常州市重點中學2025屆高三下學期第五次調研考試生物試題含解析

常州市重點中學2025屆高三下學期第五次調研考試生物試題考生請注意：1．答題前請將考場、試室號、座位號、考生號、姓名寫在試卷密封線內，不得在試卷上作任何標記。2．第一部分選擇題每小題選出答案后，需將答案寫在試卷指定的括號內，第二部分非選擇題答案寫在試卷題目指定的位置上。3．考生必須保證答題卡的整潔?？荚嚱Y束后，請將本試卷和答題卡一并交回。一、選擇題(本大題共7小題,每小題6分,共42分。)1．圖甲表示某動物細胞中一對同源染色體，圖乙表示該卵原細胞形成的卵細胞中的一條染色體，若只考慮圖中字母所表示的基因，下列相關敘述中正確的是（）A．該卵原細胞形成的第一極體的基因型為aeDB．復制形成的兩個A基因發(fā)生分離的時期為有絲分裂后期和減數第一次分裂后期C．形成乙的次級卵母細胞中不存在同源染色體，但可能存在等位基因D．甲形成乙的過程中發(fā)生了基因重組和染色體結構變異2．下圖為甲、乙兩種單基因遺傳病的遺傳家系圖，其中I-2只攜帶一種致病基因。人群中甲病基因頻率為1/15，乙病基因頻率為1/10。下列敘述正確的是（）A．甲病為伴性遺傳，乙病為常染色體遺傳B．II-3體細胞內最多含有6個致病基因C．III-1與一正常女性結婚，生下患病小孩的概率為6/11D．III-7與一甲病男性結婚，生下正常小孩的概率為49/1163．下列關于藍藻和玉米兩種生物的說法，正確的是A．遺傳物質都是DNAB．細胞分裂方式相同C．光合作用的場所和產物不同D．變異類型相同4．科研人員研究了溫度對人工種植的蒲公英光合作用與呼吸作用的影響，其他條件相同且適宜，實驗結果如下圖所示：據圖分析，下列說法正確的是（）A．在光照條件下，30℃環(huán)境中蒲公英的實際光合速率比25℃環(huán)境中小B．晝夜時間相同且溫度不變，則適合蒲公英生長的最適溫度是25℃C．P點時，葉表皮細胞產生ATP的場所為細胞溶膠和線粒體D．一直處于光照條件下，P點時蒲公英無法正常生長發(fā)育5．如圖表示雄果蠅體內某細胞分裂過程中，細胞內每條染色體上DNA含量的變化（甲曲線）及與之對應的細胞中染色體數目變化（乙曲線）。下列說法錯誤的是（）A．CD與FG對應的時間段，細胞中均含有兩個染色體組B．D點所對應時刻之后，單個細胞中可能不含Y染色體C．EF過程中，DNA含量的變化是由于同源染色體的分離D．CD段有可能發(fā)生同源染色體上非等位基因之間的重組6．下列關于細胞結構和功能的說法中，正確的是A．核糖體與新冠病毒COVID-19，一種單鏈RNA病毒）的化學成分相似B．核仁與核糖體的形成密切相關，沒有核仁的細胞無法形成核糖體C．ATP和[H]在葉綠體中隨水的分解而產生，在線粒體中隨水的生成而產生D．核糖體、內質網高爾基體的膜都參與了分泌蛋白的合成與運輸7．下列關于動物細胞培養(yǎng)及融合技術的敘述，正確的是（）A．細胞融合即細胞雜交，指由2個或多個細胞融合成1個細胞的現象B．一個脾細胞和一個骨髓瘤細胞融合而成的雜交細胞稱為雜交瘤細胞C．滋養(yǎng)層細胞可對細胞克隆起到支持生長的作用D．“多莉”克隆過程中，營養(yǎng)限制性培養(yǎng)的目的是使細胞周期同步化，最終有利于重組細胞中核基因表達的分子開關的啟動8．（10分）某高等植物細胞呼吸過程中主要物質變化如圖，①~③為相關生理過程。下列敘述正確的是（）A．若該植物為玉米，則③只發(fā)生在玉米胚細胞的細胞質基質中B．該植物②過程產生ATP的場所是線粒體基質和線粒體內膜C．等量的葡萄糖在有氧呼吸和無氧呼吸過程中產生丙酮酸的量不同D．只給根部細胞提供同位素標記的H218O，在O2和CO2中能同時檢測到18O二、非選擇題9．（10分）番茄中的番茄紅素和胡蘿卜中的β-胡蘿卜素都屬于類胡蘿卜素，兩種色素都具有很強的抗氧化能力，在生活和生產中得到廣泛應用，回答下列問題。（1）從番茄中提取番茄紅素常用萃取法，提取的效率主要取決于______；提取過程應采用水浴加熱，在加熱瓶口還要加______裝置，以防止加熱時有機溶劑揮發(fā)。胡蘿卜中的胡蘿卜素也可用萃取法提取，原因是______。（2）工業(yè)生產上，常利用微生物發(fā)酵的方法提取天然β-胡蘿卜素．已知紅酵母細跑在合成β-胡蘿卜素過程中會產生還原性較強的物質，該物質可將無色的TTC還原為紅色復合物。