HIV實驗室SOP文件-新版

3河南省鶴壁市中醫(yī)院檢驗科HIV篩查實驗室SOP文件責(zé)任部門檢驗科文件編號201405版次/頁碼第1版第3次修改 第0頁共70頁 目錄 \o"CurrentDocument"HIV篩查實驗室的設(shè)置及人員情況 3\o"CurrentDocument"HIV篩查實驗室工作管理程序 4\o"CurrentDocument"HIV篩查實驗室工作流程圖 6\o"CurrentDocument"HIV篩查實驗室規(guī)章制度 7\o"CurrentDocument"一、實驗室工作制度 7\o"CurrentDocument"二、崗位責(zé)任制 7\o"CurrentDocument"三、標本管理制度 8\o"CurrentDocument"四、試劑管理制度 11五、污染區(qū)工作守則 12六、清潔區(qū)工作守則 13七、環(huán)境消毒隔離制度 13\o"CurrentDocument"八、實驗臺消毒措施 14\o"CurrentDocument"九、廢棄物處置和實驗室消毒 15\o"CurrentDocument"十、消毒液的配置及使用措施 16\o"CurrentDocument"十一、消防安全制度 16\o"CurrentDocument"十二、生物安全防護制度 16十三、職業(yè)暴露的防護及處理措施 17\o"CurrentDocument"十四、篩查檢驗程序 18\o"CurrentDocument"十五、檢測結(jié)果的判定方法 25\o"CurrentDocument"十六、檢測結(jié)果報告規(guī)程 25\o"CurrentDocument"十七、檢測結(jié)果的判定方法 26\o"CurrentDocument"十八、檢驗結(jié)果的解釋 27\o"CurrentDocument"十九、檢測數(shù)據(jù)的記錄與保存 28\o"CurrentDocument"二十、呈陽性反應(yīng)標本的處理程序 28\o"CurrentDocument"二十一、檢測數(shù)據(jù)季報方案和程序 29\o"CurrentDocument"二十二、感染追蹤處理方案 30\o"CurrentDocument"二十三、保密程序制度 31\o"CurrentDocument"二十四、質(zhì)量管理制度 323河南省鶴壁市中醫(yī)院檢驗科HIV篩查實驗室SOP文件責(zé)任部門檢驗科文件編號201405版次/頁碼第1版第3次修改第1頁共70頁\o"CurrentDocument"二十五、室內(nèi)質(zhì)控分析管理制 33\o"CurrentDocument"二十六、外部質(zhì)控血清的制備和保存 34\o"CurrentDocument"二十七、儀器的使用維護 35\o"CurrentDocument"人類免疫缺陷病毒抗體診斷試劑盒（酶聯(lián)免疫法） 36\o"CurrentDocument"程序HIV—抗體初篩試驗標準操作（酶聯(lián)免疫法） 37\o"CurrentDocument"人類免疫缺陷病毒抗體診斷試劑盒（酶聯(lián)免疫法） 38\o"CurrentDocument"人類免疫缺陷病毒抗體檢測（膠體金法） 39科華酶標儀的標準操作程序（SOP） 40科華全自動洗板機標準操作規(guī)程 40加樣器的維護保養(yǎng)程序 41\o"CurrentDocument"加樣槍校準記錄 41\o"CurrentDocument"生物安全柜的標準操作程序（SOP） 42\o"CurrentDocument"離心機操作維護規(guī)程 47\o"CurrentDocument"室內(nèi)質(zhì)量控制的標準操作程序 48\o"CurrentDocument"室間質(zhì)量評價的標準操作程序（EQA） 55\o"CurrentDocument"實驗室意外和事故處理 58\o"CurrentDocument"艾滋病的職業(yè)暴露后預(yù)防 60附表1 HIV抗體篩查報告 61附表2 HIV抗體復(fù)檢檢測單 62\o"CurrentDocument"附表3 HIV抗體檢測數(shù)季報表 65附表4艾滋病職業(yè)暴露個案登記表 66附表5 艾滋病防治工作人員職業(yè)暴露事故匯總表 703河南省鶴壁市中醫(yī)院檢驗科HIV篩查實驗室SOP文件責(zé)任部門檢驗科文件編號201405版次/頁碼第1版第3次修改 第2頁共70頁HIV篩查實驗室的設(shè)置及人員情況為了更好發(fā)揮艾滋病檢測在艾滋病防治工作中的作用，根據(jù)《全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范》對于艾滋病的檢測要求,我院檢驗科設(shè)置了獨立的HIV篩查實驗室。為了使檢測工作能夠正常進行，保證HIV檢測結(jié)果的正確性和準確性，我們不僅對工作環(huán)境條件和檢測設(shè)施加以整改，而且建立了完整的實驗室標準化操作規(guī)程，以確保HIV檢測結(jié)果的準確有效.HIV檢測實驗室分為清潔區(qū)、半污染區(qū)和操作區(qū)，配備了專用的的生物安全柜、電腦、冰箱、酶標儀、洗板機、恒溫培養(yǎng)箱、離心機、高壓消毒鍋等設(shè)備和安全防護用品等。根據(jù)HIV檢測實驗室工作的需要，我科配備從事HIV檢測工作人員4名，其中專職工作管理人員3名,副高級技術(shù)人員1名，中級衛(wèi)生技術(shù)職稱人員3名，所有人員從業(yè)年限均在7年以上.并積極參加省級、市級舉辦的HIV檢測技術(shù)培訓(xùn)，不斷提高質(zhì)量意識、技術(shù)水平和業(yè)務(wù)能力，保證HIV檢測工作的質(zhì)量。HIV篩查實驗室負責(zé)人：賈向東人員：孟曉虹呂華郭長城3河南省鶴壁市中醫(yī)院檢驗科HIV篩查實驗室SOP文件責(zé)任部門檢驗科文件編號201405版次/頁碼第1版第3次修改 第3頁共70頁HIV篩查實驗室工作管理程序一、目的對HIV篩查實驗室工作全過程進行控制，保證檢驗工作符合規(guī)定要求,提供可靠的檢驗數(shù)據(jù)和有效的檢驗報告.二、范圍適用于本實驗室開展的各類醫(yī)學(xué)檢驗工作的各個環(huán)節(jié)。三、職責(zé)1、工作人員負責(zé)門診檢驗樣品的采集.2、工作人員負責(zé)住院檢驗樣品的接收。3、負責(zé)人負責(zé)組織協(xié)調(diào)完成檢驗任務(wù),并負責(zé)對檢驗工作質(zhì)量的監(jiān)督。4、工作人員負責(zé)執(zhí)行檢驗任務(wù)，做好檢驗記錄，填報檢驗數(shù)據(jù)。5、報告授權(quán)審核人負責(zé)檢驗報告的簽發(fā)、發(fā)放.6、實驗室負責(zé)人負責(zé)檢驗資料的歸檔保管（計算機）工作.四、工作程序（一）、檢驗工作分類本實驗室的檢驗工作，根據(jù)標本的來源不同分為采樣檢驗和送樣檢驗，根據(jù)工作性質(zhì)分為常規(guī)標本檢驗和檢驗質(zhì)量抽檢委托復(fù)檢。（二）、委托復(fù)檢工作需按下列程序執(zhí)行：1、當面核對標本姓名、性別、年齡及標本質(zhì)量等資料；2、按要求進行檢驗;3、必要時委托方可全程參與檢驗過程;4、其余程序與常規(guī)檢驗標本相同。（三）、采樣及樣品管理采樣執(zhí)行本科程序文件《標本采樣管理程序》.樣品接收、分發(fā)和保管處理，執(zhí)行本科程序文件《標本管理程序》和《標本3河南省鶴壁市中醫(yī)院檢驗科HIV篩查實驗室SOP文件責(zé)任部門檢驗科文件編號201405版次/頁碼第1版第3次修改 第4頁共70頁采樣管理程序》。樣品一旦受理即給予受理編號.（四）、標本檢驗檢驗執(zhí)行本科程序文件《標本檢驗管理程序》和《檢驗項目標準操作規(guī)程》。（五）、檢驗依據(jù)1、國家標準方法；2、部頒標準方法和檢驗規(guī)范；3、衛(wèi)生技術(shù)部門推薦使用方法；4、有關(guān)科技文獻或雜志上發(fā)表的方法；5、自編規(guī)程的使用執(zhí)行《檢驗方法確認程序》。（六）、檢驗實施檢驗人員按檢驗標準或作業(yè)指導(dǎo)書的要求按時完成檢驗任務(wù),并按程序文件《記錄檔案管理程序》做好原始記錄。（七）、檢驗報告的編制、復(fù)核和簽發(fā)按本科程序文件《檢驗報告管理程序》執(zhí)行。（八）、檢驗方法控制檢驗必須按《全國臨床檢驗操作規(guī)程》規(guī)定的方法或標準檢驗方法進行，也可用經(jīng)本科技術(shù)負責(zé)人批準的非標準檢驗方法進行.其他檢驗方法不得采用。3河南省鶴壁市中醫(yī)院檢驗科HIV篩查實驗室SOP文件責(zé)任部門檢驗科文件編號201405版次/頁碼第1版第3次修改 第5頁共70頁HIV篩查實驗室工作流程圖3河南省鶴壁市中醫(yī)院檢驗科HIV篩查實驗室SOP文件責(zé)任部門檢驗科文件編號201405版次/頁碼第1版第3次修改 第6頁共70頁HIV篩查實驗室規(guī)章制度一、實驗室工作制度1.