安捷倫1260高效液相操作規(guī)程

安捷倫液相1260高效液相色譜操作規(guī)程前期工作查找資料〔最好是外文文獻〕了解別人做該樣品時常用的流動相和固定相。如果還不清楚樣品是什么物質(zhì)，最起碼也應(yīng)該對其極性進行了解，為選擇適宜的流動相和固定相打好根底。流動相選擇考前須知：防止使用高粘度的溶劑作為流動相；所選用的流動相一定要與樣品相溶；各流動相之間可以很好的相溶；固定相選擇考前須知：正相色譜正相色譜用的固定相通常為硅膠〔Silica〕以及其他具有極性官能團胺基團，如〔NH2，APS〕和氰基團〔CN，CPS〕的鍵合相填料。由于硅膠外表的硅羥基〔SiOH〕或其他極性基團極性較強，因此，別離的次序是依據(jù)樣品中各組分的極性大小，即極性較弱的組份最先被沖洗出色譜柱。正相色譜使用的流動相極性相比照固定相低，如正已烷〔Hexane〕，氯仿〔Chloroform〕，二氯甲烷〔MethyleneChloride〕等。反向色譜反向色譜用的填料常是以硅膠為基質(zhì)，外表鍵合有極性相對較弱官能團的鍵合相。反向色譜所使用的流動相極性較強，通常為水、緩沖液與甲醇、乙腈等的混合物。樣品流出色譜柱的順序是極性較強的組分最先被沖洗出，而極性弱的組分會在色譜柱上有更強的保存。常用的反向填料有：C18〔ODS〕、C8〔MOS〕、C4〔Butyl〕、C6H5〔Phenyl〕等。準備工作用于液相色譜分析的樣品溶液使用前要經(jīng)過0.15μm過濾器過濾，必須到達均勻而無顆粒的狀態(tài)；流動相一定要選用色譜級別的〔最好是默克、飛世爾、時聯(lián)等牌子的〕，并且在使用之前一定要使用0.4μm過濾器過濾，再用超聲波清洗儀脫氣處理20-30min；在連接柱子和色譜儀之前，閥件或管路一定要清洗干凈，〔一般用異丙醇將管路清洗〕儀器操作將所選擇的流動相參加相應(yīng)的試劑瓶中：棕色瓶對應(yīng)A泵，該瓶中只能加雙蒸水或娃哈哈純潔水；B、C、D泵根據(jù)需要添加。注：假設(shè)流動相中有水、乙腈最好現(xiàn)用現(xiàn)處理，不宜放置太長時間。先翻開計算機登陸windows操作系統(tǒng)，再將儀器的泵、色譜柱、檢測器翻開，待計算機界面顯示連接好后，雙擊桌面“聯(lián)機〞圖標，進入化學(xué)工作站，從“視圖〞菜單中選擇“方法和運行控制〞畫面。模塊右上角狀態(tài)燈顏色說明：無色，未開電源或者模塊準備就緒黃色，模塊未準備就緒綠色，正在進樣分析紅色，模塊出錯所有模塊紅色，儀器有漏液工作站圖形顏色說明：綠色，模塊準備就緒黃色，模塊未準備就緒藍色，正在進樣分析紅色，出錯或者不能聯(lián)機灰色,此模塊沒啟用等度洗脫：直接選擇比；

梯度洗脫：在等度洗脫：直接選擇比；

梯度洗脫：在中設(shè)定好初始比例，再點擊，設(shè)置一定時間內(nèi)不同的比例。

方法如下:

