醫(yī)學藥物基因檢測專題培訓課件

藥物基因檢測藥物基因檢測11藥物基因組學的概念2北京精準醫(yī)學服務(wù)平臺3藥物基因檢測應(yīng)用示例4

總結(jié)目錄1藥物基因組學的概念2北京精準醫(yī)學服務(wù)平臺3藥物基因檢測應(yīng)用21藥物基因組學的概念1藥物基因組學的概念3藥物治療效果的差異性

相同病癥相同治療藥物相同劑量毒副反應(yīng)治療作用不起藥效常見臨床藥物治療有效率哮喘、糖尿病、抑郁癥等

<60%丙肝、骨質(zhì)疏松、風濕性關(guān)節(jié)炎<50%抗腫瘤藥物<24%藥物治療的個體差異現(xiàn)象無法用傳統(tǒng)藥動學和藥效學解釋藥物治療效果的差異性相同病癥毒副反應(yīng)治療作用不起藥效常見臨4藥物基因組學藥物基因組學是“藥物反應(yīng)”的基因組學，以藥物遺傳多態(tài)性為基礎(chǔ)，從基因組整體角度研究藥物與遺傳的關(guān)系，主要以藥物效應(yīng)和安全性為目標，研究各種基因突變與藥效與安全性之間的關(guān)系，其目的是建立基于評價疾病易感性和選擇藥物治療方案的個體化患者特征的遺傳變異標志。藥代動力學：研究藥物在體內(nèi)吸收、分布、代謝和排泄規(guī)律（確定給藥劑量和間隔時間的依據(jù))。藥效動力學：研究藥物對機體的作用、作用規(guī)律和作用機制。精準治療：從基因組出發(fā)，研究藥物與基因組結(jié)構(gòu)之間的關(guān)系，指導臨床用藥，達到個體化治療目標。藥物基因組學藥物基因組學是“藥物反應(yīng)”的基因組學，以藥物遺傳559%藥物不良反應(yīng)與基因變異相關(guān)。JAMA,2001;286:2270-2279藥物療效和毒性的個體差異基因檢測基因變異

(單核苷酸多態(tài)性-SNP）藥物代謝酶藥物轉(zhuǎn)運體藥物靶點藥代動力學藥效動力學59%藥物不良反應(yīng)與基因變異相關(guān)。JAMA,2001;26數(shù)據(jù)庫支持PharmGKB數(shù)據(jù)庫支持PharmGKB7臨床藥物基因組學實施聯(lián)盟臨床藥物基因組學實施聯(lián)盟8現(xiàn)狀至2017年4月5日，各國基因相關(guān)藥物達251個美國223個，歐盟92個，日本53個，加拿大109個現(xiàn)狀至2017年4月5日，各國基因相關(guān)藥物達259現(xiàn)狀我國2012版臨床藥學重點專科評分標準中，均要求三甲醫(yī)院開展基于藥物基因檢測的個體化藥學服務(wù)。

