核醫(yī)學(xué)其它體外分析+分子核進(jìn)展

1、其它體外放射分析1含意：除RIA之外的一切體外放射分析，但它的應(yīng)用有一定局限性。一、競爭蛋白結(jié)合分析（CPBA）：待分析物的結(jié)合劑：蛋白質(zhì)舉例：TBG甲狀腺素結(jié)合球蛋白甲狀腺素 CBG皮質(zhì)醇結(jié)合球pro皮質(zhì)醇 SHBG性激素結(jié)合球pro皮質(zhì)醇 內(nèi)因子結(jié)合蛋白B12 視蛋白視黃醛 蛋白激酶CAMP、cGMP 牛乳蛋白酶、葉酸還原酶葉酸 2方法：競爭性與RIA相同優(yōu)點：這些蛋白天然存在，來源豐富，制備簡單，省時，方法學(xué)成熟易建立。缺點： 比抗體的特異性差、靈敏度也差，為了提高特異性，須在樣品制備上下功夫。如純化，清除干擾物等，不夠方便。 該類蛋白種類有限，應(yīng)用范圍受限，已有很多被RIA和IRMA取

2、代。 3 二、放射受體分析RRA RRA與RBA的區(qū)別含義：以受體為結(jié)合劑，利用競爭結(jié)合原理對配體進(jìn)行體外分析。受體的分類： 膜R：一般為水溶性配體（肽類激素、兒茶酚胺等） 胞內(nèi)R：（漿or核），一般為脂溶性的配體（甲狀腺素，類固醇）受體樣品的制備：與RBA相同。 4標(biāo)記品的要求： 要求配體標(biāo)記前后生物活性不受影響。因為標(biāo)記配體在RRA時活性往往是降低的。如125I標(biāo)上一個不影響，如果有二個125I標(biāo)上就有變化了。RRA的優(yōu)點： 1、R與L的結(jié)合反應(yīng)快、瞬間完成、比RIA出結(jié)果快。 2、能反應(yīng)L的生物學(xué)活性。如冬眠靈有多種衍生物，它們均能與特異抗體結(jié)合，但只有有生物活性的衍生物才能與受體結(jié)合，

3、這種測定反應(yīng)L的生物學(xué)活性，而不是免疫活性。所以研究物質(zhì)結(jié)合與功能RRA占有相當(dāng)?shù)牡匚弧?RRA的缺點： 1、靈敏度比RIA小10100倍，這是因為不同組織間得來的受體對配體的親和力有差異，又難以尋找高親和力的受體。 2、反應(yīng)條件和環(huán)境嚴(yán)格，離子強度，溫度、PH值要求高。 3、NSB結(jié)合容量大，親和力又小，NSB較大6臨床應(yīng)用： 1、利用受體來測體內(nèi)配體的含量。 2、測定體內(nèi)抗受體抗體的量。 有些疾病發(fā)現(xiàn)體內(nèi)存在著抗R的抗體（自身抗體），如Gtraves disease(TSH、甲狀腺素R的抗體)；Insulin B型抗癥（Ins R-Ab）、重癥肌無力（乙酰膽鹼受體抗體）。這類受體的抗體有兩

4、類特征： 1、受體結(jié)合部位抗體（RAb）：當(dāng)R與Ab成復(fù)合物時，復(fù)合物中的R可再與配體結(jié)合，即R的結(jié)合位點保留，但復(fù)合物卻抑制配體與單獨存在的游離R相結(jié)合。 2、受體非結(jié)合部位抗體（Ab）：它的特征是復(fù)合物對配體與R的結(jié)合無抑制作用。 7三、酶的放射分析（REA）1、酶的活性（力）分析 概念：酶活性（力）：指酶催化加速反應(yīng)的能力。 表示法：濃度/時間（反應(yīng)酶促反應(yīng)速度的快慢） 酶的反應(yīng)速度，可以是底物的消耗量或產(chǎn)物的生成量 單位：Kat：（催量）指在規(guī)定條件下，每秒鐘酶催化1mol底物轉(zhuǎn)變所需要酶的量。 舊單位：U；1 U=16.67kat 符號：底物用S表示， S*指標(biāo)記的底物 酶用E表示

