第9章 生物芯片

1、第九章第九章 生物芯片生物芯片何為生物芯片？何為生物芯片？l生物芯片生物芯片l生物芯片包括生物芯片包括生物芯片的分類生物芯片的分類 l根據(jù)用途還可以把生物芯片分為兩類：根據(jù)用途還可以把生物芯片分為兩類：信信息生物芯片息生物芯片（information-biochipinformation-biochip）和）和功能生物芯片功能生物芯片（function-biochipfunction-biochip）。）。生物芯片分析過(guò)程生物芯片分析過(guò)程試樣處理試樣處理點(diǎn)陣固定點(diǎn)陣固定反應(yīng)或雜交反應(yīng)或雜交芯片制作芯片制作標(biāo)記標(biāo)記洗滌洗滌檢測(cè)掃描檢測(cè)掃描光刻合成光刻合成微量點(diǎn)樣微量點(diǎn)樣噴墨噴墨純化、標(biāo)記純化、標(biāo)

2、記光化學(xué)檢測(cè)光化學(xué)檢測(cè)電化學(xué)檢測(cè)電化學(xué)檢測(cè)計(jì)算處理計(jì)算處理內(nèi)容提要內(nèi)容提要第一節(jié)第一節(jié) 基因芯片基因芯片第二節(jié)第二節(jié) 蛋白質(zhì)芯片蛋白質(zhì)芯片第三節(jié)第三節(jié) 芯片實(shí)驗(yàn)室芯片實(shí)驗(yàn)室基因芯片技術(shù)的概念基因芯片技術(shù)的概念基因芯片基因芯片(Gene chip)(Gene chip)技術(shù)是指通過(guò)技術(shù)是指通過(guò)微陣列微陣列(Microarray)(Microarray)技術(shù)將高密度技術(shù)將高密度DNADNA片段陣列通過(guò)片段陣列通過(guò)高速機(jī)器人或原位合成方式以一定的順序或排高速機(jī)器人或原位合成方式以一定的順序或排列方式使其附著在如玻璃片等固相表面，以熒列方式使其附著在如玻璃片等固相表面，以熒光標(biāo)記的光標(biāo)記的DNADNA

3、探針，借助堿基互補(bǔ)雜交原理，探針，借助堿基互補(bǔ)雜交原理，進(jìn)行大量的基因表達(dá)及監(jiān)測(cè)等方面研究的最新進(jìn)行大量的基因表達(dá)及監(jiān)測(cè)等方面研究的最新革命性技術(shù)。革命性技術(shù)。基因芯片又稱基因芯片又稱DNADNA芯片。芯片。第一節(jié)第一節(jié) 基因芯片基因芯片基因研究的前沿技術(shù)基因研究的前沿技術(shù)-基因芯片技術(shù)基因芯片技術(shù)測(cè)序類測(cè)序類 基因芯片類基因芯片類 PCRPCR類類基因芯片發(fā)展歷史基因芯片發(fā)展歷史DNADNA芯片的主要類型芯片的主要類型按制備方式分：按制備方式分：原位合成芯片原位合成芯片：采用顯微光蝕刻等技術(shù)在：采用顯微光蝕刻等技術(shù)在特定部位原位合成寡核苷酸特定部位原位合成寡核苷酸(ONA)(ONA)而制備而

4、制備的芯片。的芯片。合成的序列較短合成的序列較短cDNAcDNA微集陣列微集陣列：將通過(guò)：將通過(guò)mRNAmRNA制備的（制備的（cDNAcDNA) ) 片段以顯微打印的方式有序地固化于支片段以顯微打印的方式有序地固化于支持物表面而制成的芯片持物表面而制成的芯片(CDA)(CDA)。固定基因固定基因的來(lái)源較靈活的來(lái)源較靈活按探針?lè)诸惏刺结樂(lè)诸悾篋NADNA芯片芯片寡核苷酸陣列（芯片）寡核苷酸陣列（芯片）基因組芯片基因組芯片cDNAcDNA芯片芯片一、基本原理一、基本原理l基因芯片的工作原理與經(jīng)典的核酸分子雜交方法基因芯片的工作原理與經(jīng)典的核酸分子雜交方法（southernsouthern、nor

