細(xì)胞工程習(xí)題s

1、緒論1. 生物技術(shù)：以生命科學(xué)為基礎(chǔ)，利用生物體系和工程學(xué)原理生產(chǎn)生物制品和創(chuàng)造新物種的一門(mén)綜合技術(shù)。主要包括細(xì)胞工程、基因工程、發(fā)酵工程、酶工程、蛋白質(zhì)工程、生化工程。2. 細(xì)胞工程是指應(yīng)用細(xì)胞生物學(xué)、發(fā)育生物學(xué)、遺傳學(xué)和分子生物學(xué)等方法，通過(guò)類(lèi)似于工程學(xué)的步驟，在細(xì)胞或細(xì)胞器水平上按照人們的醫(yī)院來(lái)改變下包內(nèi)的遺傳物質(zhì)，以獲得新的生物物種、品種或特種細(xì)胞產(chǎn)品的一門(mén)綜合性技術(shù)。3. 細(xì)胞工程主要研究?jī)?nèi)容：1）動(dòng)植物細(xì)胞與組織培養(yǎng)：主要包括細(xì)胞培養(yǎng)、組織培養(yǎng)和器官培養(yǎng)。2）細(xì)胞融合3）染色體工程：按人們的需要來(lái)添加、削減或替換染色體的一種技術(shù)。主要用于新品種的培育。4）胚胎工程：主要針對(duì)動(dòng)物。包

2、括胚胎分割、胚胎融合、細(xì)胞核移植、體外受精、胚胎培養(yǎng)等。5）細(xì)胞遺傳工程：主要包括動(dòng)物克隆和轉(zhuǎn)基因技術(shù)。4. 細(xì)胞工程的應(yīng)用：1）植物方面的應(yīng)用：微繁殖技術(shù)的應(yīng)用、細(xì)胞大量培養(yǎng)與有用代謝產(chǎn)物生產(chǎn)、單倍體技術(shù)的應(yīng)用、胚培養(yǎng)、原生質(zhì)體培養(yǎng)、轉(zhuǎn)化。2）動(dòng)物方面的應(yīng)用：快速繁殖優(yōu)良、瀕危品種及新品種；利用動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)生產(chǎn)活性產(chǎn)物、藥品；供醫(yī)學(xué)器官修復(fù)或移植的組織工程；轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的生物反應(yīng)器。3）細(xì)胞工程在能源、環(huán)境保護(hù)等領(lǐng)域的應(yīng)用第一章組織培養(yǎng)的基本設(shè)備和基本方法1. 植物細(xì)胞工程（plant cell engineering）:一種在細(xì)胞水平上進(jìn)行遺傳操作的生物技術(shù)，它以植物細(xì)胞為對(duì)象，通過(guò)離體培養(yǎng)

3、，實(shí)現(xiàn)植物個(gè)體快速繁殖、品種改良或有效成分的生產(chǎn)和應(yīng)用的目的。研究?jī)?nèi)容：（1）器官培養(yǎng)（organ culture）：指對(duì)植物根、莖、葉、花、果實(shí)以及各部原基（芽原基、根原基）的培養(yǎng)。（2）胚胎培養(yǎng)（embryo ）：指以胚珠、幼胚、成熟胚（包括胚乳）為材料的離體培養(yǎng)。（3）組織培養(yǎng)（tissue ）：指以植物各部分組織為材料的離體培養(yǎng)，如莖組織、葉肉組織、根組織、中柱鞘、形成層、髓組織等。（4）細(xì)胞培養(yǎng)（cell ）：指以能保持較好分散性的植物細(xì)胞或很小的細(xì)胞團(tuán)為材料進(jìn)行的離體培養(yǎng)。（5）原生質(zhì)體培養(yǎng)（protoplast ）：指對(duì)脫除細(xì)胞壁的裸露細(xì)胞的培養(yǎng)，使其在特定培養(yǎng)基上重新形成細(xì)胞壁

