醫(yī)療護(hù)理醫(yī)學(xué)培訓(xùn) 生化實(shí)驗(yàn)-血糖的測(cè)定課件

血糖的測(cè)定實(shí)驗(yàn)四血糖及血糖水平的概念：血糖：指血液中的單糖：葡萄糖血糖水平：血漿中葡萄糖濃度血糖總維持在恒定水平：

3.9~6.7mmol/L調(diào)節(jié)血糖水平的激素：胰島素、胰高血糖素、糖皮質(zhì)激素和腎上腺素。血糖水平異常：⑴高血糖及糖尿?。虎频脱桥R床：血糖檢測(cè)是目前診斷糖代謝異常相關(guān)疾病的主要依據(jù)。科研：在代謝疾病的研究中，常測(cè)定血糖。在某些藥物的研究中，也涉及血糖的測(cè)定。測(cè)定血糖的意義體液糖的測(cè)定項(xiàng)目：①血糖濃度測(cè)定②口服糖耐量試驗(yàn)③糖化血紅蛋白試驗(yàn)④糖化血清白蛋白測(cè)定⑤胰島素測(cè)定⑥C-肽測(cè)定等測(cè)定方法無(wú)機(jī)化學(xué)法：Folin-Wu法有機(jī)化學(xué)法：鄰甲苯胺法酶法：葡萄糖氧化酶法血糖測(cè)定的常用方法葡萄糖氧化酶-過(guò)氧化物酶法原理（1）葡萄糖＋O2＋H2O（2）H2O2＋4-氨基安替吡啉＋苯酚葡萄糖酸＋H2O2葡萄糖氧化酶（GOD）H2O＋紅色醌式物質(zhì)過(guò)氧化物酶（POD）Trinder反應(yīng)505nm光吸收法測(cè)定相對(duì)血糖濃度分光光度計(jì)的原理分光光度技術(shù)電泳技術(shù)層析技術(shù)離心技術(shù)生物化學(xué)的四大研究技術(shù)：光的波粒二象性物質(zhì)的光吸收性分光光度計(jì)的原理分光光度計(jì)的工作原理朗伯-比爾定律朗伯定律：A=k1L比爾定律：A=k2C朗伯-比爾定律：如同時(shí)考慮液層厚度和溶液濃度對(duì)吸光度的影響，則吸光度與溶質(zhì)的濃度和溶液的厚度的乘積成正比。

A=KLC朗伯-比爾定律應(yīng)用A標(biāo)=KC標(biāo)LA樣=KC樣L

標(biāo)準(zhǔn)品法測(cè)定未知樣品含量C樣=A樣A標(biāo)×C標(biāo)朗伯-比爾定律應(yīng)用A標(biāo)=KC標(biāo)LA樣=KC樣L

標(biāo)準(zhǔn)品法測(cè)定未知樣品含量C樣=A樣A標(biāo)×C標(biāo)1.接通電源，調(diào)整波長(zhǎng)。2.比色杯中加入空白及待測(cè)樣品，并放入分光光度計(jì)中，注意：加入樣品量不超過(guò)比色杯體積的2/3。3.調(diào)模式為“透射比”，對(duì)空白對(duì)照進(jìn)行調(diào)“0”（開(kāi)蓋）和調(diào)“100”（閉蓋）。4.調(diào)模式為“吸光度”，將空白對(duì)照調(diào)“0”，測(cè)定待測(cè)樣品的吸光度值。分光光度計(jì)的使用

葡萄糖氧化酶-過(guò)氧化物酶法檢測(cè)激素對(duì)血糖濃度的影響方法（1）取4支試管，按下表加入試劑:試劑標(biāo)準(zhǔn)管(ml)測(cè)定管1(ml)測(cè)定管2(ml)空白管(ml)血清樣品–0.020.02–葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液0.02–––蒸餾水–––0.02酶酚混合試劑3.003.003.003.00實(shí)驗(yàn)步驟：充分混勻，37℃水浴中保溫20min；冷卻至室溫后，505nm處比色比色方法：以空白管調(diào)零，讀取標(biāo)準(zhǔn)管及測(cè)定管光密度值。（1）取4支試管，按下表加入試劑:試劑標(biāo)準(zhǔn)管(ml)測(cè)定管1(ml)測(cè)定管2(ml)空白管(ml)血清樣品–0.020.02–葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液0.02–––蒸餾水–––0.02酶酚混合試劑3.003.003.003.00實(shí)驗(yàn)步驟：充分混勻，37℃水浴中保溫20min；冷卻至室溫后，505nm處比色比色方法：以空白管調(diào)零，讀取標(biāo)準(zhǔn)管及測(cè)定管光密度值。（2）計(jì)算：依據(jù)朗伯-比爾定律：A=KLC