欲從土壤中篩選出能合成β-胡蘿卜素的紅酵母菌株，首先將土樣制成菌液，涂布到含TTC的培養(yǎng)基上，挑選出______菌落，然后通過______法進行分離純化。（3）工業(yè)生產番茄汁時，常常利用果膠酶以提高出汁率，原因是果膠酶能瓦解植物細胞的______?？蒲腥藛T通過酶解法和吸水脹破法將果膠酶從某種微生物中釋放了出來，進一步分離純化該酶的方法是______，鑒定該酶純度的方法是______。10．（14分）阿爾茨海默(AD)是一種神經退行性疾病，主要病理特征為β-淀粉樣蛋白(Aβ)沉積導致形成細胞外老年斑和tau蛋白過度磷酸化導致神經原纖維纏結，兩種情形均可能引起神經細胞凋亡，使學習、記憶能力減退，科研人員為了進一步探究發(fā)病機理和治療方案，進行了如下研究。（1）研究發(fā)現，患者腦部的神經元數量及神經元之間的_________（結構）明顯減少。進一步研究證實這是由于神經元________（填“胞體”、“樹突”或“軸突”）內的核糖體上合成的β﹣淀粉樣蛋白（Aβ）異常積累而引發(fā)細胞損傷導致?？蒲腥藛T推斷這種異常積累可能與_______Aβ的酶C表達量下降有關。（2）科研人員提取正常人和患者的神經元DNA，對酶C基因進行測序，測序結果完全一致，說明酶C基因表達量的改變不是____________導致。（3）科研人員分別提取正常人和患者神經元的酶C基因啟動子的DNA片段，再分別用具有相同識別序列（CCGG）的HpaⅡ和MspⅠ酶切（但HpaⅡ不能切割甲基化的胞嘧啶）。結果顯示正常人該DNA片段用MspⅠ切割后產生的片段數目與用HpaⅡ切割后產生的片段數目的差值___________（大于/小于）患者的相應差值，說明患者細胞中酶C基因啟動子甲基化程度更高。（4）依據上述結果，研究人員推測，患者神經元內的RNA聚合酶與酶C基因啟動子結合受影響，進而影響了酶C基因的轉錄。結合上述研究提出一種治療阿爾茨海默癥的方案：_______________________。11．（14分）蘿卜的蛋白A具有廣泛的抗植物病菌作用，而且對人體沒有影響。我國科學家欲獲得高效表達蛋白A的轉基因大腸桿菌作為微生物農藥，做了相關研究。（1）研究者用相同的_________酶處理蛋白A基因和pET質粒，得到重組質粒，再將重組質粒置于經_________處理的大腸桿菌細胞懸液中，獲得轉基因大腸桿菌。（2）檢測發(fā)現，轉入的蛋白A基因在大腸桿菌細胞中表達效率很低，研究者推測不同生物對密碼子具有不同的偏好，因而設計了與蛋白A基因結合的兩對引物（引物B和C中都替換了一個堿基），并按圖2方式依次進行4次PCR擴增，以得到新的蛋白A基因。①這是一種定點的_________技術。②圖2所示的4次PCR應該分別如何選擇圖1中所示的引物？請?zhí)顚懸韵卤砀瘢ㄈ暨x用該引物劃“√”，若不選用該引物則劃“×”）。_____引物A引物B引物C引物DPCR1PCR2PCR3PCR4（3）研究者進一步將含有新蛋白A基因的重組質粒和_________分別導入大腸桿菌，提取培養(yǎng)液中的蛋白質，用_________方法檢測并比較三組受體菌蛋白A的表達產物，判斷新蛋白A基因表達效率是否提高。為檢測表達產物的生物活性，研究者將上述各組表達產物加入到長滿了植物病菌的培養(yǎng)基上，培養(yǎng)一段時間后，比較_________的大小，以確定表達產物的生物活性大小。（4）作為微生物農藥，使用時常噴灑蛋白A基因的發(fā)酵產物而不是轉蛋白A基因的大腸桿菌，其優(yōu)點是_________。12．某種多年生雌雄異株植物，其性別決定為XY型，花色有紫、白兩種情況。研究人員讓兩株純合的紫花個體雜交，F1全為紫花，F1雌、雄個體隨機交配，F2中紫花：白花＝15：1，而開白花個體全為雄性（不考慮同源區(qū)段）?；卮鹣铝袉栴}：（1）控制此種植株花色的等位基因有________對，控制花色的基因在常染色體或性染色體上的分布情況是______________________。（2）研究發(fā)現當控制花色的基因全部非純合狀態(tài)下，紫色雌花的藥用價值很高。由于管理不當造成了親本與F1植株全部死亡。請利用F2中的個體設計實驗，選出藥用價值很高的雌株。僅需寫出簡單的實驗設計思路，預期實驗結果及結論________________________________。

