藥用菌茯苓菌種生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程

1DBXX/XXXXX—XXXX藥用菌茯苓菌種生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程本標準規(guī)定了藥用菌茯苓菌種生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程中的術(shù)語和定義，菌種生產(chǎn)，母種生產(chǎn)，原種生產(chǎn)，栽培種生產(chǎn)，菌種質(zhì)量標準與檢驗，標簽、標志、包裝、運輸和貯存等要求。本標準適用于江西省內(nèi)茯苓菌種的規(guī)范化生產(chǎn)。2規(guī)范性引用文件下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB1354-2008小麥GB1886.239-2016食品安全國家標準食品添加劑瓊脂GB3095-2012環(huán)境空氣質(zhì)量標準GB5749-2006生活飲用水衛(wèi)生標準GB/T191-2008包裝儲運圖示標志GB/T5483-2008天然石膏GB/T10463-2008玉米粉GB/T12728-2006食用菌術(shù)語GB/T20413-2017過磷酸鈣GB/T20880-2018食用葡萄糖NY5099-2002無公害食品食用菌栽培基質(zhì)安全技術(shù)要求NY/T119-1989麥麩NY/T528-2010食用菌菌種生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程NY/T1846-2010食用菌菌種檢驗規(guī)程NY/T2798.5-2015無公害農(nóng)產(chǎn)品生產(chǎn)質(zhì)量安全控制技術(shù)規(guī)范第5部分：食用菌NY/T5010-2016無公害農(nóng)產(chǎn)品種植業(yè)產(chǎn)地環(huán)境條件《食用菌菌種管理辦法》（2015年修正版）3術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。3.1茯苓Poria多孔菌科真菌茯苓Poriacocos(Schw.)Wolf的菌核，供藥、食兩用。3.2菌種culture生長在適宜基質(zhì)上具結(jié)實性的菌絲純培養(yǎng)物，包括母種、原種和栽培種。3.3母種stockculture經(jīng)各種方法選育得到的具有結(jié)實性的菌絲體純培養(yǎng)物及其繼代培養(yǎng)物，也稱一級種、試管種。2DBXX/XXXXX—XXXX3.4種源母種provenanceculture從具備相應(yīng)技術(shù)資質(zhì)的供種單位購買的試管母種。3.5生產(chǎn)母種cultivateculture從試管母種轉(zhuǎn)接得到的菌種。3.6原種motherspawn由母種移植、擴大培養(yǎng)而成的菌絲體純培養(yǎng)物，也稱二級種。3.7栽培種spawn由原種移植、擴大培養(yǎng)而成的菌絲體純培養(yǎng)物。栽培種只能用于栽培，不可再次擴大繁殖菌種。也稱三級種。3.8種苓mothersclerotium經(jīng)精心培育、選擇，用于分離茯苓母種的優(yōu)質(zhì)鮮茯苓菌核。3.9菌齡cellages菌種菌絲體的生長時間，即菌種自接種至使用之間的間隔時間。4菌種生產(chǎn)4.1生產(chǎn)條件要求從事茯苓菌種生產(chǎn)和經(jīng)營的人員、單位、生產(chǎn)場地環(huán)境、廠房設(shè)置布局、設(shè)施設(shè)備和技術(shù)條件應(yīng)符合《食用菌菌種管理辦法》和NY/T528-2010、NY/T2798.5-2015無公害農(nóng)產(chǎn)品生產(chǎn)質(zhì)量安全控制技術(shù)規(guī)范第5部分：食用菌、NY/T5010-2016無公害農(nóng)產(chǎn)品種植業(yè)產(chǎn)地環(huán)境條件、GB3095-2012環(huán)境空氣質(zhì)量標準的規(guī)定。