4、，并繼續(xù)分裂、分化形成完整植株。2. 基本培養(yǎng)基：培養(yǎng)基由無(wú)機(jī)營(yíng)養(yǎng)（大量元素、微量元素）、有機(jī)營(yíng)養(yǎng)（碳源、維生素、氨基酸）和激素這幾大類(lèi)成分構(gòu)成。不含有激素的培養(yǎng)基稱(chēng)為基本培養(yǎng)基，如常用的基本培養(yǎng)基有MS、LS、AA、SH培養(yǎng)基等。培養(yǎng)基的基本成分：（1）無(wú)機(jī)營(yíng)養(yǎng)（大量、微量）（2）有機(jī)營(yíng)養(yǎng)（碳源、氮源、生理活性物質(zhì)）（3）植物激素：生長(zhǎng)素類(lèi)（IAA、IBA、NAA）、細(xì)胞分裂素類(lèi)（KT、BA、ZT）、其他類(lèi)（GA3、ABA、乙烯）。（4）附加物類(lèi)：瓊脂、活性炭、蛋白水解物等。3. 培養(yǎng)基的滅菌方式：高溫消毒、過(guò)濾消毒4. 常用的滅菌方法：1）干熱滅菌法：利用鼓風(fēng)機(jī)干箱進(jìn)行烘烤滅菌。適用于各種

5、玻璃器皿和器械的滅菌消毒。2）濕熱滅菌法：利用高壓蒸汽滅菌的方法。適用于培養(yǎng)基、蒸餾水、各種器械等物品滅菌。3）熏蒸滅菌法：利用藥物熏蒸以達(dá)到滅菌的目的。適用于接種室和培養(yǎng)室的滅菌。4）過(guò)濾滅菌法：指用細(xì)菌過(guò)濾器進(jìn)行滅菌的方法。使用的濾膜孔徑在0.30.45um范圍內(nèi)。5）藥劑滅菌法：指采用一定濃度的化學(xué)藥品進(jìn)行滅菌的方法。如氯化汞、漂白粉等。6）燒灼滅菌法：指用酒精燈燒灼進(jìn)行滅菌的方法。適用于接種器械、瓶口、瓶塞的滅菌。7）照射滅菌法：指用紫外燈照射進(jìn)行滅菌的方法。適用于接種室內(nèi)和工作臺(tái)面的消毒滅菌。植物材料的消毒方式：次氯酸鈣、次氯酸鈉、過(guò)氧化氫、氯化汞等。 植物材料進(jìn)行消毒處理后，必須用

6、無(wú)菌水沖洗34次，以清除消毒的殘留。第二章 植物細(xì)胞的全能性與脫分化、再分化1. 植物細(xì)胞全能性（totipotent）：指植物細(xì)胞具有該植物體全部遺傳信息，在一定條件下如同受精卵一樣，具有發(fā)育成完整植物體的潛在能力，包括兩種含義：1)植物細(xì)胞無(wú)論是生殖細(xì)胞還是體細(xì)胞，均具有該物種全部的遺傳信息；2）每個(gè)植物細(xì)胞均具有發(fā)育成完整植物體的潛在能力。離體培養(yǎng)條件下植物細(xì)胞全能性實(shí)現(xiàn)的途徑：以植物體細(xì)胞為材料，植株有兩套染色體，可正常開(kāi)花；以性細(xì)胞為材料，含單套染色體組，不能正常開(kāi)花；以原生質(zhì)體為材料；通過(guò)某種方式促進(jìn)不同的原生質(zhì)體融合，得雜種植株；外源基因?qū)胫参锛?xì)胞。2. 細(xì)胞分化（differ

7、entiation）指由于細(xì)胞的分工而導(dǎo)致的細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能的改變，或發(fā)育方式改變的過(guò)程。3. 胚性細(xì)胞(embryogenic cells）：能夠在離體環(huán)境下增殖，能夠分化發(fā)育成完整的植株的細(xì)胞。4. 細(xì)胞脫分化（dedifferentiation）：指在離體培養(yǎng)條件下，分化細(xì)胞失去其原有分化的典型特征，轉(zhuǎn)變?yōu)榉稚鸂顟B(tài)或胚性狀態(tài)的現(xiàn)象。條件：創(chuàng)傷和外源激素。第三章 影響植物細(xì)胞脫分化和再分化的因子1.影響植物細(xì)胞脫分化和再分化的因子：主要包括內(nèi)因和外因兩個(gè)方面。內(nèi)因：主要指植物的遺傳特性和生理狀態(tài)。；外因：主要包括植物細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)條件（無(wú)機(jī)營(yíng)養(yǎng)、有機(jī)營(yíng)養(yǎng)、植物激素、天然提取物等）和環(huán)境條件（滲透壓

