細(xì)菌的分離純化和接種實(shí)驗(yàn)

環(huán)境科學(xué)與工程學(xué)院實(shí)驗(yàn)中心實(shí)驗(yàn)題目細(xì)菌得分離純化與接種實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)類別綜合實(shí)驗(yàn)環(huán)境溫度:濕度:同儀器:無(wú)菌小試管8支、盛無(wú)菌水得錐形瓶1個(gè)、盛無(wú)菌基礎(chǔ)培養(yǎng)基得錐形瓶1環(huán)、煤氣燈、無(wú)菌培養(yǎng)皿10套試劑:無(wú)菌水、無(wú)菌基礎(chǔ)培養(yǎng)基、未知菌種、酵母菌、羽毛溶解菌、湖水三、實(shí)驗(yàn)原理從混雜得微生物群體中獲得只含有某一種或某一株微生物得過(guò)程稱為微生—培養(yǎng)(平板倒置)—挑菌落;平板劃線法步驟:倒平板(標(biāo)記培養(yǎng)基名稱)－制備湖培養(yǎng)斜面:試管中加培養(yǎng)液(標(biāo)記培養(yǎng)基名稱)—斜放試管制斜面-選取菌種—實(shí)驗(yàn)原理問(wèn)答題:答:因?yàn)樵谶@三個(gè)濃度范圍內(nèi)能盡量使樣品中得微生物分散開(kāi),使其成單個(gè)個(gè)體/答:第一,為了防止重力對(duì)菌落得生成產(chǎn)生影響;第二,為了防止培養(yǎng)基中得水分蒸3。微生物常用接種方式有哪些？進(jìn)行微生物接種應(yīng)該注意哪些方面？答:⑴劃線接種,涂布接種,穿刺接種,三點(diǎn)接種,澆混接種,液體接種,注射接種,活體⑵接種用具及培養(yǎng)基等均需滅菌處理,接種過(guò)程必須在煤氣燈旁進(jìn)行,接種環(huán)、玻璃涂棒等器具要過(guò)火處理,把所要用到得器材與菌種培養(yǎng)基有序編號(hào)放置,操作時(shí)應(yīng)避免已經(jīng)滅菌處理得材料用具與周圍得物品得接觸,往培養(yǎng)基就是劃線或點(diǎn)菌時(shí)動(dòng)作要輕以防把培養(yǎng)基劃破等、四、實(shí)驗(yàn)步驟1、制備細(xì)菌稀釋液:?使用5ml移液管加4.5ml無(wú)菌水放入貼有10—3、10—4、0。5ml放入貼10－4標(biāo)簽得小試管中,吸洗三次以混輕輕地?fù)艹?瓶口保持對(duì)著火焰;另一人拿培養(yǎng)皿并將皿蓋在火焰附近打開(kāi)一縫,迅速倒入培養(yǎng)基約15ml,加蓋后輕輕搖動(dòng)培養(yǎng)皿,使培養(yǎng)基均勻分布在培養(yǎng)皿底3、湖水中微生物含量得測(cè)定:?分別從10－4、10-5、10—6土壤稀釋液中,用各自4、空氣、自來(lái)水中細(xì)菌含量得測(cè)定:在一個(gè)平板中,加入0.2ml得自來(lái)水,搖晃并涂布均勻,并做一組平行樣;打開(kāi)一平將灼燒滅菌得接種環(huán)插入菌種管內(nèi),先接觸無(wú)菌苔生長(zhǎng)得培養(yǎng)基上,待冷卻后再?gòu)男泵嫔瞎稳∩僭S菌苔取出,接種環(huán)不能通過(guò)火焰,應(yīng)在火焰旁迅速插入接種管。在棉塞、再重新仔細(xì)灼燒接種環(huán)后,放回原處,并塞緊棉塞。將接種管貼好標(biāo)簽五、實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)六、思考題1、氧化亞鐵硫桿菌(Thiobacillusferrooxidans,廣泛存在于土壤、海水、淡水、垃圾、硫磺泉與沉積硫內(nèi),尤以金屬硫化礦與煤礦等酸性礦坑水(pH〈4)中最為常見(jiàn)、其化能自養(yǎng),專性好氧,嗜酸,革蘭氏陰性,,主要利用利用CO2為碳源,并吸收氮、磷等無(wú)機(jī)營(yíng)養(yǎng)來(lái)合成自身細(xì)胞。請(qǐng)思考其athen0mL,加入盛有100mL滅菌9K或Leathen液體培養(yǎng)基得250mL錐形瓶中,在30℃,120r/min得空氣浴恒溫?fù)u床中培養(yǎng),直至錐形瓶中得溶液變?yōu)榧t棕色,一般需4天。反復(fù)幾次。然后采用固體培養(yǎng)基稀釋凸起狀小菌落(d≈1mm),將單獨(dú)小菌落挑起,每個(gè)小菌落分別接體培養(yǎng)基得小試管中,以棉球封口,培養(yǎng)條件同上,直到小試管得液體顏色也變成紅棕色、重復(fù)在液體培養(yǎng)基中擴(kuò)大培養(yǎng)與在平板上反復(fù)分離,最后分離出優(yōu)良菌具體方法二:取菌液1mL,用pH=2.5得稀硫酸按每次稀釋10倍,依次稀釋成-1—2,10—3,10-4,10—5,10-6濃度得稀釋液。吸取稀釋度為10－4,10-5,10-6稀釋樣各0。2mL,分別接種到三個(gè)事先準(zhǔn)備好得滅菌9K瓊脂固體培養(yǎng)基,涂布均勻,正置于30℃恒溫培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng),次日倒置繼續(xù)培養(yǎng),直至固體培養(yǎng)基表面出現(xiàn)圓形凸起狀小菌落(d≈1mm),一般需兩周、將單獨(dú)小菌落挑起,每個(gè)小菌落分別接種到裝有5mL9K液體培養(yǎng)基得小試管中,以棉球封口,放在30℃搖床2、某果園業(yè)主想知道其果園土壤中得微生物數(shù)量,請(qǐng)幫助設(shè)計(jì)方案(詳細(xì)說(shuō)明)、釋度得溶液,在基礎(chǔ)培養(yǎng)基上以平板涂布法培養(yǎng)后數(shù)菌落數(shù),然后乘上稀釋倍數(shù),答:液體石蠟保藏法(將滅菌液體