實驗室保持清潔整齊,儀器設(shè)備要擺放整齊，說明書手冊要妥善保管，原始記錄不得擅自修改和銷毀。2。進入實驗室前要摘除首飾修剪指甲,以免揕手套。.嚴禁在艾滋病實驗室進食，飲水,吸煙和化妝。.不要將與工作無關(guān)的物品帶入實驗室。.進入實驗室要穿隔離衣,戴手套必要時戴雙層手套和防護眼鏡..認真對待樣品，嚴格遵守操作規(guī)程..采血時一定要注意安全，使用一次性注射器,謹慎操作防止刺傷皮膚以免造成污染。8。嚴格執(zhí)行實驗室工作人員年度采血和備案年度，工作人員從事工作必須進行HIV抗體和乙肝,丙肝等肝炎病毒標記物的檢測，注射乙肝疫苗，每半年至一年進行一次抗體檢測，并保留笑血清樣品.二、崗位責(zé)任制1.崗位責(zé)任制是保證工作質(zhì)量和醫(yī)療安全，提高工作效率的重要環(huán)節(jié).建立崗位責(zé)任制，做到人人分工職責(zé)明確，事事有人負責(zé)，立足本職，團結(jié)互助,相互協(xié)調(diào)，保證各項任務(wù)的勝利完成。2。HIV篩查實驗室由有實踐經(jīng)驗的技術(shù)人員負責(zé)。3。牢固樹立把質(zhì)量放在第一位的思想，在工作中必須加強檢查和復(fù)查制度，以保證血液質(zhì)量及醫(yī)療安全。4。交接工作必須認真負責(zé)，須核對實物和記錄，對工作一般情況、存在問題和注意事項應(yīng)進行具體交待，否則，發(fā)生問題由交班人負責(zé)。5。職工臨時因故離開工作崗位，必須將工作委托給能勝任該項工作的人員，否則，發(fā)生問題由原擔任該項工作者負責(zé).3河南省鶴壁市中醫(yī)院檢驗科HIV篩查實驗室SOP文件責(zé)任部門檢驗科文件編號201405版次/頁碼第1版第3次修改 第7頁共70頁6。新參加工作的職工,在未熟悉和掌握工作前不能獨立工作不能頂崗位，在確能掌握經(jīng)考核合格后方可。7。建立HIV篩查實驗室專用的精密儀器和重要設(shè)備專責(zé)崗位制，其他人不得任意使用.嚴格按照儀器操作規(guī)程操作，不可擅自亂改設(shè)置。8。凡是一物多人使用的，除共同負責(zé)外，應(yīng)指定一人為該崗位責(zé)任制負責(zé)人,負責(zé)指導(dǎo)正確操縱,定期安全檢查，經(jīng)常維護保養(yǎng)，保持正常運轉(zhuǎn)，該負責(zé)人有權(quán)制止任何違章操作和有害設(shè)備安全的行為。9。人員職責(zé)分工：每日值班人員負責(zé)樣品的采集,接收，執(zhí)行檢驗任務(wù)，做好檢驗記錄，填報檢驗數(shù)據(jù),簽發(fā)報告及實驗室儀器設(shè)備的日常維護和保養(yǎng).行政班人員負責(zé)協(xié)助值班人員做好實驗室的所有日常工作,并負責(zé)對檢驗工作質(zhì)量的監(jiān)督,檢驗報告的復(fù)核、發(fā)放,結(jié)果的解釋，實驗室室內(nèi)消毒以及每日醫(yī)療廢棄物的消毒處理。實驗室負責(zé)人負責(zé)檢驗資料的歸檔保管（計算機）工作。三、標本管理制度（一）、樣品的采集和處理艾滋病檢測最常用的樣品是血液，包括血清、血漿和全血.唾液或尿液有時也可作為測試樣品。常用的血液樣品的采集和處理方法如下：1、血清樣品采集和處理（1）、用一次性注射器（或真空采血管）抽取一定量靜脈血,室溫下自然放置1~2h，待血液凝固、血塊收縮后再用3000r∕min離心15min，吸出血清備用。（2）、如用濾紙片采樣，則手指或耳垂局部嚴格按常規(guī)進行消毒，在刺破皮膚后，迅速把濾紙片沾上，切勿讓血液滴落在其它物體表面造成污染。采血后要待血樣干燥后再包裝送檢。2、抗凝血樣品采集和處理（1）、用加有抗凝劑的真空采血管（或一次性注射器抽取靜脈血，轉(zhuǎn)移至加有抗凝劑的試管），反復(fù)輕搖，分離血漿和血細胞備用。3河南省鶴壁市中醫(yī)院檢驗科HIV篩查實驗室SOP文件責(zé)任部門檢驗科文件編號201405版次/頁碼第1版第3次修改 第8頁共70頁(2)、應(yīng)根據(jù)實驗要求選用適當?shù)目鼓齽?如CD4+∕CD8+T淋巴細胞測定可選用K3EDTA或肝素或枸櫞酸鈉，HIV病毒分離、核酸定性/定量檢測可選用K3EDTA或枸櫞酸鈉。(3)、用于核酸定性檢測時，采集的抗凝全血應(yīng)在4?8h內(nèi)分離PBMC和血漿，否則應(yīng)在24?48h內(nèi)分離血漿和血細胞。3、采集樣品注意事項(1)、采集樣品原則上應(yīng)按臨床采血技術(shù)規(guī)范操作.(2)、采集樣品時應(yīng)注意安全，建議采用真空采血管及蝶形針具，以避免直接接觸血液;直接接觸HIV感染者/艾滋病(AIDS)病人血液/體液的操作,應(yīng)戴雙層手套.(3)、所有的血液、血清、未固定的組織和組織液樣品，均應(yīng)視為有潛在傳染性，都應(yīng)以安全的方式進行操作.(4)、應(yīng)象操作未知傳染風(fēng)險樣品一樣,小心存放、拿取和使用所有可能有傳染性的質(zhì)量控制和參考物質(zhì)。用后的包裹應(yīng)進行消毒。(5)、采血時一定要注意安全，采血用一次性注射器，謹慎操作，防止發(fā)生刺傷皮膚和造成外界污染.(6)、離心機要使用密閉的罐和密封頭，以防液體溢出或在超/高速離心時形成氣溶膠。(二)樣品的保存1、用于抗體檢測的血清或血漿樣品，應(yīng)存放于—20℃以下，短期(1周)內(nèi)進行檢測的樣品可存放于2-8℃.2、用于抗原和核酸檢測的血漿和血細胞樣品應(yīng)凍存于—20℃以下，進行病毒RNA檢測的樣品如需保存3個月以上應(yīng)置于-80℃。3、用于CD4+/CD8+T淋巴細胞測定的樣品不能長期保存，樣品采集時間超過48h則不可檢測.(三)樣品的運送1、實驗室間傳遞的樣品應(yīng)為血清或血漿，除特殊情況外一般不運送全血。2、應(yīng)采用WHO提出的三級包裝系統(tǒng)：3河南省鶴壁市中醫(yī)院檢驗科HIV篩查實驗室SOP文件責(zé)任部門檢驗科文件編號201405版次/頁碼第1版第3次修改 第9頁共70頁第一層容器：裝樣品，要求防滲漏。樣品應(yīng)置于帶蓋的試管內(nèi)，試管上應(yīng)有明顯的標記，標明樣品的編號或受檢者姓名、種類和采集時間.在試管的周圍應(yīng)墊有緩沖吸水材料，以免碰碎。隨樣品應(yīng)附有送檢單，送檢單應(yīng)與樣品分開放置。第二層容器:要求耐受性好、防滲漏、容納并保護第一層容器，可以裝若干個第一層容器。將試管裝入專用帶蓋的容器內(nèi),容器的材料要易于消毒處理.第三層容器：放在一個運輸用外層包裝內(nèi),應(yīng)易于消毒。在第三層容器外面要貼標簽（數(shù)量，收、發(fā)件人）。3、血清和血漿樣品應(yīng)在2?8℃條件下由專人運送。用于CD4+∕CD8+T淋巴細胞測定的樣品應(yīng)在室溫下18?23℃運送。每一包裝的體積以不超過50ml為宜。4、運送感染性材料必須有記錄。5、如分離血漿仍有困難，可直接將抗凝血—20℃以下凍存，采用冰壺冷藏運輸，避免凍融。6、特殊情況下如需對個別樣品進行復(fù)測,可以用特快專遞形式投寄,但必須按三級包裝系統(tǒng)將盛樣品的試管包扎好,避免使用玻璃容器,以保證不會破碎和溢漏.（四）。樣本接收和拒收標準1、簽收：實行雙簽制度，送檢者及實驗室驗收人員均需簽名。2、認真查對姓名,性別,年齡，住院號，病區(qū)/床號，檢測目的及項目等。對不符合要求者記入拒收標本記錄表中，并及時通知采樣單位，正確及時地補采樣本,以免延誤病人的檢測報告。3、對符合檢測要求的標本及時進行唯一性編號（詳見標本唯一性編號標準操作程序）并記入可接收標本記錄表中。4、含有感染性樣品的包裹必須在具有處理感染源設(shè)備的實驗室內(nèi)由經(jīng)過培訓(xùn)、穿戴防護衣的工作人員打開，用后的包裹應(yīng)進行消毒.4.1、核對樣品與送檢單，檢查樣品管有無破損和溢漏.如發(fā)現(xiàn)溢漏應(yīng)立即將尚存留的樣品移出,對樣品管和盛器進行消毒,同時報告科主任等有關(guān)領(lǐng)導(dǎo)和專家.4。2、檢查樣品的狀況，記錄有無溶血、污染、血脂高及黃疸等情況。如果污染過重認為樣品不能接受，則應(yīng)將樣品安全廢棄。并要將樣品情況立即3河南省鶴壁市中醫(yī)院檢驗科HIV篩查實驗室SOP文件責(zé)任部門檢驗科文件編號201405版次/頁碼第1版第3次修改第10頁共70頁通知送樣人。4。3、打開標本容器時要小心，以防內(nèi)容物潑濺。樣品處理時若內(nèi)容物有可能濺出，則應(yīng)在生物安全柜中戴手套進行。同時應(yīng)戴口罩、防護眼睛，以防皮膚或粘膜污染。4.4、接收樣品時應(yīng)填寫樣品接收單。（五）標本檢測1、離心機要使用密閉的罐和密封頭，以防液體溢出或在超/高速離心時形成氣溶膠。