8、、酸堿度、溫度、濕度、光照等）。2.常用的植物激素有哪些？各有什么作用？1）生長(zhǎng)素：IAA、IBA、NAA等。作用：促進(jìn)細(xì)胞分裂和伸長(zhǎng)；使頂芽保持頂端優(yōu)勢(shì)；刺激生根；加速木質(zhì)部導(dǎo)管的形成；防止葉片的脫落。2）細(xì)胞分裂素：KT、6-BA、ZT等。作用：促進(jìn)細(xì)胞的分裂和器官的形成；終止種子和芽的休眠；打破頂端優(yōu)勢(shì)；延遲葉片衰老；增加酶活性；促進(jìn)物質(zhì)運(yùn)輸；提高機(jī)體的抗逆性。3）赤霉素（不耐高溫）作用：促進(jìn)細(xì)胞的伸展和莖葉的伸長(zhǎng)；誘導(dǎo)長(zhǎng)日照植物提前開(kāi)花；促進(jìn)果實(shí)發(fā)育，誘導(dǎo)單性生殖等；誘導(dǎo)某些酶的合成；打破種子或器官的休眠。4）乙烯作用：加速果實(shí)的成熟和組織的老化。5）脫落酸作用：促進(jìn)芽和種子進(jìn)入休眠狀

9、態(tài)；促進(jìn)某些短日照植物提前開(kāi)花等。第四章 植物組織培養(yǎng)與快速繁殖1. 植物的繁殖方式：1）有性繁殖：指植物通過(guò)開(kāi)花、傳粉、受精和產(chǎn)生種子的繁殖過(guò)程。2）無(wú)性繁殖：指植物的營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)到一定時(shí)期，就進(jìn)入生殖生長(zhǎng)階段，產(chǎn)生具有生殖功能的細(xì)胞，這些細(xì)胞不經(jīng)兩性結(jié)合，可直接發(fā)育新個(gè)體的繁殖方式。3）營(yíng)養(yǎng)繁殖：屬于無(wú)性繁殖。2. 微繁殖技術(shù)：以植物的器官、組織、細(xì)胞或原生質(zhì)體為外植體，在立體培養(yǎng)條件下快速進(jìn)行植株再生的技術(shù)。微繁殖技術(shù)用途：1）克服高度雜合物種因有性繁殖而引起的后代嚴(yán)重分離；2）名優(yōu)植物或?yàn)l危植物的快速繁殖；3）無(wú)病毒苗木生產(chǎn)；4）單獨(dú)繁殖雌株或雄株；5）種質(zhì)資源保存。3.舉例說(shuō)明微繁殖技術(shù)

10、的過(guò)程?（紅豆杉的芽培養(yǎng)與快速繁殖）：1）取材及低溫預(yù)處理：從優(yōu)良的成年樹(shù)或扦插苗上采取枝條，放入4的冰箱中處理4天，備用。；2）消毒處理；3）外植體的制備及接種培養(yǎng)；4）繼代培養(yǎng)及褐化的防止；5）壯芽培養(yǎng)；6）生根培養(yǎng)4. 愈傷組織：脫分化后的細(xì)胞，經(jīng)過(guò)分裂，產(chǎn)生無(wú)組織結(jié)構(gòu)、無(wú)明顯極性的細(xì)胞團(tuán)稱(chēng)為愈傷組織。其細(xì)胞大而不規(guī)則，高度液泡化，沒(méi)有次生細(xì)胞壁和胞間連絲。外植體：指植物組織培養(yǎng)中用來(lái)進(jìn)行離體無(wú)菌培養(yǎng)的材料的切塊或切斷（如子葉的切塊、胚軸切段、莖段等），也可以是器官、組織、細(xì)胞和原生質(zhì)體。繼代培養(yǎng)：外植體在培養(yǎng)基上培養(yǎng)一段時(shí)間以后，培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)不足、水分散失，并且積累一些代謝產(chǎn)物，需