參考答案一、選擇題(本大題共7小題,每小題6分,共42分。)1、C【解析】

據圖甲可知，兩條染色體為同源染色體，其上有三對等位基因；圖乙為卵細胞中的一條染色體，圖中的D基因變成了d基因，根據染色體的形態(tài)，可判斷變異是由于非姐妹染色單體間發(fā)生交叉互換造成的。【詳解】A、由于發(fā)生了交叉互換，所以該卵原細胞形成的第一極體的基因型（基因組成）為Ddeeaa，A錯誤；B、復制形成的兩個A基因發(fā)生分離的時期為有絲分裂后期和減數第二次分裂后期，B錯誤；C、圖乙中的卵細胞在形成過程中發(fā)生了交叉互換，故經減數第一次分裂后形成的乙的次級卵母細胞中不存在同源染色體，但可能存在等位基因，C正確；

D、甲形成乙的過程中只發(fā)生了基因重組（交叉互換），D錯誤。故選C?！军c睛】本題考查了生物變異的類型和原因，解答此題需把握題干中兩條染色體顏色的不同，并掌握基因的關系，進而分析作答。2、D【解析】

據圖分析，圖中II-4、II-5患甲病，但是生出了正常的女兒，說明甲病為常染色體顯性遺傳病；II-4、II-5不患乙病，但是生出了有乙病的兒子，說明乙病為隱性遺傳病，又因為I-2只攜帶一種致病基因（甲?。?，但是生出了有乙病的兒子，說明乙病為伴X隱性遺傳病?！驹斀狻緼、根據以上分析已知，甲病為常染色體顯性遺傳病，乙病為伴X隱性遺傳病，A錯誤；B、II-3兩病兼患，假設致病基因分別是A、b，則其基因型為AaXbY，因此其體細胞內最多含有4個致病基因，B錯誤；C、III-1基因型為AaXBY，由于人群中乙病基因頻率為1/10，則正常女性是乙病致病基因攜帶者的概率=（2×1/10×9/10）÷（2×1/10×9/10+9/10×9/10）=2/11，因此III-1與一正常女性結婚，生下患病小孩的概率=1-正常=1-1/2×(1-2/11×1/4)=23/44，C錯誤；D、III-7基因型為1/2aaXBXB或1/2aaXBXb，甲病男性基因型為AAXBY或AaXBY，由于人群中甲病基因頻率為1/15，則甲病患者是雜合子的概率=（2×1/15×14/15）÷（2×1/15×14/15+1/15×1/15）=28/29，因此III-7與一甲病男性結婚，后代正常的概率=（28/29×1/2）×(1-1/2×1/4)=49/116，D正確。故選D。3、A【解析】藍藻和玉米都是細胞生物，遺傳物質都是DNA，A正確；藍藻是原核生物，通過二分裂的方式增殖，而玉米是真核生物，主要通過有絲分裂的方式增殖，B錯誤；藍藻和玉米光合作用的場所不同，但是產物是相同的，C錯誤；藍藻的變異類型只有基因突變，而玉米的變異類型有基因突變、基因重組和染色體變異，D錯誤。4、C【解析】

