天然產(chǎn)物化學(xué)

不同倒提壺化學(xué)成分研究目錄背景介紹研究目的實驗設(shè)計展望琉璃草屬植物的研究概況紫草科琉璃草屬（Cynoglossum）植物全世界約有60種，廣布于世界，我國有10種，2變種，分布于全國各省區(qū)，主產(chǎn)于云南、四川、西藏，西南地區(qū)是我國琉璃草屬植物的分布中心（徐慶軍，張德志，2009）。該屬植物大部分有藥效，其性寒，微苦，有清熱解毒、利尿消腫、活血調(diào)經(jīng)等功效。內(nèi)服主治急性腎炎、牙周炎、肝炎、月經(jīng)不調(diào)、白帶、水腫、下頜急性淋巴結(jié)炎及心絞痛；外用治療瘡癤癰腫、毒蛇咬傷及跌打損傷等，具有較好療效（吳振海，陳彥生等，1996）。目前，對該屬植物化學(xué)成分和藥理作用研究不多，化學(xué)成分的研究主要集中在吡咯里西啶生物堿上。1.化學(xué)成分的研究1.1生物堿成分生物堿是本屬植物的主要成分，有著廣泛的藥理和毒理活性，如抗腫瘤、抗菌、抑制微生物以及肝毒性等。目前，發(fā)現(xiàn)的生物堿類型主要集中在吡咯里西啶生物堿（PAs）上，其基本結(jié)構(gòu)是7-羥基-1-羥甲基-6,7-雙氫-5H-吡咯里西啶（I）。迄今，從本屬植物中發(fā)現(xiàn)的PAs主要為I和I-1,2位氫化物的單酯、開鏈雙酯、大環(huán)雙酯，另發(fā)現(xiàn)少量PAs的N-氧化物。1.2精油成分

在本屬植物中，張援虎等用水蒸氣蒸餾法研究了小花琉璃草（Cynoglossumlanceolatum）精油成分，在分離出的75個成分中鑒定出茴香腦、愛草醚、小茴香酮、對-甲氧基-苯甲醚等64個化合物，為同屬其他植物揮發(fā)油成分的分離鑒定提供了參考。1.3脂溶性成分張援虎等在小花琉璃草（Cynoglossumlanceolatum）的繼續(xù)研究中，從其全草的石油醚提取物中分離到5個化合物，鑒定分別為：十六碳酸甲酯（Hexadecanoicacid,methylester）、β-谷甾醇（β-sitosterol）、5α，豆甾烷-3，6-二酮（5α,stigmastane-3,6-dione）、6β-羥基-豆甾-4-烯-3-酮（6β-hydroxy-stigmasta-4-en-3-one）和胡蘿卜苷（daucosterol）。陳昭文等從錫蘭琉璃草（Cynoglossumzeylanicum(Vabi)Thunb.）脂溶性部分分得β-谷甾醇和月桂酸。2.藥理作用2.1肝毒性琉璃草屬植物大都含有豐富的PAs，而其是目前已知的最重要的植物性肝毒成分，然而，并不是所有的PAs都具有肝毒性，Mattocks等總結(jié)了PAs肝毒性的構(gòu)效關(guān)系，肝毒性必需基團：①一個不飽和吡咯環(huán)；②1個或2個OH，每個都通過1個C原子連在吡咯環(huán)上；③至少有1個OH被酯化；④酸部分帶有分支的側(cè)鏈。2.2神經(jīng)節(jié)阻滯作用Pandey等對天芥菜堿(heliolrine)進行了藥理研究，體內(nèi)和體外實驗表明，天芥菜堿(heliolrine)選擇性降低尼古丁所致神經(jīng)節(jié)激動效應(yīng)。刺凌德草堿（echinatine）也具有同樣的作用，10毫克/千克就可以完全阻斷電刺激交感節(jié)前纖維引起的瞬膜收縮。