干細(xì)胞臨床應(yīng)用

人類許多重大疾病如糖尿病、帕金森氏癥、亨廷頓氏癥都與關(guān)鍵細(xì)胞或器官的不可逆損傷有關(guān)；世界上每天都有數(shù)以十萬計(jì)的嚴(yán)重腎臟衰竭病人、心臟衰竭病人掙扎在生死線上，等待器官更換。然而，現(xiàn)行的器官移植卻存在諸多的問題，如：供體器官資源緊缺；傳統(tǒng)的器官移植方法造價(jià)昂貴；傳統(tǒng)的器官移植存在異體排斥等等?，F(xiàn)在是1頁\一共有123頁\編輯于星期一科學(xué)家們一直希望找到一種辦法，在體外開設(shè)自身身體部件的“生產(chǎn)車間”，利用自己的材料，為自己生產(chǎn)“零部件”，以用于衰老、壞死、損傷組織或器官的替換。但是，生命好像在和我們開玩笑：癌癥細(xì)胞可以穩(wěn)定而持續(xù)地增長(zhǎng)；而健康的、正常的細(xì)胞離開身體后，很難有效地繁殖。現(xiàn)在是2頁\一共有123頁\編輯于星期一干細(xì)胞研究的突破性進(jìn)展為生命開拓了新的契機(jī)

現(xiàn)在是3頁\一共有123頁\編輯于星期一

StemCell第一節(jié)干細(xì)胞生物學(xué)第二節(jié)干細(xì)胞的臨床應(yīng)用和研究狀況4現(xiàn)在是4頁\一共有123頁\編輯于星期一MEDICALCELLBIOLOGYMEDICALCELLBIOLOGY5

一、WhatisStemCell?

是具有自我更新、高度增殖和多向分化潛能的細(xì)胞群體，即這些細(xì)胞可通過分裂維持自身細(xì)胞的特性和大小，又可進(jìn)一步分化為各種組織細(xì)胞，從而在組織修復(fù)等方面發(fā)揮積極作用。現(xiàn)在是5頁\一共有123頁\編輯于星期一6

二.干細(xì)胞特性1.干細(xì)胞的形態(tài)和生化特點(diǎn)形態(tài)特點(diǎn)：圓形或橢圓形，體積較小，核質(zhì)比較大，核中多為常染色體。

生化特點(diǎn)：a.具有較高端粒酶活性;b.具有不同的生化標(biāo)志：角蛋白15、nestin（巢素蛋白）。現(xiàn)在是6頁\一共有123頁\編輯于星期一

2，干細(xì)胞的增殖特點(diǎn)

能力強(qiáng)：高度增殖是干細(xì)胞生物學(xué)特性之一。自穩(wěn)性：會(huì)自我更新維持自身數(shù)目的恒定。（self-maintenance）7干細(xì)胞維持自穩(wěn)性的機(jī)制：對(duì)稱分裂和不對(duì)稱分裂

現(xiàn)在是7頁\一共有123頁\編輯于星期一

8

干細(xì)胞的對(duì)稱分裂和不對(duì)稱分裂對(duì)稱分裂（symmetrydivision）不對(duì)稱分裂（asymmetrydivision）干細(xì)胞

分化細(xì)胞

干細(xì)胞

分化細(xì)胞現(xiàn)在是8頁\一共有123頁\編輯于星期一9

3，干細(xì)胞的分化特點(diǎn)

1）.多潛能性現(xiàn)在是9頁\一共有123頁\編輯于星期一10

在不同生長(zhǎng)因子刺激下干細(xì)胞可表現(xiàn)出不同分化潛能現(xiàn)在是10頁\一共有123頁\編輯于星期一11

（內(nèi)胚層）

胃上皮（中胚層）

骨、軟骨、平滑肌、橫紋肌（外胚層）

神經(jīng)表皮、神經(jīng)節(jié)、復(fù)層鱗狀上皮人胚胎干細(xì)胞具分化的多潛能性

小鼠皮下注射

混合組織人胚胎干細(xì)胞現(xiàn)在是11頁\一共有123頁\編輯于星期一12

（1）去分化

一種干細(xì)胞向其前體細(xì)胞的逆向轉(zhuǎn)化的過程。2）.去分化和轉(zhuǎn)分化的能力現(xiàn)在是12頁\一共有123頁\編輯于星期一（2）轉(zhuǎn)分化（transdifferentiation）

一種組織類型的干細(xì)胞在適當(dāng)條件下分化為另一種組織類型細(xì)胞的過程。

例一：將成年雄性小鼠的造血干細(xì)胞移植到雌鼠體內(nèi)，3天后在雌鼠的神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞中檢測(cè)到Y(jié)染色體的存在，證明成體動(dòng)物的造血干細(xì)胞可轉(zhuǎn)分化成為神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞。現(xiàn)在是13頁\一共有123頁\編輯于星期一14

例二：造血干細(xì)胞向骨骼肌細(xì)胞的轉(zhuǎn)分化現(xiàn)在是14頁\一共有123頁\編輯于星期一全能干細(xì)胞多能干細(xì)胞單能干細(xì)胞按分化潛能按發(fā)育狀態(tài)(來源)胚胎干細(xì)胞embryostemcell成體干細(xì)胞三，干細(xì)胞的分類現(xiàn)在是15頁\一共有123頁\編輯于星期一全能干細(xì)胞（Totipotentstemcell）