圖中自變量為溫度，本題是研究溫度對光合作用與呼吸作用的影響．在讀表時，要明確光照下吸收CO2的量為凈吸收量，即凈光合作用量；黑暗中放出CO2的量代表的是有機物的消耗量，也代表呼吸作用強度?！驹斀狻緼、實際光合速率等于凈光合速率加上呼吸速率，30℃環(huán)境中蒲公英的實際光合速率為6.5mg/h，25℃環(huán)境中蒲公英的實際光合速率為5.95mg/h，A錯誤；B、晝夜時間相同且溫度不變，則適合蒲公英生長的最適溫度是20℃，B錯誤；C、P點時，凈光合速率大于0，蒲公英既進行光合作用，又進行呼吸作用，但表皮細胞沒有葉綠體，所以表皮細胞只進行呼吸作用，產生ATP的場所是細胞溶膠和線粒體，C正確；D、一直處于光照條件下，P點時蒲公英凈光合速率大于0，蒲公英能正常生長發(fā)育，D錯誤。故選C。5、C【解析】

根據題意和圖示分析可知：圖中實線甲表示減數分裂過程中DNA含量變化，虛線乙表示減數分裂過程中染色體含量變化；其中CD段表示減數第一次分裂，DG表示減數第二次分裂，EF表示著絲粒分裂?！驹斀狻緼.CD段表示減數第一次分裂，FG表示減數第二次分裂后期，所以CD與FG對應的時間段，細胞中均含有2個染色體組，A正確；B.由于減數第一次分裂后期同源染色體分離，因此D點所對應時刻之后，單個細胞中可能不含Y染色體，B正確；C.DE對應的時間段為減數第二次分裂，細胞中不含同源染色體，因此EF過程中DNA含量的變化與同源染色體的分離無關，C錯誤；D.CD段表示減數第一次分裂，在前期有可能發(fā)生同源染色體上非姐妹染色單體之間的交叉互換，從而導致同源染色體上的非等位基因之間發(fā)生重組，D正確。故選C。6、A【解析】

1、原核細胞的核糖體形成與核仁無關；2、核糖體由rRNA和蛋白質構成；3、光合作用的光反應階段的特征是在光驅動下水分子氧化釋放的電子通過類似于線粒體呼吸電子傳遞鏈那樣的電子傳遞系統傳遞給NADP+，使它還原為NADPH。電子傳遞的另一結果是基質中質子被泵送到類囊體腔中，形成的跨膜質子梯度驅動ADP磷酸化生成ATP。4、有氧呼吸的第三階段：在線粒體的內膜上，前兩階段脫下的共24個[H]與從外界吸收或葉綠體光合作用產生的6個O2結合成水；在此過程中釋放大量的能量，其中一部分能量用于合成ATP，產生大量的能量?！驹斀狻緼、核糖體由rRNA和蛋白質構成，新冠病毒也是由RNA和蛋白質構成，A正確；B、原核細胞沒有核仁，也能形成核糖體，B錯誤；C、在線粒體水的生成過程中生成了ATP，但是沒有[H]產生，C錯誤；D、核糖體、內質網高爾基體都參與了分泌蛋白的合成與運輸，但核糖體無膜，D錯誤；故選A。【點睛】結合核糖體的結構、光合作用的光反應階段及有氧呼吸第三階段分析選項。7、D【解析】

細胞融合與細胞雜交細胞融合指兩個或多個細胞融合成一個細胞的現象。細胞融合可以在基因型相同或不同的細胞間進行，其中基因型不同的細胞間的融合就是細胞雜交。由于細胞雜交中染色體容易丟失,動物細胞融合與植物原生質體融合的基本原理相同，誘導動物細胞融合的方法與植物原生質體融合的方法也類似，常用的誘導因素有聚乙二醇、滅活的病毒、電激等。提高細胞克隆形成率的措施有：選擇適宜的培養(yǎng)基、添加血清(胎牛血清最好)、以滋養(yǎng)細胞(如經射線照射本身失去增殖力的小鼠成纖維細胞)支持生長、激素(胰島素等)刺激、使用CO2培養(yǎng)箱、調節(jié)pH等?！驹斀狻緼、動物細胞融合是指兩個或多個動物細胞結合形成一個細胞的過程，一般為兩個細胞的融合，其中基因型不同的細胞間的融合就是細胞雜交，A錯誤；B、抗體生成細胞和瘤細胞的融合叫做雜交瘤技術，據此可知，一個經過免疫的脾細胞與一個骨髓瘤細胞融合而成的雜交細胞稱為雜交瘤細胞，B錯誤；C、滋養(yǎng)細胞可對細胞克隆起到支持生長的作用，不是滋養(yǎng)層細胞支持生長，C錯誤；D、多莉”克隆過程中，營養(yǎng)限制性培養(yǎng)的目的是使細胞周期同步化，最終有利于重組細胞中核基因表達的分子開關的啟動，D正確。故選D。8、B【解析】