SFDA已經(jīng)更改很多藥品的說明書，除了靶向藥物以外，普通化學藥物，如得理多（卡馬西平）等，已經(jīng)在說明書中明確標示：HLA-B1502基因陽性者，禁止使用卡馬西平?，F(xiàn)狀我國2012版臨床藥學重點?？圃u分標準中，均要求三甲醫(yī)院10現(xiàn)狀現(xiàn)狀11現(xiàn)狀現(xiàn)狀12廣東省現(xiàn)狀2017年廣東省高水平醫(yī)院建設(shè)標準中，在藥學部的服務(wù)能力評分指標中明確提出：用藥相關(guān)基因檢測人數(shù)≥600，品種數(shù)≥6，基因個體化治療方案設(shè)計例數(shù)≥300。廣東省現(xiàn)狀13醫(yī)學藥物基因檢測專題培訓課件14廣東省藥學會設(shè)立精準用藥研究基金廣東省藥學會設(shè)立精準用藥研究基金152北京精準醫(yī)學服務(wù)平臺2北京精準醫(yī)學服務(wù)平臺16檢測原理A寡核苷酸探針：3’端接有熒光素（紅圈），5’端接有淬滅基團（紅點）未雜交時，成自身環(huán)狀，不發(fā)出熒光。35Q+A35=T模板G有特異核酸SNP位點的模板雜交后，探針打開，淬滅基團遠離熒光素，發(fā)出熒光檢測原理A寡核苷酸探針：35Q+A35=T模板G有特異核酸S17檢測原理由于測序探針是熒光素標記的，利用熒光檢測設(shè)備即可直接檢測雜交染色的結(jié)果，熒光檢測儀高靈敏地捕捉雜交測序熒光信號的變化，從而完成目標序列的精準檢測，由此形成了新一代雜交測序，即數(shù)字熒光分析雜交/原位雜交熒光染色脫氧核糖核酸測序（簡稱“數(shù)字熒光分子雜交/雜交測序技術(shù)”）體系。該技術(shù)要求更多的模板核酸（要求不低于10000拷貝）才能完成測序，但不需要通過PCR環(huán)節(jié)。檢測原理18臨床基因檢測技術(shù)對比探針雜交采集標本提取基因組DNA/RNAPCR擴增顯色/掃描電泳檢測純化PCR產(chǎn)物基因芯片焦磷酸測序雙脫氧標記毛細管電泳焦磷酸測序雙脫氧測序、SangerRT-PCR實時熒光PCR血液標本白細胞染色體核型分析或雜交測序（系統(tǒng)自動完成）數(shù)字熒光分子雜交和雜交測序出現(xiàn)污染的高風險環(huán)節(jié)低風險環(huán)節(jié)避開PCR環(huán)節(jié)，前處理簡單*金標準臨床基因檢測技術(shù)對比探針雜交采集標本提取基因組PCR擴增顯色19熒光分子雜交獨特優(yōu)勢1.不怕污染:少量的異源DNA污染的信號很低，不會影響測序準確性。例如500拷貝的異源DNA污染，在PCR擴增中絕對是災(zāi)難級的，但在雜交測序中，異源信號的強度不到總信號強度的10%，則可以作為本底信號而被消除；2.簡便：雜交測序沒有繁瑣的標本DNA提取和PCR擴增產(chǎn)物提取環(huán)節(jié)，將臨床標本簡單處理即可進行雜交測序，因此測序速度非?？?，從拿到臨床標本算起，約3小時即由檢測儀自動報告測序結(jié)果。熒光分子雜交獨特優(yōu)勢20準確性該技術(shù)初期對進行方法學準確性驗證。與Sanger法進行比較，一致性為99%。準確性該技術(shù)初期對進行方法學準確性驗證。21可檢測藥物：心腦血管科：氯吡格雷、阿司匹林、華法林、他汀類、硝酸甘油、ACE-I類、美托洛爾、葉酸、卡馬西平、苯妥因等。腫瘤科：嘧啶類、鉑類、紫杉醇、伊立替康、他莫昔芬、甲氨蝶呤等。心理科：氯氮卓、氯氮平、奧氮平、氟西汀、文拉法辛、西酞普蘭、阿米替林、依地普侖等。消化科：PPI類、環(huán)孢素A、硫唑嘌呤、呋塞米和螺內(nèi)酯等。呼吸科：吸入性糖皮質(zhì)激素、短/長效β受體激動劑、伏立康唑等。內(nèi)分泌科：磺脲類、二甲雙胍和胰島素等。婦產(chǎn)科：葉酸(胎兒神經(jīng)管發(fā)育異常、習慣性流產(chǎn)等）。風濕免疫科/腎內(nèi)科/血液科：他克莫司、環(huán)磷酰胺、別嘌醇、硫唑嘌呤等。........可檢測藥物：22開展情況至2016年底，覆蓋醫(yī)院284家。開展情況至2016年底，覆蓋醫(yī)院284家。23廣東開展示例南方醫(yī)院：卡馬西平、苯妥英鈉、磷苯妥因、奧卡西平、巰嘌呤、硫唑嘌呤、糖皮質(zhì)激素沖擊、甲氨蝶呤、氯吡格雷、阿司匹林、華法林、他克莫司、別嘌醇、環(huán)磷酰胺、阿糖胞苷、奧美拉唑、泮托拉唑、蘭索拉唑、埃索美拉唑、葉酸、新生兒自閉癥、孕中及產(chǎn)后抑郁、胎兒神經(jīng)發(fā)育異常、習慣性流產(chǎn)、人工受精。中山孫逸仙紀念醫(yī)院：卡馬西平、巰嘌呤、硫唑嘌呤、別嘌醇、奧美拉唑、糖皮質(zhì)激素沖擊、甲氨蝶呤、他克莫司、環(huán)孢素、腎移植排斥風險、霉酚酸、丙戊酸、環(huán)磷酰胺、替莫唑胺、抗胸腺細胞球蛋白ATG。中大五院：氯吡格雷、華法林、阿司匹林、他汀、伏立康唑、環(huán)孢素、他克莫司、糖皮質(zhì)激素、奧氮平、氯氮平、奮乃靜、利培酮、文拉法辛、丙戊酸、別嘌醇、乙醇風險等。......廣東開展示例南方醫(yī)院：24檢測操作分子診斷檢測樣本：1、血液樣本2、組織樣本血液樣本：2～3ml靜脈全血（EDTA抗凝紫管）白細胞富集耀金分測序反應(yīng)耀金保個體化藥學基因檢測主要步驟檢測操作分子診斷檢測樣本：白細胞富集耀金分測序反應(yīng)耀金保個體25條件支持該項目污染小，實驗室要求為通風通水的普通實驗室條件即可，不需要PCR認證實驗室。我院開展此項新技術(shù)、新項目需新添置的設(shè)備1、熒光分析儀2、離心機3000R/M3、冰箱4、普通PC機5、移液槍*36、打印機開展此項新技術(shù)、新項目所需新購置的試劑1、耀金分