是指具有無限分化潛能,能分化成所有組織和器官的干細(xì)胞。換句話說,也就是具有形成完整個(gè)體分化潛能。16現(xiàn)在是16頁\一共有123頁\編輯于星期一多能干細(xì)胞：（pluripotentstemcell）具有分化出多種細(xì)胞組織的潛能。如造血干細(xì)胞、神經(jīng)干細(xì)胞。單能干細(xì)胞：（multipotentstemcell）只能向一種或兩種密切相關(guān)的細(xì)胞類型分化。如上皮組織基底層的干細(xì)胞，肌肉中的成肌細(xì)胞。17現(xiàn)在是17頁\一共有123頁\編輯于星期一多能干細(xì)胞具有增殖、分化兩種功能。

例如骨髓造血干細(xì)胞就是典型的多能干細(xì)胞。造血干細(xì)胞一般條件下處于休止?fàn)顟B(tài)(Go期)，一定條件下能大量增殖、分化，然后由定向干細(xì)胞再分化成血液中至少12種類型的血細(xì)胞。18現(xiàn)在是18頁\一共有123頁\編輯于星期一現(xiàn)在是19頁\一共有123頁\編輯于星期一二.干細(xì)胞來源上分:來源于胚胎---胚胎干細(xì)胞ESC

（EmbryonicStemCell）胚胎性生殖細(xì)胞EGC

（EmbryonicGermCell）來源于成體---成體組織來源的干細(xì)胞ASC（Adult-derivedStemCell）20現(xiàn)在是20頁\一共有123頁\編輯于星期一1981年，最早埃文斯(Evans)和考夫曼(Kaufman)從小鼠早期胚胎中分離出胚胎干細(xì)胞并在體外培養(yǎng)建立細(xì)胞系。1995年，美國(guó)從恒河猴囊胚中分離并克隆建立了第一個(gè)靈長(zhǎng)類動(dòng)物的胚胎干細(xì)胞系(一)胚胎干細(xì)胞現(xiàn)在是21頁\一共有123頁\編輯于星期一現(xiàn)在是22頁\一共有123頁\編輯于星期一體細(xì)胞核移植（SCNT）是得到多能性干細(xì)胞的另一種途徑現(xiàn)在是23頁\一共有123頁\編輯于星期一成體誘導(dǎo)干細(xì)胞（iPS）現(xiàn)在是24頁\一共有123頁\編輯于星期一誘導(dǎo)產(chǎn)生的多功能性干細(xì)胞2006年，Takahashi和Yamnaka將幾個(gè)轉(zhuǎn)錄因子導(dǎo)入已分化的小鼠皮膚成纖維細(xì)胞，進(jìn)而獲得了類似于胚胎干細(xì)胞的多能性干細(xì)胞，稱之為“誘導(dǎo)產(chǎn)生的多功能性干細(xì)胞”（inducedpluripotentstemcells,iPS細(xì)胞）。這一研究明確地證實(shí)了分化的細(xì)胞可以通過少數(shù)幾個(gè)因子的外源導(dǎo)入而被重編程到具有多能性的狀態(tài)，因而受到了整個(gè)生命科學(xué)領(lǐng)域的廣泛關(guān)注?，F(xiàn)在是25頁\一共有123頁\編輯于星期一1.胚胎干細(xì)胞（embryonicstemcell,ES細(xì)胞）ESC定義：指從著床前的內(nèi)細(xì)胞團(tuán)或原始生殖細(xì)胞獲得的一種具有多潛能性、可發(fā)育成為各種細(xì)胞、同時(shí)可保持不分化狀態(tài)而持續(xù)生長(zhǎng)的克隆細(xì)胞系。經(jīng)體外分化抑制培養(yǎng)分離的一種全能性細(xì)胞?？梢苑只扇魏我环N組織類型的細(xì)胞。26現(xiàn)在是26頁\一共有123頁\編輯于星期一2.胚胎干細(xì)胞的生物學(xué)特性

(1)ES細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)與核型：

各種動(dòng)物的ES細(xì)胞具有與早期胚胎細(xì)胞相似的形態(tài)結(jié)構(gòu)，細(xì)胞體積小、核大、有1個(gè)或多個(gè)核仁。

27現(xiàn)在是27頁\一共有123頁\編輯于星期一

(2)ES細(xì)胞的生長(zhǎng)特性：增殖速度：18－24h分裂增殖一次

hES必須在含有白血病抑制因子（LIF）的培養(yǎng)基保持不分化狀態(tài)。28現(xiàn)在是28頁\一共有123頁\編輯于星期一鳥巢狀生長(zhǎng)保持未分化的ES細(xì)胞

第一個(gè)人體胚胎干細(xì)胞（ES細(xì)胞)29現(xiàn)在是29頁\一共有123頁\編輯于星期一30現(xiàn)在是30頁\一共有123頁\編輯于星期一