高等植物的細胞呼吸可以分為有氧呼吸和無氧呼吸兩類，有氧呼吸分為三個階段，分別為葡萄糖在細胞質基質分解為丙酮酸和[H]，丙酮酸在線粒體基質分解為二氧化碳和[H]，氧氣和[H]在線粒體內膜上生成水三個過程。而無氧呼吸是在沒有氧氣的條件下，第一階段產生的丙酮酸在細胞質基質被分解為酒精和二氧化碳?！驹斀狻緼、玉米的胚細胞進行無氧呼吸的產物為乳酸，不是酒精和二氧化碳，A錯誤；B、②過程主要是指有氧呼吸的第二階段和第三階段，場所分別為線粒體基質和線粒體內膜，都會產生ATP，B正確；C、有氧呼吸第一階段和無氧呼吸第一階段反應完全相同，會產生等量的丙酮酸，C錯誤；D、根部細胞沒有葉綠體，不會進行光合作用，所以給根部細胞提供同位素標記的H218O，只能在CO2中先檢測到18O，D錯誤；故選B。二、非選擇題9、提取液的性質和使用量回流冷凝裝置溶于有機溶劑，且不易分解呈紅色平板劃線法或稀釋涂布平板法細胞壁和胞間層凝膠色譜法電泳法【解析】

1、果膠酶能夠分解果膠，瓦解植物的細胞壁及胞間層，使榨取果汁變得更容易，而果膠分解成可溶性的半乳糖醛酸，也使得渾濁的果汁變得澄清。果膠酶并不特指某一種酶，而是分解果膠的一類酶的總稱，包括多聚半乳橢醛酸酶、果膠分解酶和果膠酯酶等。2、平板劃線法是指通過接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的操作，將聚集的菌種逐步稀釋分散的培養(yǎng)基的表面，在數次劃線后培養(yǎng)，可以分離到由一個細胞繁殖而來的肉眼可見的子細胞群體，這些生長在固體培養(yǎng)基表面的子細胞群體就是菌落。3、凝膠色譜法也稱為分配色譜法，是根據相對分子質量的大小分離蛋白質的有效方法。當相對分子質量不同的蛋白質通過凝膠時，相對分子質量較小的蛋白質容易進入凝膠內部的通道，路程較長，移動的速度較慢，而相對分子質量較大的蛋白質，無法進入凝膠內部的通道，只能在凝膠外部移動，路程較短，移動的速度較快，相對分子質量不同的蛋白質分子得以分離?！驹斀狻浚?）番茄紅素是一種類胡蘿卜素，而類胡蘿卜素化學性質比較穩(wěn)定，不溶于水，易溶于石油醚等有機溶劑，因此常用萃取法從番茄中提取番茄紅素。提取的效率主要取決于提取液的性質和使用量。因萃取劑為有機溶劑，易燃、易爆，所以萃取過程應該避免明火加熱，而應采用水浴加熱。在加熱瓶口還要安裝回流冷凝裝置，防止加熱時有機溶劑揮發(fā)。根據胡蘿卜素溶于有機溶劑，且不易分解的特點，在提取胡蘿卜中的胡蘿卜素也可用萃取法提取。（2）已知紅酵母細跑在合成β-胡蘿卜素過程中會產生還原性較強的物質，該物質可將無色的TTC還原為紅色復合物。根據這一特性，欲從土壤中篩選出能合成β-胡蘿卜素的紅酵母菌株，首先制備含TTC的培養(yǎng)基，然后將土樣制成菌液，涂布到含TTC的培養(yǎng)基上，挑選出呈紅色的菌落，然后通過稀釋涂布平板法或平板劃線法進行分離純化。（3）工業(yè)生產番茄汁時，常常利用果膠酶以提高出汁率，原因是果膠酶能瓦解植物細胞的細胞壁和胞間層，使榨取果汁變得更容易，果汁更澄清?？蒲腥藛T通過酶解法和吸水脹破法將果膠酶從某種微生物中釋放了出來，進一步分離純化該酶的方法是凝膠色譜法，鑒定該酶純度的方法是電泳法?！军c睛】本題最后兩空是易錯空，需要學生認真理解凝膠色譜法和電泳的原理，這是正確解答最后一問的關鍵！10、突觸胞體降解基因突變小于抑制酶C基因啟動子甲基化水平增高；增加酶C（或“分解Aβ的酶”）基因的表達量【解析】

