火鍋底料去甲烏藥堿和曲托喹酚液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法

ICS67.220

CCSX04

T/BPMA

北京預(yù)防醫(yī)學(xué)會(huì)團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)

T/BPMAXXXX—XXXX

火鍋底料中去甲烏藥堿和曲托喹酚的測(cè)

定液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法

Determinationofhigenamineandtretoquinolincondimentsbyultra

highperformanceliquidchromatography-tandemmassspectrometry

(征求意見稿）

XXXX年XX月XX日發(fā)布XXXX年XX月XX日實(shí)施

北京預(yù)防醫(yī)學(xué)會(huì)發(fā)布

第1頁共8頁

火鍋底料中去甲烏藥堿和曲托喹酚的測(cè)定

液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法

1范圍

本文件規(guī)定了火鍋底料中去甲烏藥堿和曲托喹酚液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜的檢測(cè)方法。

本文件適用于火鍋底料中去甲烏藥堿和曲托喹酚的測(cè)定。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的內(nèi)容通過本文的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中凡是注日期的引

用文件，僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改

單）適用于本文件。

GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法

3術(shù)語和定義

本文件沒有需要界定的術(shù)語和定義

4方法原理

火鍋底料中的去甲烏藥堿和曲托喹酚，用含5%甲酸的乙醇溶液提取，經(jīng)C18、GCB以及EMR組

合填料凈化后，采用液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定，內(nèi)標(biāo)法定量。

5試劑和材料

除另有說明外，所用試劑均為優(yōu)級(jí)純，水為GB/T6682規(guī)定的一級(jí)水

5.1試劑

5.1.1甲醇（CH3OH）：色譜純。

5.1.2乙醇（C2H5OH）：色譜純。

5.1.3甲酸（CH3COOH）：色譜純。

5.1.4甲酸銨（NH4HCO3）：色譜純。

5.2溶液配制

5.2.1含5%甲酸的乙醇溶液：取甲酸12.5mL，用乙醇定容至250mL容量瓶中，混勻。

5.2.210mmol/L甲酸銨水溶液（含0.1%甲酸）：稱取0.315g甲酸銨溶解于500mL水中，加入0.5

mL甲酸，0.22μm聚醚砜微孔濾膜過濾。

第3頁共8頁

5.3標(biāo)準(zhǔn)品

標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)：去甲烏藥堿（CAS：5843-65-2）；曲托喹酚鹽酸鹽（CAS：18559-59-6；去甲烏藥

堿-D4（CAS：2249814-83-1）、曲托喹酚鹽酸鹽-D9（CAS：18559-63-2），純度均≥99.0%。

5.4標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備

5.4.1標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：分別準(zhǔn)確稱取按其純度折算為100%的去甲烏藥堿、曲托喹酚鹽酸鹽、去甲烏藥

堿-D4、曲托喹酚鹽酸鹽-D9標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)10mg，用甲醇溶解并定容于10mL容量瓶，得到1000mg/L

標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，-20℃避光保存。

5.4.2混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：分別準(zhǔn)確移取兩種標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液各100μL于10mL容量瓶中，用甲醇定容至

刻度，配制成10μg/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液。

5.4.3混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：準(zhǔn)確移取混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液（10μg/mL）100μL于10mL容量瓶中，用甲

醇定容至刻度，配制成100ng/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液。

5.4.4混合內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)溶液：準(zhǔn)確移取去甲烏藥堿-D4和曲托喹酚鹽酸鹽-D9標(biāo)準(zhǔn)溶液各100μL于10

mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，得到10mg/L混合內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液。

5.4.5混合內(nèi)標(biāo)工作溶液：準(zhǔn)確移取10mg/L混合內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液1.0mL于10mL容量瓶中，用

甲醇定容至刻度，得到1mg/L混合內(nèi)標(biāo)工作溶液。

5.4.6取適量混合標(biāo)準(zhǔn)溶液和混合內(nèi)標(biāo)工作溶液，用甲醇+10mmol/L甲酸銨水溶液（含0.1%甲酸）

（1+1）稀釋配制成濃度為0.1ng/mL、0.5ng/mL、1ng/mL、5ng/mL、10ng/mL的系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶

液，其中內(nèi)標(biāo)濃度為5ng/mL。

5.5材料

5.5.1石墨化碳黑（120μm~400μm）。

5.5.2十八烷基鍵合硅（40μm~60μm）。

5.5.3EMR凈化材料。

6儀器和設(shè)備

6.1超高效液相色譜儀串聯(lián)三重四極桿質(zhì)譜儀；

6.2離心機(jī)；

6.3恒溫水浴氮吹儀；

6.4多管渦旋混勻儀；

6.5渦旋混合器；

6.6超聲波清洗器；

第4頁共8頁

7試樣制備和保存

7.1試樣制備

取適量代表性樣品，用攪碎機(jī)充分?jǐn)囁榛靹颍▔K狀樣品需先在60℃水浴中融化后再用攪碎機(jī)充

分?jǐn)囁榛靹?；組合包裝樣品需將干制蔬菜包、干制菌菇包等全部料包倒入攪碎機(jī)內(nèi)攪碎混勻），分

成適量等份，并標(biāo)明標(biāo)記。

8測(cè)定步驟

8.1樣品的處理

8.1.1提取

稱取試樣2g（精確到0.01g）于50mL的具塞螺旋蓋聚丙烯離心管中，準(zhǔn)確加入100μL1mg/L

混合內(nèi)標(biāo)工作溶液，加入20mL含5%甲酸的乙醇溶液，渦旋混勻，振蕩提取30min，8000r/min離

心5min。

8.1.2凈化

移取2.0mL上清液于含有10mL的凈化管中，加入65mgGCB、65mgC18和65mgEMR，渦

旋混合，8000r/min離心5min，移取1.0mL上清液，氮?dú)獯抵两桑?.0mL甲醇+10mmol/L甲

酸銨水溶液（含0.1%甲酸）（1+1）定容，渦旋30s，0.22μm尼龍微孔濾膜過濾，供高效液相色譜

串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定。

8.2空白試驗(yàn)

除不稱取試樣外，均按8.1的步驟進(jìn)行。

8.3儀器分析條件

8.3.1液相色譜條件

a)色譜柱：ACQUITYUPLCHSST3色譜柱，1.8μm，100mm×2.1mm

b)柱溫：30℃；

c)進(jìn)樣量：5μL；

d)流速：0.3mL/min，梯度洗脫程序見表1。

表1HPLC梯度洗脫條件

10mmol/L甲酸銨水溶液

時(shí)間（min）甲醇（%）

（含0.1%甲酸）（%）

0.0397

1.5397

5.5955

第5頁共8頁

5.6397

7.5397

8.3.2質(zhì)譜條件

a)離子源：電噴霧離子源，正離子掃描（ESI+）；

b)檢測(cè)方式：多重反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）；

c)毛細(xì)管電壓：3.0kV；

d)離子源溫度：150℃；

e)脫溶劑溫度：500℃；

f)脫溶劑氣流量：800L/hr；

g)錐孔氣流量：50L/hr；

h)碰撞氣體：氬氣；

i)甲烏藥堿和曲托喹酚的MRM參數(shù)見表2。

表2甲烏藥堿和曲托喹酚的MRM參數(shù)

序號(hào)被測(cè)物定量離子對(duì)（m/z）CV/CE定性離子對(duì)（m/z）CV/CE

1去甲烏藥堿272.4>107.240/20272.4>161.240/18

2去甲烏藥堿-D4276.5>108.340/20276.5>164.340/18

3曲托喹酚346.5>164.26/14346.5>149.16/5

4曲托喹酚-D9355.6>164.112/16355.6>137.112/46

8.4定性判定

用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用法對(duì)試樣進(jìn)行定性判定，在相同試驗(yàn)條件下，樣液譜圖中應(yīng)呈現(xiàn)定量

離子對(duì)和定性離子對(duì)的色譜峰，被測(cè)物質(zhì)的質(zhì)量色譜峰保留時(shí)間與標(biāo)準(zhǔn)溶液中對(duì)應(yīng)物質(zhì)的色譜峰保

留時(shí)間偏差在±5%之內(nèi)；試樣色譜圖中所選擇的監(jiān)測(cè)離子對(duì)的相對(duì)豐度與相當(dāng)濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液的離子

相對(duì)豐度比的偏差不超過表3規(guī)定范圍，則可以判斷試樣中存在對(duì)應(yīng)的目標(biāo)物質(zhì)。

表3定性確證時(shí)相對(duì)離子豐度的最大允許偏差

相對(duì)離子豐度/%>5020~50（含）10~20（含）≤10

允許的相對(duì)偏差/%±20±25±30±50

8.5定量測(cè)定

在儀器最佳工作條件下，將系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液由低濃度至高濃度依次注入液質(zhì)聯(lián)用儀后，以標(biāo)

準(zhǔn)工作液濃度為橫坐標(biāo)，以峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，用標(biāo)準(zhǔn)工作曲線對(duì)試樣進(jìn)行內(nèi)標(biāo)

第6頁共8頁

法定量，試樣溶液中待測(cè)物的響應(yīng)值均應(yīng)在儀器測(cè)定的線性范圍內(nèi)。2種被測(cè)物質(zhì)的多反應(yīng)監(jiān)測(cè)

（MRM）色譜圖參見附錄A。

9結(jié)果計(jì)算和表述

結(jié)果按式（1）計(jì)算：

X....................（1）

晦晦晦

式中:=