2023年生物高考總復習第二部分考點培優(yōu)訓練 檢測案39微生物的培養(yǎng)技術及應用

課后定時檢測案39微生物的培養(yǎng)技術及應用

［基礎鞏固練］——學業(yè)水平一、二

考點一微生物的分離和培養(yǎng)

i.下列關于制備牛肉膏蛋白陳固體培養(yǎng)基的敘述，錯誤的是（）

A.操作順序為計算一稱量一溶化一倒平板一滅菌

B.將稱好的牛肉膏連同稱量紙一同放入燒杯

C.待培養(yǎng)基冷卻至50℃左右時倒平板

D.待平板冷卻凝固后將平板倒過來放置

2.下列關于“微生物的分離與培養(yǎng)”實驗的敘述，正確的是（）

A.高壓蒸汽滅菌加熱結束時，打開放氣閥使壓力表指針回到零后，開啟鍋蓋

B.倒平板時，應將打開的皿蓋放到一邊，以免培養(yǎng)基濺到皿蓋上

C.為了防止污染，接種環(huán)經火焰滅菌后應趁熱快速挑取菌落

D.用記號筆標記培養(yǎng)皿中菌落時，應標記在皿底上

3.［2022?衡水中學全國高三聯(lián)考］秸稈還田可增加土壤肥力，緩解環(huán)境污染。為分離分解

纖維素的微生物菌種，實現(xiàn)廢物的資源化利用，研究人員設計了“土壤取樣一選擇培養(yǎng)一梯度

稀釋f涂布平板一挑選菌株”的實驗流程。下列敘述錯誤的是（）

A.配制培養(yǎng)基時，應在高壓蒸汽滅菌之后調節(jié)pH

B.選擇培養(yǎng)時，應使用纖維素為唯一碳源培養(yǎng)基

C.進行梯度稀釋時，應在酒精燈火焰旁完成各種操作

D.挑選菌株后，應將使用過的培養(yǎng)基進行滅菌后再丟棄

考點二某種微生物數(shù)量的測定

4.能夠測定樣品活菌數(shù)的方法是（）

A.稀釋涂布平板法B.直接計數(shù)法

C.重量法D.比濁法

5.取9個潔凈培養(yǎng)皿，均分為三組（I、II、HI）,各組分別加入等量的不同培養(yǎng)基，每

個平板均用涂布法接種0.1mL大腸桿菌菌液，37℃培養(yǎng)3611后，統(tǒng)計菌落數(shù)（見表）。下列相

關敘述正確的是（）

1

各平板的菌落數(shù)

組別培養(yǎng)基

123

I瓊脂、C6Hl2。6、NH4NO3303127

瓊脂、C6Hl2。6、NH4NO3、維生

II169178193

素

III瓊脂、NH4NO3、維生素001

A.I組和n組說明維生素可以促進大腸桿菌生長

B.I組和III組說明大腸桿菌正常生長需要糖類物質

C.三組實驗均使用了液體培養(yǎng)基，以方便菌落計數(shù)

D.三組實驗所使用的培養(yǎng)基均需62°C、30min消毒

考點三培養(yǎng)基對微生物的選擇作用

6.通過選擇培養(yǎng)基可以從混雜的微生物群體中分離出所需的微生物。在缺乏氮源的培養(yǎng)

基上，大部分微生物無法生長；在培養(yǎng)基中加入青霉素可以抑制細菌和放線菌的生長；在培養(yǎng)

基中加入10%的酚可以抑制細菌和霉菌的生長。利用上述方法能從混雜的微生物群體中分別分

離出（）

①大腸桿菌②霉菌③放線菌④固氮細菌

A.④②③B.①②③

C.①③④D.只有③④

7.［2022.青島模擬］高溫淀粉酶在大規(guī)模工業(yè)生產中有很大的實用性。研究者從熱泉中篩

選高效產生高溫淀粉酶的嗜熱菌，其篩選過程如圖1所示。將得到的菌懸液轉接于同時含有葡

萄糖和淀粉作碳源的固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)，得到若干菌落后用碘液作顯色處理，看到如圖2所示

