高效毛細管電泳分離模式

2023/2/5第五章

毛細管電泳

毛細管區(qū)帶電泳

毛細管凝膠電泳

膠束電動毛細管色譜

毛細管等電聚焦

毛細管等速電泳

毛細管電滲色譜第四節(jié)

毛細管電泳分離模式Capillary

electrophoresis,CESeparatetypesofCE

2023/2/5分離類型八種分離類型，介紹常用的幾種；根據(jù)試樣性質(zhì)不同，采用不同的分離類型；每種機理的選擇性不同。2023/2/5

毛細管區(qū)帶電泳

capillaryzoneelectrophoresis，CZE

帶電粒子的遷移速率=電泳和電滲流速率的矢量和。正離子：兩種效應(yīng)的運動方向一致，在負極最先流出。中性粒子：無電泳現(xiàn)象，受電滲流影響在陽離子后流出。

陰離子：兩種效應(yīng)的運動方向相反。v電滲流>v電泳時，陰離子在負極最后流出,在這種情況下，不但可以按類分離，同種類離子由于差速遷移被相互分離。

最基本、應(yīng)用廣的分離模式。2023/2/5

毛細管凝膠電泳

Capillarygelelectrophoresis，CGE

將聚丙烯酰胺等在毛細管柱內(nèi)交聯(lián)生成凝膠。其具有多孔性，類似分子篩的作用，試樣分子按大小分離。能夠有效減小組分擴散，所得峰形尖銳，分離效率高。蛋白質(zhì)、DNA等的荷/質(zhì)比與分子大小無關(guān)，CZE模式很難分離，采用CGE能獲得良好分離，DAN測序的重要手段。

特點：抗對流性好，散熱性好，分離度極高。無膠篩分技術(shù)：采用低黏度的線性聚合物溶液代替高黏度交聯(lián)聚丙烯酰胺。柱便宜，易制備。2023/2/5

1.緩沖溶液中加入離子型表面活性劑，其濃度達到臨界濃度，形成一疏水內(nèi)核，外部帶負電的膠束。

膠束電動毛細管色譜（MECC，MEKC）

micellarelectrokineticcapillarychromatography

在電場力的作用下，膠束在柱中移動。2023/2/5

2.電泳流和電滲流的方向相反，且v電滲流>v電泳，負電膠束以較慢的速率向負極移動。

5.色譜與電泳分離模式的結(jié)合。

3.中性分子在膠束相和溶液（水相）間分配，疏水性強的組分與膠束結(jié)合的較牢，流出時間長。4.可用來分離中性物質(zhì)，擴展了高效毛細管電泳的應(yīng)用范圍。2023/2/5

1.根據(jù)等電點差別分離生物大分子的高分辨率電泳技術(shù)。2.毛細管內(nèi)充有兩性電解質(zhì)（合成的具有不同等電點范圍的脂肪族多氨基多羧酸混合物），當施加直流電壓（6～8V）時，管內(nèi)將建立一個由陽極到陰極逐步升高的pH梯度。3.氨基酸、蛋白質(zhì)、多肽等的所帶電荷與溶液pH有關(guān)，在酸性溶液中帶正電荷，反之帶負電荷。在其等電點時，呈電中性，淌度為零。

毛細管等電聚焦

Capillaryisoelectricfocusing，CIEF2023/2/5

4.聚焦：具有不同等電點的生物試樣在電場力的作用下遷移，分別到達滿足其等電點pH的位置時，呈電中性，停止移動，形成窄溶質(zhì)帶而相互分離。

5.陽極端裝稀磷酸溶液，陰極端裝稀NaOH溶液。6.加壓將毛細管內(nèi)分離后的溶液推出經(jīng)過檢測器檢測。7.電滲流在CIEF中不利，應(yīng)消除或減小。2023/2/5

1.將兩種淌度差別很大的緩沖液分別作為前導(dǎo)離子(充滿毛細管)和尾隨離子，試樣離子的淌度全部位于兩者之間，并以同一速率移動。2.負離子分析時，前導(dǎo)電解質(zhì)的淌度大于試樣中所有負離子的。所有試樣都按前導(dǎo)離子的速率等速向陽極前進，逐漸形成各自獨立的區(qū)帶而分離。陰極進樣，陽極檢測。

毛細管等速電泳

Capillaryisotachophoresis，CITP2023/2/5

3.不同離子的淌度不同，所形成區(qū)帶的電場強度不同(v=μE

)，淌度大的離子區(qū)帶電場強度小。沿出口到進口，將不同區(qū)帶依次排序1,2,3,4…，電場強度依次增大。假設(shè)“2”號中離子擴散到“3”號，該區(qū)電場強度大，離子被加速，返回到“2”區(qū)；當“2”號中離子跑到“1”號區(qū)，離子被減速使之歸隊。4.特點：界面明顯，富集、濃縮作用。2023/2/5

在毛細管壁上鍵合或涂漬高效液相色譜的固定液，以電滲流為流動相，試樣組分在兩相間的分配為分離機理的電動色譜過程；

毛細管電滲色譜

Capillaryelectroosmosticchromatography，CEC2023/2/5請選擇內(nèi)容結(jié)束5.1