1、根據題干信息分析，阿爾茨海默是由非可溶性β-淀粉樣蛋白（Aβ）聚集破壞神經細胞所致，表現為記憶力下降和認知功能障礙等，而神經元細胞是神經調節(jié)的基本單位，記憶、認知都與人的大腦皮層有關。2、神經纖維未受到刺激時，細胞膜內外的電荷分布情況是外正內負，當某一部位受刺激時，其膜電位變?yōu)橥庳搩日?；興奮的傳導方向和膜內側的電流傳導方向一致，與膜外側的電流傳導方向相反。興奮在神經元之間的傳遞是單向的，神經遞質存在于突觸前膜的突觸小泡中，只能由突觸前膜釋放，然后作用于突觸后膜，因此興奮只能從一個神經元的軸突傳遞給另一個神經元的細胞體或樹突。信號由電信號轉變?yōu)榛瘜W信號再轉變?yōu)殡娦盘?。【詳解】?）由題干信息“阿爾茨海默病理特征為β-淀粉樣蛋白（Aβ）沉積導致形成細胞外老年斑和tau蛋白過度磷酸化導致神經原纖維纏結，兩種情形均可能引起神經細胞凋亡”，使患者腦部的神經元數量及神經元之間的突觸明顯減少。這可能是由于神經元胞體內的核糖體上合成的β-淀粉樣蛋白（Aβ）異常積累而引發(fā)細胞損傷導致?？蒲腥藛T推斷這種異常積累可能與降解Aβ的酶C表達量下降有關。（2）科研人員提取正常人和患者的神經元DNA，對酶C基因進行測序，測序結果完全一致，說明正常人和患者的酶C基因一樣，故酶C基因表達量的改變不是基因突變所致。（3）科研人員分別提取正常人和患者神經元的酶C基因啟動子的DNA片段，再分別用具有相同識別序列（CCGG）的HpaⅡ和MspⅠ酶切（但HpaⅡ不能切割甲基化的胞嘧啶）。正常人該DNA片段用MspⅠ切割后產生的片段數目與用HpaⅡ切割后產生的片段數目的差值應為0，若患者的相應差值大于0，說明患者細胞中酶C基因啟動子較多的序列不能被HpaII識別、切割，甲基化程度更高。（4）研究人員推測，患者神經元內的RNA聚合酶與酶C基因啟動子結合受影響，進而影響了酶C基因的轉錄。結合推測可通過抑制酶C基因啟動子甲基化水平增高；增加酶C（或“分解Aβ的酶”）基因的表達量等方式治療阿爾茨海默癥?！军c睛】本題考查神經調節(jié)和體液調節(jié)的相關知識，意在考查學生的識記能力和判斷能力，運用所學知識綜合分析問題的能力。11、限制酶和DNA連接CaCl2基因突變引物A引物B引物C引物DPCR1√√××PCR2××√√PCR3××××PCR4√××√含有蛋白A基因的重組質粒、空質粒（pET質粒）抗原-抗體雜交抑菌圈對人、畜、農作物和自然環(huán)境安全；不會造成基因污染；有效成分純度較高【解析】