情況。下列分析錯誤的是（）

QR

挑出菌生周圍顯藍

eM

一①U丁色的菌落

UL周圍不顯

甲

乙

培養(yǎng)基培養(yǎng)基藍色的菌落

圖1圖2

A.過程①②合稱為稀釋涂布平板法

B.甲、乙試管中的液體均為選擇培養(yǎng)基

c.n號培養(yǎng)基上的接種方法為平板劃線法

D.圖2中周圍不顯藍色的菌落含有所需菌種

［提能強化練］.學業(yè)水平三、四

2

8.菌種M和菌種N在發(fā)酵工程應用上具有不同的優(yōu)越性，為了獲得具有它們共同優(yōu)良

性狀的融合菌，進行了下圖所示的實驗。已知菌種M為組氨酸依賴（組氨酸合成相關基因突變

為B）,菌種N為色氨酸依賴（色氨酸合成相關基因突變?yōu)锳）,下列分析錯誤的是（）

停一?產

舟）一?J―^基x篇。

A.菌種M和N可通過人工誘變和選擇性培養(yǎng)篩選獲得

B.用PEG誘導融合之前需要去除菌種M和N的細胞壁

C.在培養(yǎng)基X中添加組氨酸和色氨酸以篩選出雜種融合菌

D.從培養(yǎng)基X中分離出的雜種融合菌P對兩種氨基酸均不依賴

9.幽門螺桿菌（含有胭酶）感染是急慢性胃炎和消化性潰瘍的主要致病因素。在患者體內

采集樣本并制成菌液后，進行分離培養(yǎng)。下列有關敘述不正確的是（）

A.分離純化幽門螺桿菌時應使用以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基

B.鑒別幽門螺桿菌時應在培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑和緩沖物質

C.可用牛肉膏蛋白陳培養(yǎng)基作對照證明選擇培養(yǎng)基的選擇作用

D.對幽門螺桿菌進行分離和計數(shù)可用稀釋涂布平板法

10.養(yǎng)殖池中存在的有毒物質主要是氨及亞硝酸，這兩種物質可被硝化細菌吸收利用。在

“養(yǎng)殖池底泥中硝化細菌的分離與計數(shù)”實驗中，下列說法正確的是（）

A.需要配制添加一定濃度錢鹽的牛肉膏蛋白陳培養(yǎng)基，以篩選硝化細菌

B.應對采集底泥使用的工具進行滅菌，全部接種過程均需在酒精燈火焰旁進行

C.可以采用平板劃線法進行接種，還需與未接種的空白培養(yǎng)基同時培養(yǎng)

D.應將接種后的培養(yǎng)皿放在光照培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，原因是硝化細菌為自養(yǎng)微生物

11.苯酚是工業(yè)生產排放的有毒污染物質，自然界中存在著降解苯酚的微生物。某工廠產

生的廢水中含有苯酚，為了降解廢水中的苯酚，研究人員從土壤中篩選獲得了只能降解利用苯

酚的細菌菌株，篩選的主要步驟如圖所示，①為土壤樣品。下列相關敘述不正確的是（）

A.使用平板劃線法可以在⑥上獲得單個菌落

B.如果要測定②中活細菌數(shù)量，常采用平板劃線法

3

C.圖中②培養(yǎng)目的菌株的選擇培養(yǎng)基中應加入苯酚作為唯一碳源

D.微生物培養(yǎng)前，需對培養(yǎng)基和培養(yǎng)器皿進行滅菌處理

12.研究者分別將B半乳糖昔酶基因和四環(huán)素降解酶基因轉入大腸桿菌中，獲得了能利用

乳糖和對四環(huán)素有抗性的兩種大腸桿菌。將兩種菌單獨接種于特定的選擇培養(yǎng)基中培養(yǎng)，兩種

菌均不能生長；但將兩種菌混合接種于該培養(yǎng)基中，兩種菌均能生長。下列說法不正確的是

()

A.需選擇不能利用乳糖并對四環(huán)素無抗性的大腸桿菌作為受體

B.該實驗可選用添加有四環(huán)素并以乳糖為唯一碳源的培養(yǎng)基進行培養(yǎng)