（耀金寶等為贈送）條件支持該項目污染小，實驗室要求為通風通水的普通實驗室條件即26檢測操作1、血液樣本：2-3ml靜脈全血(不需空腹)，使用一次性真空抽血管（EDTA抗凝紫帽管）采集，于4℃低溫保存，保存時間不宜超過24h。2、使用預處理液NH4CL裂解紅細胞，離心，獲得白細胞。2、將白細胞溶解到耀金寶中，再取1.5微升，加入耀金分試劑管中。3、將加入了白細胞裂解液的耀金分試劑，放置入熒光檢測儀中。4、熒光檢測儀自動完成染色體核型分析和基因序列測定。5、熒光檢測儀在2.5小時內(nèi)自動報告基因型結(jié)果。6、藥師解讀報告，給出個體化用藥建議。檢測操作1、血液樣本：2-3ml靜脈全血(不需空腹)，使用一273藥物基因檢測應(yīng)用示例3藥物基因檢測應(yīng)用示例28氯吡格雷基因檢測氯吡格雷基因檢測29氯吡格雷氯吡格雷是一種血小板聚集抑制劑。可用于防治心肌梗死，缺血性腦血栓，閉塞性脈管炎和動脈粥樣硬化及血栓栓塞引起的并發(fā)癥。氯吡格雷30氯吡格雷代謝路徑氯吡格雷代謝路徑31醫(yī)學藥物基因檢測專題培訓課件32CYP2C19的中國人特異性