復(fù)核標本接收過程中的每一步驟，在檢測過程中，應(yīng)嚴格按照標準化操作規(guī)程。2、在標本足夠的情況下，不能浪費、隨意丟棄或損壞標本。應(yīng)象操作未知傳染風(fēng)險樣品一樣，小心存放、拿取和使用所有可能有傳染性的質(zhì)量控制和參考物質(zhì)。用后的包裹應(yīng)進行消毒（六）、標本處理檢驗標本先用含2—3g/L有效氯消毒劑浸泡半小時，再用高壓鍋高壓消毒。然后用雙層專用黃色醫(yī)用垃圾袋專人收集所有廢棄醫(yī)用垃圾。送專門存放醫(yī)用垃圾處統(tǒng)一焚化處理.四、試劑管理制度（一）、采購與審批科主任根據(jù)需要定期擬定采購計劃，交由院領(lǐng)導(dǎo)審批,批核后由科主任交與器械科,有器械科與經(jīng)銷聯(lián)系（二）、驗收與登記倉管負責(zé)人根據(jù)供應(yīng)商提供的試劑及清單對數(shù)量、品種、品牌、包裝等進行驗收，并將入庫數(shù)據(jù)登記。（三）、貯存冷藏試劑統(tǒng)一存放在HIV實驗室專用的冰箱內(nèi)，冷箱保管及溫度控制由倉管負責(zé)人負責(zé)。HIV試劑一般應(yīng)2?8℃避光保存,在有效期內(nèi)使用。（四）、出庫管理3河南省鶴壁市中醫(yī)院檢驗科HIV篩查實驗室SOP文件責(zé)任部門檢驗科文件編號201405版次/頁碼第1版第3次修改第11頁共70頁各室提出試劑申領(lǐng),倉管人填寫出庫單據(jù)，認領(lǐng)人簽名后出庫.（五）、其它1、試劑的保存應(yīng)嚴格按照要求存放,以保證有效期內(nèi)能有效地使用，杜絕浪費現(xiàn)象。2、倉管人應(yīng)對試劑庫存定期檢查，不使用過期變質(zhì)的試劑。3、易燃，易爆試劑應(yīng)分開存放遠離火源和電源。4、劇毒試劑必須由科主任和負責(zé)科室保衛(wèi)的同志負責(zé)保存，放保險箱內(nèi)，使用時應(yīng)有兩人在場，并做好登記。五：污染區(qū)工作守則做好污染區(qū)實驗室廢棄物的消毒處理，未經(jīng)實驗室管理人員許可不得進入污染區(qū)。凡是被血液、體液污染的物品要先消毒滅菌后清洗.嚴格操作程序，做好各種實驗記錄，實驗陽性標本保存至5年,（經(jīng)過免疫印記確診的陰性標本也要保存），不得擅自處理。禁止用口吸液體，必須使用移液器操作。操作中有標本等外濺時，應(yīng)及時消毒，對大量濺出的高濃度污染物在清潔前先用1％次氯酸鈉溶液浸泡，然后戴上手套擦洗。每次實驗后，要對工作臺面消毒,用0.2％-1％次氯酸鈉溶液噴灑和浸泡.離開實驗室前要脫去手套，隔離衣等防護物品，放入指定污桶，用肥皂和流水洗手。3河南省鶴壁市中醫(yī)院檢驗科HIV篩查實驗室SOP文件責(zé)任部門檢驗科文件編號201405版次/頁碼第1版第3次修改第12頁共70頁六：清潔區(qū)工作守則1、實驗室是檢驗工作的場所，要保持清潔、安靜、物品擺放要整齊.2、清潔的防護服置于實驗室清潔區(qū)內(nèi)存放處。檢驗人員工作時應(yīng)按要求穿工作服、工作衣、帽、專用鞋等.3、禁止將與檢驗工作無關(guān)的物品帶入檢驗室，禁止在檢驗室內(nèi)會客、抽煙、吃東西.4、注意安全，下班后、節(jié)假日必須切斷水源、氣源、電源，關(guān)好門窗。5、嚴禁將污染區(qū)的物品帶入清潔區(qū)。6、妥善保管儀器、設(shè)備的說明書、操作規(guī)程、原始記錄表、零（部）件、常用工具、電源線、連接線要排列整齊.7、檢驗室須配置消防設(shè)備，并經(jīng)常檢查待用狀態(tài),任何人不得擅自挪用或挪動。七、環(huán)境消毒隔離制度1、實驗室應(yīng)分為清潔區(qū)和操作區(qū)，清潔區(qū)要注意保護不受污染。操作有氣溶膠可能的標本應(yīng)配置生物安全柜及其它防護設(shè)置,如紫外線燈，排氣扇等操作區(qū)的工作臺及地面每日用消毒液擦拭一次，有污染時隨時消毒,每周大掃除一次.2、采血室每日操作前用清水擦拭操作臺一次，采血結(jié)束用消毒液擦拭操作臺、桌子和地面一次，紫外線每日照射消毒二次，每月空氣細菌培養(yǎng)一次，紫外線強度定期測定。3、各種檢驗標本的收集，送檢必須用相應(yīng)指定的容器留取,不得外溢污染。4、靜脈及末稍采血，應(yīng)嚴格執(zhí)行消毒隔離措施，靜脈抽血做到一人一針一3河南省鶴壁市中醫(yī)院檢驗科HIV篩查實驗室SOP文件責(zé)任部門檢驗科文件編號201405版次/頁碼第1版第3次修改第13頁共70頁筒一巾一帶一消毒，所用止血帶及紙墊每日消毒，末稍采血一人一片一管，杜絕交叉污染。5、一次性醫(yī)用器具包括采血針，注射器、尿杯、血紅蛋白微量吸血吸管，應(yīng)嚴格做好領(lǐng)發(fā)登記，注射器先浸泡消毒后由供應(yīng)室一對一調(diào)換，統(tǒng)一處理，其余一次性器具浸泡消毒后裝入污物袋送焚燒爐焚燒。6、檢驗人員在進行靜脈抽血時應(yīng)嚴格遵守?zé)o菌操作技術(shù)，操作前必須洗手必須戴好帽子與口罩，操作臺和手被污染時應(yīng)用肥皂和流水認真洗手，必要時用消毒液浸泡雙手，酒精、碘酒瓶每周更換消毒兩次。7、溢出試管外的血液,應(yīng)立即用碘酒棉簽擦拭干凈，注意防止玻璃碎片刺傷手，并注意試管有無破裂。8、當針頭和碎玻璃刺傷手時,用流水沖洗，擠出血水,應(yīng)立即用碘酒消毒局部。9、實驗室操作時應(yīng)戴上手套。吸取標本，離心振蕩等應(yīng)嚴格按操作規(guī)程，防止自身和實驗室受污染。10、已檢查標本與容器分別浸泡于次氯酸鈉（2000mg∕L）中兩小時后,標本傾棄，一次性容器送焚燒，重復(fù)使用的經(jīng)清洗消毒和滅菌后再使用，均要有記錄。有毒化學(xué)試劑和放射性試劑使用后要經(jīng)無害化處理，防止污染環(huán)境。11、非科室工作人員不準進入實驗室，外來人員參觀需經(jīng)科主任同意方可進入.八、實驗臺消毒措施1、實驗臺消毒措施必須符合艾滋病實驗室的通用生物安全要求。由專人按特定程序和方法進行清潔和消毒。2、臺面的清潔消毒，保持清潔、濕式打掃。每天開始工作前用濕布抹擦1次,地面用濕拖把擦1次，禁用干抹干掃。抹布和拖把等清潔用具實驗室專用，不得混用，用后洗凈晾干,下班前用含氯消毒劑（次氯酸鈉，含有效氯2000mg/L）、0.2~0。5％過氧乙酸或75%乙醇抹擦1次。也可用便捷式高強度紫外線消毒器近距離照射消毒.3、應(yīng)象操作未知傳染風(fēng)險樣品一樣進行消毒與滅菌，小心存放、拿取和使用所有可能有傳染性的血液、質(zhì)量控制和參考物質(zhì),若被上述物品明顯污染，如具3河南省鶴壁市中醫(yī)院檢驗科HIV篩查實驗室SOP文件責(zé)任部門檢驗科文件編號201405版次/頁碼第1版第3次修改 第14頁共70頁傳染性的標本或培養(yǎng)物外溢，濺潑或器皿打破，灑落于臺面，應(yīng)立即用消毒液消毒，用5000mg∕L有效氯消毒劑、過氧乙酸或乙醇灑于污染的臺面，并使消毒液浸過污染表面，保持30?60min后再擦,拖把用后浸于上述消毒液內(nèi)Ih以上。4、各類在實驗室實驗臺上操作后的廢棄物品均應(yīng)視作物染物分類處理，所有廢棄物應(yīng)視為HIV污染物品，按照《傳染病防治法》處理。九、廢棄物處置和實驗室消毒1、廢棄物處置廢棄物處置應(yīng)符合《實驗室生物安全通用要求》（GB19489-2004）和《消毒技術(shù)規(guī)范（2002年版）》。從艾滋病實驗室出來的所有廢棄物,包括不再需要的樣品、培養(yǎng)物和其它物品，均應(yīng)視為感染性廢棄物，應(yīng)置于專用的密封防漏容器中，安全運至消毒室，并在高壓消毒后再進行處理或廢棄。2、HIV常用的物理消毒方法壓力蒸汽消毒,121℃，保持15?20min；干燥空氣烘箱消毒（干烤消毒），140℃，保持2?3h。3、HIV常用的化學(xué)消毒方法HIV最常用的化學(xué)消毒劑是含氯消毒劑（次氯酸鈉,含有效氯2000?5000mg/L）、75%乙醇和2%戊二醛，保持10?30min。4、廢棄物缸：5000mg/L次氯酸鈉。5、生物安全柜工作臺面和儀器表面:75%乙醇。6、溢出物:5000mg/L次氯酸鈉.7、污染的臺面和器具：2000mg/L次氯酸鈉，也可以用過氧化氫或過氧乙酸。器械可用2%戊二醛浸泡消毒。十、消毒液的配制及使用措施1、HIV實驗室最常用的化學(xué)消毒劑是含氯消毒劑（次氯酸鈉，含有效氯2000—5000mg/L）、75%乙醇和2%戊二醛，保持10?30min。2、含氯消毒劑的配制:次氯酸鈉原液使用前進行1：20?1：50稀釋（2000—5000mg/L）或聯(lián)昌84使用前進行1:10?1：25（2000—5000mg/L）稀釋3河南省鶴壁市中醫(yī)院檢驗科HIV篩查實驗室SOP文件責(zé)任部門檢驗科文件編號201405版次/頁碼第1版第3次修改第15頁共70頁后，用于實驗室內(nèi)的消毒.3、乙醇，俗稱“酒精”，能夠殺滅多種細菌，對HIV病毒有一定的殺滅作用，70?75%的效果最好。