前10min中，A：B=10:90

第10-15min中，用B:100%

第15-30min，A逐漸增加到20%，B逐漸減少80%。

設(shè)置：10min，A：B=10:90；

10.1min，B:100%；

15min，A:B=0：100%；

30min，A:B=20：80右擊四元泵界面：選擇“瓶填充〞點擊“溶劑瓶填充量〞設(shè)置溶劑瓶中流動相實際體積，也可設(shè)定低體積關(guān)泵。旋開排氣閥〔逆時針〕，點擊“方法〞選項進入泵編輯的畫面。將泵的流量設(shè)到5ml/min,溶劑A設(shè)到100%，翻開泵，觀察排出管線中的氣體，直到管線內(nèi)由溶劑瓶到泵入口無其起泡為止，查看柱前壓力〔假設(shè)大于10bar，那么應(yīng)更換排氣閥內(nèi)的過濾白頭〕。依次切換到B、C、D溶劑分別排氣。將泵的流速調(diào)到0.5ml/min,設(shè)定四元泵最初的溶劑比例，如A=80%，B=20%；關(guān)閉排氣閥。再將流速設(shè)定到所需流量，待壓力視數(shù)穩(wěn)定，翻開檢測器燈，觀察基線情況。注：假設(shè)反復(fù)幾次檢測器顯示錯誤，右擊“視圖〞中的“工作日志〞“當前工作日志〞查看是什么錯誤。以上步驟用文字也可描述為翻開計算機，登陸windows操作系統(tǒng)。翻開主機各模塊電源〔從上至下〕，待各模塊完成自檢后，再雙擊桌面“儀器1聯(lián)機〞圖標,進入化學(xué)工作站，從“視圖〞菜單中選擇“方法和運行控制〞畫面。把各流動相放入溶劑瓶中。旋開排氣閥〔逆時針〕，右單擊“四元泵〞圖標出現(xiàn)快捷鍵，點擊“方法〞選項進入泵編輯畫面。將泵流量設(shè)到5ml/min，溶劑A設(shè)到100%，翻開泵，排出管線中的氣體2—3分鐘，直到管線內(nèi)由溶劑瓶到泵入口無氣泡為止,查看柱前壓力〔假設(shè)大于10bar，那么應(yīng)更換排氣閥內(nèi)過濾白頭〕。依此切換到B、C、D溶劑分別排氣。將泵的流量設(shè)到0.5ml/min，多元泵那么再設(shè)定溶劑配比，如A=80%，B=20%；關(guān)閉排氣閥〔順時針〕。再將泵的流量設(shè)到0.8ml/min，2分鐘后將泵的流量設(shè)到1ml/min，沖洗色譜柱20—30分鐘。把緩沖液換成流動相，待柱前壓力根本穩(wěn)定后,翻開檢測器燈，觀察基線情況。編輯樣品信息：由“運行控制〞進入“樣品信息〞，設(shè)定操作者姓名，樣品數(shù)據(jù)文件名等。四元泵參數(shù)設(shè)置：色譜柱設(shè)置〔TCC檢測器參數(shù)設(shè)置〕右擊TCC模塊中的空白區(qū)域，在“溫度〞左側(cè)下面的方框內(nèi)輸入所需的溫度，并選中它，右側(cè)選中“與左側(cè)相同〞——使柱溫箱的溫度左右一致。VWD檢測器參數(shù)設(shè)定右鍵點擊VWD模塊視圖空白處，選擇“方法〞進入VWD的參數(shù)設(shè)置界面波長---設(shè)置VWD檢測波長峰寬---設(shè)置為色譜圖中的預(yù)期的最窄峰。峰檢測器將忽略比峰寬設(shè)置窄很多或者寬很多的所有峰停止時間---設(shè)置VWD停止分析時間。一般設(shè)置為“與泵一致〞即可雜項---當VWD與其他檢測器一起工作或者設(shè)定沖洗色譜柱的梯度方法時，關(guān)閉檢測器的燈，分析將停止。如果希望關(guān)閉檢測器的燈時也能進行分析，將“采集所需的等已翻開〞一欄不選定即可。時間表---此處可以變化的參數(shù)包括自動平衡、改變波長、執(zhí)行掃描。進樣在設(shè)置“運行控制->樣品信息〞后，將手動進樣閥扳至“l(fā)oad〞狀態(tài)進樣(將樣品裝入到定量環(huán)內(nèi))。進樣后，將手動進樣器扳至“inject〞狀態(tài)，工作站自動開始記錄采集數(shù)據(jù)。分析完成后，將手動進樣閥扳至“l(fā)oad〞狀態(tài)，用定量環(huán)的5倍體積左右的甲醇清洗定量環(huán)，再在“inject〞狀態(tài)下清洗排空管路。清洗進樣口，防止殘留樣品污染下次進樣。注：手不要拿注射器的針頭和有樣品的部位，不要有氣泡，吸樣時要慢、快速排出再慢吸，反復(fù)幾次，10μL注射器金屬針頭局部體積0.6μL，有氣泡也看不到，多吸1-2μL把注射器針尖朝上，氣泡上走到頂端，再推動針桿排除氣泡，進樣的速度要快，每次進樣要保持相同的速度。在線信號檢測“視圖〞中翻開在線信號，可以隨時了解樣品出峰情況。關(guān)機關(guān)閉檢測器的燈：G1314B/C/E/F(可變波長紫外檢測器)，關(guān)閉檢測器的燈后沖洗系統(tǒng)，可以延長檢測器燈的壽命。沖洗系統(tǒng)：沒有鹽緩沖溶液的流動相，(反相系統(tǒng))用85%~90%有機相+15%~10%水相沖洗系統(tǒng)和反相色譜柱或者適宜的流動相沖洗系統(tǒng)和反相色譜柱。有鹽緩沖溶液的流動相，(反相系統(tǒng))用85%~90%水相+15%~10%有機相沖洗系統(tǒng)和反相色譜柱(反相系統(tǒng))，除去反相色譜柱與系統(tǒng)中的鹽溶液。然后用85%~90%有機相+15%~10%水相沖洗系統(tǒng)和反相色譜柱。封存色譜柱：(反相系統(tǒng))用90%~95%有機相+10%~5%水相封存反相色譜柱，兩端封死。〔如長時間存放可將柱子完全侵泡有機相內(nèi)，以防用純有機相封存反相色譜柱，如果長期保存有機相會揮發(fā)〕。關(guān)閉電腦：將泵流速逐步降至0ml/min，單擊“關(guān)閉〞按鈕關(guān)閉所有模塊，退出化學(xué)工作站，關(guān)閉電腦?？记绊氈褂梅聪蛑鶗r，要注意正相溶液的比例最好不要超過5%，否那么會對柱子產(chǎn)生影響。氘燈是易耗品，應(yīng)最后開燈，不分析樣品時即關(guān)燈，洗柱子時應(yīng)關(guān)燈。操作中常見問題的解決方