篩選雜交瘤細胞細胞培養(yǎng)篩選課件

篩選雜交瘤細胞細胞培養(yǎng)篩選課件匯報人：文小庫2024-01-11目錄contents雜交瘤細胞篩選概述雜交瘤細胞篩選的步驟雜交瘤細胞篩選的注意事項雜交瘤細胞篩選的實驗操作雜交瘤細胞篩選的結(jié)果分析01雜交瘤細胞篩選概述0102雜交瘤細胞篩選的定義雜交瘤細胞篩選是單克隆抗體技術(shù)中的關(guān)鍵步驟，能夠獲得具有高度均一性和特異性的抗體。雜交瘤細胞篩選是指通過細胞融合技術(shù)將免疫細胞與腫瘤細胞融合，篩選出能夠持續(xù)產(chǎn)生特異性抗體的細胞株的過程。雜交瘤細胞篩選的原理免疫細胞與腫瘤細胞融合后，形成的雜交瘤細胞既具有免疫細胞的抗體生成能力，又具有腫瘤細胞的無限增殖能力。通過篩選，選擇出能夠產(chǎn)生特異性抗體的雜交瘤細胞株，經(jīng)過克隆化培養(yǎng)和抗體檢測，最終獲得單克隆抗體。單克隆抗體能夠特異識別抗原，用于診斷和治療疾病，如癌癥、自身免疫性疾病等。疾病診斷和治療免疫學研究生物制品生產(chǎn)單克隆抗體技術(shù)可用于免疫學研究，如免疫應(yīng)答機制、抗原表位分析等。單克隆抗體可用于生產(chǎn)高純度、高質(zhì)量的生物制品，如藥物、診斷試劑等。030201雜交瘤細胞篩選的應(yīng)用02雜交瘤細胞篩選的步驟將免疫的B細胞與骨髓瘤細胞融合，形成雜交瘤細胞。細胞融合通過選擇性培養(yǎng)基篩選出融合的雜交瘤細胞，淘汰未融合的細胞。篩選方法初步檢測雜交瘤細胞是否產(chǎn)生所需抗體。抗體檢測細胞融合

抗體檢測檢測方法通過酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）等方法檢測雜交瘤細胞分泌的抗體。檢測指標抗體親和力、特異性、效價等指標。陽性克隆篩選根據(jù)檢測結(jié)果篩選出陽性克隆，即產(chǎn)生所需抗體的雜交瘤細胞。通過抗體檢測結(jié)果，挑選出陽性克隆進行擴大培養(yǎng)。篩選方法將陽性克隆進行單細胞分離培養(yǎng)，以獲得單一細胞的純培養(yǎng)?？寺』囵B(yǎng)對陽性克隆進行抗體檢測和鑒定，確保其符合要求。抗體檢測與鑒定陽性克隆篩選細胞擴增通過克隆化培養(yǎng)，使雜交瘤細胞數(shù)量不斷增加。培養(yǎng)條件為雜交瘤細胞提供適宜的生長條件，如溫度、濕度、營養(yǎng)等。細胞傳代定期將雜交瘤細胞進行傳代，保持細胞的活力和生長狀態(tài)。克隆化培養(yǎng)采用免疫學技術(shù)對雜交瘤細胞產(chǎn)生的抗體進行檢測和鑒定。檢測方法抗體的親和力、特異性、效價等指標，以及抗體的類別、亞類等屬性。鑒定指標鑒定后的抗體可用于進一步的研究和應(yīng)用，如疾病診斷、治療和藥物研發(fā)等。應(yīng)用價值抗體檢測與鑒定03雜交瘤細胞篩選的注意事項