11、將培養(yǎng)物轉(zhuǎn)到新的培養(yǎng)基上繼續(xù)培養(yǎng)，這種轉(zhuǎn)移培養(yǎng)的過(guò)程稱(chēng)為繼代。5. 當(dāng)前植物脫病毒的方法主要有：莖尖培養(yǎng)脫毒法、高溫和低溫處理脫毒法、化學(xué)處理脫毒法、微體嫁接離體培養(yǎng)脫毒法、株心組織培養(yǎng)脫毒法等、蒜臺(tái)圓盤(pán)培養(yǎng)脫毒法。6.莖尖培養(yǎng)脫病毒的原因：能量競(jìng)爭(zhēng)；傳導(dǎo)抑制；激素抑制；酶缺乏造成抑制；抑制因子存在影響因素：第五章 胚胎培養(yǎng)1.胚培養(yǎng)包括幾種？成熟胚培養(yǎng)：將成的種子通過(guò)表面滅菌，在超凈工作臺(tái)上解剖種子，取出胚，接種在培養(yǎng)基上，在常規(guī)條件下進(jìn)行培養(yǎng)即可萌發(fā)形成完整植株。幼胚培養(yǎng)：幼胚在胚珠中是異養(yǎng)的，培養(yǎng)時(shí)須通過(guò)培養(yǎng)基提供足夠的營(yíng)養(yǎng)和適宜的培養(yǎng)條件2. 影響幼胚培養(yǎng)的因素：胚胎發(fā)育時(shí)期、培養(yǎng)基、

12、培養(yǎng)條件3. 抑制幼胚提前萌發(fā)的措施：1）提高培養(yǎng)基的滲透壓。提高培養(yǎng)基中蔗糖的濃度（高于10%），或加入甘露醇，部分地代替蔗糖。2）加入0.010.2mg/L的ABA和200500mg/L的酪蛋白水解物。其中ABA的作用在于抑制幼胚的吸水過(guò)程，是胚胎逐漸脫水干燥，發(fā)育為形態(tài)正常的成熟胚，然后產(chǎn)生健壯的幼苗。3）將培養(yǎng)物在高溫（32）和強(qiáng)光條件下培養(yǎng)。4.胚培養(yǎng)的應(yīng)用：拯救雜種胚，獲得稀有雜種；單倍體的產(chǎn)生；打破種子休眠，縮短育種周期；稀有植物的繁殖5.胚乳培養(yǎng)的應(yīng)用前景如何？P1106.離體受精：將精子及卵細(xì)胞分離出來(lái)，在體外融合成受精卵的過(guò)程過(guò)程：精子的分離，卵細(xì)胞的分離，精卵離體的融合，

13、合子離體培養(yǎng)7. 影響胚狀體發(fā)生的因素：供體植物的基因型、外植體的來(lái)源和培養(yǎng)物的生理狀況、與胚狀體發(fā)生相關(guān)基因的表達(dá)、培養(yǎng)基中外源激素、培養(yǎng)基的氮源、天然提取物和活性炭對(duì)胚狀體形成的作用。8. 人工種子：將植物組織培養(yǎng)產(chǎn)生的胚狀體包裹上用有機(jī)化合物和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)制作的人工種皮，即為人工種子。制作過(guò)程：1）胚狀體同步發(fā)育的控制；2）人工種皮的研制；3）人工胚乳；4）胚狀體的包埋。特點(diǎn)：具有發(fā)育良好的體細(xì)胞胚，并能發(fā)育成正常的完整植株；具有人工胚乳可提供種胚發(fā)育的營(yíng)養(yǎng)；具有能引起保護(hù)作用的人工種皮。9. 胚珠培養(yǎng)：將胚珠從子房中剝離出來(lái)進(jìn)行培養(yǎng)，然后將花粉授在胚珠的珠孔端，可實(shí)現(xiàn)雙受精，獲得健康的種子

14、。第六章 花藥培養(yǎng)1. 藥培養(yǎng)的一般程序：1）取材：從植株上取花藥單核期的花蕾或幼穗。2）預(yù)處理：在保濕條件下低溫預(yù)處理。3）消毒：對(duì)花藥進(jìn)行常規(guī)表面消毒。4）接種及培養(yǎng)：將花藥接種到合適的培養(yǎng)基上，在適宜溫度下進(jìn)行培養(yǎng)。5）植株再生：將花粉胚或花粉愈傷組織轉(zhuǎn)入再生培養(yǎng)基中，進(jìn)行植株再生培養(yǎng)。6）染色體加倍：在試管階段或移栽成活后，采用秋水仙素處理等方法對(duì)花粉植株的染色體加倍。2.影響花藥培養(yǎng)的因素：1）供體的基因型；2）供體植株的生理狀況；3）花粉的發(fā)育時(shí)期；4）材料的預(yù)處理和預(yù)培養(yǎng)；5）培養(yǎng)基；6）培養(yǎng)方式；7）培養(yǎng)條件4. 單倍體在植物遺傳育種中的作用：1）控制雜種分離，縮短育種周期；2