2.3抗菌、抗腫瘤作用目前對毛果天芥菜堿（lasiocarpine）研究較多，藥理研究發(fā)現(xiàn)，其對實驗?zāi)[瘤系統(tǒng)walker-256系統(tǒng)有顯著活性，且抑制新月型念珠球菌活性較強，對熱帶念珠球菌有最大抑制活性（劉清華，袁經(jīng)權(quán)等，2005）。紫草科中的某些吡咯里西啶類化合物擁有雙重的生理活性，其中有一些具有抗菌、抑制微生物和抗腫瘤活性。如在美國問世的indicine-N-oxide臨床上用來治療腹水癌，療效顯著（OgihayaK，MiyagiY，HigaM，et.al．1997）。另一些則表現(xiàn)出肝毒、致突變、致癌等毒性。2.4心血管作用從錫蘭琉璃草（Cynoglossum

zeylanicum(Vabi)Thunb.）中分得一種水溶性生物－綠花倒提壺堿，藥理實驗表明其具有增強小鼠心肌耐缺氧作用（陳昭文，李金山等，1987）。而在早期對披針葉琉璃草（cynoglossumlanceolatumforst）初步研究中發(fā)現(xiàn)其全草制劑具有擴張冠狀動脈，增加冠脈血流量及增加心肌耐缺氧量的作用，在據(jù)此進行的治療冠心病研究中也取得比較滿意的結(jié)果（劉清華，袁經(jīng)權(quán)等，2005）。2.5抗炎鎮(zhèn)痛用琉璃草（cynoglossumleiaeum(vahb)）水溶性溶出物對小鼠二甲苯所致的耳腫脹和毛細(xì)血管通透性進行藥理試驗，表明溶出物中嘌呤類生物堿具有抗炎鎮(zhèn)痛的作用（張國安，劉紅，2001）。3.臨床應(yīng)用3.1治療神經(jīng)衰弱以琉璃草屬植物倒提壺的地上部分提取生物堿制成天芥合劑，表明其確有一定的抑制中樞神經(jīng)作用，用量小，無明顯的毒副作用（姚志道，孫述奎等，1996）。而買買素唐應(yīng)用倒提壺糖漿及濃縮藥片治療神經(jīng)衰弱，具有一定的療效（新疆首屆神經(jīng)科學(xué)術(shù)會議資料匯編，1982）。3.2前列腺疾病中國專利報道趙明生用倒提壺及其提取物治療前列腺疾病及其前列腺疾病等引起的性功能障礙具有起效快、療效確實、穩(wěn)定的優(yōu)點，能改善和修復(fù)人體某些生理功能，提高人的機體防御力和生活質(zhì)量。3.3治療脫發(fā)采用紫草科琉璃草屬植物的原生藥材、炮制品、提取物或以其原生藥材、炮制品、提取物為活性成分制備而得的制劑，在治療脫發(fā)方面效果顯著，有效率約85％，尤其是治療雄激素源性脫發(fā)效果顯著。脫發(fā)患者一般用藥30天以后，脫發(fā)現(xiàn)象停止，使用2～3個月以后，萎縮的毛囊開始修復(fù)，禿頂部位長出新發(fā)，禿頭部位逐漸被新生的頭發(fā)覆蓋，頭發(fā)的生長代謝逐漸恢復(fù)正常（趙明生，2007）。3.4治療肛腸疾病紫草科琉璃草屬植物或其提取物用于治療痔瘡、便秘、脫肛等肛腸疾病，具有起效快，療效確實穩(wěn)定，能改善和修復(fù)人體相關(guān)生理功能，提高人的機體抵抗力和生活質(zhì)量的特點，經(jīng)近百例患者使用，其有效率在90％左右，為臨床治療痔瘡、便秘、脫肛等肛腸疾病提供了一種新的選擇（趙明生，2007）。倒提壺簡介倒提壺（CynoglossumamabileStapfetDrumm），系紫草科琉璃草屬植物，多年生草本，分布于我國云南、貴州、廣東、廣西等地。其地上部分又叫狗屎花、狗舌花、藍(lán)布裙、藍(lán)花參、小綠連草等，其地下部分異名雞爪參、狗屎花根、接骨草根等；倒提壺全草入藥，其味苦，性涼，有清熱利濕，散瘀止血、止咳、鎮(zhèn)痛之功效，是我國布依族常用來治療瘧疾、肝炎、痢疾、咳嗽、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、支氣管炎、膀胱炎、尿道炎等癥的民族藥物。