因此,使用前新鮮配置足量70?75%的乙醇，用于生物安全柜、工作臺面和儀器表面的消毒,可以達到最佳的消毒效果。4、過氧乙酸也是目前使用比較廣泛的一種高效消毒劑,新鮮配置1?3%的過氧乙酸熏蒸,用于地面、墻壁、實驗器材及實驗室內(nèi)資料、文件、書本等物品的消毒.0。04%的過氧乙酸用于實驗室工作人員手浸泡1?20分鐘,再用肥皂洗手。5、2%戊二醛用于可浸泡物品的消毒,醫(yī)療器械等。6、HIV實驗室常用化學(xué)消毒劑的配置，本著多用多配，少用少配，現(xiàn)用現(xiàn)配的原則，保證消毒劑使用時的濃度，保證消毒效果。十一、消防安全制度1、根據(jù)“誰主管、誰負責(zé)”的原則，實行科室負責(zé)制。2、主管領(lǐng)導(dǎo)和保衛(wèi)科對全體職工經(jīng)常進行消防安全教育，提高思想認識,掌握消防知識和消防器材的使用。3、嚴格執(zhí)行《安全防火管理制度》各種火種與易燃易爆物品，必須嚴格分區(qū),保持一定的安全距離。實驗室實施單向流向制度,通道不得亂堆放易燃爆物品和雜物.4、嚴禁在實驗室內(nèi)吸煙。5、電器的安裝與拆除，必須由電工進行，嚴禁亂接電源，亂后電線.6、各種機電設(shè)備、高溫電器設(shè)備、耐高壓容器和設(shè)施，使用時必須有專人負責(zé),隨時檢查,消除隱患,嚴防事故發(fā)生。7、各防火區(qū)域設(shè)置的消防器材和設(shè)備,應(yīng)定期進行檢查，維修和更換，隨時處于完好狀態(tài)，并不得隨便挪動。8、任何人發(fā)現(xiàn)火、水災(zāi)等隱患者，必須及時向科領(lǐng)導(dǎo)報告?？浦魅渭皶r向院領(lǐng)導(dǎo)報告，及時做好善事處理工作。十二、生物安全防護制度1、上崗工作人員應(yīng)是經(jīng)過崗前安全與技術(shù)培訓(xùn)，取得合格證，具有獨立工作能力的人員。3河南省鶴壁市中醫(yī)院檢驗科HIV篩查實驗室SOP文件責(zé)任部門檢驗科文件編號201405版次/頁碼第1版第3次修改 第16頁共70頁2、進入實驗室應(yīng)穿隔離衣、戴手套，必要時（如對篩查陽性標本進行復(fù)測或檢測高危標本）要戴防護眼鏡，防止污染暴露的皮膚和衣物。3、嚴格按照操作規(guī)程操作.操作過程中，不得用戴手套的手觸摸暴露的皮膚、口唇、眼睛、耳朵和頭發(fā)等。4、操作時可能發(fā)生的觸電、失火、玻璃割傷、針頭刺傷、燒傷、不慎中毒、傳染性標本的污染，有應(yīng)急處理的方法,有關(guān)工作人員均應(yīng)熟悉.5、操作中手套破損,應(yīng)立即丟棄，洗手后戴上新手套繼續(xù)操作，不慎發(fā)生瀉漏，應(yīng)立即按照《發(fā)生職業(yè)暴露后的處理措施》，進行處理。6、防止腐蝕、灼傷、中毒、火災(zāi)和爆炸等事件發(fā)生。7、實驗操作完畢后，應(yīng)按照實驗室清理與消毒程序，進行善后處理。同時記錄相關(guān)資料與數(shù)據(jù)并存檔。8、工作結(jié)束后，應(yīng)先洗戴手套的手，然后脫去手套丟棄，再脫去工作衣，用肥皂和流動水洗手后離開實驗室。9、注意安全,隨手關(guān)門，做好水，電，門的安全保衛(wèi)工作，防火防盜防水。十三、職業(yè)暴露的防護及處理措施HIV檢測實驗室職業(yè)暴露是指檢驗工作人員在從事檢測工作過程中意外被艾滋病病毒感染者或者艾滋病病人的血液、體液污染了皮膚或者粘膜，或者被含有艾滋病病毒的血液、體液污染了的針頭及其他利器刺破皮膚，有可能被艾滋病病毒感染的情況.（一）、防護措施:1。醫(yī)務(wù)人員進行有可能接觸病人血液、體液的診療和護理操作時必須戴手套,操作完畢,脫去手套后立即洗手,必要時進行手消毒。2.在診療、護理操作過程中，有可能發(fā)生血液、體液飛濺到醫(yī)務(wù)人員的面部時，醫(yī)務(wù)人員應(yīng)當戴手套、具有防滲透性能的口罩、防護眼鏡；有可能發(fā)生血液、體液大面積飛濺或者有可能污染醫(yī)務(wù)人員的身體時，還應(yīng)當穿戴具有防滲透性能的隔離衣或者圍裙。3。醫(yī)務(wù)人員手部皮膚發(fā)生破損，在進行有可能接觸病人血液、體液的診療和護理操作時必須戴雙層手套。3河南省鶴壁市中醫(yī)院檢驗科HIV篩查實驗室SOP文件責(zé)任部門檢驗科文件編號201405版次/頁碼第1版第3次修改 第17頁共70頁.醫(yī)務(wù)人員在進行侵襲性診療，護理操作過程中，要保證充足的光線，并特別注意防止被針頭、縫合針、刀片等銳器刺傷或者劃傷。.使用后的銳器應(yīng)當直接放入耐刺、防滲漏的利器盒，也可使用具有安全性能的注射器、輸液器等醫(yī)用銳器，以防刺傷。6。禁止將使用后的一次性針頭重新套上針頭套。禁止用手直接接觸使用后的針頭、刀片等銳器。（二）、處理措施：.用肥皂液和流動水清洗污染的皮膚,用生理鹽水沖洗粘膜..如有傷口，應(yīng)當在傷口旁端輕輕擠壓,盡可能擠出損傷處的血液，再用肥皂液和流動水進行沖洗，禁止進行傷口的局部擠壓。。受傷部位的傷口沖洗后,應(yīng)當用消毒液,如75％的酒精或者0。5％的碘伏等進行消毒，并包扎傷口；被暴露的粘膜，應(yīng)當反復(fù)用生理鹽水沖洗干凈。.在暴露后的0周、第四周、第八周、第十二周及六個月時抽血進行檢測艾滋病病毒抗體。.預(yù)防性用藥應(yīng)當在發(fā)生艾滋病病毒職業(yè)暴露后盡早開始,最好在四小時內(nèi)實施，最遲不得超過二十四小時；即使超過24小時，也應(yīng)當實施預(yù)防性用藥，連續(xù)使用28天。6。發(fā)生艾滋病病毒職業(yè)暴露后立即通知院感科備案、評估。十四、篩查檢驗程序1、篩查試劑必須是經(jīng)國家食品藥品監(jiān)督管理局注冊批準、批批檢合格、在有效期內(nèi)的試劑。推薦使用經(jīng)臨床質(zhì)量評估敏感性和特異性高的試劑。2、篩查方法一，膠體金法樣品的采集和保存1。采集靜脈的血清、血漿樣本必須在無菌條件下,并避免樣品溶血。2.如果血清和血漿樣品收集后7天內(nèi)檢測，樣品須放在2-8℃保存，如果大于7天則須冷凍保存。3河南省鶴壁市中醫(yī)院檢驗科HIV篩查實驗室SOP文件責(zé)任部門檢驗科文件編號201405版次/頁碼第1版第3次修改第18頁共70頁操作步驟在使用此測試卡前必須仔細閱讀試劑的說明書,需嚴格按照試劑說明書執(zhí)行有關(guān)操作，否則無法保證可靠的結(jié)果.將待測標本從儲存條件下取出,平衡至室溫并編號。.將所需數(shù)量的測試卡從包裝盒中取出平衡至室溫，打開鋁箔包裝袋,平置于臺面上。3。用微量加樣器取50μl樣本血清，加到測試卡的加樣處。4。加樣后，陽性標本可在1?30分鐘內(nèi)檢出。經(jīng)過試驗確證,反應(yīng)時間（從加樣后計算起）超過30分鐘將對實驗結(jié)果的觀察造成影響，因此,建議30分鐘再最終觀察并記錄實驗結(jié)果.結(jié)果判斷陽性:測試卡在檢測區(qū)和對照區(qū)位置出現(xiàn)兩條紫紅色條帶。如果檢測區(qū)的紫紅色條帶隱約可見，建議對該樣本重復(fù)試驗，并使用其他方法確認.陰性：測試卡只在對照區(qū)位置出現(xiàn)一條紫紅色條帶。失效：對照區(qū)未出現(xiàn)紫紅色條帶，表明不正確的操作過程或試劑盒已變質(zhì)損壞或者是樣本中抗體的含量過高.在此情況下，應(yīng)再次仔細閱讀說明書，并將待測樣本稀釋后用新的測試卡重新測試。注意：測試區(qū)（T）內(nèi)的紫紅色條帶可呈現(xiàn)顏色深淺的現(xiàn)象。但是，在規(guī)定的觀察時間內(nèi)，不論該色帶顏色深淺，即使只有非常弱的色帶也應(yīng)判定為陽性結(jié)果。二，酶聯(lián)免疫法1珠海麗珠原理及用途：本品系用純化基因工程人類免疫缺陷病毒I型和∏型二?HIV-1/HIV-2」抗原合成肽或基因重組蛋白，包被的微孔板和酶標記的HIV-1/HIV-2抗原及其他試劑組成。應(yīng)用雙抗原夾心法原理檢測人血清或血漿中的HIV—1/HIV—2抗體。試劑盒成分HIV抗原包被板12孔×8,HIV酶標記物7mlX1瓶，陰性對照1ml×1瓶，陽性對照1mlX1瓶，20倍濃縮洗液50mlX1瓶，底物緩沖液7mlX1瓶，底物液7mlX1瓶，終止液7mlX1瓶，封口袋1個，說明書1份3河南省鶴壁市中醫(yī)院檢驗科HIV篩查實驗室SOP文件責(zé)任部門檢驗科文件編號201405版次/頁碼第1版第3次修改第19頁共70頁操作方法①將試劑盒平衡至室溫,取出所需的條板,剩余的即時封存.②用去離子水和蒸餾水20倍稀釋濃縮洗滌液。③將所需數(shù)量的條板固定于支架按順序編號設(shè)置樣品孔、外部對照孔、陽性對照孔和陰性對照孔.每次實驗需設(shè)外部對照1孔陽性對照2孔陰性對照3孔。