C.含四環(huán)素降解酶基因的大腸桿菌可通過降解四環(huán)素獲取物質和能量用于生長

D.兩種菌混合培養(yǎng)時，兩種菌的代謝分別為對方提供生存條件

13.經人工誘變獲得的天冬氨酸缺陷型菌株，菌體自身不能合成天冬氨酸，必須從外界環(huán)

境中獲取天冬氨酸才能生長繁殖。如圖是科研人員利用“影印法”篩選天冬氨酸缺陷型菌株的

部分過程(注：基本培養(yǎng)基中不含氨基酸，完全培養(yǎng)基中含所有種類的氨基酸)?；卮鹣铝袉栴}：

無菌的絲絨布

揭起絲絨布

經誘變處待測絲絨布

理的菌液培養(yǎng)皿吸附菌體

完全培養(yǎng)基

(1)過程①接種時，必需使用的工具是;待測培養(yǎng)皿中的培養(yǎng)基是(填“基

本”或“完全”)培養(yǎng)基。

(2)過程②是將印在同一塊絲絨布上的菌落，先后轉印至兩個不同的平板上。該過程應該

先轉印到培養(yǎng)基上，原因是

(3)經過程②，完全培養(yǎng)基上出現(xiàn)的菌落A和菌落B中，不可能含天冬氨酸缺陷型菌株的

是________菌落。為了進一步鑒定篩選到的菌株確實是天冬氨酸缺陷型菌株，科研人員又制備

了甲、乙兩個平板，這兩個平板培養(yǎng)基中營養(yǎng)成分的差異是0

(4)下列對上述“影印法”篩選天冬氨酸缺陷型菌株過程的敘述，錯誤的是o(填

字母)

4

A.過程①接種前還需對菌液進行梯度稀釋，每次接種時取菌液0.1mL

B.過程①、②中菌落培養(yǎng)時應將平板倒置并放在28℃恒溫培養(yǎng)箱中

C.過程②絲絨布在兩個培養(yǎng)基上覆蓋的方向和角度可不必相同

D.影印和接種等操作均最好在超凈臺的酒精燈火焰旁進行

14.［2021?四川省遂寧市高三三診］幽門螺桿菌(Hp菌)因為其導致胃痛、胃癌，成為最臭名

昭著的細菌之一。它是一種異養(yǎng)微厭氧菌，胃里面還有胃酸(pH為1.5左右)，絕大部分的細菌

都適應不了。在患者體內采集樣本并制成菌液后，進行分離培養(yǎng)。實驗基本步驟如下：

患者取樣麗羸］一廊度麗~展祎］一隔弄1T計數(shù)觀察I

請回答下列問題：

(1)上述培養(yǎng)過程中，能夠“濃縮”幽門螺桿菌的步驟是o梯度稀釋操作

時如何防止雜菌污染：

(2)有的化工廠會產生尿素廢水，研究者提出用幽門螺桿菌來處理廢水，如果該方法可行，

根據(jù)題干信息可知，該處理過程對溫度和氧氣的要求是

(3)實踐證明有一種尿素分解菌比幽門螺桿菌處理尿素廢水的能力強很多，最可能的原因

是前者比后者產生的多。

(4)為了證明不分餐能導致胃幽門螺桿菌交叉?zhèn)鞑?，研究者提取了某胃炎患者家庭?00g

剩菜，加入無菌水稀釋。取上述稀釋液分別接種到3個適宜的培養(yǎng)基中置于適宜的條件下進行

培養(yǎng)，三個平板上胃幽門螺桿菌菌落數(shù)均介于30?300之間且相差不大，求平均值得到菌落數(shù)