15、）提高常規(guī)育種的選擇效率；3）單倍體是誘變育種的良好材料；誘導(dǎo)單倍體的途徑：1）自然界自發(fā)單倍體發(fā)生孤雌生殖：由胚囊中未受精的卵細(xì)胞（大孢子）分裂形成單倍體胚，進(jìn)一步發(fā)育成單倍體植株。孤雄生殖：傳粉后卵細(xì)胞退化消失，由精細(xì)胞發(fā)育成單倍體植株。無(wú)融合生殖：由胚囊中卵細(xì)胞之外的其他細(xì)胞發(fā)育成單倍體植物。體細(xì)胞減數(shù)分裂：體細(xì)胞減數(shù)分裂的幾率很小，只是偶爾發(fā)生。2）人工誘導(dǎo)單倍體的途徑：孤雄生殖：離體培養(yǎng)花藥或花粉，誘發(fā)小孢子發(fā)育成單倍體植物。孤雌生殖：離體培養(yǎng)未受精的子房或胚珠，誘發(fā)卵細(xì)胞發(fā)育成單倍體植株。第七章 原生質(zhì)體培養(yǎng)與體細(xì)胞雜交1. 原生質(zhì)體：指去掉細(xì)胞壁的單細(xì)胞，它是離體培養(yǎng)條件下能夠再

16、生完整植株的最小單位。2. 分離原生質(zhì)體的方法：1）機(jī)械分離法：能避免酶制劑對(duì)原生質(zhì)體的破壞作用，但產(chǎn)量少；2）酶解分離法影響原生質(zhì)體活力的因素：酶的種類(lèi)和組合、滲透壓穩(wěn)定劑、質(zhì)膜穩(wěn)定劑、pH值、溫度、植物材料的生理狀態(tài)。3. 培養(yǎng)方式有幾種？影響原生質(zhì)體培養(yǎng)的因素是什么？原生質(zhì)體培養(yǎng)方式：固體培養(yǎng)、液體淺層培養(yǎng)、雙層培養(yǎng)、微滴培養(yǎng)、滋養(yǎng)培養(yǎng)影響原生質(zhì)體培養(yǎng)的因素：原生質(zhì)體的活力、原生質(zhì)體密度、細(xì)胞壁再生速度、培養(yǎng)條件4. 原生質(zhì)體培養(yǎng)目的：原生質(zhì)體融合，克服遠(yuǎn)緣雜交障礙，實(shí)現(xiàn)體細(xì)胞雜交，產(chǎn)生雜交后代5. 原生質(zhì)體的融合方式：1）自發(fā)融合:由于細(xì)胞間胞間絲的擴(kuò)展和粘連，有些相鄰的原生質(zhì)體間能彼

17、此自發(fā)融合。2）誘發(fā)融合：NaNO3誘導(dǎo)融合、高pH和高鈣離子誘導(dǎo)融合、PEG誘導(dǎo)融合、PEG與pH、高鈣離子相結(jié)合的誘導(dǎo)法、電擊融合。6. 同核體：同一親本原生質(zhì)體自身融合即自體融合，得到同核體。異核體：由于不同種親本原生質(zhì)體見(jiàn)發(fā)生融合即異體融合，得到異核體。7.如何對(duì)雜種細(xì)胞進(jìn)行選擇？如何進(jìn)行體細(xì)胞雜種的鑒定？選擇：互補(bǔ)選擇法（白化互補(bǔ)、遺傳互補(bǔ)）、利用對(duì)外源激素的要求不同進(jìn)行選擇、利用生長(zhǎng)習(xí)性和愈傷組織顏色不同進(jìn)行選擇、根據(jù)原生質(zhì)體形態(tài)機(jī)械分離雜種細(xì)胞、熒光染色標(biāo)記法。鑒定：形態(tài)特征觀察、染色體數(shù)目和核型檢查、生物化學(xué)與分子生物學(xué)檢測(cè)。8. 體細(xì)胞雜交在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中的應(yīng)用：1）體細(xì)胞雜合形