④在樣品孔中加入50可待測樣品，陰性、陽性對照及外部對照每孔加入50ul,輕拍混勻。⑤置37℃溫育60分鐘.⑥將孔內(nèi)液體甩干，置洗板機用洗滌液充分洗滌5遍，扣干.⑦每孔加入50ul酶標記物，輕拍混勻,置37℃溫育30分鐘.⑧重復(fù)步驟⑥.⑨每孔加入50ul底物緩沖液和50ul底物液，輕拍混勻，置37℃避光溫育30分鐘.⑩每孔加入50ul終止液終止顯色反應(yīng),用酶標儀（雙波長450nm/630nm）測定各孔A值。結(jié)果判定臨界值：?Cutoff=。。15+陰性對照的平均A值（陰性對照的平均A值小于0.08按0。08計算，大于0.08按實際值計算），樣品的A值≥Cutoff值為HIV抗體陽性;樣品的A值〈Cutoff值為HIV抗體陰性。2北京萬泰試劑廠家：北京萬泰生物工程公司試劑類型:雙抗原夾心酶聯(lián)免疫法儀器：a.洗板機b。酶標儀c.恒溫箱標本的采集與要求1病人的準備：無特殊要求。2標本的類型：無溶血的血清或血漿.3標本準備：取無菌試管采集全血2ml,待血液凝固后離心分離血清,標本應(yīng)無溶血現(xiàn)象.標本采集后應(yīng)及時測定,如不能及時測定，將分離后的血清樣本放置于4?6℃冰箱保存不超過4天，一20°C以下保存可延長一個月，-80℃一下可長期保存。不合要求的樣本按樣本拒收制度執(zhí)行。操作步驟1、配液:將50ml濃縮洗滌液用蒸餾水或去離子水20倍稀釋至1000ml備用.2、編號：將樣品對應(yīng)微孔按序編號,每板設(shè)陰性對照3孔、陽性對照I型2孔，外部對照1孔。3、力口樣:分別在相應(yīng)孔中加入待檢樣品、陰陽對照、外部對照各100μlo4、溫育：封板后37+1C60min5、洗滌：洗板機洗5遍。6、力口酶：每孔加入酶標試劑100μl.7、溫育：37+1C30min8、洗滌：洗板機洗5遍3河南省鶴壁市中醫(yī)院檢驗科HIV篩查實驗室SOP文件責(zé)任部門檢驗科文件編號201405版次/頁碼第1版第3次修改 第20頁共70頁9、顯色:各孔加入A、B顯色液50μl,混勻，37+1℃30mino10、測定：加入終止液50μl,450nm∕620nm波長測定各孔OD值.?結(jié)果判斷：陰性對照孔OD值≤0.10，陽性對照孔OD值≥0.80,試驗有效.?臨界值(CUTOFF)的計算臨界值=陰性對照孔OD均值Nc+0。12。陽性判定:樣品OD值大于等于臨界值(CUTOFF)為HIV抗體陽性，樣品小于臨界值為陰性。(注意:初試陽性標本應(yīng)重新取樣進行雙孔復(fù)試，復(fù)試陽性者應(yīng)按《全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范》進行確證實驗。3。廈門英科新創(chuàng)【試劑名稱】人類免疫缺陷病毒HIV(1+2型)抗體診斷試劑盒(酶聯(lián)免疫法)【漢語拼音】RENLEIMIANYIQUEXIANBINGDU(HIV1+2XING)KANGTIZHENDUANSHIJIHE(MEILIANMIANYIFA)【英文名】HIV(1+2)AntibodiesELISAKit【檢測原理】本試劑盒采用雙抗原夾心兩步法檢測人血清或血漿樣本中的(HIV1/2)型抗體.采用多種HIV-1和HIV-2的特異性抗原制作預(yù)包被板及酶結(jié)合物.當待檢樣本中存在HIV抗體時，在反應(yīng)過程中形成“固相HIV抗原-HIV抗體一酶標記HIV抗原”的免疫復(fù)合物,加入底物后形成顯色反應(yīng).【適用范圍】人類免疫缺陷病毒(HIV1/2)抗體輔助診斷及獻血員篩查?！驹噭┙M成】序號組分名稱數(shù)量包裝規(guī)格序號組分名稱數(shù)量包裝規(guī)格1微孔板1包8X12T6顯色劑A1瓶7ml2酶標抗原1瓶14ml7顯色劑B1瓶7ml3陽性對照1瓶1ml8終止液1瓶7ml4陰性對照1瓶1ml9說明書1份5洗滌液2瓶25ml10自封袋1個3河南省鶴壁市中醫(yī)院檢驗科HIV篩查實驗室SOP文件責(zé)任部門檢驗科文件編號201405版次/頁碼第1版第3次修改 第21頁共70頁11封板膜3張【樣品的采集和保存】1。采集靜脈的血清、血漿樣本應(yīng)在無菌條件下保存，并避免樣品溶血及反復(fù)凍溶。2。血清和血漿樣品收集后如果無法在當天檢測，樣品須在2—8。C保存；如果大于7天則須冷凍保存?！静僮鞑襟E】:在使用本檢測試劑前必須仔細閱讀使用說明書1。平衡：將試劑盒各組分從盒中取出，平衡至室溫（18℃-25℃）,微孔板開封后按需要取用，余者及時以自封袋封存。2。配液:濃縮洗滌液配置前充分搖勻（如有晶體應(yīng)充分溶解）,濃縮洗滌液和蒸餾水或去離子水按1:19稀釋后使用。.編號:取所需數(shù)量微孔條固定于支架，按序編號。4。加樣：按順序分別在相應(yīng)孔加入50μl待測樣品及陰、陽性對照血清。.溫育:覆上封板膜，置37℃溫育30分鐘。.洗滌：用洗滌液充分洗滌5次，洗滌完后扣干（每次應(yīng)保持30-60秒的浸泡時間）..加酶：分別在每孔中加入酶標抗原100μ1。.溫育:覆上封板膜，置37℃溫育30分鐘。9。洗滌:用洗滌液充分洗滌5次，洗滌完后扣干（每次應(yīng)保持30-60秒的浸泡時間）。10。顯色：每孔加底物A、B各50μ1,輕拍混勻，覆上封板膜，37℃暗置20分鐘..終止：每孔加入終止液50μ1,混勻。.測定：用酶標儀單波長450nm或雙波長450∕630nm測定各孔OD值（用單波長測定時，需設(shè)空白對照一孔，30分鐘內(nèi)完成測定，并記錄結(jié)果）.【結(jié)果判定】1、陽性對照均值應(yīng)大于陰性對照均值0.60以上且陰性對照均值小于0。10方可認為本次實驗有效。2、臨界值計算：CutOffValue=0.10+陰性對照均值（若陰性對照均值小于0.05,以3河南省鶴壁市中醫(yī)院檢驗科HIV篩查實驗室SOP文件責(zé)任部門檢驗科文件編號201405版次/頁碼第1版第3次修改 第22頁共70頁0.05計）。3、樣本OD值大于或等于臨界值為初篩陽性，小于臨界值為陰性.初篩陽性者重新取樣雙孔復(fù)試,復(fù)試陽性者應(yīng)按照“全國HIV檢測管理規(guī)范”送HIV確認實驗室進行確認試驗?！咀⒁馐马棥?、本檢測試劑僅用于體外診斷試驗。僅用于人血清或血漿樣本，其它體液和樣品可能得不到準確的結(jié)果。2、本試劑的使用單位必須是經(jīng)當?shù)匦l(wèi)生行政部門批準的HIV初篩實驗室。3、樣本的加樣建議使用微量加樣器準確加入。酶標抗原需用微量加液器加液，并經(jīng)常校對其準確性.加酶標記抗原時,注意勿使微量加液器的加樣頭接觸樣本以避免樣本間相互污染。加試劑前，應(yīng)先將試劑瓶翻轉(zhuǎn)數(shù)次，使液體混勻。4、封板膜為一次性使用，每次使用后請丟棄重復(fù)使用將導(dǎo)致嚴重污染。5、HIV檢測必須符合HIV實驗室管理規(guī)范和生物安全守則的規(guī)定，嚴格防止交叉感染，嚴格健全和執(zhí)行消毒隔離制度。所有樣品、洗滌液和各種廢棄物應(yīng)按傳染物處理。對于那些含有感染源和懷疑含有感染源的物質(zhì)應(yīng)有合適的生物安全保證程序,下列為有關(guān)注意事項但不僅限于此：火帶手套處理樣本和試劑*不要用嘴吸樣火不可在處理這些物品時吸煙、進食、喝飲料、美容和處理隱形眼鏡火用消毒劑對濺出的樣本或試劑進行消毒火按當?shù)氐挠嘘P(guān)條例來消毒和處理所有樣本、試劑和潛在的污染物火試劑各組份在正當處理和保存的情況下直至效期都保持穩(wěn)定，不能使用過效期的試劑盒6、HIV抗體檢定結(jié)果的判定必須以酶標儀讀數(shù)為準。樣本的酶標儀讀值與樣本中抗體的滴度沒有一定的必然聯(lián)系。7、任何一種測試都不能絕對保證樣本中沒有低濃度的抗體存在，所以陰性結(jié)果任何時候不能排除含有HIV暴露和感染的可能。3河南省鶴壁市中醫(yī)院檢驗科HIV篩查實驗室SOP文件責(zé)任部門檢驗科文件編號201405版次/頁碼第1版第3次修改 第23頁共70頁8、每板建議設(shè)陰、陽性對照血清各兩孔，設(shè)空白對照時,不加樣本及酶標抗原,其余各步相同.9、洗滌液應(yīng)先取出預(yù)先稀釋，洗滌時各孔均須加滿但應(yīng)防止溢流，防止孔口內(nèi)有游離酶未能洗凈。10、不同品名、不同批號的試劑不可混用，以免產(chǎn)生錯誤結(jié)果?！举A藏】儲存：2-8℃避光保存【有效期】十二個月【批準文號】3、復(fù)檢試驗:對初篩呈陽性反應(yīng)的樣品用原有試劑和另外一種不同原理或不同廠家的篩查試劑重復(fù)檢測。如兩種試劑復(fù)測均呈陰性反應(yīng)，則報告HIV抗體陰性；如均呈陽性反應(yīng)，或一陰一陽,需送艾滋病確認實驗室進行確認（見圖1）。