(3)ES細(xì)胞高度分化潛能：

現(xiàn)在是31頁\一共有123頁\編輯于星期一（二）成體干細(xì)胞1.定義：存在于成人各種組織中，具有自我更新和向前分化為一種或多種成熟功能細(xì)胞的幼稚細(xì)胞。意義：1.負(fù)責(zé)更新死亡細(xì)胞，維持正常個(gè)體、組織、器官的結(jié)構(gòu)和功能的完整性。2.病例情況下，負(fù)責(zé)分化和增殖，修復(fù)組織損傷。32現(xiàn)在是32頁\一共有123頁\編輯于星期一2.成體干細(xì)胞的生物學(xué)特性：（1）具有自我更新和分化潛能（2）數(shù)量少（3）存在于特定的微環(huán)境中（4）處于相對(duì)靜止?fàn)顟B(tài)（5）體積小，細(xì)胞漿少，細(xì)胞核較大（6）成體干細(xì)胞的數(shù)量和活性隨年齡增加而減少現(xiàn)在是33頁\一共有123頁\編輯于星期一3.成體干細(xì)胞的分布現(xiàn)在是34頁\一共有123頁\編輯于星期一胚胎干細(xì)胞成體干細(xì)胞①來自胚泡的內(nèi)細(xì)胞群來源于骨髓、外周血、角膜、視網(wǎng)膜、腦、骨骼肌、齒髓、肝、皮膚、胃腸道粘膜層和胰腺等②發(fā)育全能性，可誘導(dǎo)分化為機(jī)體分化較局限，部分成體干細(xì)胞（造血干細(xì)胞、骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞、神經(jīng)干細(xì)胞）有一定跨系、跨胚層的“可塑性”③無限的自我更新能力病理?xiàng)l件下才顯出一定的自我更新潛能④增殖能力強(qiáng)，便于應(yīng)用增殖能力較弱，故不能完全取代胚胎干細(xì)胞4.與胚胎干細(xì)胞的比較現(xiàn)在是35頁\一共有123頁\編輯于星期一36間胚層組織類型干細(xì)胞轉(zhuǎn)分化為同胚層另一組織類型細(xì)胞間胚層組織類型干細(xì)胞轉(zhuǎn)分化為內(nèi)胚層組織類型細(xì)胞間胚層組織類型干細(xì)胞轉(zhuǎn)分化為外胚層組織類型細(xì)胞由此認(rèn)為，成體干細(xì)胞有較大的可塑性。血細(xì)胞肌細(xì)胞血細(xì)胞肝細(xì)胞血細(xì)胞腦細(xì)胞5.成體干細(xì)胞的可塑性：現(xiàn)在是36頁\一共有123頁\編輯于星期一第二節(jié)干細(xì)胞的醫(yī)學(xué)應(yīng)用和研究狀況37現(xiàn)在是37頁\一共有123頁\編輯于星期一381999年，Science雜志編者Bloom：“干細(xì)胞給人類提供了極大的可能性：用干細(xì)胞修復(fù)病損的臟器和細(xì)胞缺損”，他還說“最終可能用干細(xì)胞制成像腎、肝這樣復(fù)雜的器官”?，F(xiàn)在是38頁\一共有123頁\編輯于星期一

干細(xì)胞研究成為繼人類基因組大規(guī)模測(cè)序之后最具活力、最有影響和最有應(yīng)用前景的生命學(xué)科研究領(lǐng)域，1999年干細(xì)胞研究被美國(guó)《科學(xué)》雜志評(píng)為1999年度世界十大科學(xué)之冠，2000年干細(xì)胞研究再次被《科學(xué)》雜志評(píng)為該年度世界十大科學(xué)成就之一。

現(xiàn)在是39頁\一共有123頁\編輯于星期一干細(xì)胞的應(yīng)用最基本的，多能干細(xì)胞可以幫助我們理解人類發(fā)育過程中的復(fù)雜事件人體多能干細(xì)胞研究也能大大地改變研制藥品和進(jìn)行安全性實(shí)驗(yàn)的方法人體多能干細(xì)胞最為深遠(yuǎn)的潛在用途是用來生產(chǎn)細(xì)胞和組織，它們可用于所謂的“細(xì)胞療法”。

現(xiàn)在是40頁\一共有123頁\編輯于星期一現(xiàn)在是41頁\一共有123頁\編輯于星期一42源于胚胎干細(xì)胞的細(xì)胞已能或可能治療許多疾病神經(jīng)細(xì)胞心肌細(xì)胞B型胰島細(xì)胞軟骨細(xì)胞白細(xì)胞皮膚細(xì)胞肝細(xì)胞骨細(xì)胞視細(xì)胞骨骼肌細(xì)胞帕金森病心肌梗死糖尿病骨關(guān)節(jié)炎白血病燒傷和創(chuàng)傷肝炎骨質(zhì)疏松癥視網(wǎng)膜退化肌營(yíng)養(yǎng)不良治療現(xiàn)在是42頁\一共有123頁\編輯于星期一43成體干細(xì)胞中，造血干細(xì)胞（包括骨髓、臍血、羊膜和外周血中的干細(xì)胞）已用于治療某些遺傳病或慢性病?，F(xiàn)在是43頁\一共有123頁\編輯于星期一44成體干細(xì)胞及其子代細(xì)胞移植或動(dòng)員腦組織內(nèi)的干細(xì)胞治療神經(jīng)退行性疾病已獲初步成效。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證實(shí)移植的神經(jīng)元可替代修復(fù)已損壞的神經(jīng)通路。臨床試驗(yàn)也證實(shí)細(xì)胞替代治療可使癥狀緩解?，F(xiàn)在是44頁\一共有123頁\編輯于星期一干細(xì)胞治療的特點(diǎn)1.一次性或幾次介入，永久性治療；2.不需要完全了解疾病發(fā)生的確切機(jī)理?，F(xiàn)在是45頁\一共有123頁\編輯于星期一46造血干細(xì)胞移植