5、P產(chǎn)物 反應(yīng)式：*S+E E*S E*P *P+E 經(jīng)過一般時間，從反應(yīng)液中分離出*P，測放。8 *P的CPS酶活性（力）的計算（kat）=- SAte *P的CPS酶的比活力（kat/g）=- SAtew可知以下幾個量：t（分）：*P的放射性CPS；SA標(biāo)記物的比活度；e儀器效率；W參加反應(yīng)的酶的蛋白量（mg）。9優(yōu)點:1、靈敏度高（放射性標(biāo)記品）2、特性性強，由酶的專一性決定。3、適用廣，絕大多數(shù)酶可用此法。缺點:1、需高質(zhì)量的定位標(biāo)記物2、分離方法復(fù)雜，難以自動化。酶液制備：標(biāo)記物制備與選擇PH、激活或抑制劑的使用、溫度、時間等（自學(xué)）102、酶促同位素衍生物分析：實際上分析底物含量。反

6、應(yīng)：標(biāo)記試劑+待測底物 標(biāo)記衍生物 E舉例：32PrATP+膽鹼 32P一磷酰膽鹼+ADP激酶膽鹼 衍生物的放射性強弱標(biāo)記試劑比活度可計算待測物量 （底物）注意：需要知道一個分子待測物能與標(biāo)記試劑結(jié)合的分子比。如果用雙同位素標(biāo)記可以更準(zhǔn)確。 113、酶的激動劑和抑制劑測定法： 原理：激動或抑制劑可加快或減慢酶促反應(yīng)的速率，用系列濃度的激動或抑制劑與酶進(jìn)行定時反應(yīng)，分離產(chǎn)物測放射性，可計算出激動劑或抑制劑的量。如磷酸吡哆醛能使酪氨酸脫羧基產(chǎn)生Co2，14C標(biāo)記酪氨酸經(jīng)磷酸吡哆醛作用產(chǎn)生14Co2，可計算磷酸吡哆醛的量。124、放射酶促飽和分析法：與酶的底物分析相同 該法類同RIA的競爭，不同之處

7、是E不斷從E*S和ES中釋放出來而再去與S反應(yīng)，如果反應(yīng)時間足夠長，因*S與S為同一物，會均被轉(zhuǎn)化為產(chǎn)物，失去競爭之間的函數(shù)關(guān)系，所以不能象RIA那樣等待反應(yīng)平衡，而應(yīng)該在一定時間就得分離測定。這是它的關(guān)鍵（特點之一） 5， ELISA：固相酶標(biāo)記-免疫分析 待測抗原固相化，然后與酶標(biāo)記的抗體結(jié)合形成復(fù)合物，最后不測放射性而是讓酶顯色計算物質(zhì)含量。136、整體酶活力測定及應(yīng)用二氧化碳呼氣試驗：用14C或13C等標(biāo)記酶的底物，如經(jīng)過酶的作用，其產(chǎn)物中可收集到CO2等，反映酶活力。應(yīng)用：幽門螺桿菌可產(chǎn)生尿素酶。如果胃內(nèi)有幽門螺桿菌，可將14C標(biāo)記的尿素分解為14CO2。因此有了呼氣14CO2。檢測

8、幽菌的檢驗。147、其它體外分析的新進(jìn)展 化學(xué)發(fā)光分析（CLIA）：如發(fā)光劑魯米諾經(jīng)氧化劑H2O2和催化劑（HRP）作用下放出光子（發(fā)光）特點：a、用發(fā)光物質(zhì)代替放素建立的免疫分析。b、試劑盒穩(wěn)定性更好，發(fā)光物用特殊處理后才發(fā)光。c、無放射性污染d、設(shè)備相對簡單（仍昂貴，但RIA也貴）e、發(fā)光效率與溫度有關(guān)，須配備恒溫設(shè)備f、 臨床上可應(yīng)用項目有限，價格高于RIA15時間分辨熒光免疫分析（TrFIA） 概念：稀土元素：稀土元素不是土,是周期表中5771號元素的總稱，現(xiàn)又新發(fā)現(xiàn)二個鈧、釔，共計17個元素。 如果用稀土元素標(biāo)記化合物，而這些稀土元素如Eu（銪）、Tb（鋱）Te、Sm（釤）、Dy（鏑