4.2種源要求從選育單位或具備相應(yīng)技術(shù)資質(zhì)的供種單位引種；或從明確種源的產(chǎn)區(qū)中選用優(yōu)質(zhì)鮮茯苓菌核分4.3原料要求4.3.1母種馬鈴薯新鮮、無發(fā)芽、無病斑、無霉爛。選用的葡萄糖應(yīng)符合GB/T20880-2018的要求，瓊脂應(yīng)符合GB1886.239-2016的要求。4.3.2原種選用的麥粒應(yīng)符合GB1354-2008的要求，過磷酸鈣應(yīng)符合GB/T20413-2017的要求，石膏粉應(yīng)符合GB/T5483-2008的要求。松木屑應(yīng)新鮮且粗細均勻，不含有害物質(zhì)，符合NY5099-2002無公害食品食用菌栽培基質(zhì)安全技術(shù)要求，使用前過篩除去雜質(zhì)。4.3.3栽培種3DBXX/XXXXX—XXXX選用的玉米粉應(yīng)符合GB/T10463-2008的要求，麥麩應(yīng)符合NY/T119-1989的要求。松木屑應(yīng)新鮮且粗細均勻，不含有害物質(zhì)，符合NY5099-2002無公害食品食用菌栽培基質(zhì)安全技術(shù)要求，使用前過篩除去雜質(zhì)。4.3.4容器容器應(yīng)符合NY/T528-2010中的要求。4.3.5水水應(yīng)符合GB5749-2006的要求。5母種生產(chǎn)5.1種苓的選擇5.1.1在明確種源的產(chǎn)區(qū)，經(jīng)提前精心培育而成的優(yōu)質(zhì)鮮茯苓菌核。5.1.2處于旺長期，個體較大，重量﹥2.5kg；近球形，外皮較薄，呈黃棕色或淡棕色，有明顯的白色或淡棕色裂紋。5.1.3切開或掰開后，內(nèi)部苓肉色白，氣味濃郁，有乳白色汁液或淡青色漿汁滲出。5.1.4外皮完整，無蟲咬損傷，無腐爛異味。5.1.5種苓選定后要及時進行分離使用，若需短暫儲存或運往異地使用，必須埋于濕沙中儲存，以防干燥。5.2培養(yǎng)基5.2.1配方詳見附錄A。5.2.2制作將馬鈴薯去皮洗凈，切片放入容器，加水800mL，煮沸30min，取濾液加入20g瓊脂，煮至全部溶化，再加入葡萄糖20g,攪拌溶化，補足水分至1000mL，分裝于18mm×200mm規(guī)格試管中，塞上棉塞。5.2.3滅菌將配制的母種培養(yǎng)基置于高壓滅菌鍋內(nèi)，用0.1030MPa壓力（溫度121℃)滅菌30min。待冷卻至55~60℃時，放斜，制成斜面培養(yǎng)基，48h后無微生物檢出的視為合格培養(yǎng)基。5.3組織分離5.3.1分離前準備嚴格按照無菌操作方法對無菌室或無菌箱內(nèi)的環(huán)境、工具以及移入的培養(yǎng)基試管等進行表面消毒，操作人員按照無菌操作標準著裝、手部消毒。將選好的種苓用清水沖至無泥沙，稍晾干表面后，迅速移入無菌室或無菌箱操作臺面上，70%酒精沖洗，再用無菌水沖洗6～8遍。待種苓表面稍干，備用。5.3.2接種4DBXX/XXXXX—XXXX用接種刀從種苓中央切淺口，順淺口掰開。用滅菌的接種刀或接種鏟在近種苓皮內(nèi)側(cè)2cm～3cm處，挑取0.5cm見方，0.1cm厚的白色苓肉，接種于試管斜面培養(yǎng)基中部。5.3.3將分離后的試管貼上標簽，內(nèi)容應(yīng)符合《食用菌菌種管理辦法》的相關(guān)規(guī)定。5.4種源母種接種按照無菌操作流程，1支種源母種可擴繁20～30支生產(chǎn)母種。接種后的試管貼上標簽，內(nèi)容應(yīng)符合《食用菌菌種管理辦法》的相關(guān)規(guī)定。