211220 4XLAMP MasterMix（電泳法）使用手冊v1.0

1、天凈沙系列CAT#:211220-50低溫運輸，-20保存4LAMP MasterMix（電泳法）使用手冊V1.0江蘇天凈沙基因診斷技術有限公司網(wǎng)址： HYPERLINK ；電話：400-6005850；電郵：order產(chǎn)品及特點4LAMP MasterMix含有LAMP擴增所需的所有成分，可以用于LAMP等溫擴增。LAMP即Loop-Mediated Isothermal Amplification（環(huán)介導等溫擴增），它利用4條模板專一的特異引物和具有鏈置換能力的Bst DNA 聚合酶，在等溫條件下(65左右) 3060分鐘完成LAMP擴增。該技術在靈敏度、特異性和檢測范圍等指標上能媲美甚至

2、優(yōu)于定性PCR技術，同時還不需要昂貴的儀器設備。目前已成功應用于生物的快速檢測，廣泛用于各個領域。本試劑盒具有下列特點：即開即用，含有紅色電泳示蹤劑，擴增后可以直接上樣，不需要上樣液。4濃度，最多可加入14uL模板，可以增加檢測機率。高特異性，精心優(yōu)化的配方，非特異擴增比自配的試劑更低。高擴增效率，一般比PCR靈敏一個數(shù)量級。65左右等溫擴增，不需要貴重儀器。本試劑盒足夠50次20uL體系的LAMP擴增。提供擴增對照，便于在遇到困難時分析原因。本產(chǎn)品只能用于科研，不能用于臨床。規(guī)格及成分本產(chǎn)品采用5孔盒包裝成份編號規(guī)格包裝材料4LAMP MasterMix（含電泳示蹤劑，待加酶） 211220

3、a200uL0.5mL白蓋管Bst DNA聚合酶2.0(8U/uL)11-22031950uL0.5mL紅蓋管LAMP陽性對照模板-引物混合物22040250uL0.5mL藍蓋管使用手冊211220sc1份無運輸及保存低溫運輸，-20保存，有效期一年。自備試劑DNA模板、LAMP引物使用方法制備模板DNA：用于選用合適的方法制備模板DNA。如果有N個樣品，最好設置N+2個樣品制備，多出的兩個一個是樣品制備陽性對照，一個是樣品制備陰性對照。配制20LAMP引物混合液先加超純水將合成的HPLC級別的下列引物干粉稀釋到下表所標注的母液濃度，然后在一新的離心管中按表中所列體積加入各種引物母液和超純水，

4、最后得到0.1mL的20RT-LAMP引物混合液，此混合液足夠100次20uL體系的RT-LAMP擴增。如果需要配制的20RT-LAMP引物混合液體積異于0.1mL，則各成分的用量請按比例調整。引物混合液可以在-20放置2年。引物名稱母液濃度加母液量在20LAMP引物混合液中的濃度FIP引物100 uM32uL32 uMBIP引物100 uM32 uL32 uMF3引物100 uM4 uL4 uMB3引物100 uM4 uL4 uMLoop F100 uM8 uL8 uMLoop B100 uM8 uL8 uM超純水12 uL終體積0.1mL注：如果沒有Loop引物，則用水替代。在冰上融化4L

5、AMP MasterMix（待加酶），混勻，稍離心。第一次使用時，請將50uL Bst DNA聚合酶2.0(8U/uL)全部加入到4LAMP MasterMix中并輕柔混勻至少1分鐘，然后再使用。如果有N個樣品，則在N+2個反應管中加入以下組份，多出的一管是LAMP擴增陽性對照（PC），一管是LAMP擴增陰性對照（NC）：成份N+2個樣品管LAMP擴增PCLAMP擴增NC4LAMP MasterMix（含電泳示蹤劑，加酶后）5 uL5uL5 uL自備的20LAMP引物混合液1 uL 不加1uLLAMP陽性對照模板-引物混合物不加4 uL不加自備模板DNA1-14uL不加不加補自備超純水到20

6、uL20 uL20 uL混勻，置于65保溫60分鐘。如果是在PCR儀中保溫，必須加熱蓋。如果用金屬浴或水浴保溫，沒有熱蓋，必須覆蓋50uL的自備石蠟油，否則保溫期間反應體系的水分會蒸發(fā)，會嚴重影響反應效率。擴增結束后取5-10uL擴增產(chǎn)物直接上樣（本產(chǎn)品含有紅色電泳示蹤劑，不需要再加上樣液，紅色示蹤劑的泳動速度相當于50bp的DNA）進行2-3%的瓊脂糖凝膠電泳，有LAMP擴增的樣品將可見LAMP特征性DNA梯度電泳圖譜（見下圖）：結果分析：如果本試劑盒提供的LAMP陽性對照-引物混合物能夠擴增而陰性對照不能擴出，則實驗有效。如果陽性對照-引物混合物沒有擴增出條帶，則試劑盒的問題，請跟廠家聯(lián)系。如果陰性對照（水作為模板