臨床應(yīng)用

與新進(jìn)展現(xiàn)在是46頁\一共有123頁\編輯于星期一什么是造血干細(xì)胞？造血干細(xì)胞(HemapoieticStemCell,HSC)是指一群在特定時(shí)期能夠分裂的未分化細(xì)胞，具有自我更新能力和產(chǎn)生高度特異性的功能后代細(xì)胞?，F(xiàn)在是47頁\一共有123頁\編輯于星期一

胸腺、淋巴結(jié)造血干細(xì)胞定向造血干細(xì)胞造血祖細(xì)胞（CFU-GEMM）CFU-LCFU-ECFU-GMCFU--MKCFU-GCFU-M原淋原紅原粒原單原巨幼淋早幼紅早幼粒幼單幼巨中幼紅中幼粒顆粒巨大小淋巴晚幼紅晚幼粒產(chǎn)板巨網(wǎng)織紅裸巨

淋巴

紅細(xì)胞

粒細(xì)胞單核細(xì)胞血小板CD34+MNC現(xiàn)在是48頁\一共有123頁\編輯于星期一什么是造血干細(xì)胞移植？

造血干細(xì)胞移植(HemapoieticStemCellTransplantation,HSCT)是指將異體或自體的造血干細(xì)胞植入到受者體內(nèi)，使其造血及免疫功能恢復(fù)?，F(xiàn)在是49頁\一共有123頁\編輯于星期一根據(jù)供體的不同，HSCT分：

1、同基因(Syngeneic)：指同卵雙胎，供受者基因型完全相同。2、異基因(Allogeneic)：非同卵雙胎，人類白細(xì)胞抗原（HLA）相合，來自患者的兄弟姐妹，無關(guān)供髓者，臍帶血。

3、自體(Autologous)：自體解救措施。現(xiàn)在是50頁\一共有123頁\編輯于星期一根據(jù)HSCT來源的不同分為：骨髓移植：1～3×108有核細(xì)胞/kg

2.外周血造血干細(xì)胞移植：>2×106CD34+細(xì)胞/kg

3.臍帶血干細(xì)胞移植：>3×107有核細(xì)胞/kg

現(xiàn)在是51頁\一共有123頁\編輯于星期一主要適應(yīng)癥(EBMT)淋巴瘤和骨髓瘤：53％，其中異基因4％，自體96％。白血?。?2％，其中異基因76％，自體24％，包括AML、ALL、CML、MDS、CLL。實(shí)體腫瘤：7％，其中異基因8％，自體92％，包括、神經(jīng)母細(xì)胞瘤、腦膠質(zhì)細(xì)胞瘤、胚胎細(xì)胞瘤、乳腺癌、肺癌、卵巢癌等。非惡性疾?。?％，其中異基因92％，自體8％，包括再生障礙性貧血、范可尼氏貧血、地中海貧血、嚴(yán)重聯(lián)合免疫缺陷癥、自身免疫性疾病等?，F(xiàn)在是52頁\一共有123頁\編輯于星期一干細(xì)胞移植過程自體造血干細(xì)胞移植：異體造血干細(xì)胞移植：供者細(xì)胞無須凍存，直接輸注。

合適患者凍存干細(xì)胞動(dòng)員采集患者預(yù)處理支持治療植活40度水浴現(xiàn)在是53頁\一共有123頁\編輯于星期一APBSCT治療步驟和策略1、常規(guī)化療4～5個(gè)療程白血病患者達(dá)到CR后，鞏固治療4～5次；實(shí)體腫瘤消失或進(jìn)入平臺(tái)期。2.外周血干細(xì)胞動(dòng)員、采集及冷凍保存。3.預(yù)處理、細(xì)胞回輸。4.并發(fā)癥的防治及支持治療?，F(xiàn)在是54頁\一共有123頁\編輯于星期一目前常規(guī)動(dòng)員方案可歸納為2種方式:正常健康人采用：

G-CSF5ug/Kg/d×5-7dorGM-CSF5ug/Kg/d+G-CSF5ug/Kg/d病人作自身移植的動(dòng)員方案為：化療方案+細(xì)胞因子（G-CSForGM-CSF+G-CSF）現(xiàn)在是55頁\一共有123頁\編輯于星期一三種不同冷藏方法的優(yōu)缺點(diǎn)1．4℃冰箱（直接冷藏）優(yōu)點(diǎn)：方法簡(jiǎn)便，不需配制冷凍保存液。缺點(diǎn)：如>72h，細(xì)胞存活率及干細(xì)胞回收率明顯減少2．-80℃冰箱（緩慢降溫法）優(yōu)點(diǎn)：操作容易，花費(fèi)時(shí)間短。缺點(diǎn)：需要專箱專用，保存時(shí)間只能在3—6個(gè)月之間。彌補(bǔ)方法：-80℃冰箱保存2小時(shí)后，再置入-176℃的液氮，可長(zhǎng)期保存。3.程序降溫儀及-196℃液氮保存優(yōu)點(diǎn)：細(xì)胞經(jīng)程序降溫，損傷少，細(xì)胞存活率高且干細(xì)胞回收率高，保存的時(shí)間長(zhǎng)。缺點(diǎn)：需要相應(yīng)設(shè)備配置，操作時(shí)間長(zhǎng)現(xiàn)在是56頁\一共有123頁\編輯于星期一

預(yù)處理預(yù)處理：指移植前給予患者亞致死劑量的化療和全身放療。預(yù)處理的目的

治療腫瘤最大程度清除患者體內(nèi)殘存的腫瘤細(xì)胞為移植的干細(xì)胞留出空間，以便于其定位、增殖分化免疫抑制治療非腫瘤性疾病免疫抑制清除異常細(xì)胞提供細(xì)胞植入的空間現(xiàn)在是57頁\一共有123頁\編輯于星期一干細(xì)胞技術(shù)臨床應(yīng)用