9、）等可發(fā)射熒光，在紫外線激發(fā)下其發(fā)光能譜和發(fā)光時間相對集中而穩(wěn)定。而干擾因素的本底發(fā)光壽命很短，可將標(biāo)記物放置短時間，待本底光暴光后再去測量稀土熒光，所以叫時間分辨。必要時其發(fā)光還可做些增效處理。16該方法優(yōu)點：1、靈敏度高，特異性強2、出結(jié)果快3、樣品熒光能重現(xiàn)4、無放射性污染缺點：儀器價格貴 配套試劑制備困難17免疫PCR原理：用DNA做標(biāo)記物，用PCR法擴增產(chǎn)物上的DNA，通量測定DNA的量進(jìn)行定性研究。基本反應(yīng)：1）將待測物抗原固化試管底部2）加入生物素標(biāo)記的特異抗體Ab-b3）加入親和素A做為連接分子 Ag+Ab-b+AAgAb-b-A4）再加入生物素標(biāo)記的DNA-b得AgAb-b-

10、A-b-DNA 引物 PCR擴增 染色 記錄PCR擴增的DNA量確定Ab的含量。18優(yōu)點：1） 特異性強（與RIA相同）2）靈敏度高（比酶標(biāo)高1000倍，也高于RIA）3）操作簡單缺點：1）假陽性高2）影響實驗準(zhǔn)確度的因素多3）未商品化19還有化學(xué)發(fā)光酶免疫分析（CLEIA）p209 用鹼性磷酸酶標(biāo)記Ab，反應(yīng)的復(fù)合物帶有酶，加入底物金剛烷（dioxetane phosphate）后酶促底物斷裂而發(fā)光。電化學(xué)發(fā)光免疫分析（ECL） p209 208、活化分析： 基本原理，用粒子束（射線）照射樣品，使其中待測穩(wěn)定核素發(fā)生核反應(yīng)變?yōu)榉潘兀捎谶@些放素各具有一定的半衰期、固定的能量特征r射線或其它射

11、線，測量其衰變出的射線能量和活度就可確定樣品中各元素的種類和活度。臨床應(yīng)用：微量元素分析21活化分析的類型：1）中活化分析：a、反應(yīng)堆中子活化分析（廣泛）b、中子高壓倍加器（啟動費用高）c、中子源，如Ra-Be中子源（Ra的a粒子轟擊Be可產(chǎn)生中子）d、自發(fā)裂變中子源252Cf（價格貴），將239Pu在反應(yīng)堆照射二年吸收13個中子才能得到252Cf產(chǎn)額很低。2）帶電粒子活化分析：一般將帶電子粒子如P、d、a加速，然后轟擊待測元素，產(chǎn)生新的放素或穩(wěn)定核素。如12C（p,r）13N3）r射線活化分析：較危險，目前很少用。22活化分析的優(yōu)點：靈敏度高10-9克左右沒有試劑污染可進(jìn)行非破壞性分析一次可同時分析幾十種元素缺點：精確度低有干擾反應(yīng)（副反應(yīng)）方法不易普及不能測化合物的量和結(jié)構(gòu)。23最常用的計算公式（相對測量法） WX AX - = - WS AS248、質(zhì)子激發(fā)X線發(fā)射分析PIXEA 原理：用高速運動的質(zhì)子轟擊待測元素，待測元素原子核外電子被擊出，留下的空穴將被外層電子來填補，多余的能量以特征X線放出。 特征（產(chǎn)生射線的能量與入射粒子無關(guān)，它只與被測元素的種類有關(guān)。不同的元素產(chǎn)生不同的特征X線。25分子核醫(yī)學(xué)進(jìn)展內(nèi)涵：利用示蹤技術(shù)觀察體內(nèi)的生化過程并與相關(guān)基因聯(lián)系起來的一門分支學(xué)科，分子識別是其重要理論基礎(chǔ)。研究領(lǐng)域：受體顯