標(biāo)準(zhǔn)管葡萄糖濃度：5mmol/L

測(cè)定管葡萄糖含量（mmol/L）＝測(cè)定管光密度

標(biāo)準(zhǔn)管光密度×5正確使用比色器皿：手拿比色皿的毛面；比色液應(yīng)占比色皿的2/3。血糖測(cè)定應(yīng)在取血后2小時(shí)內(nèi)完成，放置太久，血糖易分解，故使含量降低。酶酚混合液一般現(xiàn)用現(xiàn)配。

注意事項(xiàng)補(bǔ)充實(shí)驗(yàn)測(cè)2-3名同學(xué)早餐后和空腹血糖的水平，并比較二者之間的區(qū)別。使用怡成JPS-5型血糖儀。小結(jié)1、葡萄糖氧化酶-過(guò)氧化物酶比色法測(cè)定血糖的原理。2、分光光度計(jì)的正確使用。3、實(shí)驗(yàn)操作中存在的問(wèn)題。其他常用血糖測(cè)定方法介紹葡萄糖氧化酶-過(guò)氧化物酶比色法Folin-Wu法鄰-甲苯胺法原理葡萄糖在和堿性銅試劑混合加熱后，可使Cu2+還原成Cu+

，后者與磷鉬酸試劑作用生成藍(lán)色的鉬藍(lán)。通過(guò)比色法測(cè)定藍(lán)色化合物，計(jì)算出血糖的含量。評(píng)價(jià)穩(wěn)定、準(zhǔn)確、但對(duì)葡萄糖無(wú)特異性，受血中非糖還原物質(zhì)的影響?？崭拐Ｑ菂⒖贾?/p>

4.4~6.7mmol/L或80-120mg/dLFolin-Wu法其他常用血糖測(cè)定方法介紹葡萄糖氧化酶-過(guò)氧化物酶比色法Folin-Wu法鄰-甲苯胺法原理

葡萄糖在冰醋酸中加熱脫水后，與鄰-甲苯胺縮合產(chǎn)生藍(lán)綠色的席弗(Schiff)堿，顏色的深淺與葡萄糖含量成正比，可通過(guò)比色法測(cè)得血糖含量。評(píng)價(jià)

結(jié)果較可靠、但鄰-甲苯胺須蒸餾后使用，有毒性?？崭拐Ｑ菂⒖贾?/p>

3.9~6.1mmol/L或70-110mg/dL

鄰-甲苯胺法葡萄糖氧化酶法：該法特異性高，反應(yīng)條件溫和，能反映血中葡萄糖的真實(shí)含量，且已推廣出試劑盒，廣泛應(yīng)用與臨床。Folin-Wu法：該法對(duì)葡萄糖無(wú)特異性，一切還原物質(zhì)均可產(chǎn)生同樣的反應(yīng)。雖血液中葡萄糖為主要還原物質(zhì)，但仍存在其他非糖還原物質(zhì)，故該法其參考值較其他方法略高。鄰-甲苯胺法：該法涉及強(qiáng)酸、加熱等反應(yīng)條件，不便于大規(guī)模檢測(cè)，且使用的試劑具有毒性，臨床和科研上已很少采用。備用工具&資料原理

葡萄糖在冰醋酸中加熱脫水后，與鄰-甲苯胺縮合產(chǎn)生藍(lán)綠色的席弗(Schiff)堿，顏色的深淺與葡萄糖含量成正比，可通過(guò)比色法測(cè)得血糖含量。評(píng)價(jià)

結(jié)果較可靠、但鄰-甲苯胺須蒸餾后使用，有毒性?？崭拐Ｑ菂⒖贾?/p>

3.9~6.1mmol/L或70-110mg/dL

鄰-甲苯胺法原理葡萄糖在和堿性銅試劑混合加熱后，可使Cu2+還原成Cu+

，后者與磷鉬酸試劑作用生成藍(lán)色的鉬藍(lán)。通過(guò)比色法測(cè)定藍(lán)色化合物，計(jì)算出血糖的含量。評(píng)價(jià)穩(wěn)定、準(zhǔn)確、但對(duì)葡萄糖無(wú)特異性，受血中非糖還原物質(zhì)的影響。空腹正常血糖參考值

4.4~6.7mmol/L或80-120mg/dLFolin-Wu法調(diào)節(jié)血糖水平的激素：胰島素、胰高血糖素、糖皮質(zhì)激素和腎上腺素。血糖水平異常：⑴高血糖及糖尿?。虎频脱求w液糖的測(cè)定項(xiàng)目：①血糖濃度測(cè)定②口服糖耐量試驗(yàn)③糖化血紅蛋白試驗(yàn)④糖化血清白蛋白測(cè)定⑤胰島素測(cè)定⑥C-肽測(cè)定等葡萄糖氧化酶-過(guò)氧化物酶法原理（1）葡萄糖＋O2＋H2O（2）H2O2＋4-氨基安替吡啉＋苯酚葡萄糖酸＋H2O2葡萄糖氧化酶（GOD）H2O＋紅色醌式物質(zhì)過(guò)氧化物酶（POD）T