目前的研究表明，當(dāng)組織器官受到損傷時(shí)，干細(xì)胞被激活，對(duì)受損的組織進(jìn)行修復(fù)重建。但這種自身修復(fù)畢竟是有限的，必須通過移植干細(xì)胞才能達(dá)到治療相關(guān)疾病的目的。但是成體干細(xì)胞由于數(shù)量很少，難于克隆而使其應(yīng)用受到限制。

現(xiàn)在是58頁\一共有123頁\編輯于星期一比較成熟的干細(xì)胞移植

臨床應(yīng)用￥造血干細(xì)胞移植1.下肢缺血性疾?。禾悄虿∽恪⒀ㄩ]塞性脈管炎、動(dòng)脈硬化閉塞癥等。2.股骨頭壞死。3.缺血性心臟病：心?！?.失代償期肝硬化。5.神經(jīng)系統(tǒng)疾患：腦梗死、肌萎縮性側(cè)索硬化癥（ALS）、腦脊髓損傷（因創(chuàng)傷、缺血、變性疾病等造成神經(jīng)元損傷）等。現(xiàn)在是59頁\一共有123頁\編輯于星期一來源大部分來源于骨髓或經(jīng)動(dòng)員后采集的外周血干細(xì)胞。少數(shù)來源于臍血干細(xì)胞。現(xiàn)在是60頁\一共有123頁\編輯于星期一采集方法骨髓：密度梯度離心分離細(xì)胞。吸取單個(gè)核細(xì)胞。外周血：生長(zhǎng)因子動(dòng)員后細(xì)胞分離機(jī)采集單個(gè)核細(xì)胞?，F(xiàn)在是61頁\一共有123頁\編輯于星期一糖尿病的干細(xì)胞治療現(xiàn)在是62頁\一共有123頁\編輯于星期一

胚胎干細(xì)胞的全能性為研究糖尿病的細(xì)胞治療開辟了新途徑。研究人員相繼用不同的方法獲得了分泌胰島素的細(xì)胞。

現(xiàn)在是63頁\一共有123頁\編輯于星期一

用胚胎干細(xì)胞誘導(dǎo)為胰島素分泌細(xì)胞并用于治療糖尿病的策略：

用細(xì)胞因子、天然化學(xué)物質(zhì)與胚胎干細(xì)胞共培養(yǎng)，將胚胎干細(xì)胞誘導(dǎo)分化為胰島素分泌細(xì)胞。目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)一些因子和特定的培養(yǎng)系統(tǒng)結(jié)合，可以誘導(dǎo)胚胎干細(xì)胞分化。

現(xiàn)在是64頁\一共有123頁\編輯于星期一

科學(xué)家將小鼠的胚胎干細(xì)胞誘導(dǎo)分化成能分泌胰島素的類似于胰島的結(jié)構(gòu)。他們先將小鼠的胚胎干細(xì)胞培養(yǎng)成類胚體，并在此基礎(chǔ)上誘導(dǎo)出了α、β等多種胰島細(xì)胞的細(xì)胞群?，F(xiàn)在是65頁\一共有123頁\編輯于星期一

這些細(xì)胞在植入糖尿病小鼠的皮下后糾正高血糖水平（未到正常），細(xì)胞在植入12天后發(fā)生血管化，其形態(tài)類似于胰腺的胰島，并保持著分泌胰島素的能力。

現(xiàn)在是66頁\一共有123頁\編輯于星期一

最近的研究結(jié)果表明，人胚胎干細(xì)胞也能分化成分泌胰島素的細(xì)胞。有實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)了人胚胎干細(xì)胞，并讓它們自發(fā)形成類胚體；然后用多種生長(zhǎng)因子誘導(dǎo)類胚體分化?，F(xiàn)在是67頁\一共有123頁\編輯于星期一

試驗(yàn)結(jié)果提示了類胚體可以自發(fā)分化成胰島β細(xì)胞。也有實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步證實(shí)了人胚胎干細(xì)胞可自發(fā)分化為β細(xì)胞的現(xiàn)象。

現(xiàn)在是68頁\一共有123頁\編輯于星期一

類胚體中有1%～3%的細(xì)胞是胰島β細(xì)胞。在葡萄糖存在的情況下，這些細(xì)胞可以向培養(yǎng)基中分泌胰島素?，F(xiàn)在是69頁\一共有123頁\編輯于星期一

由胚胎干細(xì)胞向胰島細(xì)胞分化的研究剛剛起步，如何完善誘導(dǎo)方案以獲得大量純化的功能性β細(xì)胞替代物是今后急需解決的問題。

現(xiàn)在是70頁\一共有123頁\編輯于星期一

干細(xì)胞定向分化為胰島β細(xì)胞的研究為糖尿病患者點(diǎn)燃了新的希望,也為研究人員提供了新的突破口,其勿庸置疑的成為治療糖尿病的最佳種子細(xì)胞,雖然目前存在很多問題,但隨著干細(xì)胞生物學(xué)的發(fā)展,相信將來肯定能克服以上困難,用細(xì)胞治療攻克糖尿病?，F(xiàn)在是71頁\一共有123頁\編輯于星期一