CYP2C19的表型多態(tài)性有明顯的種族差異

白種人，弱代謝者發(fā)生率僅為3％

韓國人，弱代謝者發(fā)生率為13％

津巴布韋黑人中，弱代謝者發(fā)生率僅約4％

中國人，弱代謝者發(fā)生率為15％-17％付良青.國外醫(yī)學藥學分冊,2001.28(2):74-78CYP2C19的中國人特異性CYP2C19的表型多態(tài)性有明33醫(yī)學藥物基因檢測專題培訓課件34PON1PON135醫(yī)學藥物基因檢測專題培訓課件36醫(yī)學藥物基因檢測專題培訓課件37臨床數(shù)據(jù)分析成果分享臨床數(shù)據(jù)分析成果分享38臨床數(shù)據(jù)分析成果分享臨床數(shù)據(jù)分析成果分享394總結(jié)4總結(jié)40北京精準醫(yī)學服務(wù)平臺

完善方案服務(wù)藥物位點多簡便高效準確抗污染，準確性高！前處理簡單，自動檢測！設(shè)備可同時多位點，高效率檢測！涵蓋多種慢性病及腫瘤相關(guān)藥物基因位點！基于基因測序結(jié)果，為您提供相應(yīng)的藥物治療方案！北京精準醫(yī)學服務(wù)平臺

完善方案服務(wù)藥物位點多簡便高效準確抗污41醫(yī)學藥物基因檢測專題培訓課件42THANKYOUTHANKYOU43藥物基因檢測藥物基因檢測441藥物基因組學的概念2北京精準醫(yī)學服務(wù)平臺3藥物基因檢測應(yīng)用示例4

總結(jié)目錄1藥物基因組學的概念2北京精準醫(yī)學服務(wù)平臺3藥物基因檢測應(yīng)用451藥物基因組學的概念1藥物基因組學的概念46藥物治療效果的差異性

相同病癥相同治療藥物相同劑量毒副反應(yīng)治療作用不起藥效常見臨床藥物治療有效率哮喘、糖尿病、抑郁癥等

<60%丙肝、骨質(zhì)疏松、風濕性關(guān)節(jié)炎<50%抗腫瘤藥物<24%藥物治療的個體差異現(xiàn)象無法用傳統(tǒng)藥動學和藥效學解釋藥物治療效果的差異性相同病癥毒副反應(yīng)治療作用不起藥效常見臨47藥物基因組學藥物基因組學是“藥物反應(yīng)”的基因組學，以藥物遺傳多態(tài)性為基礎(chǔ)，從基因組整體角度研究藥物與遺傳的關(guān)系，主要以藥物效應(yīng)和安全性為目標，研究各種基因突變與藥效與安全性之間的關(guān)系，其目的是建立基于評價疾病易感性和選擇藥物治療方案的個體化患者特征的遺傳變異標志。藥代動力學：研究藥物在體內(nèi)吸收、分布、代謝和排泄規(guī)律（確定給藥劑量和間隔時間的依據(jù))。藥效動力學：研究藥物對機體的作用、作用規(guī)律和作用機制。精準治療：從基因組出發(fā)，研究藥物與基因組結(jié)構(gòu)之間的關(guān)系，指導臨床用藥，達到個體化治療目標。藥物基因組學藥物基因組學是“藥物反應(yīng)”的基因組學，以藥物遺傳4859%藥物不良反應(yīng)與基因變異相關(guān)。JAMA,2001;286:2270-2279藥物療效和毒性的個體差異基因檢測基因變異

(單核苷酸多態(tài)性-SNP）藥物代謝酶藥物轉(zhuǎn)運體藥物靶點藥代動力學藥效動力學59%藥物不良反應(yīng)與基因變異相關(guān)。JAMA,2001;249數(shù)據(jù)庫支持PharmGKB數(shù)據(jù)庫支持PharmGKB50臨床藥物基因組學實施聯(lián)盟臨床藥物基因組學實施聯(lián)盟51現(xiàn)狀至2017年4月5日，各國基因相關(guān)藥物達251個美國223個，歐盟92個，日本53個，加拿大109個現(xiàn)狀至2017年4月5日，各國基因相關(guān)藥物達2552現(xiàn)狀我國2012版臨床藥學重點?？圃u分標準中，均要求三甲醫(yī)院開展基于藥物基因檢測的個體化藥學服務(wù)。

