中藥材中13種氨基甲酸酯農(nóng)藥多殘留的測(cè)定

中藥材中13種氨基甲酸酯農(nóng)藥多殘留的測(cè)定

氨基乙酸酯農(nóng)藥作為一種廣泛的光譜農(nóng)藥，自20世紀(jì)70年代以來(lái)，它已廣泛應(yīng)用于糧食、蔬菜和作物的害蟲防治。由于氨基甲酸酯類農(nóng)藥毒性大,其殘留對(duì)公眾健康危害極大。但在2005年版中國(guó)藥典中,僅收載了9種有機(jī)氯,12種有機(jī)磷和3種擬除蟲菊酯類農(nóng)藥的測(cè)定方法,氨基甲酸酯類農(nóng)藥的測(cè)定是一項(xiàng)空白在中國(guó)藥典2010年版附錄農(nóng)藥殘留測(cè)定法增修訂中,我所系統(tǒng)研究了當(dāng)今國(guó)內(nèi)外農(nóng)藥測(cè)定的種類、前處理技術(shù)、檢測(cè)技術(shù)的等多方面的內(nèi)容1儀器和試劑盒1.1處理器和檢測(cè)儀器Agilent-1100高效液相色譜儀,熒光檢測(cè)器。多功能真空樣品處理器,石墨化碳-氨基串聯(lián)柱(0.5g+0.5g,6mL),N-EVAP112型氮吹儀(美國(guó)Organomation公司),旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(德國(guó)BüCHIRotavapor)。1.2內(nèi)標(biāo)物質(zhì)及試劑13種氨基甲酸酯農(nóng)藥購(gòu)自德國(guó)Dr.EhrenstorferGmbH公司和美國(guó)ChemService公司;內(nèi)標(biāo)物質(zhì)乙萘酚為分析純(國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司,上海);乙腈、甲醇色譜純(美國(guó)MERCK公司);無(wú)水硫酸鈉,分析純(中國(guó)醫(yī)藥集團(tuán)上?；瘜W(xué)試劑公司)。2方法和結(jié)果2.1pa衍生試劑的配制十八烷基硅烷鍵合硅膠色譜柱(4.6mm×25cm,5μm)保護(hù)柱:C鄰苯二甲醛(OPA)衍生試劑的配制方法:稱取鄰苯二甲醛(OPA)100mg,加入甲醇10mL使溶解,加入0.05mol/L硼砂溶液500mL,加巰基乙醇0.5mL,加0.05mol/L硼砂緩沖液至1000mL,搖勻。臨用前新配(冰箱冷藏可使用一周)。2.2標(biāo)準(zhǔn)品溶液的制備根據(jù)各農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品及內(nèi)標(biāo)乙萘酚在熒光檢測(cè)器上的相應(yīng)值,精密稱取各農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品和乙萘酚適量,用甲醇分別制成100mg/L的標(biāo)準(zhǔn)品貯備液,精密吸取各農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品貯備液,用甲醇制成濃度分別為0.02、0.05、0.1、0.2、0.5mg/L的混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液,并分別加入內(nèi)標(biāo)貯備液適量,使乙萘酚濃度為1.0mg/L。2.3試驗(yàn)溶液的制備2.3.1以乙腈為原料的制備取供試品,粉碎,過(guò)三號(hào)篩,取約10g(準(zhǔn)確至0.01g),精密加入乙腈50mL,放置30min,均質(zhì)提取3min(15000r/min),離心,取上清液,置錐形瓶中,加無(wú)水硫酸鈉5g,放置30min,精密量取5mL,40℃減壓濃縮至近干,加乙腈1mL使溶解,待凈化。2.3.2樣品溶液的制備將上述提取濃縮液置石墨化碳/氨基串聯(lián)柱(500mg+500mg/6mL,加樣前柱上加無(wú)水硫酸鈉約1cm高,用乙腈-甲苯(3∶1)溶液5mL預(yù)淋洗)上,容器用乙腈-甲苯(3∶1)洗滌3次,每次1mL,洗液置同一石墨化碳/氨基串聯(lián)柱上,再用乙腈-甲苯(3∶1)溶液10mL洗脫,收集洗脫液,40℃減壓濃縮至近干,精密加入內(nèi)標(biāo)工作溶液1.0mg/L1mL使溶解,搖勻,即得。2.4內(nèi)標(biāo)濃度與峰面積、標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立取13種氨基甲酸酯類農(nóng)藥混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液,分別制成5個(gè)不同濃度系列的溶液(分別為0.02、0.05、0.1、0.2、0.5μg/mL,內(nèi)標(biāo)濃度均為1μg/mL),分別進(jìn)行分析,記錄峰面積,以經(jīng)內(nèi)標(biāo)校正后的濃度與峰面積比值為縱坐標(biāo)Y,濃度(μg/mL)為橫坐標(biāo)X,建立標(biāo)準(zhǔn)曲線,計(jì)算回歸方程。結(jié)果(見表1)表明,上述13種氨基甲酸酯類農(nóng)藥在濃度0.02~0.5μg/mL范圍內(nèi),其濃度和經(jīng)內(nèi)標(biāo)校正后的濃度和峰面積比值呈良好的線性關(guān)系,相關(guān)系數(shù)均在0.99797~0.99986之間。見表1。