3河南省鶴壁市中醫(yī)院檢驗科HIV篩查實驗室SOP文件責(zé)任部門檢驗科文件編號201405版次/頁碼第1版第3次修改第24頁共70頁圖1HIV抗體篩查檢測流程4、初篩試驗結(jié)果的報告對HIV抗體篩查試驗,呈陰性反應(yīng)者可出具“HIV抗體陰性"報告（可用附表1）;對初篩試驗呈陽性反應(yīng)者不能出陽性報告,可出具“HIV抗體待復(fù)查”報告（附表1）.8、初篩試驗呈陽性反應(yīng)樣品的轉(zhuǎn)送如需送上級實驗室進行復(fù)測或確認，需要填寫“HIV抗體復(fù)測送檢單”（附表2），經(jīng)1名檢驗人員和1名具有中級以上技術(shù)職稱的人員審核簽字。送當?shù)匕滩『Y查中心實驗室，再轉(zhuǎn)送艾滋病確認實驗室，或在本實驗室復(fù)檢后直接送確認實驗室.9、對篩查陰性和陽性者，均需做好檢測后咨詢。十五、檢測結(jié)果的判定方法1、HIV測定（膠體金法）結(jié)果的判定方法（1）、陽性：出現(xiàn)兩條或三條紅線均為陽性反應(yīng)。（2）、陰性：僅出現(xiàn)質(zhì)控一條紅線,則實驗結(jié)果為陰性。（3）、無效：如無紅線（或只有反應(yīng)線）出現(xiàn)，表明實驗無效，須重新檢測.2、HIV測定（ELISA法）結(jié)果的判定方法（1）、計算臨界值CO（cut—off）值。（2）、臨界值=陰性對照A均值+0.12（3）、正常情況下，陰性對照孔的OD值≤0.10（若1孔陰性對照的OD值＞0。1應(yīng)舍棄，若有2孔或2孔以上陰性對照的OD值＞0.1,應(yīng)重復(fù)實驗。）。樣品OD值?臨界值者為HIV抗體陰性。（4）、正常情況下,陽性對照孔的OD值≥0.80（若1孔陽性對照的OD值＜0。8應(yīng)舍棄，若有2孔或2孔以上陽性對照的OD值＜0。8,應(yīng)重復(fù)實驗。樣品OD值≥臨界值者為HIV抗體陽性。十六、檢測結(jié)果報告規(guī)程1、從事HIV檢測工作的技術(shù)人員必須接受過上崗前的培訓(xùn)和定期復(fù)訓(xùn)。3河南省鶴壁市中醫(yī)院檢驗科HIV篩查實驗室SOP文件責(zé)任部門檢驗科文件編號201405版次/頁碼第1版第3次修改 第25頁共70頁2、HIV檢測工作必須在獨立的實驗室內(nèi)進行。3、初篩檢測試劑必須是經(jīng)國家食品藥品監(jiān)督管理局注冊批準、中國藥品生物制品檢定所批批檢合格且在有效期內(nèi)的試劑。4、按照《全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范》的要求建立健全質(zhì)量管理制度、實驗室安全標準操作規(guī)程、安全防護工作等.5、檢測結(jié)果報告前應(yīng)填寫好原始實驗記錄資料，包括試驗日期，試驗操作記錄，檢測樣品及空白、陰、陽對照結(jié)果S/CO值、臨界值、試劑廠家、批號、效期，檢測人、復(fù)核人簽名等。6、將試驗結(jié)果存檔保存，處理試驗廢物，擦凈實驗臺，做好實驗室消毒衛(wèi)生.7、結(jié)果報告：對呈陰性反應(yīng)的樣品，可出具“HIV抗體篩查報告”（見附表1）陰性報告；對呈陽性反應(yīng)的樣品,須進行復(fù)檢，不能出陽性報告。8、復(fù)檢試驗：對初篩呈陽性反應(yīng)的樣品用原有試劑和另外一種不同原理或不同廠家的篩查試劑重復(fù)檢測。如兩種試劑復(fù)測均呈陰性反應(yīng)，則報告“HIV抗體篩查報告”（見附表1）陰性;如均呈陽性反應(yīng)，或一陰一陽,則應(yīng)按照《全國HIV檢測管理規(guī)范》的要求送艾滋病確認實驗室進行確證試驗。十七、檢測結(jié)果的判定方法1、HIV測定（膠體金法）結(jié)果的判定方法（1）、陽性：出現(xiàn)兩條或三條紅線均為陽性反應(yīng)。（2）、陰性：僅出現(xiàn)質(zhì)控一條紅線，則實驗結(jié)果為陰性。（3）、無效：如無紅線（或只有反應(yīng)線）出現(xiàn)，表明實驗無效，須重新檢測。2、HIV測定（ELISA法）結(jié)果的判定方法（1）、計算臨界值CO（cut-off）值。（2）、臨界值=陰性對照A均值+0.12（3）、正常情況下，陰性對照孔的OD值≤0.10（若1孔陰性對照的OD值＞0.1應(yīng)舍棄，若有2孔或2孔以上陰性對照的OD值＞0.1,應(yīng)重復(fù)實驗。）。樣品OD值?臨界值者為HIV抗體陰性.3河南省鶴壁市中醫(yī)院檢驗科HIV篩查實驗室SOP文件責(zé)任部門檢驗科文件編號201405版次/頁碼第1版第3次修改 第26頁共70頁（4）、正常情況下，陽性對照孔的OD值≥0080（若1孔陽性對照的OD值<0。8應(yīng)舍棄,若有2孔或2孔以上陽性對照的OD值<0.8,應(yīng)重復(fù)實驗.樣品OD值≥臨界值者為HIV抗體陽性。十八、檢驗結(jié)果的解釋HIV抗體檢測的結(jié)果有三種,分別是陽性、陰性和不確定，絕大多數(shù)情況下都是陽性或陰性，出現(xiàn)不確定結(jié)果的情況很少。（一）、陽性結(jié)果的解釋1、表明一個人感染了HIV,具有傳播性當一個人HIV抗體檢測結(jié)果為陽性，表明這個人已經(jīng)感染了HIV,具有把HIV傳播給別人的可能.2、不能判斷發(fā)病與否，不能判斷疾病的進展。HIV抗體檢測結(jié)果只能說明一個人是否感染了HIV,陽性結(jié)果并非就意味著一個人已經(jīng)得了艾滋病，也不能說明患者處于疾病發(fā)展的哪個階段。若要判斷疾病的進展,則要做另外的實驗檢測CD4細胞記數(shù)和HIV病毒載量檢查。3、對于剛出生的嬰兒，情況則不一樣剛出生的嬰兒，不能根據(jù)其HIV抗體檢測呈陽性反應(yīng)而判斷該嬰兒感染了HIVo因為出生半年以內(nèi)的嬰兒，其抗體主要是由該嬰兒從其母體獲得,不管他（她）感染HIV與否，只要其母親感染了HIV,母體內(nèi)存在HIV抗體,嬰兒出生后HIV抗體檢測-般都是陽性。如果要判斷一個嬰兒是否感染HIV,則應(yīng)該等到一歲半（18個月）以后再做檢測,檢測結(jié)果陽性時才能說明該嬰兒感染了HIVo（二）、陰性結(jié)果的解釋1、檢測者處于窗口期HIV從感染到能夠檢測出來有一段時期，這段時期稱為窗口期,窗口期一般是2周到2個月。拿到一個陰性結(jié)果,首先要確定窗口期是否已過，如果確定最后-次危險行為距抽血作檢測時已過窗口期,這時基本可以確定檢測者未感染HIVo如果窗口期末過或者抽血化驗之后又發(fā)生了危險行為（如又共用針具或未采取保護措施的性行為），同樣也不能確定抽血者沒有感染HIVo2、檢測者未感染HIV如果檢測結(jié)果陰性,最后—次危險行為又過了窗口期,那可以判定檢測未3河南省鶴壁市中醫(yī)院檢驗科HIV篩查實驗室SOP文件責(zé)任部門檢驗科文件編號201405版次/頁碼第1版第3次修改第27頁共70頁感染HIV。（三）、不確定結(jié)果結(jié)果不能確定是指住進行HIV抗體檢測的確認試驗時，檢測結(jié)果不是陰性,又夠陽性標準，界乎于陽性與陰性之間的一種結(jié)果.出現(xiàn)不確定結(jié)果一般建議過三個月后再復(fù)查，出現(xiàn)不確定結(jié)果一般有以下幾種原因：1、感染處于窗口期,從HIV進人體內(nèi)到檢測這段時間還不夠長,因此血清還沒有形成典型的抗體反應(yīng).2、艾滋病進展到終末期，抗體水平下降。3、有其它原因：如某些惡性疾病，懷孕,輸血或器官移植等情況，身體會產(chǎn)生一些抗體，其反應(yīng)與HIV的某些蛋白抗體所引起的反應(yīng)相似。十九、檢測數(shù)據(jù)的記錄與保存1、實驗原始記錄表應(yīng)按實驗要求,設(shè)計操作的原始記錄表,標明空白對照、陽性對照、陰性對照、外部對照以及待檢樣品的位置，便于指導(dǎo)實驗人員加樣。要注明試劑盒廠家、測定方法、批號、效期、操作人員和復(fù)核人員姓名及檢測日期.2、標本的登記收到標本后，及時登記有關(guān)參數(shù)，包括受檢者姓名或代號、試管編號、性別、年齡、職業(yè)、送檢單位、人群類別、檢驗結(jié)果、送檢日期、報告日期、備注（必要時記錄通信地址）等.3、HIV陽性標本的保存記錄包括HIV陽性標本的類型、貯存量、貯存溫度、貯存起始時間以及標本保管人姓名.4、文件存檔實驗原始記錄表、打印數(shù)據(jù)、檢測記錄表、標本登記、標本保存記錄以及儀器設(shè)備維修和校準記錄等都應(yīng)該妥善存檔保存15年以上。并同時使用計算機保存各種文件和記錄.二十、呈陽性反應(yīng)標本的處理程序3河南省鶴壁市中醫(yī)院檢驗科HIV篩查實驗室SOP文件責(zé)任部門檢驗科文件編號201405版次/頁碼第1版第3次修改 第28頁共70頁1、對HIV抗體初篩試驗，呈陰性反應(yīng)的樣品可出具“HIV抗體陰性”報告（可用附表1）；對初篩呈陽性反應(yīng)的樣品用原有試劑和另外一種不同原理或不同廠家的篩查試劑重復(fù)檢測。