SFDA已經(jīng)更改很多藥品的說明書，除了靶向藥物以外，普通化學藥物，如得理多（卡馬西平）等，已經(jīng)在說明書中明確標示：HLA-B1502基因陽性者，禁止使用卡馬西平?，F(xiàn)狀我國2012版臨床藥學重點專科評分標準中，均要求三甲醫(yī)院53現(xiàn)狀現(xiàn)狀54現(xiàn)狀現(xiàn)狀55廣東省現(xiàn)狀2017年廣東省高水平醫(yī)院建設(shè)標準中，在藥學部的服務(wù)能力評分指標中明確提出：用藥相關(guān)基因檢測人數(shù)≥600，品種數(shù)≥6，基因個體化治療方案設(shè)計例數(shù)≥300。廣東省現(xiàn)狀56醫(yī)學藥物基因檢測專題培訓課件57廣東省藥學會設(shè)立精準用藥研究基金廣東省藥學會設(shè)立精準用藥研究基金582北京精準醫(yī)學服務(wù)平臺2北京精準醫(yī)學服務(wù)平臺59檢測原理A寡核苷酸探針：3’端接有熒光素（紅圈），5’端接有淬滅基團（紅點）未雜交時，成自身環(huán)狀，不發(fā)出熒光。35Q+A35=T模板G有特異核酸SNP位點的模板雜交后，探針打開，淬滅基團遠離熒光素，發(fā)出熒光檢測原理A寡核苷酸探針：35Q+A35=T模板G有特異核酸S60檢測原理由于測序探針是熒光素標記的，利用熒光檢測設(shè)備即可直接檢測雜交染色的結(jié)果，熒光檢測儀高靈敏地捕捉雜交測序熒光信號的變化，從而完成目標序列的精準檢測，由此形成了新一代雜交測序，即數(shù)字熒光分析雜交/原位雜交熒光染色脫氧核糖核酸測序（簡稱“數(shù)字熒光分子雜交/雜交測序技術(shù)”）體系。該技術(shù)要求更多的模板核酸（要求不低于10000拷貝）才能完成測序，但不需要通過PCR環(huán)節(jié)。檢測原理61臨床基因檢測技術(shù)對比探針雜交采集標本提取基因組DNA/RNAPCR擴增顯色/掃描電泳檢測純化PCR產(chǎn)物基因芯片焦磷酸測序雙脫氧標記毛細管電泳焦磷酸測序雙脫氧測序、SangerRT-PCR實時熒光PCR血液標本白細胞染色體核型分析或雜交測序（系統(tǒng)自動完成）數(shù)字熒光分子雜交和雜交測序出現(xiàn)污染的高風險環(huán)節(jié)低風險環(huán)節(jié)避開PCR環(huán)節(jié)，前處理簡單*金標準臨床基因檢測技術(shù)對比探針雜交采集標本提取基因組PCR擴增顯色62熒光分子雜交獨特優(yōu)勢1.不怕污染:少量的異源DNA污染的信號很低，不會影響測序準確性。例如500拷貝的異源DNA污染，在PCR擴增中絕對是災(zāi)難級的，但在雜交測序中，異源信號的強度不到總信號強度的10%，則可以作為本底信號而被消除；2.簡便：雜交測序沒有繁瑣的標本DNA提取和PCR擴增產(chǎn)物提取環(huán)節(jié)，將臨床標本簡單處理即可進行雜交測序，因此測序速度非?？?，從拿到臨床標本算起，約3小時即由檢測儀自動報告測序結(jié)果。