0mg/L6-BA+0.5mg/LNAAMS4：MS+2.0mg/L6-BA+2.0mg/LNAA實(shí)驗(yàn)用具：天平、燒杯、玻璃棒、量筒、移液槍、三角瓶、pH試紙、電爐、高壓滅菌鍋。無(wú)菌室、無(wú)菌濾紙、無(wú)菌培養(yǎng)皿、燒杯、解剖刀、鑷子、剪刀、酒精燈、酒精棉花、滴管、記號(hào)筆、廢液罐、火柴、光照培養(yǎng)箱。（四）實(shí)驗(yàn)步驟

配制以下培養(yǎng)基各100ml：MS5：MS+1.0mg/L6-BA+2.0mg/LNAAMS6：MS+1.0mg/L6-BA+3.0mg/L2,4-D取200ml燒杯2只，標(biāo)記，各加入4gMS培養(yǎng)基和100ml蒸餾水，加熱直至完全溶解。各加入1mg/ml6-BA100μl，并不斷攪拌。分別加入1mg/mlNAA200μl和1mg/ml2,4-D300μl，并不斷攪拌。用1mol/LHCl或NaOH調(diào)節(jié)pH至5.8～6.0。分裝。將2種培養(yǎng)基分別分裝到4個(gè)三角瓶中，做好標(biāo)記。滅菌。用高壓蒸汽滅菌鍋在121℃、0.1MPa條件下滅菌15～20min。操作按儀器操作步驟進(jìn)行。滅菌后待壓力下降到0Pa時(shí)取出，凝固后待用。4.接種

菊花花瓣，洗凈，70％乙醇浸泡30s，2％次氯酸鈉液（加1～2滴吐溫-80）浸泡20min。進(jìn)入無(wú)菌室，用70％乙醇擦洗雙手、盛放外植體的燒杯外壁和工作臺(tái)面，點(diǎn)燃酒精燈。將次氯酸鈉倒掉，加無(wú)菌水沖洗3～5次。剪成3mm小片，每瓶接種5片。每組每種培養(yǎng)基各4瓶。光照培養(yǎng)箱25℃、60％光照16h/d培養(yǎng)。作業(yè)1周后觀察培養(yǎng)體系有無(wú)污染，計(jì)算每一個(gè)平皿內(nèi)染菌外植體數(shù)和外植體外的菌落數(shù)，分析染菌原因。1周后計(jì)算每種培養(yǎng)基的花瓣愈傷組織（不定芽）誘導(dǎo)率（形成愈傷組織（不定芽）的外