干細(xì)胞移植在糖尿病足臨床研究

2003年11月-2007年4月治療380例，總有效率達(dá)87.2%，使患者疼痛、冷感緩解，行走間距延長(zhǎng)，潰瘍愈合，免除了截肢致殘的嚴(yán)重后果?，F(xiàn)在是72頁\一共有123頁\編輯于星期一干細(xì)胞移植術(shù)在手術(shù)室進(jìn)行干細(xì)胞移植術(shù)患者接受全憑靜脈麻醉MNC配制成（1-6）×108細(xì)胞/ml細(xì)胞懸液按3cm×3cm間距進(jìn)行肌肉注射

現(xiàn)在是73頁\一共有123頁\編輯于星期一

移植后臨床情況

疼痛緩解（87.2%）1-28d

冷感消失（90.8%）1-21d

行走間距延長(zhǎng)（44.6%）4-6m

潰瘍縮小愈合（92.3%)3-6m

壞疽好轉(zhuǎn)(20.2%）4-6m現(xiàn)在是74頁\一共有123頁\編輯于星期一臨床研究病例選擇2004年7月～2007年4月224例股骨頭壞死患者接受動(dòng)脈內(nèi)骨髓干細(xì)胞移植治療病因皮質(zhì)激素、外傷、飲酒、原因不明診斷髖關(guān)節(jié)X線攝片、MRI、CT核素掃描

現(xiàn)在是75頁\一共有123頁\編輯于星期一經(jīng)動(dòng)脈干細(xì)胞移植術(shù)

股動(dòng)脈穿刺DSA血管造影導(dǎo)管超選插入旋股內(nèi)旋股外閉孔動(dòng)脈骨髓單個(gè)核細(xì)胞懸液緩慢灌注入動(dòng)脈內(nèi)現(xiàn)在是76頁\一共有123頁\編輯于星期一治療結(jié)果—臨床指標(biāo)

髖關(guān)節(jié)疼痛緩解率82.7%

行走間距延長(zhǎng)54%

關(guān)節(jié)功能改善30.2%

總有效率達(dá)80.6%現(xiàn)在是77頁\一共有123頁\編輯于星期一干細(xì)胞移植6m血管造影前后對(duì)照現(xiàn)在是78頁\一共有123頁\編輯于星期一自體干細(xì)胞移植

治療失代償肝硬化36例失代償肝硬化:

乙型肝炎肝硬化27例

酒精肝硬化9例現(xiàn)在是79頁\一共有123頁\編輯于星期一術(shù)后1、4、8、12周觀察臨床癥狀：12周1.腹水減輕19例52.7%2.食欲改善28例77.7%3.體力好轉(zhuǎn)20例58.3%4.腹脹減輕17例47.2%現(xiàn)在是80頁\一共有123頁\編輯于星期一1.谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）逐漸減低

25例69.4%2.總膽紅素逐漸下降22例61.1%3.白蛋白逐漸升高27例75%4.凝血酶原活動(dòng)度全部不同程度升高?，F(xiàn)在是81頁\一共有123頁\編輯于星期一干細(xì)胞治療:自體骨髓干細(xì)胞、自體間充質(zhì)干細(xì)胞、人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞治療(2005年德國(guó)科學(xué)家率先將骨髓細(xì)胞治療肝損傷的研究應(yīng)用于臨床，發(fā)現(xiàn)移植的骨髓干細(xì)胞可促進(jìn)肝臟再生.)現(xiàn)在是82頁\一共有123頁\編輯于星期一臍血干細(xì)胞新技術(shù)預(yù)防和治療老年性癡呆（AD）

現(xiàn)在是83頁\一共有123頁\編輯于星期一老年性癡呆即阿爾茨海默病性癡呆（dementiaAlzheimerDisease）:大腦細(xì)胞退化萎縮，細(xì)胞密度降低的器質(zhì)性疾病。導(dǎo)致死亡的第4位原因，神經(jīng)科疾病的第1位。多種機(jī)制下神經(jīng)元的損傷引起臨床用藥受到限制,抗癡呆藥物的研究與開發(fā)相對(duì)困難

背景現(xiàn)在是84頁\一共有123頁\編輯于星期一創(chuàng)意主體

一．采集臍血干細(xì)胞

二．干細(xì)胞保存及體外增殖

三.體外培養(yǎng)神經(jīng)干細(xì)胞定向誘導(dǎo)及基因修飾

四．神經(jīng)干細(xì)胞的植入及植入后監(jiān)測(cè)

現(xiàn)在是85頁\一共有123頁\編輯于星期一采集臍血干細(xì)胞臍帶靜脈血采集臍血庫密度梯度法有核細(xì)胞DMSO處理添加保護(hù)劑冷凍管程控降溫自動(dòng)化監(jiān)探的保存系統(tǒng)現(xiàn)在是86頁\一共有123頁\編輯于星期一？干細(xì)胞的保存問題現(xiàn)在是87頁\一共有123頁\編輯于星期一體外增殖模型SCFGM-CSF5ML增殖前增殖后６０ＭＬ庫血現(xiàn)在是88頁\一共有123頁\編輯于星期一？神經(jīng)干細(xì)胞進(jìn)入腦的持續(xù)分化如何克服AD患者腦內(nèi)不利環(huán)境現(xiàn)在是89頁\一共有123頁\編輯于星期一神經(jīng)干細(xì)胞定向誘導(dǎo)、基因修飾及植入