18、成新物種2）體細(xì)胞雜交可培育抗病新品種3）胞質(zhì)雜種在育種上的應(yīng)用9. 滋養(yǎng)培養(yǎng)：是利用能夠分泌腎功能無(wú)活性物質(zhì)的細(xì)胞或組織培養(yǎng)物作為滋養(yǎng)者，來(lái)促進(jìn)原生質(zhì)體的分裂和生長(zhǎng)。10看護(hù)培養(yǎng)法：是指用一塊活躍生長(zhǎng)的愈傷組織塊來(lái)看護(hù)單個(gè)細(xì)胞，并使其生長(zhǎng)和增殖11. 不對(duì)稱(chēng)的細(xì)胞融合技術(shù)：使一個(gè)親本的原生質(zhì)體和另一個(gè)親本的細(xì)胞質(zhì)結(jié)合在一起雜種細(xì)胞：具有一個(gè)親本細(xì)胞核的兩個(gè)親本細(xì)胞質(zhì)的體細(xì)胞雜種。胞質(zhì)雜種細(xì)胞產(chǎn)生的途徑：正常原生質(zhì)體+去核的原生質(zhì)體；正常的原生質(zhì)體+核失活的原生質(zhì)體；融合后的某一個(gè)階段一個(gè)親本的核或染色體被排除。第九章 植物細(xì)胞培養(yǎng)1.植物細(xì)胞大量培養(yǎng)生產(chǎn)次生代謝產(chǎn)物：藥用代謝產(chǎn)物（苷類(lèi)、甾醇

19、、生物堿、醌類(lèi)、蛋白質(zhì)類(lèi)、有機(jī)酸等）、天然食物添加劑、殺蟲(chóng)劑和殺菌劑。2.植物細(xì)胞大量培養(yǎng)的主要步驟：1）誘導(dǎo)植物產(chǎn)生旺盛生長(zhǎng)的愈傷組織和懸浮培養(yǎng)：植物細(xì)胞懸浮培養(yǎng)是指在離體條件下，將于上組織或其他易分散的組織置于液體培養(yǎng)中進(jìn)行振蕩培養(yǎng)，得到游離的懸浮細(xì)胞，通過(guò)繼代培養(yǎng)使細(xì)胞增殖，從而獲得大量細(xì)胞群體的一種技術(shù)。2）篩選高產(chǎn)細(xì)胞系；3）在生物反應(yīng)器中大量培養(yǎng)細(xì)胞或細(xì)胞團(tuán)3.成功的細(xì)胞懸浮系應(yīng)當(dāng)滿(mǎn)足的條件：懸浮培養(yǎng)物分散性好，細(xì)胞較??；均一性好；生長(zhǎng)迅速4.簡(jiǎn)述細(xì)胞懸浮培養(yǎng)過(guò)程中的生長(zhǎng)動(dòng)態(tài)：延遲期：由于細(xì)胞剛接種到一個(gè)新的環(huán)境，有一段適應(yīng)期，細(xì)胞很少分裂或剛開(kāi)始分裂；對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期：細(xì)胞生長(zhǎng)旺盛，細(xì)

20、胞數(shù)目迅速增加；減緩期：由于培養(yǎng)和細(xì)胞衰老等因素的限制，細(xì)胞數(shù)目的增長(zhǎng)速度減緩；靜止期：細(xì)胞分裂停止，數(shù)目恒定，此時(shí)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)耗盡，必須及時(shí)進(jìn)行繼代培養(yǎng)，細(xì)胞死亡速度加快，細(xì)胞開(kāi)始死亡，即衰亡期。5.高產(chǎn)細(xì)胞系篩選：1）根據(jù)細(xì)胞表型進(jìn)行篩選；2)根據(jù)單克隆此生代謝產(chǎn)物的含量進(jìn)行篩選保存：高產(chǎn)細(xì)胞系的超低溫保存6.影響植物細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)的因素：光照、攪拌、通氣、培養(yǎng)基成分、接種量、脅迫因子、誘導(dǎo)子、前提物質(zhì)第十一章 動(dòng)物細(xì)胞與組織培養(yǎng)1. 與植物細(xì)胞相比,動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)有何特點(diǎn)?答:1)與植物細(xì)胞相比，動(dòng)物細(xì)胞之間的連接形式復(fù)雜的多，主要有五種形式：緊密連接,間隙連接,隔壁連接,中間連接,橋粒連接；