為B個。根據(jù)上述情景不能計算出每克剩菜中的幽門螺桿菌的數(shù)量，原因是

15.微生物的生長繁殖需要不同種類的碳源、氮源、無機鹽、生長因子等營養(yǎng)物質，若培

養(yǎng)基中的某種營養(yǎng)物質不能被微生物利用，微生物便不能生長。根據(jù)這一特性，可將微生物接

種在只缺少某種營養(yǎng)物質的基礎培養(yǎng)基中，再將所缺的營養(yǎng)物質點植于平板上，該營養(yǎng)物質便

逐漸擴散于點植周圍。該微生物若需要此種營養(yǎng)物質，便在這種營養(yǎng)物質擴散處生長繁殖，形

成肉眼可見的菌落圈，這種測定微生物營養(yǎng)需求的方法稱為生長譜法。某興趣小組嘗試用生長

譜法測定某種大腸桿菌對糖類(碳源)的需求情況，操作流程如下：

5

I.培養(yǎng)基的制備。該小組所用無碳培養(yǎng)基配方如下(加水定容至1L)：

成分瓊脂

NaClKH2PO4K2HPO4(NH4)2SO4MgSO4-7H2O

質量/g10.50.520.220

同時配制質量分數(shù)為10%的葡萄糖、麥芽糖、蔗糖、乳糖溶液各50mL。

II.將大腸桿菌懸液與溶化并冷卻至50℃的固體培養(yǎng)基混勻，倒平板。

III.將已凝固的平板背面用記號筆劃分為四個區(qū)，并注明要點植的糖類名稱。

IV.通過無菌操作分別加入蘸有不同糖類的無菌濾紙片，待平板吸收干燥后倒置培養(yǎng)24小

時。

結合所學知識回答相關的問題：

(1)無碳培養(yǎng)基配方中加入(NH4)2SO4的目的是。對培養(yǎng)基及糖溶液通常采用

的滅菌方法是。倒平板后用法進行接種。

(2)該小組發(fā)現(xiàn)最終在培養(yǎng)基的四個區(qū)內均有菌落圈產生，但大小不同，據(jù)此得到的初步

結論是。______________________________________________________________________________

(3)如果在此實驗中發(fā)現(xiàn)某一不被該大腸桿菌利用的碳源的點植區(qū)域也長出菌落圈，試分

析可能的原因：o(寫出2條即可)