5.5培養(yǎng)5.5.1將試管置于23℃~25℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)5～7d。培養(yǎng)過程中應(yīng)經(jīng)常觀察菌絲生長情況，凡是菌絲長速慢、稀疏、不均勻、發(fā)黑、污染者，應(yīng)及時剔出。5.5.2苓肉分離的母種可轉(zhuǎn)管純化1次。6原種生產(chǎn)6.1培養(yǎng)基6.1.1配方詳見附錄A。6.1.2制作將麥粒精選，除去癟粒和雜質(zhì)，洗凈，置于溫水中浸泡5h，取出，煮至麥粒無白芯后攤開放置于干凈臺面上，晾至表面半干，加入過磷酸鈣和石膏粉，混勻，再加入一半松木屑混勻，裝于500mL原種瓶(袋)中，裝至瓶（袋）肩處。將另一半松木屑稍潤濕（含水率20%）后覆蓋于混合培養(yǎng)基表面，厚約0.5cm。擦凈瓶（袋）內(nèi)、外壁沾附物，蓋塞或扎口。6.1.3培養(yǎng)基滅菌將配制的原種培養(yǎng)基置于高壓滅菌鍋內(nèi)，用0.1030MPa壓力（溫度121℃)滅菌120min，或用流通蒸汽（溫度100℃)滅菌8～10h，冷卻后放置干凈處備用。6.2接種嚴格按照無菌操作方法，挑取長寬各0.5cm左右的母種塊（連同培養(yǎng)基），移入原種培養(yǎng)基上端中央，與培養(yǎng)基料接觸，隨即蓋塞或扎口。6.2.1接種后的原種瓶（袋）貼上標簽，內(nèi)容應(yīng)符合《食用菌菌種管理辦法》的相關(guān)規(guī)定。6.3培養(yǎng)6.3.1接種后的原種瓶（袋）放置于25℃~28℃培養(yǎng)室中培養(yǎng)。菌絲生長至瓶（袋）內(nèi)三分之二處時，移入10℃~23℃的培養(yǎng)室內(nèi)繼續(xù)培養(yǎng)。6.3.2培養(yǎng)過程中應(yīng)經(jīng)常觀察菌絲生長情況，凡出現(xiàn)菌絲長速慢、稀疏、不均勻、發(fā)黑、污染等異?，F(xiàn)象的瓶（袋），應(yīng)及時剔出，滅菌處理。6.3.3每一批次的原種生產(chǎn)完成后，均應(yīng)進行清場，做好環(huán)境清潔和清場記錄。5DBXX/XXXXX—XXXX7栽培種生產(chǎn)7.1培養(yǎng)基7.1.1配方詳見附錄A。7.1.2制作將蔗糖溶于水中，放入松木屑、玉米粉、麥麩、過磷酸鈣、石膏粉混合拌勻，以緊握培養(yǎng)基料指間稍見滲水為度（含水率40%~45%）。放置30min，待水分均勻滲入料后，裝入12╳24規(guī)格聚丙烯袋中，每袋裝料400～450g，稍微壓實（上緊下松），擦凈袋口內(nèi)外壁沾附物，封口。7.1.3滅菌將配制的栽培種培養(yǎng)基置于高壓滅菌鍋內(nèi)，用0.1030MPa壓力（溫度121℃)滅菌120min，或用流通蒸汽（溫度100℃)滅菌12～18h，冷卻后放置干凈處備用。7.2接種7.2.1嚴格按照無菌操作方法，將原種瓶（袋）打開，除去表面的菌膜及培養(yǎng)物，用接種鏟或接種匙取4~6g略加搗碎的菌種迅速移入栽培種培養(yǎng)基中央，封口。7.2.2接種后的菌袋貼上標簽，內(nèi)容應(yīng)符合《食用菌菌種管理辦法》的相關(guān)規(guī)定。7.3培養(yǎng)7.3.1將接種后的菌種袋放置于25℃~28℃培養(yǎng)室中培養(yǎng)。菌絲向下生長至袋內(nèi)培養(yǎng)料2～3cm處時，可移入10℃~23℃的培養(yǎng)室內(nèi)繼續(xù)培養(yǎng)25～30d，菌絲可基本長滿。7.3.2培養(yǎng)過程中應(yīng)經(jīng)常檢查培養(yǎng)室溫度、二氧化碳濃度以及菌絲生長情況，凡是出現(xiàn)菌絲長速慢、稀疏、不均勻、發(fā)黑、污染等異常現(xiàn)象的菌袋，應(yīng)及時剔出，滅菌處理。