熒光分子雜交獨特優(yōu)勢63準確性該技術(shù)初期對進行方法學準確性驗證。與Sanger法進行比較，一致性為99%。準確性該技術(shù)初期對進行方法學準確性驗證。64可檢測藥物：心腦血管科：氯吡格雷、阿司匹林、華法林、他汀類、硝酸甘油、ACE-I類、美托洛爾、葉酸、卡馬西平、苯妥因等。腫瘤科：嘧啶類、鉑類、紫杉醇、伊立替康、他莫昔芬、甲氨蝶呤等。心理科：氯氮卓、氯氮平、奧氮平、氟西汀、文拉法辛、西酞普蘭、阿米替林、依地普侖等。消化科：PPI類、環(huán)孢素A、硫唑嘌呤、呋塞米和螺內(nèi)酯等。呼吸科：吸入性糖皮質(zhì)激素、短/長效β受體激動劑、伏立康唑等。內(nèi)分泌科：磺脲類、二甲雙胍和胰島素等。婦產(chǎn)科：葉酸(胎兒神經(jīng)管發(fā)育異常、習慣性流產(chǎn)等）。風濕免疫科/腎內(nèi)科/血液科：他克莫司、環(huán)磷酰胺、別嘌醇、硫唑嘌呤等。........可檢測藥物：65開展情況至2016年底，覆蓋醫(yī)院284家。開展情況至2016年底，覆蓋醫(yī)院284家。66廣東開展示例南方醫(yī)院：卡馬西平、苯妥英鈉、磷苯妥因、奧卡西平、巰嘌呤、硫唑嘌呤、糖皮質(zhì)激素沖擊、甲氨蝶呤、氯吡格雷、阿司匹林、華法林、他克莫司、別嘌醇、環(huán)磷酰胺、阿糖胞苷、奧美拉唑、泮托拉唑、蘭索拉唑、埃索美拉唑、葉酸、新生兒自閉癥、孕中及產(chǎn)后抑郁、胎兒神經(jīng)發(fā)育異常、習慣性流產(chǎn)、人工受精。中山孫逸仙紀念醫(yī)院：卡馬西平、巰嘌呤、硫唑嘌呤、別嘌醇、奧美拉唑、糖皮質(zhì)激素沖擊、甲氨蝶呤、他克莫司、環(huán)孢素、腎移植排斥風險、霉酚酸、丙戊酸、環(huán)磷酰胺、替莫唑胺、抗胸腺細胞球蛋白ATG。中大五院：氯吡格雷、華法林、阿司匹林、他汀、伏立康唑、環(huán)孢素、他克莫司、糖皮質(zhì)激素、奧氮平、氯氮平、奮乃靜、利培酮、文拉法辛、丙戊酸、別嘌醇、乙醇風險等。......廣東開展示例南方醫(yī)院：67檢測操作分子診斷檢測樣本：1、血液樣本2、組織樣本血液樣本：2～3ml靜脈全血（EDTA抗凝紫管）白細胞富集耀金分測序反應(yīng)耀金保個體化藥學基因檢測主要步驟檢測操作分子診斷檢測樣本：白細胞富集耀金分測序反應(yīng)耀金保個體68條件支持該項目污染小，實驗室要求為通風通水的普通實驗室條件即可，不需要PCR認證實驗室。我院開展此項新技術(shù)、新項目需新添置的設(shè)備1、熒光分析儀2、離心機3000R/M3、冰箱4、普通PC機5、移液槍*36、打印機開展此項新技術(shù)、新項目所需新購置的試劑1、耀金分

（耀金寶等為贈送）條件支持該項目污染小，實驗室要求為通風通水的普通實驗室條件即69檢測操作1、血液樣本：2-3ml靜脈全血(不需空腹)，使用一次性真空抽血管（EDTA抗凝紫帽管）采集，于4℃低溫保存，保存時間不宜超過24h。2、使用預處理液NH4CL裂解紅細胞，離心，獲得白細胞。2、將白細胞溶解到耀金寶中，再取1.5微升，加入耀金分試劑管中。3