DB22-T 3455-2023 分蘗洋蔥中洋蔥黃矮病毒檢測 實時熒光PCR法_第1頁
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文檔簡介

65.020

05

DB22

22/T

3455—2023分蘗洋蔥中洋蔥黃矮病毒檢測實時熒光PCR

Shallot 吉林省市場監(jiān)督管理廳

DB22/T

2023前言本文件按照

GB/T

XXXX分蘗洋蔥中洋蔥黃矮病毒檢測 實時熒光

法

本文件描述了分蘗洋蔥中洋蔥黃矮病毒實時熒光

PCR

GB/T

6682-2008

RT-PCR

提取分蘗洋蔥總

Taq

PCR擴增反應（采用

SYBR

Green

GreenⅠ

是一種具有綠色激發(fā)波長的染料，能夠與雙鏈

DNA

SYBR

Green

DNA

結合后，

5.1

Trizol

實時熒光

PCR

試劑盒。

Pyrocarbonate）。

XXXX

DEPC

5.1.10

DEPC

處理的

DEPC

5.2

引物用水稀釋成

10

保存?zhèn)溆谩?/p>

實時熒光

PCR

儀。

微量移液器：0.1

L～2.5

L，20

L。

冰箱：4

，-20

離心管：DEPC

mL。

L。

7.2

采集新鮮管狀葉為宜，也可采集地下鱗莖。裝入密封袋，置于冰盒中，4

保存不超過12

核苷酸引物dNTP

混合溶液(10

mmol/L)

2.5rnase

ddH5.55×PrimeScriptⅡ

rnase

U/μL)0.5primeScriptⅡ

U/μL)rnase

ddH4.5

XXXX

稱取

0.1

樣品液氮充分研磨（檢測鱗莖時，選擇中部層取樣。），轉入

0.1%

DEPC

（焦碳酸

15

min，4

15

0.5

mL

DEPC

處理的

75%乙醇，渦旋震蕩

12000

r/min

DEPC

行下步操作或-80

用核酸蛋白分析儀測定

RNA

濃度。

利用反轉錄試劑盒合成

cDNA

1、表

反應體系-1，65

℃溫浴

42

h。

見表3。2×Magic

SYBR

Mixtrue101×

0.60.3

μM

0.60.3

μM10

ng200

ng

XXXX

min，變性95

30

根據(jù)

Ct

值判定檢測結果，在陽性對照、陰性對照和空白對照檢測結果與預期一致的前提下：a)

b) 檢測樣品的

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