新生兒九項(xiàng)耳聾基因篩查試劑盒說明書

2.64人份/221110μl/11100μl/B1260μl/1260μl/1520μl/160μl/11600μl/每一個子陣列可以檢測一份樣品。子陣列中的探針排布如圖1所示，排布說明見表3。圖1.微陣列探針排布（排布說明見表3.EDTA或枸櫞酸鈉等，不得以肝素抗凝；被檢者服藥情況、飲食及健康狀態(tài)不影響標(biāo)本和結(jié)果檢組DNA提33mm干血斑，采用濾紙干血ng/μl。提取后的人組DNA需進(jìn)行濃度測定，滿足上述要求方可進(jìn)血液的保存：的血液在2-8℃保存不應(yīng)超過一周；-20℃保存不應(yīng)超 16μlNaOH(10N1584μl純化水中，輕微渦漩混勻，得到變性液，可滿足24人份檢測。，50I：SSC0.3×，SDS0.1%。以配制總量混勻。再加入20ml10%SDS，混勻。PCR在PCR配液實(shí)驗(yàn)區(qū)內(nèi)，按照被檢樣品數(shù)目的兩倍（兩套管分別用來檢測同一個樣品的不同位點(diǎn)）準(zhǔn)備200μl離心管，并在管上標(biāo)記樣品編號，兩套管須一一對應(yīng)。從試劑盒中取出PCR擴(kuò)增引物混合物（A、B號管，，以純化水為模板的空白對照，以環(huán)境及操作過程中的污染情況。該操作需要增加相應(yīng)離心管和PCR反應(yīng)混合物的份數(shù)。4中的比例取出PCR擴(kuò)增引物混合物（A、B號管）和PCR擴(kuò)增試劑混合物，分別充分混合后，按每份20μl進(jìn)行分裝。所需的份數(shù)，建議適當(dāng)放大配制體積。例88.5在PCR擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)區(qū)內(nèi)，向每管混合物中加入5μl樣品組DNA（或?qū)φ掌贰⒓兓甈CR擴(kuò)增的模板。每份PCR254.PCR1231235.PCR4-11111本PCR程序應(yīng)用了PCRRAMP功能設(shè)定升降溫速率，總反應(yīng)時間約為3小時。200μl離心管置于磁力架上，離心管磁力架，再加入20μl結(jié)合緩沖液，渦漩混勻。241.5ml510μl×20μl）結(jié)合緩沖液，再加入102μl磁珠（25.5×4μl）， 磁力架，再加入510μl結(jié)合緩沖液向離心管中加入A體系和B10μlPCR10min。置于磁力架上，靜置吸附15秒，去除溶液，磁力架。再加入60μl靜置吸附15秒，去除溶液，磁力架。 圖 圖 每個微陣列限加一份樣品，記錄編號、微陣列位置及對應(yīng)的樣品編片上，14l/陣列（見圖4。迅速蓋上雜交盒上蓋，并密封（見圖全部放入后計時，雜交儀參數(shù)為15rpm，50℃，1小時。圖 圖從加樣開始至干 之前的任何一個環(huán)節(jié)中，均應(yīng)避 II，4221min3。將洗滌液Ⅰ和洗滌液Ⅱ槽內(nèi)，洗干儀提示放入。 使用晶芯?LuxScan?10K-B微陣列掃描儀和晶芯?耳聾分析系統(tǒng)（微陣列法）進(jìn)行信號及判斷。具體操作見掃描儀及軟檢測結(jié)果由晶芯?耳聾分析系統(tǒng)（微陣列法）cutoff值時，判斷該探針為陽性；當(dāng)探針的檢測信號值小于該探針的cutoff值時，判斷該探針為。試劑盒中各探針cutoff值已經(jīng)整合到晶芯?耳聾分析系統(tǒng)（微陣列BCQC、MCPC出現(xiàn)陽性信號，軟件提示無檢測樣品，如圖7所示。6對照品：各位點(diǎn)野生型7空白對照：各位點(diǎn)每一個位點(diǎn)的檢測結(jié)果可能有以下三種情況出現(xiàn)（235delC位點(diǎn)檢測結(jié)果為例：W為陽性，檢測探針M為，軟件判讀該位點(diǎn)為野生型，表示該份樣品上的兩條等位上的該位點(diǎn)均未發(fā)生突變，檢測結(jié)果如圖8所示；8235delCW為，檢測探針M為陽性，軟件判讀該位點(diǎn)為純合突變型，表示該份樣品上的兩條等位上的該位點(diǎn)均發(fā)生了突變，檢測結(jié)果如圖9所示；9235delC位點(diǎn)和1555位點(diǎn)檢測探針W為，檢測探針M為陽性，軟件判讀該位點(diǎn)為均質(zhì)突變型，表示線粒體中12SrRNA上的該位點(diǎn)均發(fā)位點(diǎn)檢測探針WM均為陽性，軟件判讀該位點(diǎn)為雜合突變型，表示該份樣品上的兩條等位中一條等位上的該位點(diǎn)發(fā)生10235delC1555位點(diǎn)WM同時為陽性，軟件判讀該位點(diǎn)為異質(zhì)突變型，表示線粒體中部分12SrRNA上的該位點(diǎn)發(fā)生沒有檢測到任何點(diǎn)的信號，包括QC探針檢查及其插入方掃描一張未使用過的芯核對洗滌液配制記核對洗滌液配制記QC、MCPC探針的信號，沒有IC探針的信號PCR核對PCR某些位點(diǎn)檢測探針無PCR核對PCR對樣品進(jìn)本試劑盒檢測對象為遺傳性耳聾相關(guān)常見突變位點(diǎn)，共計9個，并為野生型時，并不能排除被檢測者帶有與遺傳性耳聾相關(guān)的其他突9個位點(diǎn)的野生型和突變型，試劑盒對與人無關(guān)的組DNA無交叉反應(yīng)。手套、；所有直接接觸過血液的物品應(yīng)進(jìn)行后丟棄或再PCR操作應(yīng)嚴(yán)格按照國家有關(guān)規(guī)定進(jìn)行嚴(yán)格分區(qū)，以防止交叉污染。配制PCR反應(yīng)混合物應(yīng)在PCR配液區(qū)內(nèi)進(jìn)行，PCR配液區(qū)應(yīng)為干凈環(huán)境；KasugaT,etal.Metastablesingle-strandDNAconformationalpolymorphismysisresultsinenhancedpolymorphismdetection.PCRMethodsandApplications,1995,4:GaoHF,etal.ComparisonofdifferentmethodsforpreparingsinglestrandedDNAforoligonucleotidemicroarray.yticalLetters,2003,33:2849-2863.ZhaoH,etal.Maternallyinheritedaminoglycoside-inducedandnonsyndro-micdeafnessisassociatedwiththenovelC1494Tmutationinthemitochondrial12SrRNAgeneinalarge family.AmericanJournalofHumanGenetics,2004,74:139-152.LiCX,etal.Constructionofamultiplexallele-specificPCR-baseduniversalarray(AS)anditsapplicationtohearinglossscreening.Humanmutation,2008,2:306-314.ZhangGB,etal.Validationofa phone-assistedmicroarraydecodingtformforsignal-enhancedmutationdetection.BiosensorsandBioelec-tronics,2011,15:4708-4714.曹菊陽，