如兩種試劑復(fù)測均呈陰性反應(yīng)，則報告“HIV抗體篩查報告"（見附表1）陰性；如均呈陽性反應(yīng),或一陰一陽，則應(yīng)按照《全國HIV檢測管理規(guī)范》的要求送艾滋病確認實驗室進行確證試驗.對初篩試驗呈陽性反應(yīng)者不能出陽性報告，可出具“HIV抗體待復(fù)查”報告（附表1）.2、初篩試驗呈陽性反應(yīng)樣品，需送上級實驗室進行復(fù)測或確認，需要填寫“HIV抗體復(fù)測送檢單”（附表2）,經(jīng)實驗室負責(zé)人和1名專業(yè)檢驗人員審核簽字。送縣疾病控制中心艾滋病篩查中心實驗室，或在本實驗室復(fù)檢后直接送安陽市艾滋病確認實驗室。3、初篩試驗呈陽性反應(yīng)樣品，進一步送檢、本室冰凍保存后不在需要的樣品的處置應(yīng)符合《實驗室生物安全通用要求》（GB19489—2004）和《消毒技術(shù)規(guī)范（2002年版）》。4、從HIV實驗室出來的所有廢棄物,包括不再需要的樣品、培養(yǎng)物和其它物品，均應(yīng)視為感染性廢棄物，應(yīng)置于專用的密封防漏容器中,安全運至消毒室,并在高壓消毒后再進行處理或廢棄.5、所有廢棄物應(yīng)按照HIV污染物品處理。由專人按本實驗室制定的程序和方法進行清潔和消毒。6、嚴格HIV實驗室的廢棄物的消毒處理制度，做好登記。7、檢驗科主任定期負責(zé)檢查，操作處理不當?shù)陌凑湛剖矣嘘P(guān)規(guī)定處罰。二十一、檢測數(shù)據(jù)季報方案和程序1、艾滋病篩查實驗室和艾滋病檢測點應(yīng)于每季度首月5日前填寫“HIV抗體檢測數(shù)季報表"（附表6），向艾滋病篩查中心實驗室報告上季度檢測情況。沒有艾滋病篩查中心實驗室的地區(qū)可直接向艾滋病確認中心實驗室報告。艾滋病篩查實驗室和艾滋病檢測點未設(shè)置艾滋病篩查中心實驗每季首月5日前報告上季檢測情況艾滋病篩查中心實驗室3河南省鶴壁市中醫(yī)院檢驗科HIV篩查實驗室SOP文件責(zé)任部門檢驗科文件編號201405版次/頁碼第1版第3次修改 第29頁共70頁每季首月5日前 每季首月10日前報告上季檢測情況 報告上季檢測情況圖2HIV抗體檢測情況季報流程2、艾滋病篩查中心實驗室應(yīng)于每季度首月10日前將本實驗室和本轄區(qū)內(nèi)各篩查實驗室上季度報告的檢測情況（附表6）匯總,報告艾滋病確認中心實驗室.3、艾滋病確認實驗室應(yīng)于每季度首月10日前將上季度檢測情況匯總后（附表6）,報告當?shù)匕滩〈_認中心實驗室和同級衛(wèi)生行政部門.4、艾滋病確認中心實驗室應(yīng)及時收集、整理和分析轄區(qū)內(nèi)HIV抗體檢測情況，于每季首月15日前向省級衛(wèi)生行政部門和中國疾病預(yù)防控制中心性病艾滋病預(yù)防控制中心（簡稱中國疾控中心性艾中心）參比實驗室報告.同時，按艾滋病疫情報告的有關(guān)規(guī)定上報疫情。5、在非送檢樣品中（如專項調(diào)查與研究等）發(fā)現(xiàn)的艾滋病病毒抗體陽性者，應(yīng)向所在地的省疾病預(yù)防控制中心報告，并填寫“HIV抗體確認檢測報告單”（附表3）,報中國疾控中心性艾中心參比實驗室.6、實驗室上報檢測結(jié)果的同時，應(yīng)隨時報同級監(jiān)測人員，以便及時隨訪調(diào)查。二十二、感染追蹤處理方案（一）、追蹤人群1、有明確受血或血液制品史,并排除性傳播、母嬰傳播、經(jīng)國家確證實驗室確認的艾滋病病毒抗體陽性者;2、無償獻血工作中發(fā)現(xiàn)的艾滋病病毒抗體陽性獻血人員。（二）、工作步驟3河南省鶴壁市中醫(yī)院檢驗科HIV篩查實驗室SOP文件責(zé)任部門檢驗科文件編號201405版次/頁碼第1版第3次修改 第30頁共70頁1、對供血或受血的追訪，須以健康跟蹤服務(wù)或科研的名義進行，系統(tǒng)體檢并采血預(yù)備有關(guān)的檢驗.2、對發(fā)現(xiàn)的受血艾滋病病毒感染者制定詳細的個人追蹤方案,確定追蹤人員，應(yīng)有一名近期參與治療的醫(yī)生參加。3、對供血者追蹤，由衛(wèi)生防疫機構(gòu)會同采供血機構(gòu)的專業(yè)技術(shù)人員進行。（三）、善后處理:對受血的艾滋病病毒感染者由縣衛(wèi)生防疫機構(gòu)制定專人建立健康檔案，實施預(yù)防監(jiān)護、醫(yī)療照顧和管理。并定期進行隨訪和醫(yī)療保健咨詢服務(wù).特別必要時應(yīng)告知受血感染者有關(guān)真實情況。（四）、對HIV抗體陰性者，如近期有高危行為如性亂史、吸毒史、受血史、獻血漿史,或有急性流感癥狀等情況，為排除窗口期的可能,建議每3個月復(fù)查一次，連續(xù)2次.二十三、保密程序制度1、HIV檢測實驗室的所有工作人員要具有高度的保密意識。不得對無關(guān)人員透漏任何實驗室內(nèi)部的信息。2、HIV檢測實驗室要有專人負責(zé)妥善保存與HIV/AIDS相關(guān)檢測項目的所有資料（包括送檢單、各種實驗記錄、感染者檔案、報告單的發(fā)放），不得擅自修改和銷毀。未經(jīng)省級衛(wèi)生行政部門許可，不得向無關(guān)人員或單位提供任何情況。嚴格遵守保密制度，杜絕泄密事件的發(fā)生。2、我院HIV實驗室屬于篩查實驗室,檢測的結(jié)果也不是最終結(jié)果，檢測到陽性結(jié)果應(yīng)及時啟動應(yīng)急預(yù)案，根據(jù)WHO提出的三級包裝系統(tǒng)送到上級實驗室作進一步確認。此時，不能出具HIV抗體陽性的結(jié)果報告，更不能告知受檢者本人。3、確認實驗室確認陽性結(jié)果，以機密級向送檢單位出具陽性報告；送檢單位接到報告后,由專人負責(zé)接收，并應(yīng)及時會同醫(yī)院感染科上報縣衛(wèi)生防疫站和衛(wèi)生局。在對陽性者告知檢測結(jié)果時要先做好法律、醫(yī)學(xué)、生活等方面的咨詢。4、經(jīng)確認的陽性標本，包括在實驗室留存的標本，應(yīng)送省級HIV抗體確認3河南省鶴壁市中醫(yī)院檢驗科HIV篩查實驗室SOP文件責(zé)任部門檢驗科文件編號201405版次/頁碼第1版第3次修改 第31頁共70頁中心或省級衛(wèi)生行政部門指定的單位保存,不得擅自處理。標本保存時間至少5年。5、當發(fā)生職業(yè)暴露事故后，無論職業(yè)暴露事故級別的大小，對涉及的職業(yè)暴露者，均應(yīng)注意做好保密工作。任何一個得到信息的人都要做好保密工作。保密守則：1、不該說的機密絕對不說;2、不該問的機密絕對不問；3、不該看的機密絕對不看；4、不該記錄的機密絕對不記錄；5、不在非保密本上記錄機密；6、不在私人通信中涉及機密；7、不在公共場所和家屬、子女、親友面前談?wù)摍C密；8、不在不利于保密的地方存放機密文件資料；9、不在普通電話、明碼電話、普通郵件傳達機密事項；10、不攜帶機密材料游覽、參觀、探親、訪友和出入公共場所。二十四、質(zhì)量管理制度1、根據(jù)省臨檢中心的有關(guān)規(guī)定，開展實驗室室內(nèi)的質(zhì)量控制，繪制HIV實驗室室內(nèi)質(zhì)量控制圖,包括20次OD值、S、靶值、CV%值.對室內(nèi)質(zhì)控應(yīng)每日有記錄，有每月的S、靶值、CV%值。對失控情況有糾正方法，有預(yù)防性措施.2、積極參加省臨檢中心組織的室間質(zhì)控活動，對每次質(zhì)控評價應(yīng)有記錄。3、計量儀器應(yīng)定期校正，每年一次.4、精密分析儀器由專人負責(zé)，有使用記錄和維修記錄。5、商品化的試劑盒的申購由專業(yè)組長負責(zé)申報,每月一次報科主任審批，不得使用過期，無批準文號的劣質(zhì)試劑,進貨統(tǒng)一由科室管理,自配試劑須嚴格校正后方可使用。6、建立完整的HIV篩查實驗室標準化操作程序,并應(yīng)嚴格按程序執(zhí)行。7、當日發(fā)出的全部檢驗報告單須經(jīng)當日科室總值班人員嚴格審核后方可發(fā)出.3河南省鶴壁市中醫(yī)院檢驗科HIV篩查實驗室SOP文件責(zé)任部門檢驗科文件編號201405版次/頁碼第1版第3次修改 第32頁共70頁8、科室在完成嚴格的室內(nèi)、室間質(zhì)量控制體系的同時，應(yīng)逐步建立全面質(zhì)量控制體系，對標本的采集,運送，保存等納入嚴格的管理之中.二十五、室內(nèi)質(zhì)控失控分析管理制度室內(nèi)質(zhì)控出現(xiàn)失控時,應(yīng)填寫失控報告單,并上交專業(yè)主管，由專業(yè)主管做出是否發(fā)出與測定質(zhì)控品相關(guān)的那批患者標本檢驗報告并分析及登記失控原因.失控信號的出現(xiàn)受多種因素的影響,這些因素包括操作上的失誤、試劑、校準物、質(zhì)控品的失效，儀器維護不良以及采用的質(zhì)控規(guī)則、質(zhì)控限范圍、一次測定的質(zhì)控標本數(shù)等等。