(4)生長譜法還可用于某些營養(yǎng)缺陷型菌株(失去合成某種生長因子能力的菌株)的篩選和

鑒定，例如，大腸桿菌經紫外線誘變處理后會產生一些營養(yǎng)缺陷型突變個體，現(xiàn)己純化并制備

出某營養(yǎng)缺陷型的菌懸液，但不清楚是氨基酸缺陷型、維生素缺陷型還是氨基酸維生素缺陷型,

請簡要寫出用生長譜法進行鑒定的思路，并預期可能的結果及結論。

課后定時檢測案39

i.解析：制備牛肉膏蛋白豚固體培養(yǎng)基的步驟是：計算稱量-溶化滅菌-倒平板，

其順序不能顛倒；牛肉膏容易吸潮，所以稱好后需將稱量紙一同放入燒杯，當牛肉膏溶化并與

稱量紙分離后，用玻璃棒取出稱量紙；待培養(yǎng)基冷卻到50℃左右，用手觸摸錐形瓶剛剛不燙

6

手，并且培養(yǎng)基處于溶化狀態(tài)時開始倒平板，平板冷卻凝固后才能倒置。

答案：A

2.解析：在高壓蒸汽滅菌的操作過程中，加熱結束后應讓滅菌鍋內溫度自然下降，待壓

力表的指針指到零時，打開放氣閥，旋松螺栓，打開蓋子；倒平板時，用左手將培養(yǎng)皿打開一

條稍大于瓶口的縫隙，而不是完全取下放到一邊；接種環(huán)經火焰灼燒滅菌后應在火焰旁冷卻后，

再用其挑取菌落；在微生物的培養(yǎng)中，一般將培養(yǎng)皿倒置，在皿底上用記號筆做標記。

答案：D

3.解析：配制培養(yǎng)基時，應在高壓蒸汽滅菌之前調節(jié)pH,避免滅菌之后調pH造成雜菌

污染，A錯誤；選擇培養(yǎng)時，為分離分解纖維素的微生物菌種，應使用纖維素為唯一碳源的培

養(yǎng)基，B正確；進行梯度稀釋時，為了無菌操作，應在酒精燈火焰旁完成各種操作，C正確；

挑選菌株后，為了防止造成污染，應將使用過的培養(yǎng)基進行滅菌后再丟棄，D正確。

答案：A

4.解析：利用稀釋涂布平板法能夠在不影響細菌生存的情況下將細菌從固體培養(yǎng)基上分

離出來，并可根據(jù)菌落數(shù)測定出樣品活菌數(shù)，A正確。直接計數(shù)法是利用特定的計數(shù)板，在顯

微鏡下計算一定容積內樣品中微生物的數(shù)量，不能區(qū)分死菌與活菌；質量法是用于微生物生長

測定的一種方法，有濕重法和干重法，也可以通過對蛋白質和DNA含量的測定以反應細胞的

物質質量；比濁法是在一定范圍內，懸液中細胞濃度與混濁度成正比，即與光密度成正比，菌

越多，光密度越大；活菌在適宜培養(yǎng)基和良好生長條件下通過生長形成菌落，此法又稱活菌計

數(shù)法，可采用稀釋涂布平板法接種。

答案：A

5.解析：由表格分析可知，I組和H組說明維生素可以促進大腸桿菌生長；II組和III組

作對照，自變量是葡萄糖的有無，說明大腸桿菌正常生長需要葡萄糖；由題意可知，每個平板

都含有瓊脂，屬于固體培養(yǎng)基；三組實驗所使用的培養(yǎng)基均需高壓蒸汽滅菌。

答案：A

6.解析：缺乏氮源的培養(yǎng)基上大部分微生物無法生長，而固氮細菌能生長；在培養(yǎng)基中

加青霉素可以抑制細菌和放線菌等原核生物細胞壁的合成，而霉菌屬于真核生物，故能生長;

在培養(yǎng)基中加入10%的酚可以抑制細菌和霉菌的生長，對放線菌的生長無影響。

答案：A

7.解析：根據(jù)I號培養(yǎng)基上菌落分布均勻可知，①②過程為稀釋涂布平板法，A正確；

甲、乙試管中的液體是用于樣品稀釋，應為無菌水，B錯誤；由n號培養(yǎng)基上的劃線區(qū)域可知，

7

從I號培養(yǎng)基上挑選的菌落進行接種的方法是平板劃線法，c正確；淀粉與碘液反應呈藍色，

但如果淀粉分解菌中的淀粉酶將淀粉水解后就不能呈藍色，因此周圍不顯藍色的菌落含有所需

菌種，D正確。

答案：B

8.解析：人工誘變可獲得不同類型的突變體，再利用選擇培養(yǎng)基從中選取組氨酸依賴型

和色氨酸依賴型的菌種，即為M、N菌種，A正確；M、N菌均為有細胞結構的微生物，再由

圖示流程可知，M、N菌經處理后得到與之前形態(tài)不同的原生質體，再用PEG處理，B正確；

培養(yǎng)基X篩選的菌種是M菌和N菌融合后的細胞，同時含有M、N兩種菌的基因，即基因型

為A+B+,故培養(yǎng)基X中不應添加組氨酸和色氨酸，C錯誤；培養(yǎng)基X篩選的菌種是M菌和

N菌融合后的細胞，同時含有M、N兩種菌的基因，即基因型為A'B，,對組氨酸和色氨酸均

不依賴，D正確。

答案：C

9.解析：幽門螺桿菌合成腺酶，可以利用尿素，所以分離純化幽門螺桿菌時應使用以尿

素為唯一氮源的培養(yǎng)基，A正確；鑒別幽門螺桿菌時應在培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，但不能加