倒提壺化學(xué)成分研究研究進展經(jīng)溶劑分步萃取，反復(fù)硅膠柱層析，有機溶劑重結(jié)晶，凝膠柱色譜等分離純化手段，從倒提壺全草的水提物和醇提物中分離得到了10個化合物。通過理化常數(shù)測定及波譜分析方法，輔助以其他定性方法并結(jié)合文獻鑒定為：豆甾醇（Stigmasterol）、正二十九烷酸（Octacosanoicacid）、β-谷甾醇（β-sitosterol）、胡蘿卜苷（Daucosterol）、鄰羥基苯甲酸（O-Hydroxybenzoicacid）、3,4-二羥基苯甲酸（3,4-Dihydroxybenzoicacid）、2α,3β-二羥基齊墩果-12-烯-23,28,30-三酸（2α,3β-dihydroxyolean-12-en-23,28,30-trioicacid）、2α,3β,19α,23-四羥基齊墩果-12-烯-28-酸（2α,3β,19α,23-tetrahydroxyolean-12-en-28-oicacid）、21-O-β-D-葡萄吡喃糖基-2α,3β,21β,23-四羥基齊墩果-12-烯-28-酸(21-O-β-D-glucopyranosyl-2α,3β,21β,23-tetrahydroxyolean-12-en-28-oicacid）和(2S,2’R,3S,4R,12E)-N-(2’-hydroxytetracosanoyl)-2-amino-octadec-12-ene-1,3,4,-triol(benjaminamide）（徐慶軍，2009）云南兩種變形倒提壺1.紅花倒提壺2.白花倒提壺倒提壺呈蘭色，云南兩種變形倒提壺指的是紅色倒提壺和白色倒提壺，在形體特征上，除顏色上的差別外，其它特征基本相似。但民間在治療痔瘡上，僅有這兩種變形倒提壺有效。研究目的1.了解紫草科琉璃草屬的化學(xué)成分、藥理作用及應(yīng)用價值；2.提取與分離倒提壺中的化學(xué)成分；3.比較蘭花倒提壺與兩種變形倒提壺的化學(xué)成分的不同；4.掌握化合物的純度檢測及結(jié)構(gòu)鑒定的方法；5.提高自己的實驗技能。實驗設(shè)計實驗材料與儀器藥材取自云南昭通，為紫草科琉璃草屬植物蘭花倒提壺、紅花倒提壺和白花倒提壺的全草。實驗設(shè)計實驗材料與儀器藥材取自云南昭通，為紫草科琉璃草屬植物蘭花倒提壺、紅花倒提壺和白花倒提壺的全草。薄層色譜用硅膠H、G、GF254，柱色譜用硅膠(200-300目)，D101大孔樹脂，SephadexLH-20為Pharmacia產(chǎn)品。柱色譜所用試劑(MeOH、Me2CO、EtOAc、CHCl3、PE(60-90℃)均為分析純，天津市富宇精細(xì)化工有限公司生產(chǎn)。顯色劑為碘蒸氣，5%磷鉬酸乙醇溶液和10%硫酸乙醇溶液。實驗材料與儀器提取用微型多能提取濃縮機組；熔點用X-4和X-6型數(shù)字顯示顯微熔點測定儀測定；粉碎藥材用FW135型中草藥粉碎機；紅外光譜用PerkinElmerSpectrum-100型紅外光譜儀測定(KBr壓片法)；ESI-MS譜用Agilent6120型液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀測定；核磁共振譜用BrukerAV400超導(dǎo)核磁共振波譜儀測定，TMS做內(nèi)標(biāo)；RE-52CS型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀；G2X-9240型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱；電子分析天平；WZZ-2B自動旋光儀?