解凍干細(xì)胞神經(jīng)干細(xì)胞神經(jīng)干細(xì)胞體外基因修飾

體外培養(yǎng)加入優(yōu)勢(shì)誘導(dǎo)劑

測(cè)定細(xì)胞因子發(fā)揮將細(xì)胞因子排在該球中包被了細(xì)胞因子最大效率的時(shí)間（Tx）距球心（R-VTx）的球面上的生物降解球測(cè)生物可降解球降解速度（v）損壞腦區(qū)定位

定期復(fù)查植入腦內(nèi)現(xiàn)在是90頁\一共有123頁\編輯于星期一R-VTxX=1現(xiàn)在是91頁\一共有123頁\編輯于星期一神經(jīng)干細(xì)胞定向誘導(dǎo)、基因修飾及植入

解凍干細(xì)胞神經(jīng)干細(xì)胞神經(jīng)干細(xì)胞體外基因修飾

體外培養(yǎng)加入優(yōu)勢(shì)誘導(dǎo)劑

測(cè)定細(xì)胞因子發(fā)揮將細(xì)胞因子排在該球中包被了細(xì)胞因子最大效率的時(shí)間（Tx）距球心（R-VTx）的球面上的生物降解球測(cè)生物可降解球降解速度（v）損壞腦區(qū)定位

定期復(fù)查植入腦內(nèi)現(xiàn)在是92頁\一共有123頁\編輯于星期一社會(huì)價(jià)值及其優(yōu)越性治療徹底，無復(fù)發(fā)可能；可行性強(qiáng)；利用自身干細(xì)胞，不產(chǎn)生免疫排斥；無需長(zhǎng)期用藥，對(duì)機(jī)體不產(chǎn)生副作用；針對(duì)性強(qiáng)，成功率高；一次性治愈，減輕病人痛苦；自身干細(xì)胞建庫，無須等待移植源；給生命一種保障，減輕患者經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。減輕家庭負(fù)擔(dān)。提高老年人生活質(zhì)量，享有幸福晚年；一定程度上減輕社會(huì)負(fù)擔(dān)除用于治療外，亦可用于預(yù)防?？赏麑?shí)現(xiàn)人類夢(mèng)寐以求的“永葆青春”的愿望?，F(xiàn)在是93頁\一共有123頁\編輯于星期一造血干細(xì)胞現(xiàn)在是94頁\一共有123頁\編輯于星期一造血干細(xì)胞移植治療白血病造血干細(xì)胞移植是從60年代逐漸發(fā)展起來的一種醫(yī)療技術(shù)，最初是通過抽取供體骨髓而救治，使急性白血病的長(zhǎng)期生存率提高到50—70％。為發(fā)展此項(xiàng)技術(shù)作出重要貢獻(xiàn)的美國(guó)醫(yī)學(xué)家托馬斯（E.D．Thomas）因此而獲得了1990年度的諾貝爾醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)。現(xiàn)在是95頁\一共有123頁\編輯于星期一造血干細(xì)胞移植過程的示意圖HLA配型供體造血干細(xì)胞的采集患者超大劑量放化療預(yù)處理，摧毀其免疫系統(tǒng)供體造血干細(xì)胞輸入患者體內(nèi)，重建其免疫系統(tǒng)現(xiàn)在是96頁\一共有123頁\編輯于星期一造血干細(xì)胞的來源骨髓從外周血富集造血干細(xì)胞臍帶血提取干細(xì)胞解決HLA配型問題*建立骨髓庫發(fā)達(dá)國(guó)家現(xiàn)已建立了多達(dá)數(shù)百萬人的骨髓庫網(wǎng)絡(luò)．多達(dá)70％需要移植的病人可獲捐贈(zèng)造血干細(xì)胞而得以挽救生命*臍帶血干細(xì)胞庫現(xiàn)在是97頁\一共有123頁\編輯于星期一神經(jīng)干細(xì)胞過去認(rèn)為成年腦內(nèi)沒有干細(xì)胞,神經(jīng)細(xì)胞終生成活，損傷也是永久的；1988年Frederken等在發(fā)育的胚胎中得到干細(xì)胞樣細(xì)胞---神經(jīng)干細(xì)胞成人腦紋狀體培養(yǎng)出干細(xì)胞樣CNS多潛能細(xì)胞，后在腦內(nèi)不同部位都發(fā)現(xiàn)了神經(jīng)干細(xì)胞的存在現(xiàn)在是98頁\一共有123頁\編輯于星期一成人腦中至少在3個(gè)腦區(qū)存在：室管膜下層（subventricularzone,SVZ）,海馬的齒狀回和嗅回。人類胚胎來源的神經(jīng)干細(xì)胞在體外培養(yǎng)，能分化產(chǎn)生神經(jīng)元、星型細(xì)胞和少突膠質(zhì)細(xì)胞等。對(duì)成體神經(jīng)干細(xì)胞行為的研究為腦損傷修復(fù)及神經(jīng)細(xì)胞功能性疾病的治療提供了新的思路?，F(xiàn)在是99頁\一共有123頁\編輯于星期一神經(jīng)干細(xì)胞的分布Back現(xiàn)在是100頁\一共有123頁\編輯于星期一腎臟疾病的干細(xì)胞治療現(xiàn)在是101頁\一共有123頁\編輯于星期一雄性小鼠骨髓細(xì)胞移植雌性小鼠雌性小鼠腎臟遷移腎小管上皮細(xì)胞分化腎小管內(nèi)現(xiàn)在是102頁\一共有123頁\編輯于星期一