細胞融合的條件細胞融合是篩選雜交瘤細胞的關(guān)鍵步驟，需要選擇適宜的細胞融合條件，包括細胞種類、融合劑、融合溫度、融合時間等因素。常用的融合劑有聚乙二醇（PEG）和電融合技術(shù)，其中PEG融合技術(shù)操作簡單，但需要嚴格控制PEG濃度和融合溫度。融合溫度和時間會影響細胞融合效果，通常選擇37℃恒溫條件下進行融合。抗體檢測是篩選雜交瘤細胞的重要環(huán)節(jié)，常用的檢測方法有酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）、免疫熒光技術(shù)和流式細胞術(shù)等。ELISA方法操作簡便、靈敏度高，適用于大量樣本的檢測；免疫熒光技術(shù)可用于觀察細胞表面抗原的表達；流式細胞術(shù)可用于檢測細胞表面抗原的定量分析?？贵w檢測的方法陽性克隆是指能夠產(chǎn)生特異性抗體的雜交瘤細胞，篩選標準包括抗體分泌量、特異性及穩(wěn)定性等方面?？贵w分泌量可通過ELISA等方法進行檢測，特異性可通過抗原刺激等方法進行驗證，穩(wěn)定性則需要經(jīng)過多次傳代和凍存復(fù)蘇等實驗進行評估。陽性克隆的篩選標準克隆化培養(yǎng)是篩選陽性克隆的關(guān)鍵步驟，需要選擇適宜的培養(yǎng)條件，包括培養(yǎng)基、溫度、氣體環(huán)境等因素。常用的培養(yǎng)基有DMEM、F12等，根據(jù)不同細胞類型選擇適宜的培養(yǎng)基。培養(yǎng)溫度需維持在37℃，氣體環(huán)境需保持95%空氣（細胞代謝必需的）和5%CO2（維持培養(yǎng)基pH值）?？寺』囵B(yǎng)的條件抗體的質(zhì)量保證抗體的質(zhì)量是雜交瘤細胞應(yīng)用價值的重要指標之一，需要從多個方面保證抗體的質(zhì)量。選擇高特異性、高親和力的抗體是保證抗體質(zhì)量的關(guān)鍵，此外還需注意抗體的可重復(fù)性、穩(wěn)定性和批次一致性等方面。04雜交瘤細胞篩選的實驗操作克隆化培養(yǎng)試劑選擇適當?shù)目寺』囵B(yǎng)試劑，如有限稀釋法或微珠法。陽性克隆篩選試劑選擇適當?shù)年栃钥寺『Y選試劑，如HAT選擇性培養(yǎng)基。抗體檢測試劑選擇適合的抗體檢測試劑，如ELISA或熒光抗體檢測。細胞培養(yǎng)基選擇適合雜交瘤細胞生長的培養(yǎng)基，如HAT培養(yǎng)基。細胞融合劑選擇適當?shù)募毎诤蟿?，如聚乙二醇或電融合。實驗材料準?23將雜交瘤細胞和骨髓瘤細胞分別進行傳代培養(yǎng)。準備雜交瘤細胞和骨髓瘤細胞根據(jù)實驗設(shè)計，采用適當?shù)娜诤戏椒▽㈦s交瘤細胞和骨髓瘤細胞融合。細胞融合通過離心和洗滌去除未融合的雜交瘤細胞和骨髓瘤細胞。去除未融合的細胞細胞融合實驗操作加抗原刺激將抗原溶液加入已融合的雜交瘤細胞中，刺激其產(chǎn)生抗體?？贵w檢測采用適當?shù)目贵w檢測方法，如ELISA或熒光抗體檢測，檢測雜交瘤細胞產(chǎn)生的抗體。制備抗原根據(jù)實驗?zāi)康?，制備相?yīng)的抗原溶液。抗體檢測實驗操作03培養(yǎng)與篩選在選擇性培養(yǎng)基中培養(yǎng)雜交瘤細胞，通過觀察生長情況、抗體產(chǎn)生情況等指標，篩選出陽性克隆。01準備選擇性培養(yǎng)基根據(jù)實驗設(shè)計，制備HAT選擇性培養(yǎng)基。02接種雜交瘤細胞將已篩選的雜交瘤細胞接種到選擇性培養(yǎng)基中。陽性克隆篩選實驗操作準備克隆化培養(yǎng)基根據(jù)實驗設(shè)計，制備適合雜交瘤細胞生長的克隆化培養(yǎng)基?？寺』囵B(yǎng)將陽性克隆接種到克隆化培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)，確保每個克隆來源于單一細胞。克隆化篩選通過觀察克隆生長情況、抗體產(chǎn)生情況等指標，篩選出穩(wěn)定表達抗體的陽性克隆。克隆化培養(yǎng)實驗操作05雜交瘤細胞篩選的結(jié)果分析抗體滴度通過滴度檢測評估雜交瘤細胞產(chǎn)生的抗體濃度，以確定抗體產(chǎn)量。抗體親和力通過親和力檢測評估抗體的結(jié)合能力，親和性強的抗體具有更好的識別和結(jié)合能力?？贵w特異性通過抗原-抗體反應(yīng)檢測雜交瘤細胞產(chǎn)生的抗體特異性，確?？贵w能夠與目標抗原特異性結(jié)合。抗體檢測結(jié)果分析克隆形成率通過繪制細胞生長曲線了解雜交瘤細胞的生長特性和生長速度。細胞生長曲線細胞形態(tài)觀察通過顯微鏡觀察細胞形態(tài)，評估細胞的健康狀態(tài)和生長狀況。通過克隆形成率檢測評估雜交瘤細胞的增殖能力，選擇增殖能力強的細胞克隆進行后續(xù)培養(yǎng)。克隆化培養(yǎng)結(jié)果分析通過實驗比較不同培養(yǎng)基對雜交瘤細胞生長