；瘜W(xué)成分的提取與分離倒提壺全草10kg，粉碎，置于100L提取罐中，以水浸泡藥材半小時，之后水回流提取4次，每次2.5小時，合并提取液，減壓濃縮，至濃縮液密度大約為1.1g/cm3，然后依次分別用石油醚，氯仿，乙酸乙酯，正丁醇萃取，減壓濃縮回收溶劑，得到不同極性的各部位浸膏。將藥材3kg用95%乙醇于提取罐中回流提取3次，合并提取液減壓濃縮成密度約1.1g/cm3濃縮液，分別用石油醚，氯仿，乙酸乙酯，正丁醇萃取進行萃取，減壓濃縮回收溶劑，得到各個部分浸膏。化學(xué)成分的提取與分離根據(jù)水提、醇提氯仿、乙酸乙酯部位薄層板層析結(jié)果，對這兩個部位分別合并進行柱層析，對醇提石油醚部位、水提正丁醇部位進行柱層析。將石油醚部位浸膏經(jīng)硅膠柱(200-300目，樣品：吸附劑=1：20)層析，石油醚-乙酸乙酯梯度洗脫(100:1；100:3,100:7；1:1;EtOAc)，每200ml收集一個流分，配合薄層色譜檢測合并相同流分?；瘜W(xué)成分的提取與分離正丁醇萃取物用D101大孔樹脂進行粗分，用水、10%、30%、50%、70%、95%乙醇進行梯度洗脫。每200ml收集一個流分，配合薄層色譜檢測合并相同流分。氯仿部位樣品用硅膠拌樣，以硅膠作為吸附劑、PE：EtOAC洗脫劑進行柱層析，每600mL為一個流分，以石油醚：乙酸乙酯=100:1、100:3、100:5、100:10、100:15、5:1、2:1和EtOAc8個梯度進行洗脫。配合薄層色譜檢測合并相同流分。化學(xué)成分的提取與分離乙酸乙酯部位樣品硅膠拌樣，以硅膠為吸附劑，以氯仿：甲醇洗脫劑進行柱層析，每50mL為一個流分，以氯仿：甲醇=100:5、100:10、100:15、100:20）進行梯度洗脫。洗脫后配合TLC檢測合并相同流分，然后用小柱，以甲醇：氯仿（10:100→100:100)為洗脫劑繼續(xù)進行反復(fù)柱層析，對極性相同的部分用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀于60℃濃縮，在小的硅膠板上，用不同的展開劑對濃縮液進行展開，能展開的部分再于大板上進行展開，并于熒光紫外燈下觀察后再進行具體操作?；瘜W(xué)成分的提取與分離將在紫外燈下成一條直線的部分刮下來，用不同的極性的展開劑進行展開，將基本呈圓形的點刮下來，抽濾形成待測夜，然后再用高效液相色譜進一步確定其純度?；衔锏慕Y(jié)構(gòu)測定方法測定樣品的物理常數(shù)，如熔點或沸點，比旋度或折光率等，查文獻，初步判斷樣品是已知還是未知物，若是已知物，按以下程序：①測定樣品熔點，與已知品的文獻值對照，比較是否一致或接近。②測定樣品與標(biāo)準(zhǔn)品的混溶點，所測值不下降。③將樣品與標(biāo)準(zhǔn)品共薄層色譜或紙色譜，比較其Rf值是否一致。④測樣品的紅外光譜，與標(biāo)準(zhǔn)品的紅外光譜或標(biāo)準(zhǔn)譜圖進行比較，是否完全一致?；衔锝Y(jié)構(gòu)鑒定的結(jié)構(gòu)測定方法若是未知物，按以下程序：①進行檢識反應(yīng)