結(jié)果表明，骨髓內(nèi)的干細(xì)胞能橫向分化為腎小管上皮細(xì)胞，有助于腎小管上皮細(xì)胞的正常更新和腎小管損傷后的再生修復(fù)，為干細(xì)胞移植治療腎小管壞死提供了理論依據(jù)?，F(xiàn)在是103頁\一共有123頁\編輯于星期一原理：

1.胚胎干細(xì)胞一方面可以新生腎小球的毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞、臟層細(xì)胞以及恢復(fù)腎小球基膜，恢復(fù)和提高腎小球的濾過膜，對(duì)由于腎小球病變所造成的尿液改變、高血壓、水腫等癥狀都會(huì)有明顯的改善；現(xiàn)在是104頁\一共有123頁\編輯于星期一2.胚胎干細(xì)胞還可以分化產(chǎn)生免疫平衡細(xì)胞，如：Ts細(xì)胞、Th細(xì)胞等，平衡免疫反應(yīng)，消除造成腎小管損傷的各種因素，避免對(duì)腎小球的持續(xù)損傷，防止病情進(jìn)一步惡化。胚胎干細(xì)胞移植對(duì)各種腎小球疾病都有很好的治療效果?，F(xiàn)在是105頁\一共有123頁\編輯于星期一胚胎干細(xì)胞、臍血干細(xì)胞、骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的應(yīng)用比較現(xiàn)在是106頁\一共有123頁\編輯于星期一1.骨髓移植是用針插入骨中抽取，需骨髓穿刺，麻醉并住院一天，局部有時(shí)會(huì)淤血或疼痛。移植時(shí)HLA須完全相合，同胞間約有25%的機(jī)會(huì)相合，非親屬間的配對(duì)成功率只有十萬分之一。排斥反應(yīng)較重，常是造成移植失敗的主因。現(xiàn)在是107頁\一共有123頁\編輯于星期一2.臍帶血采集時(shí)對(duì)產(chǎn)婦、新生兒無影響。臍帶血移植時(shí)HLA不須完全相合，發(fā)生排斥反應(yīng)程度相對(duì)較輕。胚胎干細(xì)胞由于采集的時(shí)間,干細(xì)胞表面抗原表達(dá)很少,因此不產(chǎn)生排斥免疫反應(yīng),而且由于其外源性，病人本身沒有創(chuàng)傷。相對(duì)于骨髓內(nèi)的干細(xì)胞和臍帶血干細(xì)胞移植，胚胎干細(xì)胞所引發(fā)的后遺癥更低，而且干細(xì)胞的排斥機(jī)率也低?，F(xiàn)在是108頁\一共有123頁\編輯于星期一2.胚胎干細(xì)胞的濃度高而且品質(zhì)優(yōu)良，約為骨髓干細(xì)胞濃度的20到50倍，為胚胎干細(xì)胞濃度的5倍左右，細(xì)胞的增生能力也比較高。

3.移植胚胎干細(xì)胞比移植臍帶血干細(xì)胞或骨髓或周邊血干細(xì)胞帶感染到病毒的可能性也較低。現(xiàn)在是109頁\一共有123頁\編輯于星期一

干細(xì)胞基礎(chǔ)研究進(jìn)展現(xiàn)在是110頁\一共有123頁\編輯于星期一現(xiàn)在是111頁\一共有123頁\編輯于星期一現(xiàn)在是112頁\一共有123頁\編輯于星期一干細(xì)胞改善疾病的可能機(jī)制（一）1.內(nèi)源性調(diào)控：（1）細(xì)胞內(nèi)蛋白對(duì)干細(xì)胞分裂的調(diào)控

（2）轉(zhuǎn)錄因子的調(diào)控2.外源性調(diào)控：（1）分泌因子

（2）膜蛋白介導(dǎo)的細(xì)胞間的相互作用

（3）整合素與細(xì)胞外基質(zhì)3.干細(xì)胞具有可塑性與細(xì)胞相關(guān)現(xiàn)在是113頁\一共有123頁\編輯于星期一干細(xì)胞改善疾病的可能機(jī)制（二）與微環(huán)境相關(guān)現(xiàn)在是114頁\一共有123頁\編輯于星期一現(xiàn)在是115頁\一共有123頁\編輯于星期一現(xiàn)在是116頁\一共有123頁\編輯于星期一干細(xì)胞治療的機(jī)制—微環(huán)境分化干細(xì)胞是保持靜止?fàn)顟B(tài)還是自我復(fù)制,或定向分化,是由其鄰近的體細(xì)胞組成的微環(huán)境決定的。這個(gè)微環(huán)境能夠提供一些因子維持干細(xì)胞的未分化狀態(tài)并能把誘導(dǎo)干細(xì)胞發(fā)生分化的因子排斥在外。但這個(gè)微環(huán)境的容納能力有限,一旦干細(xì)胞的數(shù)量超過這個(gè)微環(huán)境的容納能力,干細(xì)胞就會(huì)從這個(gè)微環(huán)境中分離出來并發(fā)生分化?，F(xiàn)在是117頁\一共有123頁\編輯于星期一干細(xì)胞改善疾病的可能機(jī)制（三）與系統(tǒng)環(huán)境相關(guān)現(xiàn)在是118頁\一共有123頁\編輯于星期一現(xiàn)在是119頁\一共有123頁\編輯于星期一干細(xì)胞改善疾病的可能機(jī)制（四）可能的分子機(jī)制現(xiàn)在是120頁\一共有123頁\編輯于星期一現(xiàn)在是121頁\一共有123頁\編輯于星期一Cytokine

ReceptorBCAPPDK1Gab1