標(biāo)準(zhǔn)解讀

《GB/T 38132-2019 轉(zhuǎn)基因植物品系定量檢測(cè)數(shù)字PCR法》是一項(xiàng)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)，旨在通過(guò)數(shù)字PCR技術(shù)對(duì)轉(zhuǎn)基因植物中的特定品系進(jìn)行準(zhǔn)確的定量分析。該標(biāo)準(zhǔn)適用于含有已知序列信息的轉(zhuǎn)基因植物品系DNA含量的測(cè)定。

根據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)，首先需要準(zhǔn)備樣品DNA，并確保其質(zhì)量符合后續(xù)實(shí)驗(yàn)的要求。接下來(lái)，選擇合適的引物和探針設(shè)計(jì)對(duì)于目標(biāo)轉(zhuǎn)基因成分至關(guān)重要，這些設(shè)計(jì)需基于已知的目標(biāo)序列來(lái)進(jìn)行，以保證特異性與靈敏度。此外，還應(yīng)設(shè)置適當(dāng)?shù)膶?duì)照組，包括但不限于陽(yáng)性對(duì)照、陰性對(duì)照以及內(nèi)參基因等，以驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)的有效性和可靠性。

在完成上述準(zhǔn)備工作后，按照數(shù)字PCR的操作流程進(jìn)行擴(kuò)增反應(yīng)，這通常涉及到將樣品分成大量獨(dú)立的小體積反應(yīng)單元，在每個(gè)小單元中進(jìn)行PCR擴(kuò)增。通過(guò)統(tǒng)計(jì)含有目標(biāo)序列的陽(yáng)性微滴數(shù)量來(lái)計(jì)算原始樣本中目標(biāo)分子的數(shù)量，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)轉(zhuǎn)基因成分的定量。

整個(gè)過(guò)程中，還需要注意控制實(shí)驗(yàn)條件的一致性，比如溫度循環(huán)參數(shù)、酶活性等因素，以減少實(shí)驗(yàn)誤差。同時(shí)，對(duì)于結(jié)果的數(shù)據(jù)處理也有明確要求，包括如何使用軟件分析數(shù)據(jù)、報(bào)告形式等，確保最終得出的結(jié)果能夠準(zhǔn)確反映樣品中轉(zhuǎn)基因成分的真實(shí)水平。

該標(biāo)準(zhǔn)為轉(zhuǎn)基因植物品系的定量檢測(cè)提供了科學(xué)、規(guī)范的方法指導(dǎo)，有助于提高相關(guān)領(lǐng)域研究工作的準(zhǔn)確性和可比性。


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....

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  • 2019-10-18 頒布
  • 2019-10-18 實(shí)施
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文檔簡(jiǎn)介

ICS07080

A40.

中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)

GB/T38132—2019

轉(zhuǎn)基因植物品系定量檢測(cè)數(shù)字PCR法

QuantitativedeterminationofgeneticallymodifiedplantsbydigitalPCRmethod

2019-10-18發(fā)布2019-10-18實(shí)施

國(guó)家市場(chǎng)監(jiān)督管理總局發(fā)布

中國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì)

GB/T38132—2019

前言

本標(biāo)準(zhǔn)按照給出的規(guī)則起草

GB/T1.1—2009。

本標(biāo)準(zhǔn)由全國(guó)生化檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)提出并歸口

(SAC/TC387)。

本標(biāo)準(zhǔn)起草單位上海市計(jì)量測(cè)試技術(shù)研究院蘇州百源基因技術(shù)有限公司中國(guó)檢驗(yàn)檢疫科學(xué)研

:、、

究院中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院生物技術(shù)研究所中國(guó)測(cè)試技術(shù)研究院生物研究所甘肅國(guó)研檢驗(yàn)檢測(cè)有限公司

、、、、

四川出入境檢驗(yàn)檢疫局檢驗(yàn)檢疫技術(shù)中心中國(guó)科學(xué)院上海高等研究院

、。

本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人梁文付偉李亮劉剛李妍車(chē)團(tuán)結(jié)周李華林華楊鎮(zhèn)州朱鵬宇馬麗俠

:、、、、、、、、、、、

樊春海王麗華張瑩

、、。

Ⅰ

GB/T38132—2019

轉(zhuǎn)基因植物品系定量檢測(cè)數(shù)字PCR法

1范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了轉(zhuǎn)基因植物品系的數(shù)字定量檢測(cè)方法

PCR。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于種子及物理加工種子樣品中轉(zhuǎn)基因玉米品系品系

MON810、MON89034、MIR162

品系轉(zhuǎn)基因大豆品系轉(zhuǎn)基因水稻克螟稻品系轉(zhuǎn)基因棉花品系轉(zhuǎn)基因油菜

,GTS-40-3-2,,GHB119,

品系的數(shù)字法定量檢測(cè)

RT73PCR。

本方法的定量檢測(cè)限為質(zhì)量分?jǐn)?shù)

0.1%()。

2規(guī)范性引用文件

下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的凡是注日期的引用文件僅注日期的版本適用于本文

。,

件凡是不注日期的引用文件其最新版本包括所有的修改單適用于本文件

。,()。

分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法

GB/T6682

轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測(cè)通用要求和定義

GB/T19495.1

轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測(cè)核酸提取純化方法

GB/T19495.3

轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測(cè)抽樣和制樣方法

GB/T19495.7

所有部分轉(zhuǎn)基因大米定量檢測(cè)數(shù)字法

SN/T4853()PCR

3術(shù)語(yǔ)和定義縮略語(yǔ)

、

31術(shù)語(yǔ)和定義

.

下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件

。

311

..

品系特異序列eventspecificsequence

外源片段插入受體作物基因組后重組產(chǎn)生的鄰接區(qū)序列

DNA。

32縮略語(yǔ)

.

下列縮略語(yǔ)適用于本文件

。

玉米乙醇脫氫酶基因

Adh-1:(Alcoholdehydrogenase1)

乙醇脫氫酶基因

Adhc:C(AlcoholdehydrogenaseCgene)

聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)

PCR:(Polymerasechainreaction)

磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶基因

PEP:(Phosphoenolpyruvatecarboxylasegene)

磷脂酰膽堿磷脂水解酶基因

PLD:(PhospholipaseDgene)

4原理

數(shù)字其技術(shù)原理是通過(guò)將原始反應(yīng)體系進(jìn)行分割進(jìn)而對(duì)所有小的反應(yīng)體系進(jìn)行擴(kuò)增

PCRPCR,

并后續(xù)檢測(cè)通過(guò)對(duì)反應(yīng)體系進(jìn)行有限的分割從而使整個(gè)反應(yīng)體系可以更加耐受核酸抑制因子并且

。,

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