2.5線性結(jié)果與標(biāo)準(zhǔn)值的確定取濃度為0.1μg/mL的13種氨基甲酸酯類混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液(其中內(nèi)標(biāo)乙萘酚濃度為1μg/mL),進(jìn)樣10μL,連續(xù)進(jìn)樣6次,記錄峰面積,內(nèi)標(biāo)校正后的峰面積比值計(jì)算RSD值,結(jié)果表明,13種氨基甲酸酯類農(nóng)藥的RSD值在0.2%~1.2%(n=6)。2.6加樣回收率及rsd值采用加樣回收的方法考察方法的重復(fù)性,具體方法如下:精密量取1μg/mL的13種氨基甲酸酯類農(nóng)藥混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液(內(nèi)標(biāo)濃度為10μg/mL)1mL,一式6份,置勻漿杯中,氮吹儀上吹至近干,分別精密加入10g(準(zhǔn)確至0.01g)樣品粉末(過(guò)三號(hào)篩),按2.3項(xiàng)下操作制備供試品溶液,進(jìn)樣分析,計(jì)算加樣回收率(%)及RSD值。結(jié)果13種農(nóng)藥的RSD值分別為4.0%~8.9%(人參樣品)、1.4%~4.0%(白果樣品)、1.3%~13.9%(地龍樣品)、3.0%~11.3%(紅花樣品)、3.5%~11.0%(廣藿香樣品)、1.3%~14.7%(銀杏葉樣品)。本次重復(fù)性試驗(yàn)的測(cè)定濃度為0.1mg/kg(按照歐盟的有關(guān)規(guī)定重復(fù)性應(yīng)小于20%),試驗(yàn)結(jié)果表明,各農(nóng)藥成分在不同的樣品基質(zhì)中測(cè)得回收率RSD均小于15%,重復(fù)性良好,滿足農(nóng)藥殘留測(cè)定要求。2.7加樣回收率試驗(yàn)和樣品測(cè)定精密量取1μg/mL的13種氨基甲酸酯類農(nóng)藥混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液(內(nèi)標(biāo)濃度為10μg/mL)0.2mL、1.0mL、3.0mL,各一式3份(共9份,分別作為低、中、高3種濃度),置勻漿杯中,氮吹儀上吹至近干,分別精密加入10g(準(zhǔn)確至0.01g)樣品粉末(過(guò)三號(hào)篩),按2.3項(xiàng)下操作制備供試品溶液,使供試品溶液中待測(cè)農(nóng)藥的濃度分別為0.02mg/L、0.1mg/L、0.3mg/L,進(jìn)樣分析,計(jì)算加樣回收率(%),結(jié)果見表2~7。同時(shí)以低濃度加樣中噪音的3倍計(jì)算每種農(nóng)藥的檢測(cè)限,結(jié)果見表1。3討論3.1高效液相色譜-紫外檢測(cè)法氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留的測(cè)定方法可采用氣相色譜氮磷檢測(cè)器、高效液相色譜-紫外檢測(cè)測(cè)器或高效液相色譜-柱后衍生-熒光檢測(cè)器等方法進(jìn)行測(cè)定。采用氣相色譜法檢測(cè)時(shí)有些氨基甲酸酯類農(nóng)藥存在不穩(wěn)定現(xiàn)象,如涕滅威、甲萘威;高效液相色譜-紫外檢測(cè)法靈敏度較低,達(dá)不到農(nóng)藥殘留痕量檢測(cè)的要求;采用高效液相-柱后衍生-熒光檢測(cè)法,被測(cè)組分穩(wěn)定,靈敏度高,重現(xiàn)性良好。3.2萃取溶劑的選擇在樣品前處理中,提取時(shí)首先涉及的就是溶劑的選擇。氨基甲酸酯類農(nóng)藥極性較大,能溶于大多數(shù)有機(jī)溶劑,且在常溫和中性條件下穩(wěn)定。農(nóng)藥殘留常用的萃取溶劑為丙酮、乙腈、乙酸乙酯、石油醚等?？紤]到待測(cè)農(nóng)藥的極性較大、中藥材樣品基質(zhì)的復(fù)雜性以及樣品的含水量較低,擬從丙酮、乙酸乙酯、乙腈中選擇其一或兩者混合作為提取溶劑。試驗(yàn)證明:丙酮和乙腈因皆可與水混合,提取效率明顯優(yōu)于乙酸乙酯;若使用丙酮作為提取溶劑,得到的萃取液會(huì)含有更多的共萃物,不易凈化,而乙腈的優(yōu)點(diǎn)在于樣品中大部分的親脂性物質(zhì)不會(huì)被萃取,作為提取溶劑較為理想。3.3提取方法的考察農(nóng)藥殘留常用的提取方式有振蕩法,勻漿法,超聲波提取法、索氏提取法、微波輔助提取法,加速溶劑萃取法等。根據(jù)待測(cè)農(nóng)藥的性質(zhì)、待測(cè)樣品的種類(中藥材樣品大多為固體和半固體)和實(shí)驗(yàn)室條件,擬考察的提取方法有超聲波提取法,勻漿法,加速溶劑萃取法。經(jīng)試驗(yàn),勻漿法和加速溶劑萃取法的提取效率較為一致,均優(yōu)于超聲波提取法。加速溶劑萃取法相較于勻漿法,具有溶劑用量少、回收率高、重現(xiàn)性好、自動(dòng)化程度高等特點(diǎn),因而得到的共萃物要比勻漿法多,對(duì)凈化步驟的要求較高,加之自動(dòng)化的加速溶劑萃取儀價(jià)格昂貴,實(shí)驗(yàn)室前期需投入的成本較高;而勻漿法(均質(zhì)提取)作為一個(gè)比較成熟傳統(tǒng)的提取方式,具有操作簡(jiǎn)便、快速等特點(diǎn),適合大批量樣品的前處理。綜合考慮下,將勻漿法作為氨基甲酸酯類農(nóng)藥測(cè)定的提取方法。3.4樣品預(yù)處理方法中