21、2)動(dòng)物細(xì)胞在體外培養(yǎng)時(shí)具有貼附,接觸抑制,密度依賴(lài)等特點(diǎn).；3)動(dòng)物細(xì)胞對(duì)營(yíng)養(yǎng)要求更加苛刻,除一般營(yíng)養(yǎng)外,還需要血清.；4)對(duì)培養(yǎng)環(huán)境適應(yīng)性更差.；5)動(dòng)物細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢,因此培養(yǎng)時(shí)間較長(zhǎng).與微生物細(xì)胞的不同點(diǎn)：動(dòng)物細(xì)胞比微生物細(xì)胞大,無(wú)細(xì)胞壁.；動(dòng)物細(xì)胞倍增時(shí)間長(zhǎng)，生長(zhǎng)緩慢，易受污染。；培養(yǎng)過(guò)程需氧量少，對(duì)機(jī)械攪拌或剪切力敏感。；動(dòng)物細(xì)胞主要以聚集形式存在。；原代細(xì)胞一般繁殖50代左右即退化死亡.2. 體外生長(zhǎng)特點(diǎn)：貼附、接觸抑制、密度依賴(lài)3. 貼壁培養(yǎng)是指細(xì)胞貼附在一定的固相表面進(jìn)行的培養(yǎng).貼壁培養(yǎng)的材料:要求有靜電荷和高度的表面活性.主要的材料有:玻璃,塑料,金屬,微載體.貼壁培養(yǎng)的基本

22、操作:通過(guò)機(jī)械分散法或酶消化法將培養(yǎng)材料分散成細(xì)胞懸液過(guò)濾,離心,純化,漂洗后接種到適宜的培養(yǎng)基上. 放入二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng).貼壁生長(zhǎng)的過(guò)程:游離期,吸附期,繁殖期,退化期.4. 細(xì)胞系：是由原代培養(yǎng)經(jīng)初步純化，獲得的以一種細(xì)胞為主的、能在體外長(zhǎng)期生存的不均一的細(xì)胞群體。5. 動(dòng)物細(xì)胞組織培養(yǎng)的方法主要有幾種方式?定義:動(dòng)物細(xì)胞與組織培養(yǎng)是指從動(dòng)物體內(nèi)取出細(xì)胞或組織,模擬體內(nèi)的生理環(huán)境,在無(wú)菌,適溫和營(yíng)養(yǎng)充足等條件下,使離體細(xì)胞或組織生存,生長(zhǎng)并維持結(jié)構(gòu)和功能的技術(shù).可分為原代培和傳代培養(yǎng)兩類(lèi).方式:動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的傳統(tǒng)方法:懸滴培養(yǎng)法,旋轉(zhuǎn)管培養(yǎng)法,灌注小室培養(yǎng)法,培養(yǎng)瓶培養(yǎng)法,培養(yǎng)板培養(yǎng)法

23、.6. 原代培養(yǎng)：原代培養(yǎng)期是指從體內(nèi)取出組織接種培養(yǎng)到第一次傳代培養(yǎng)這個(gè)階段,持續(xù)1-4周,此時(shí)期細(xì)胞比較活躍,有細(xì)胞分裂,但不旺盛；基本過(guò)程：接種與培養(yǎng)、常規(guī)檢查7. 動(dòng)物細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)技術(shù):懸浮培養(yǎng),微載體培養(yǎng),多孔載體培養(yǎng),微囊化培養(yǎng),中空纖維法等.8. 器官培養(yǎng)的意義：器官培養(yǎng)的基本技術(shù)要點(diǎn)是取出動(dòng)物器官或進(jìn)一步修整成器官型植塊,將其接種到固體培養(yǎng)基上或培養(yǎng)液上,在適當(dāng)?shù)臓I(yíng)養(yǎng),氣相,生長(zhǎng)基質(zhì)等條件下使其存活和生長(zhǎng).迄今為止醫(yī)學(xué)界已經(jīng)對(duì)乳腺,眼,內(nèi)耳,肝,腦,角膜,腎,肺,骨,皮膚,子宮,胸腺,腸,牙.氣管,副甲狀腺,心臟,食管等人體器官進(jìn)行培養(yǎng),解決了醫(yī)學(xué)上的重大問(wèn)題.9. 干細(xì)胞:

24、干細(xì)胞是一類(lèi)具有自我更新和分化潛能的細(xì)胞.形態(tài)上通常呈圓形或橢圓形,體積小,核質(zhì)比例大.具有較高的端粒酶活性,因此具有較強(qiáng)的增殖能力.干細(xì)胞培養(yǎng)的意義:1)組織培養(yǎng)或器官修復(fù)；2)基因治療10. 用于植物細(xì)胞大量培養(yǎng)的生物反應(yīng)器：攪拌式反應(yīng)器、氣聲式生物反應(yīng)器、固定化細(xì)胞反應(yīng)器光照反應(yīng)器、轉(zhuǎn)鼓式生物反應(yīng)器、空氣和細(xì)胞雙升式反應(yīng)器。11. 組織工程：是應(yīng)用細(xì)胞生物學(xué)和工程學(xué)原理，將人體某些部分的組織細(xì)胞種植和吸附在一種生物材料支架上進(jìn)行人工培養(yǎng)、繁殖、擴(kuò)增，然后移植到人體內(nèi)所需要的部位，從而達(dá)到器官修復(fù)或再造的治療目的的一種技術(shù)。第十二章 動(dòng)物細(xì)胞融合1. 動(dòng)物細(xì)胞融合方法：仙臺(tái)病毒法,PEG誘

25、導(dǎo)融合,電融合技術(shù).2. 動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)的用途：動(dòng)物細(xì)胞融合最有價(jià)值的應(yīng)用就是利用雜交瘤技術(shù)生產(chǎn)單克隆抗體.動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)步驟:1)動(dòng)物免疫與免疫脾細(xì)胞懸浮液的制備；2)骨髓瘤細(xì)胞的獲得與培養(yǎng)；3)細(xì)胞融合；4)HAT選擇雜交瘤；5)抗體的檢測(cè)與雜交瘤的選擇；6)單克隆抗體的大量生產(chǎn).第十三章 胚胎工程1. 胚胎工程：以體外受精和體外早期胚胎發(fā)育為基礎(chǔ),在胚胎發(fā)育過(guò)程中進(jìn)行的卵子切割,性別控制,嵌合體制作,細(xì)胞核移植,轉(zhuǎn)基因操作等定向控制,改造和創(chuàng)造新遺傳性狀的技術(shù)統(tǒng)稱(chēng)胚胎工程.2. 對(duì)動(dòng)物實(shí)施胚胎工程的意義：發(fā)揮優(yōu)良母畜的繁殖能力；促進(jìn)家畜改良的速度；作為胚胎操作的基礎(chǔ)；保存遺傳資源3.

26、 胚胎工程采用的技術(shù):體外受精,胚胎移植,胚胎分割與融合,胚胎性別鑒定,胚胎冷凍,基因?qū)氲? 核心技術(shù):體外受精,胚胎移植.4. 胚胎移植:又稱(chēng)受精卵移植,是指母畜發(fā)情排卵并經(jīng)過(guò)配種后,從其生殖道取出受精卵和胚胎,或者體外培養(yǎng)受精卵發(fā)育到囊胚期,然后把它們移植到與供體同時(shí)發(fā)情排卵,但未經(jīng)配種的母畜的輸卵管或子宮角,使來(lái)自供體的胚胎能夠在受體的子宮著床,并繼續(xù)生長(zhǎng)和發(fā)育,最后產(chǎn)下供體的后代.即借腹懷胎.胚胎分割:主要是借助顯微操作技術(shù)或徒手操作方法,將一枚早期胚胎切割成2,4等多等分,再移植給受體動(dòng)物,從而制造同卵雙生或多生后代的技術(shù).胚胎融合:又稱(chēng)胚胎嵌合,是將兩枚或兩枚以上同種或異種動(dòng)物胚

27、胎的部分或全部細(xì)胞融合在一起,使之發(fā)育成一個(gè)胚胎,然后移植到受體內(nèi),讓其繼續(xù)發(fā)形成一種嵌合體后代的技術(shù).性別控制：通過(guò)人為干預(yù)或操作手段，使動(dòng)物按人們的愿望繁殖所需要的性別后代的技術(shù)。5. 胚胎移植過(guò)程：供體受體的選擇超數(shù)排卵處理同步發(fā)情人工受精胚胎的采集、鑒別胚胎移植6. 試管動(dòng)物:將供體動(dòng)物的精子和卵子在體外受精,體外培養(yǎng)胚胎,然后發(fā)育到一定程度的胚胎移植入受體,所獲得的動(dòng)物成為試管動(dòng)物.試管動(dòng)物的培養(yǎng)過(guò)程:雌性供體超排卵處理,雄性供體人工受精-體外人工受精-采集受精卵-體外培養(yǎng)或冷凍保存-雌性受體選擇-胚胎移植-受體內(nèi)發(fā)育-試管動(dòng)物.7. 試管嬰兒:試管嬰兒是指分別將卵子和精子取出后,在體外進(jìn)行受精,并發(fā)育成胚胎,再植回母體子