失控信號一旦出現(xiàn)就意味著與測定質(zhì)控品相關(guān)的那批患者標本報告可能作廢.此時，首先要盡量查明導(dǎo)致的原因，然后再隨機挑選出一定比例（例如5—10％）的患者標本進行重新測定，最后根據(jù)既定標準判斷先前測定結(jié)果是否可接受，對失控做出恰當?shù)呐袛唷ε袛酁檎媸Э氐那闆r，應(yīng)該在重做質(zhì)控結(jié)果在控以后,對相應(yīng)的所有失控患者標本進行重新測定。如失控信號被判斷為假失控時，常規(guī)測定報告可以按原先測定結(jié)果發(fā)出,不必重做.當?shù)玫绞Э匦盘枙r，可以采用如下步驟去尋找原因：一、立即重測定同一質(zhì)控品.此步是主要是用以查明人為誤差，每一步都認真仔細操作，以查明質(zhì)控的原因；另外，這一步還可以查出偶然誤差，如是偶然誤差,則重測的結(jié)果應(yīng)控。如果重測結(jié)果仍不在允許范圍，則可以進行下一步操作.二、新開一瓶質(zhì)控品，重測失控項目。如果質(zhì)控品結(jié)果正常，那么原來那瓶質(zhì)控血清可能過期或在室溫放置時間過長而變質(zhì)或者被污染.如果結(jié)果仍不在允許范圍，則進行下一步。三、進行儀器維護,重測失控項目。檢查儀器狀態(tài),查明光源是否需要更換，比色杯是否需要清洗或更換，對儀器進行清洗等維護。另外還要檢查試劑，此時可更換試劑以查明原因.如果結(jié)果仍不在允許范圍,則進行下一步。四、重新校準，重測失控項目。用新的校準液校準儀器，排除校準液的原因。五、請實際工作經(jīng)驗豐富的工作人員或?qū)＜业膸椭Ｈ绻拔宀蕉嘉茨艿玫皆诳亟Y(jié)果，那可能是儀器或試劑的原因，只有和儀器3河南省鶴壁市中醫(yī)院檢驗科HIV篩查實驗室SOP文件責(zé)任部門檢驗科文件編號201405版次/頁碼第1版第3次修改 第33頁共70頁或試劑廠家聯(lián)系請求技術(shù)支援。二十六、外部質(zhì)控血清的制備和保存1、質(zhì)控血清的制備和保存（以ELISA試驗檢測HIV抗體為例）在每次實驗中必須包含有內(nèi)部對照質(zhì)控血清和外部對照質(zhì)控血清.（1）、內(nèi)部對照質(zhì)控血清指試劑盒內(nèi)提供的陽性和陰性對照血清。內(nèi)部對照是質(zhì)量控制的基礎(chǔ)。每一次檢測必須使用內(nèi)部對照，而且只能在同批號的試劑盒中使用.（2）、外部對照質(zhì)控血清是為了監(jiān)控檢測的重復(fù)性和穩(wěn)定性以及試劑盒批間或孔間差異而由實驗室設(shè)置的一套對照血清，包括強陽性、弱陽性和陰性對照血清。也可以只設(shè)置一個弱陽性對照,以該試劑盒臨界值（Cut-Off）的2?3倍為宜。2、外部對照質(zhì)控血清的制備HIV抗體陽性和陰性血清，56℃30min滅活,3000r/min,離心15min。弱陽性對照可以用HIV抗體陰性血清梯度稀釋HIV抗體強陽性血清并標定后得到。按一年使用量配制（可加入不影響檢測結(jié)果的防腐劑）用0.2μm濾膜過濾除菌.3、外部對照質(zhì)控血清的保存（1）、按一周實驗用量分裝、分類、標記、封口、-20℃凍存于非自動除霜冰箱中。（2）、外部對照血清不可反復(fù)凍融，一旦融化后應(yīng)該存放2~8℃，供一周內(nèi)使用.4、外部對照質(zhì)控血清的使用每一次實驗必須使用外部對照質(zhì)控血清，以便監(jiān)控實驗的重復(fù)性和穩(wěn)定性。同時可以了解各批試劑盒的批間或孔間差異，繪制質(zhì)量控制圖。5、外部對照質(zhì)控物的質(zhì)量要求質(zhì)控物的管間或瓶間變異必須小于監(jiān)測系統(tǒng)預(yù)期的變異（CV<20%=，并且質(zhì)控物的成分應(yīng)在穩(wěn)定狀態(tài)中。質(zhì)控物應(yīng)無菌，并不含有影響ELISA反應(yīng)的防腐二十七、儀器的使用維護3河南省鶴壁市中醫(yī)院檢驗科HIV篩查實驗室SOP文件責(zé)任部門檢驗科文件編號201405版次/頁碼第1版第3次修改第34頁共70頁（一）、設(shè)立常用儀器的維護及校準制度，以保證正常運轉(zhuǎn)。1、酶標讀數(shù)儀、洗板機每天：核對濾光片波長，檢查洗板機管道是否通暢,是否有漏液現(xiàn)象.每周:清潔儀器表面,保護光學(xué)零件不沾灰塵。每月:檢查洗滌時各孔是否與相應(yīng)的沖洗頭對位良好,負壓是否符合規(guī)定要求.每年：檢查、清洗濾光片,如果出現(xiàn)破裂或霉點則要更換。根據(jù)儀器內(nèi)具有的校準程序或使用校準板，對濾光片的精密度進行校準并保留記錄。實驗過程中發(fā)現(xiàn)異常情況，應(yīng)隨時進行處理，可根據(jù)使用情況更換必要的部件。2、移液器1年至少應(yīng)該標定1次，發(fā)現(xiàn)異常情況應(yīng)隨時進行校準。標定方法包括有色溶液光譜分析法、稱量校準法、同位素計數(shù)法以及使用配套校準盒等。校準多道移液器時,必須保證每一個加樣頭都能夠連續(xù)、準確地加樣。移液器的精密度應(yīng)在廠家說明書規(guī)定的范圍內(nèi)。（二）、儀器使用環(huán)境良好的工作環(huán)境不僅能確保HIV篩查實驗室的酶標儀、洗板機等儀器的準確性和穩(wěn)定性，還能夠延長其使用壽命。1、儀器應(yīng)放置在無強磁場和干擾電壓的位置。2、儀器應(yīng)放置在噪音低于40分貝的環(huán)境下。3、為延緩光學(xué)部件的老化，應(yīng)避免陽光直射。4、操作環(huán)境溫度應(yīng)在15°C-40°C之間，環(huán)境濕度在15%-85%之間.5、操作時電壓應(yīng)保持穩(wěn)定。6、操作環(huán)境空氣清潔，避免水汽、煙塵.7、保持干燥、干凈、水平的工作臺面，以及足夠的操作空間.（三）、儀器操作注意事項1、使用移液器加液，移液槍頭不能混用2、洗板要干凈，避免交叉污染。3、嚴格按照試劑盒的說明書操作，反應(yīng)時間準確。3河南省鶴壁市中醫(yī)院檢驗科HIV篩查實驗室SOP文件責(zé)任部門檢驗科文件編號201405版次/頁碼第1版第3次修改 第35頁共70頁4、請勿將樣品或試劑灑到儀器表面或內(nèi)部，操作完成注意做好清潔工作。5、不要在測量過程中關(guān)閉電源。6、對于因試劑盒問題造成的測量結(jié)果的偏差,應(yīng)根據(jù)實際情況及時修改參數(shù)，以達到最佳效果。7、使用后蓋好防塵罩。出現(xiàn)技術(shù)故障時應(yīng)及時與廠家聯(lián)系，切勿擅自拆卸酶標儀、洗板機等儀器。人類免疫缺陷病毒抗體診斷試劑盒

（酶聯(lián)免疫法）試劑廠家：英科新創(chuàng)（廈門）科技有限公司本試劑盒采用抗原夾心兩步法檢測人血清或血漿中的HIV1/HIV2型抗體。在微孔板預(yù)包被基因重組HIV（1+2）抗原,當加入的待檢測樣本中存在HIV抗體時，將反應(yīng)形成抗原抗體復(fù)合物，再與加入的酶標記基因工程HIV（1+2）抗原反應(yīng)，最后形成“固相HIV抗原-HIV抗體-酶標記HIV抗原”的免疫，復(fù)合物，加入底物后形成顯色反應(yīng).標本要求;1采用血清或血漿樣本，血漿樣本可以使用常規(guī)用量的肝素，枸櫞酸鈉或者EDTA抗凝。2樣本不能用疊氮鈉防腐，以免抑制酶的活性。3樣本保存在2—8C。如需長期保存，需置-15-20C凍存,并避免樣本反復(fù)凍融。4高血脂，高膽紅素及溶血樣本可能會影響試驗結(jié)果的準確性,建議不使用。檢驗方法：1.平衡：將試劑合各組分從盒中取出，平衡至室溫（18-25℃），微孔板開封后，余者即時以自封袋封存.2配液：濃縮洗滌液配前充分搖勻（如有晶體應(yīng)充分溶解）,濃縮洗滌液和蒸餾水或去離子水按1：19稀釋后使用。3。編號：取所需數(shù)量微孔條固定于支架，按序編號。4。加樣:按順序分別在相應(yīng)孔中加入50ul待測樣本及陰。陽性對照.5。溫育：覆上封板膜，置37℃溫育60分鐘.6。洗滌：用洗滌液充分洗滌5次，洗滌后扣干（每次應(yīng)保持30—60秒的浸泡時間）.3河南省鶴壁市中醫(yī)院檢驗科HIV篩查實驗室SOP文件責(zé)任部門檢驗科文件編號201405版次/頁碼第1版第3次修改 第36頁共70頁7。加酶：分別在每孔中加酶標抗原30分鐘。8.溫育：覆上封板膜,置37℃溫育30分鐘。9。洗滌:用洗滌液充分洗滌5次，洗滌后扣干（每次應(yīng)保持30-60秒的浸泡時間）。10。顯色：每孔加底物A,B和50ul,輕拍混勻，37℃暗置30分鐘。11.終止：每孔加入終止液50ul,混勻。12測定：用酶標儀單波長450nm或雙波長450∕630nm測定各孔OD值（用單波長測定時,需用空白對照孔調(diào)零）,并