緩沖物質，B錯誤；為了證明選擇培養(yǎng)基的選擇作用，可用牛肉膏蛋白陳培養(yǎng)基作對照，C正

確；對幽門螺桿菌進行分離和計數(shù)可用稀釋涂布平板法，D正確。

答案：B

10.解析：要分離硝化細菌，應該用以鐵鹽為唯一氮源的培養(yǎng)基，培養(yǎng)基中不能加入牛肉

膏、蛋白腺，A錯誤；獲得純凈培養(yǎng)物的關鍵是防止外來雜菌污染，因此，應對采集底泥使用

的工具進行滅菌，全部接種過程均需在酒精燈火焰旁進行，B正確；對微生物進行計數(shù)時應該

采用的接種方法是稀釋涂布平板法，C錯誤；硝化細菌能進行化能合成作用，不能利用光能,

故不需在光照培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，D錯誤。

答案：B

11.解析：分析題圖可知，實驗經過選擇培養(yǎng)基培養(yǎng)獲得目的菌株，然后經過⑤的純化培

養(yǎng)，使用平板劃線法可以在⑥上獲得單個菌落，A正確；如果要測定②中的活細菌數(shù)量，常采

用稀釋涂布平板法，B錯誤；要篩選獲得能降解利用苯酚的細菌菌株，圖中②培養(yǎng)目的菌株的

選擇培養(yǎng)基中應加入苯酚作為唯一碳源，C正確；微生物培養(yǎng)前，需對培養(yǎng)基和培養(yǎng)器皿進行

嚴格的滅菌處理，D正確。

答案：B

12.解析：根據(jù)題意可知，轉基因后獲得了能利用乳糖和對四環(huán)素有抗性的兩種大腸桿菌，

8

因此可推測轉基因的受體菌為不能利用乳糖并對四環(huán)素無抗性的大腸桿菌，A正確；該實驗可

選用添加有四環(huán)素并以乳糖為唯一碳源的培養(yǎng)基進行培養(yǎng)，從而將兩組轉基因的大腸桿菌選擇

出來，B正確；含四環(huán)素降解酶基因的大腸桿菌可通過降解四環(huán)素而破壞四環(huán)素的結構，避免

了四環(huán)素對自身的傷害,C錯誤；兩種菌混合培養(yǎng)時，兩種菌的代謝分別為對方提供生存條件，

從而實現(xiàn)了共同生長，D正確。

答案：C

13.解析：（1）從圖中看出，過程①后菌落均勻分布，因此采用的接種方法為稀釋涂布平

板法，所用的接種工具是涂布器；根據(jù)圖中結果可知，待測培養(yǎng)皿中的菌落分布與完全培養(yǎng)基

中相同，可見待測培養(yǎng)皿中是完全培養(yǎng)基。（2）過程②應將印在絲絨布上的菌落先轉印至基本

培養(yǎng)基上，原因是防止基本培養(yǎng)基中混入特殊的營養(yǎng)成分。（3）比較基本培養(yǎng)基和完全培養(yǎng)基

中的菌落可知，B菌落在基本培養(yǎng)基上能生長繁殖，說明它能合成天冬氨酸，不可能是天冬氨

酸缺陷型菌株。為了進一步鑒定篩選到的菌株確實是天冬氨酸缺陷型菌株，對照實驗的兩個平

板中營養(yǎng)成分的差異是是否含有天冬氨酸，接種后若兩個平板中菌落的生長情況是含有天冬氨

酸的平板上生長有菌落，另一個平板上不能生長，則說明該菌株是天冬氨酸缺陷型菌株。（4）

過程①接種前還需對菌液進行梯度稀釋，每次接種時取菌液0.1mL,A正確；過程①、②中

菌落培養(yǎng)時應將平板倒置并放在28℃恒溫培養(yǎng)箱中，B正確；過程②絲絨布在兩個培養(yǎng)基上

覆蓋的方向和角度都要相同，C錯誤；影印和接種等操作均最好在超凈臺的酒精燈火焰旁進行,

D正確。

答案：（1）涂布器完全（2）基本防止基本培養(yǎng)基中混入特殊的營養(yǎng)成分（3）B是否

含有天冬氨酸（4）C

14.解析：（1）據(jù)圖分析可知，“選擇培養(yǎng)”為“濃縮”幽門螺桿菌的過程。梯度稀釋操

作時，無菌操作很關鍵，要注意試管口和移液管應該在離火焰1?2cm處（或者火焰附近）進行

實驗操作。（2）胃幽門螺桿菌是一種異養(yǎng)微厭氧菌，生活環(huán)境具有胃酸（pH為1.5左右），故用幽

門螺桿菌來處理廢水應該在37℃左右、低氧（或無氧）環(huán)境中進行。（3