（一）基因工程的基本工具1、“分子手術刀”——限制性核酸內切酶（限制酶）（1）來源：主要是從原核生物中分離純化出來的。（2）功能：能夠識別雙鏈DNA分子的某種特定的核苷酸序列，并且使每一條鏈中特定部位的兩個核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷開，因此具有專一性。（3）結果：經限制酶切割產生的DNA片段末端通常有兩種形式：黏性末端和平末端。2、“分子縫合針”——DNA連接酶（1）兩種DNA連接酶（E?coliDNA連接酶和T4DNA連接酶）的比較：①相同點：都縫合磷酸二酯鍵。②區(qū)別：E?coliDNA連接酶來源于大腸桿菌，只能將雙鏈DNA片段互補的黏性末端之間的磷酸二酯鍵連接起來；而T4DNA連接酶來源于T4噬菌體，可用于連接粘性末端和平末端，但連接效率較低。（2）與DNA聚合酶作用的異同：DNA聚合酶只能將單個核苷酸加到已有的核苷酸片段的末端，形成磷酸二酯鍵．DNA連接酶是連接兩個DNA片段的末端，形成磷酸二酯鍵。3、“分子運輸車”——載體（1）載體具備的條件：①能在受體細胞中復制并穩(wěn)定保存。②具有一至多個限制酶切點，供外源DNA片段插入。③具有標記基因，供重組DNA的鑒定和選擇。（2）最常用的載體是質粒，它是一種裸露的、結構簡單的、獨立于細菌擬核DNA之外，并具有自我復制能力的雙鏈環(huán)狀DNA分子。（3）其它載體：噬菌體的衍生物、動植物病毒。（二）基因工程的基本操作程序第一步：目的基因的獲取1、目的基因是指：編碼蛋白質的結構基因。2、原核基因采取直接分離獲得，真核基因是人工合成．人工合成目的基因的常用方法有反轉錄法和化學合成法。3、PCR技術擴增目的基因（1）原理：DNA雙鏈復制（2）過程：第一步：加熱至90～95℃DNA解鏈；第二步：冷卻到55～60℃，引物結合到互補DNA鏈；第三步：加熱至70～75℃，熱穩(wěn)定DNA聚合酶從引物起始互補鏈的合成。第二步：基因表達載體的構建1、目的：使目的基因在受體細胞中穩(wěn)定存在，并且可以遺傳至下一代，使目的基因能夠表達和發(fā)揮作用。2、組成：目的基因+啟動子+終止子+標記基因（1）啟動子：是一段有特殊結構的DNA片段，位于基因的首端，是RNA聚合酶識別和結合的部位，能驅動基因轉錄出mRNA，最終獲得所需的蛋白質。（2）終止子：也是一段有特殊結構的DNA片段，位于基因的尾端。（3）標記基因的作用：是為了鑒定受體細胞中是否含有目的基因，從而將含有目的基因的細胞篩選出來．常用的標記基因是抗生素抗性基因。第三步：將目的基因導入受體細胞1、轉化的概念：是目的基因進入受體細胞內，并且在受體細胞內維持穩(wěn)定和表達的過程。2、常用的轉化方法：將目的基因導入植物細胞：采用最多的方法是農桿菌轉化法，其次還有基因槍法和花粉管通道法等。將目的基因導入動物細胞：最常用的方法是顯微注射技術．此方法的受體細胞多是受精卵。將目的基因導入微生物細胞：原核生物作為受體細胞的原因是繁殖快、多為單細胞、遺傳物質相對較少，最常用的原核細胞是大腸桿菌，其轉化方法是：先用Ca2+處理細胞，使其成為感受態(tài)細胞，再將重組表達載體DNA分子溶于緩沖液中與感受態(tài)細胞混合，在一定的溫度下促進感受態(tài)細胞吸收DNA分子，完成轉化過程。3、重組細胞導入受體細胞后，篩選含有基因表達載體受體細胞的依據是標記基因是否表達。第四步：目的基因的檢測和表達1、首先要檢測轉基因生物的染色體DNA上是否插入了目的基因，方法是采用DNA分子雜交技術。2、其次還要檢測目的基因是否轉錄出了mRNA，方法是采用用標記的目的基因作探針與mRNA雜交。3、最后檢測目的基因是否翻譯成蛋白質，方法是從轉基因生物中提取蛋白質，用相應的抗體進行抗原——抗體雜交。4、有時還需進行個體生物學水平的鑒定，如轉基因抗蟲植物是否出現抗蟲性狀?！驹斀狻浚?）在基因工程中，利用相同的限制酶和DNA連接酶處理蛋白A基因和pET質粒，得到重組質粒；大腸桿菌作為受體細胞，需要用氯化鈣處理，以便重組質粒的導入。（2）①根據題意和圖示分析，經過4次PCR技術后獲得了新的基因，這是一種定點的基因突變技術。②與研究者推測不同生物對密碼子具有不同的偏好，因而設計了與蛋白A基因結合的兩對引