標(biāo)準(zhǔn)解讀
《GB/T 34757-2017 豬流行性腹瀉病毒RT-PCR檢測(cè)方法》是一項(xiàng)國家標(biāo)準(zhǔn),旨在規(guī)范豬流行性腹瀉病毒(PEDV)的實(shí)時(shí)熒光定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)檢測(cè)過程。該標(biāo)準(zhǔn)適用于豬只及相關(guān)樣本中PEDV核酸的定性檢測(cè),為動(dòng)物疫病防控提供了技術(shù)支持。
標(biāo)準(zhǔn)首先明確了實(shí)驗(yàn)所需的材料與設(shè)備,包括但不限于特定引物和探針序列、RNA提取試劑盒、反轉(zhuǎn)錄酶以及熒光定量PCR儀等。對(duì)于樣品處理,規(guī)定了從采集到保存的具體要求,強(qiáng)調(diào)了防止交叉污染的重要性,并給出了推薦的保存條件以保證樣本質(zhì)量。
在操作步驟方面,《GB/T 34757-2017》詳細(xì)描述了從樣品準(zhǔn)備開始直至結(jié)果分析結(jié)束的全過程。這包括使用適當(dāng)?shù)脑噭?duì)樣品進(jìn)行RNA提取;利用特異性引物及探針對(duì)目標(biāo)區(qū)域進(jìn)行擴(kuò)增;設(shè)置合適的循環(huán)條件完成PCR反應(yīng);最后通過觀察Ct值來判斷是否存在PEDV感染。此外,還提供了陽性對(duì)照品的選擇建議及其制備方法,用于驗(yàn)證整個(gè)實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)的有效性。
為了確保檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性,本標(biāo)準(zhǔn)特別強(qiáng)調(diào)了質(zhì)量控制措施的應(yīng)用,比如定期校準(zhǔn)儀器、使用已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)作為參考等。同時(shí),也提出了關(guān)于實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)記錄與報(bào)告編制的要求,確保信息完整且易于理解。
如需獲取更多詳盡信息,請(qǐng)直接參考下方經(jīng)官方授權(quán)發(fā)布的權(quán)威標(biāo)準(zhǔn)文檔。
....
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- 現(xiàn)行
- 正在執(zhí)行有效
- 2017-11-01 頒布
- 2018-05-01 實(shí)施



文檔簡介
ICS11220
B41.
中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)
GB/T34757—2017
豬流行性腹瀉病毒RT-PCR檢測(cè)方法
Porcineepidemicdiarrhea—RT-PCRfordetectingvirusacid
2017-11-01發(fā)布2018-05-01實(shí)施
中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局發(fā)布
中國國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì)
GB/T34757—2017
前言
本標(biāo)準(zhǔn)按照給出的規(guī)則起草
GB/T1.1—2009。
本標(biāo)準(zhǔn)由中華人民共和國農(nóng)業(yè)部提出
。
本標(biāo)準(zhǔn)由全國動(dòng)物衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)歸口
(SAC/TC181)。
本標(biāo)準(zhǔn)起草單位東北農(nóng)業(yè)大學(xué)中國動(dòng)物衛(wèi)生與流行病學(xué)中心河南牧業(yè)經(jīng)濟(jì)學(xué)院河南農(nóng)業(yè)
:、、、
大學(xué)
。
本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人李一經(jīng)邵衛(wèi)星魏榮宋建德姜艷平袁麗萍唐麗杰喬薪瑗崔文徐耀輝
:、、、、、、、、、、
吳發(fā)興張志孫映雪魏戰(zhàn)勇李曉成
、、、、。
Ⅰ
GB/T34757—2017
豬流行性腹瀉病毒RT-PCR檢測(cè)方法
1范圍
本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了豬流行性腹瀉病毒檢測(cè)方法的儀器試劑樣品的采集和處理程
RT-PCR、、、RT-PCR
序電泳及結(jié)果判定的技術(shù)要求
、。
本標(biāo)準(zhǔn)適用于快速檢測(cè)豬臨床樣品豬小腸和新鮮糞便或細(xì)胞培養(yǎng)物中豬流行性腹瀉病毒核酸
()。
2規(guī)范性引用文件
下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的凡是注明日期的引用文件僅注日期的版本適用于本
。,
文件凡是不注日期的引用文件其最新版本包括所有的修改單適用于本文件
。,()。
分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法
GB/T6682
3縮略語
下列縮略語適用于本文件
。
鳥類病毒反轉(zhuǎn)錄酶
AMV:RNA(avianmyeloblastosisvirus)
堿基對(duì)
bp:(basepair)
焦碳酸二乙酯
DEPC:(diethylpyrocarbonate)
脫氧核糖核酸
DNA:(deoxyribonucleicacid)
種脫氧核糖核苷三磷酸混合物
dNTPs:4(deoxyribonucleosidetriphosphates)
磷酸鹽緩沖液
PBS:(phosphate-bufferedsalinebuffer)
核糖核酸
RNA:(ribonucleicacid)
反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)
RT-PCR:-(reversetranscriptase-polymerasechainreaction)
酶抑制劑
RRI:RNA(rnaseribonucleaseinhibitor)
Taq酶Taq聚合酶Taq
:DNA(DNApolymerase)
4儀器
41擴(kuò)增儀
.PCR。
42高速臺(tái)式冷凍離心機(jī)可控溫至離心速度可達(dá)以上
.:4℃、12000r/min。
43組織研磨器或者研缽
.。
44冰箱冰箱和以下超低溫冰箱
.2℃~8℃-70℃。
45核酸電泳儀和水平電泳槽
.。
46微量移液器量程分別和
.0.2μL~2μL、1μL~10μL、10μL~100μL、20μL~200μL100μL~
的移液器并配備與移液器相匹配的吸頭
1000μL,
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