復(fù)習(xí)-單克隆抗體的過程課件

單克隆抗體溫故知新：1.細(xì)胞工程的兩大類型？各自的技術(shù)手段及其原理是？2.核移植的兩大類型？其中提供細(xì)胞質(zhì)的為去核的卵母細(xì)胞，為什么選去核的卵母細(xì)胞？3.動物細(xì)胞融合的實質(zhì)，原理和方法？融合后的細(xì)胞叫？體積大，易操作；含有使細(xì)胞核的全能性容易表達的物質(zhì)和營養(yǎng)條件植物細(xì)胞工程：植物組織培養(yǎng)（細(xì)胞的全能性）植物體細(xì)胞雜交

（細(xì)胞的全能性、細(xì)胞膜的流動性）動物細(xì)胞工程：動物細(xì)胞培養(yǎng)（細(xì)胞增殖）

核移植（動物細(xì)胞核的全能性）動物細(xì)胞融合（細(xì)胞膜的流動性）單克隆抗體

（細(xì)胞膜的流動性、細(xì)胞增殖）單克隆抗體1.概念：由單個B淋巴細(xì)胞經(jīng)過無性繁殖（克?。?，形成基因型相同的細(xì)胞群，這一細(xì)胞群所產(chǎn)生的化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強的抗體

稱為單克隆抗體。

2.特點：

特異性強、靈敏度高

一個B淋巴細(xì)胞只分泌一種特異性抗體骨髓瘤細(xì)胞（癌細(xì)胞）能無限增殖雜交瘤細(xì)胞動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)動物細(xì)胞融合單克隆抗體既能在體外大量繁殖，又能產(chǎn)生特異性抗體單克隆抗體漿細(xì)胞第一次篩選用特定的選擇培養(yǎng)基帥選出雜交瘤細(xì)胞融合①細(xì)胞合成DNA有D和S兩條途徑，其中D途徑能被氨基嘌呤阻斷。②人淋巴細(xì)胞中有這兩種DNA的合成途徑，但一般不分裂增殖。

③鼠骨髓瘤細(xì)胞中只有D途徑，沒有S途徑，但能不斷分裂增殖。你想到篩選雜交瘤細(xì)胞的方案了么？

小資料：陽性孔方法——抗原-抗體雜交法用多孔細(xì)胞培養(yǎng)板培養(yǎng)，稀釋度要保證每個孔內(nèi)不多于一個細(xì)胞。抗原抗體雜交法檢測——呈陽性反應(yīng)單克隆抗體第二次篩選雜交細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞體外或體內(nèi)培養(yǎng)第一次篩選骨髓瘤細(xì)胞誘導(dǎo)細(xì)胞融合特異性雜交瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞系提取經(jīng)過免疫的B淋巴細(xì)胞動物細(xì)胞融合技術(shù)動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)單克隆抗體的制備過程：特點：既能大量繁殖又能產(chǎn)生專一抗體特點：特異性強靈敏度高可大量制備注射抗原免疫特定的選擇培養(yǎng)基多孔細(xì)胞培養(yǎng)板高考熱點：1.此過程中的B淋巴細(xì)胞是經(jīng)過免疫的，實際上就是漿細(xì)胞。2.融合后形成的雜交細(xì)胞有多種，考慮兩兩融合，共有三種：B-B、B-瘤(雜交瘤細(xì)胞)、瘤-瘤3.單克隆抗體制備中用到的技術(shù)手段：動物細(xì)胞融合、動物細(xì)胞培養(yǎng)。4.原理：細(xì)胞膜的流動性、細(xì)胞增殖5.整個制備過程為何要經(jīng)過兩次篩選?第一次篩選用特定的選擇培養(yǎng)基，

篩選出雜交瘤細(xì)胞（多種）

第二次用多孔培養(yǎng)板，篩選出能產(chǎn)生特異性抗體的雜交瘤細(xì)胞。單克隆確有單個細(xì)胞克隆的含義，只不過克隆的不是B淋巴細(xì)胞，而是雜交瘤細(xì)胞。科勒米爾斯坦榮獲1984年諾貝爾生理學(xué)或醫(yī)學(xué)獎單克隆抗體的制備1、怎樣獲得能分泌專一抗體的B淋巴細(xì)胞？2、從何處獲得較多的B淋巴細(xì)胞？3、用什么方法可以使B淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合？4、怎樣篩選出雜交瘤細(xì)胞？5、怎樣獲得只產(chǎn)生特異性抗體的雜交瘤細(xì)胞？6、怎樣獲得大量的單一抗體？反復(fù)注射特定的抗原，免疫小鼠。小鼠的脾臟PEG、滅活的病毒等利用HAT選擇培養(yǎng)基培養(yǎng)，篩選用多孔細(xì)胞培養(yǎng)板培養(yǎng)，稀釋度要保證每個孔內(nèi)不多于一個細(xì)胞?？乖贵w雜交法檢測——呈陽性反應(yīng)體內(nèi)或體外大量培養(yǎng)特異的雜交瘤細(xì)胞，從中提取單一抗體。(1)若A細(xì)胞是小鼠骨髓瘤細(xì)胞，則B細(xì)胞是取自小鼠體內(nèi)的

細(xì)胞，從小鼠體內(nèi)提取分離該細(xì)胞之前，應(yīng)給小鼠注射_____________類物質(zhì)。（2）d過程是一個_____________過程，該過程的進行常用_____________或_____________的誘導(dǎo)。(3)假設(shè)僅考慮某兩個細(xì)胞的融合，則可形成

種類型的C細(xì)胞，因此需用__________培養(yǎng)基篩選出D細(xì)胞用于培養(yǎng)，D細(xì)胞的名稱是

，其特點是_________________________________________。效應(yīng)B

抗原

細(xì)胞融合

聚乙二醇滅活的病毒

選擇性3既能無限增殖又能產(chǎn)生特異性抗體

雜交瘤細(xì)胞15、（1）單克隆抗體是指

。（2）制備單克隆抗體的步驟：①將__________注入小鼠體內(nèi)，從小鼠脾臟中獲得淋巴細(xì)胞，其中至少1個淋巴細(xì)胞帶有抗該抗原的抗體。②將步驟①獲得的B淋巴細(xì)胞與步驟②培養(yǎng)的骨髓瘤細(xì)胞在_________________的誘導(dǎo)下融合。③將誘導(dǎo)后產(chǎn)生的多種細(xì)胞，放在_______培養(yǎng)基的多孔培養(yǎng)板上培養(yǎng)，篩選。④這樣獲得的雜交瘤細(xì)胞既具有B淋巴細(xì)胞_____________的能力，又具有________________的本領(lǐng)。⑤檢測和分離帶有抗X抗體的陽性細(xì)胞，培養(yǎng)板中每孔放一個細(xì)胞進行培養(yǎng)。⑥將陽性細(xì)胞進行增殖，從而制備出大量抗該抗原的單克隆抗體。化學(xué)性質(zhì)單一，特異性強的抗體

抗原

聚乙二醇選擇性

無限增殖

產(chǎn)生專一抗體（3）大量制備單克隆抗體的方法主要有兩種：①體外培養(yǎng)法，可獲得10μg/mL的抗體；②動物體內(nèi)誘生法可獲得5~20mg/mL的抗體。你選擇的方法及原因是

。（4）用本法制備出的單克隆抗體仍具有局限性，因為它是用小鼠的_______細(xì)胞制備的，其化學(xué)本質(zhì)是___