cf7l2基因多態(tài)性與2型糖尿病遺傳易感性的關(guān)系

cf7l2基因多態(tài)性與2型糖尿病遺傳易感性的關(guān)系

t2dm是一種異質(zhì)性遺傳疾病。在國(guó)外的許多研究中，tf7l2基因與t2d的發(fā)生密切相關(guān)，但尚不清楚中國(guó)漢族是否能夠成為主要的2型糖尿病候選人。本研究探討該基因SNPrs7903146、rs12255372在我國(guó)漢族人群中的分布情況及與T2DM遺傳易感性的關(guān)系。對(duì)象和方法一、ho診斷標(biāo)準(zhǔn)1535例無(wú)血緣關(guān)系江蘇地區(qū)漢族人中,根據(jù)1999年WHO診斷標(biāo)準(zhǔn)確診為T(mén)2DM的患者682例,平均年齡63±13歲;糖耐量減低(IGT)者302例,平均年齡53±11歲;正常糖耐量(NGT)者551例,平均年齡46±11歲。二、pcr和fpg檢測(cè)參數(shù)1.外周血白細(xì)胞DNA抽提:取EDTA抗凝血5ml,常規(guī)酚-氯仿法抽提基因組DNA。2.TCF7L2基因單核苷酸多態(tài)性分析:采用高溫連接酶反應(yīng)(LDR)技術(shù),引物及探針序列見(jiàn)表1。多重PCR反應(yīng)條件:20μl反應(yīng)體系中含10×Buffer2.0μl,Mg2+1.2mmol/L,dNTPs200μmol/L,熱啟動(dòng)Taq酶1U,上下游引物各0.5μmol/L,模板DNA約100ng。擴(kuò)增條件:95℃預(yù)變性15min;94℃變性30s,59℃退火1min,72℃延伸1min,共35個(gè)循環(huán);72℃7min。LDR反應(yīng)條件:5μl反應(yīng)體系中含探針各0.1rnmol/L10×Buffer0.5μl,熱啟動(dòng)Taq酶0.05U,多重PCR產(chǎn)物1μl。循環(huán)條件:94℃2min;94℃40s,60℃2min,共35個(gè)循環(huán)。采用ABIPRISM377DNASequencer進(jìn)行測(cè)序反應(yīng),Genemapper軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。3.臨床檢測(cè)及計(jì)算指標(biāo):所有受試者測(cè)量身高、體重,計(jì)算BMI;葡萄糖氧化酶法測(cè)定FPG;發(fā)光免疫法測(cè)定FIns。三、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理方法計(jì)算TCF7L2基因型頻率及等位基因頻率,并確認(rèn)其符合Hardy-Weinberg平衡。應(yīng)用SPSS10.0統(tǒng)計(jì)軟件,基因型及等位基因頻率比較采用卡方檢驗(yàn),Logitic回歸分析風(fēng)險(xiǎn)等位基因參與疾病發(fā)生的相對(duì)風(fēng)險(xiǎn)(OR),臨床指標(biāo)比較用one-wayANOVA方差分析或卡方檢驗(yàn)。人群歸因危險(xiǎn)度(PAR)=[p(OR+1)]/[1+p(OR-1)],其中p為風(fēng)險(xiǎn)等位基因頻率。結(jié)果一、各組的臨床特點(diǎn)各組一般情況及FPG、FIns水平見(jiàn)表2。二、tp/cc結(jié)構(gòu)SNPrs7903146為C/T多態(tài),本研究所有樣本均未發(fā)現(xiàn)TT型突變純合子,故LDR反應(yīng)產(chǎn)物長(zhǎng)度(LDRlength)為82/82bp(CC純合子)或82/85bp(CT雜合子)。SNPrs12255372為G/T多態(tài),本研究所有樣本也沒(méi)有發(fā)現(xiàn)TT型突變純合子,故LDR反應(yīng)產(chǎn)物長(zhǎng)度為88/88bp(GG純合子)或88/91bp(GT雜合子)(圖1)。本研究中應(yīng)用LDR法rs7903146位點(diǎn)基因分型成功率為98.1%(1535/1565),rs12255372位點(diǎn)基因分型成功率為97.8%(1530/1565)。三、糖代謝異常組3.4基因型及等位基因頻率分布1.在1535例漢族人中,共檢測(cè)到CT基因型95例,C等位基因頻率為96.9%,T等位基因頻率為3.1%。2.T2DM組與IGT組CT基因型頻率分別為7.2%和7.0%,均高于NGT組的4.5%,組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(與NGT組比較,P值分別為0.052和0.135)表3)。3.T2DM組及IGT組T等位基因頻率分別為3.6%和3.5%,均高于NGT組(2.3%),但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(與NGT組比較,P值分別為0.055和0.141)(表3)。4.