7.3.3菌絲長滿料后，逐一檢查菌種質(zhì)量，合格品裝入專用包裝袋內(nèi)，根據(jù)批號歸類儲存。7.3.4每一批次的栽培種生產(chǎn)完成后，均應(yīng)進行清場，做好環(huán)境清潔和清場記錄。8菌種質(zhì)量標準與檢驗8.1母種質(zhì)量標準與檢驗8.1.1質(zhì)量標準8.1.1.1菌齡﹤21d。8.1.1.2菌絲色白、均勻、致密、粗壯、茯苓特異香氣濃郁。8.1.1.3菌絲體表面可見晶瑩的露滴狀分泌物。8.1.1.4菌種試管完整無損，棉塞嚴密，無雜菌污染。8.1.2檢驗6DBXX/XXXXX—XXXX8.1.2.1按照質(zhì)量標準要求，在自然光下采取目測方法，培養(yǎng)過程中，每隔2d觀察各試管菌種生長速度及菌絲形態(tài)。8.1.2.2凡表現(xiàn)異常，特別是長速慢、菌絲稀疏、不均勻、發(fā)黑、污染者應(yīng)及時剔出。8.1.2.3菌絲長滿斜面后，按照上述質(zhì)量標準逐支檢查，合格者放置4℃冰箱內(nèi)保存。8.2原種質(zhì)量標準與檢驗8.2.1質(zhì)量標準8.2.1.1菌齡25～40d。8.2.1.2菌絲生長旺盛，潔白、均勻、致密，爬壁現(xiàn)象明顯，有根狀菌索為佳。8.2.1.3菌絲體尖端可見乳白色露滴狀分泌物，茯苓特異香氣濃郁。8.2.1.4菌種瓶（袋）完整無損，無雜菌污染。8.2.2檢驗8.2.2.1按照質(zhì)量標準要求，在自然光下采取目測方法，培養(yǎng)過程中經(jīng)常觀察各菌種瓶（袋）內(nèi)菌絲生長情況。8.2.2.2凡是發(fā)現(xiàn)菌絲生長速度明顯緩慢，菌絲稀疏、不均、地圖斑、發(fā)黑、污染者，應(yīng)及時剔出。8.2.2.3菌絲在瓶（袋）內(nèi)長滿后，按照上述質(zhì)量標準逐瓶（袋）檢查，合格者方可轉(zhuǎn)入下一道工序，作為茯苓栽培種生產(chǎn)的種源。8.3栽培種質(zhì)量標準與檢驗8.3.1質(zhì)量標準8.3.1.1菌齡30～45d。8.3.1.2菌絲潔白致密，生長均勻，布滿菌袋內(nèi)。8.3.1.3菌絲體尖端可見晶瑩露滴狀分泌物，茯苓特異香氣濃郁。菌袋完整無破損，菌絲充滿菌種袋（滿料），手握菌種袋，感覺堅實，無松散，無軟化。菌絲無發(fā)黃、發(fā)黑、地圖斑、無軟化、無子實體出現(xiàn)、無雜菌污染。8.3.2檢驗8.3.2.1按照質(zhì)量標準要求，在自然光下采取目測法，培養(yǎng)過程中經(jīng)常觀察各菌種袋內(nèi)菌絲生長情況。8.3.2.2發(fā)現(xiàn)菌絲體發(fā)黃、發(fā)黑、不均勻、地圖斑、雜菌污染者應(yīng)及時剔出。8.3.2.3逐一檢查各菌種袋，應(yīng)符合上述質(zhì)量標準，且菌絲長滿菌種袋（滿料），菌絲無倒伏現(xiàn)象，手握菌種袋，感覺堅實，無松散，無軟化。8.4各級菌種應(yīng)留樣備查，留樣數(shù)量為每批次3～5支（瓶、袋0℃~4℃貯存，貯存至正常生產(chǎn)條件下該批菌種生產(chǎn)的栽培袋出菇采收完畢。9標簽、標志、包裝、運輸和貯存9.1標簽、標志7DBXX/XXXXX—XXXX9.1.1產(chǎn)品標簽每支（瓶、袋）菌種應(yīng)貼有標簽，應(yīng)清晰注明以下信息：a)產(chǎn)品名稱（菌種名稱、菌株代號、類別）；b)生產(chǎn)單位；c)接種日期；d)執(zhí)行標準。9.1.2包裝標簽菌種包裝應(yīng)貼有標簽，應(yīng)清晰注明以下信息：a)產(chǎn)品名稱（品種名稱、菌株代號、類別）；b)保質(zhì)期、貯存條件；c)數(shù)量；d)執(zhí)行標準；e)菌種生產(chǎn)經(jīng)營許可證編號。9.1.3包裝儲運圖示按GB/T191-2008規(guī)定，應(yīng)注明以下圖示標志：a)小心輕放標志；b)防水、防潮、防凍標志；c)