糖代謝異常組rs7903146基因型及等位基因頻率分布情況:將T2DM組與IGT組合并為糖代謝異常組,其CT基因型頻率顯著高于NGT組(P=0.044),T等位基因頻率亦顯著高于NGT組(P=0.048),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(表4);T等位基因參與糖代謝異常發(fā)生的相對(duì)風(fēng)險(xiǎn)(OR)為1.589(95%CI=1.000～2.524),人群歸因危險(xiǎn)度(PAR)為2.1%。四、t等位基因頻率本研究中共檢測(cè)到17個(gè)GT突變雜合子,T等位基因頻率僅為0.55%,遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于歐美白種人及日本黃種人,且不構(gòu)成SNP,未進(jìn)行進(jìn)一步分析。中國(guó)少數(shù)民族糖代謝異常人群的tcf7l2基因TCF7L2基因位于人類(lèi)染色體10q25,其編碼的蛋白質(zhì)為β連環(huán)素的核受體,是介導(dǎo)WNT信號(hào)通路的關(guān)鍵蛋白,作為細(xì)胞內(nèi)重要的轉(zhuǎn)錄因子調(diào)控胰升糖素原基因的轉(zhuǎn)錄,從而調(diào)節(jié)腸道L細(xì)胞合成胰升糖素樣肽1。2006年Grant等首先報(bào)道TCF7L2基因與2型糖尿病的發(fā)生強(qiáng)烈相關(guān),這一結(jié)果隨后在多個(gè)人群中得到證實(shí),研究發(fā)現(xiàn)TCF7L2基因參與白種人2型糖尿病發(fā)生的相對(duì)風(fēng)險(xiǎn)為1.5～1.6,遠(yuǎn)高于PPARγ、KCNJ11、Calpain10等既往較公認(rèn)的T2DM易感基因(約1.15～1.30)。因此,TCF7L2基因一度被認(rèn)為是目前繼HLA后糖尿病遺傳學(xué)研究領(lǐng)域最重大的發(fā)現(xiàn)。然而,在日本人群中TCF7L2基因盡管也與2型糖尿病的發(fā)生相關(guān),但風(fēng)險(xiǎn)等位基因頻率極低,同時(shí)在一些非洲人的研究中并未證實(shí)TCF7L2基因參與2型糖尿病的發(fā)生。SNPrs7903146為C/T多態(tài),T為風(fēng)險(xiǎn)等位基因,本研究結(jié)果顯示中國(guó)漢族糖耐量正常人群及2型糖尿病人群T等位基因頻率分別為2.3%和3.6%,均顯著低于白種人(分別約為30%和40%),與日本人非常接近,與北京大學(xué)、香港及中國(guó)臺(tái)灣報(bào)道的結(jié)果一致。SNPrs12255372為G/T多態(tài),T為風(fēng)險(xiǎn)等位基因,本研究人群T等位基因頻率僅為0.55%,也遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于白種人和日本人。以上結(jié)果提示TCF7L2基因該兩個(gè)多態(tài)具有明顯的種族特異性。在本研究中,T2DM人群TCF7L2基因rs7903146位點(diǎn)T等位基因頻率明顯高于NGT人群,但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.052),但尚不能完全肯定TCF7L2基因與中國(guó)漢族T2DM無(wú)關(guān)。因?yàn)樵诒狙芯縏2DM人群中T等位基因頻率僅達(dá)3.6%,據(jù)此推算需要近千例的樣本量才能達(dá)到80%的統(tǒng)計(jì)效力,因此如果進(jìn)一步擴(kuò)大樣本量可能會(huì)得到陽(yáng)性結(jié)果。同時(shí),香港與中國(guó)臺(tái)灣的研究發(fā)現(xiàn)TCF7L2基因rs11196218、rs290487與中國(guó)漢族人群T2DM相關(guān)。本研究在統(tǒng)計(jì)上將T2DM人群與IGT人群合并為糖代謝異常組,主要依據(jù)以下兩個(gè)理由:其一,本研究中IGT人群與T2DM人群臨床特征相似,T等位基因頻率幾乎一致(分別為3.5%和3.6%);其二,在DM的自然病程中IGT是公認(rèn)的T2DM前期病變,若不加干預(yù),多數(shù)患者會(huì)轉(zhuǎn)歸為T(mén)2DM,可近似認(rèn)為兩者是同一疾病的不同發(fā)展階段,具有同質(zhì)性。合并后結(jié)果發(fā)現(xiàn)糖代謝異常人群TCF7L2基因rs7903146位點(diǎn)CT基因型頻率及T等位基因頻率均顯著高于NGT人群,統(tǒng)計(jì)學(xué)差異具有顯著性,T等位基因參與疾病發(fā)生的相對(duì)危險(xiǎn)度達(dá)1.589,由于風(fēng)險(xiǎn)等位基因頻率較低,其人群歸因危險(xiǎn)度僅達(dá)2.1%,也明顯低于歐美白種人。據(jù)此,本研究謹(jǐn)慎地認(rèn)為T(mén)CF7L2基因rs7903146位點(diǎn)T突