5、thernnorthern）相似。）相似。核酸印跡：核酸印跡：將將待測(cè)樣品待測(cè)樣品DNADNA（靶基因）（靶基因）固定固定于支持物于支持物上，用已知序列上，用已知序列DNADNA片段制作探針，二者按堿基互片段制作探針，二者按堿基互補(bǔ)配對(duì)原理雜交，檢測(cè)出欲鑒定的基因。補(bǔ)配對(duì)原理雜交，檢測(cè)出欲鑒定的基因?；蛐酒夯蛐酒簩⒋罅繉⒋罅恳阎蚱我阎蚱危ㄅc核酸印跡相反）（與核酸印跡相反）以微陣列方式以微陣列方式固定固定在支持物上，待測(cè)樣品用熒光染在支持物上，待測(cè)樣品用熒光染料標(biāo)記制成探針，當(dāng)探針與芯片上的靶基因雜交后，料標(biāo)記制成探針，當(dāng)探針與芯片上的靶基因雜交后，通過(guò)隨后的信號(hào)檢測(cè)進(jìn)行定性

6、與定量分析。通過(guò)隨后的信號(hào)檢測(cè)進(jìn)行定性與定量分析。 基因芯片在一微小的基片表面集成了大量的基因芯片在一微小的基片表面集成了大量的DNADNA分子，能夠在同一時(shí)間內(nèi)平行分析大量的基因，進(jìn)分子，能夠在同一時(shí)間內(nèi)平行分析大量的基因，進(jìn)行大信息量的篩選與檢測(cè)分析。行大信息量的篩選與檢測(cè)分析。二二 、基因芯片的制作、基因芯片的制作DNADNA芯片技術(shù)流程圖芯片技術(shù)流程圖芯片制作芯片制作樣品的制備樣品的制備顯微光蝕刻顯微光蝕刻壓電打印壓電打印分子打印分子打印原位合成芯片原位合成芯片固定基因設(shè)計(jì)與制備固定基因設(shè)計(jì)與制備支持物預(yù)處理支持物預(yù)處理打印打印固化固化DNADNA微集陣列微集陣列樣品核酸的樣品核酸的提

7、取與純化提取與純化擴(kuò)增與標(biāo)記擴(kuò)增與標(biāo)記 標(biāo)記樣品標(biāo)記樣品 的純化的純化雜交及雜交后清洗雜交及雜交后清洗 掃描與分析掃描與分析基因芯片技術(shù)流程基因芯片技術(shù)流程 1. 1.芯片制備芯片制備- -目前制備芯片主要以玻璃片或硅片為目前制備芯片主要以玻璃片或硅片為載體，采用原位合成和微矩陣的方法將寡核苷酸片載體，采用原位合成和微矩陣的方法將寡核苷酸片段或段或cDNAcDNA按順序排列在載體上。芯片的制備除了用按順序排列在載體上。芯片的制備除了用到微加工工藝外，還需要使用機(jī)器人技術(shù)。以便能到微加工工藝外，還需要使用機(jī)器人技術(shù)。以便能快速、準(zhǔn)確地將探針?lè)胖玫叫酒系闹付ㄎ恢?。快速、?zhǔn)確地將探針?lè)胖玫叫酒系?/p>

8、指定位置。 2.2.樣品制備樣品制備- -生物樣品往往是復(fù)雜的生物分子混生物樣品往往是復(fù)雜的生物分子混合體，除少數(shù)特殊樣品外，一般不能直接與芯片反合體，除少數(shù)特殊樣品外，一般不能直接與芯片反應(yīng)，有時(shí)樣品的量很小。所以，必須將樣品進(jìn)行提應(yīng)，有時(shí)樣品的量很小。所以，必須將樣品進(jìn)行提取、擴(kuò)增，獲取其中的蛋白質(zhì)或取、擴(kuò)增，獲取其中的蛋白質(zhì)或DNADNA、RNARNA，然后用，然后用熒光標(biāo)記，以提高檢測(cè)的靈敏度和使用者的安全性。熒光標(biāo)記，以提高檢測(cè)的靈敏度和使用者的安全性。 3. 3.雜交反應(yīng)雜交反應(yīng)- -雜交反應(yīng)是熒光標(biāo)記的樣品與芯雜交反應(yīng)是熒光標(biāo)記的樣品與芯片上的片上的DNADNA片段進(jìn)行的反應(yīng)片段

9、進(jìn)行的反應(yīng), ,產(chǎn)生一系列信息的產(chǎn)生一系列信息的過(guò)程。選擇合適的反應(yīng)條件能使生物分子間反過(guò)程。選擇合適的反應(yīng)條件能使生物分子間反應(yīng)處于最佳狀況中，減少生物分子之間的錯(cuò)配應(yīng)處于最佳狀況中，減少生物分子之間的錯(cuò)配率。率。 4.4.信號(hào)檢測(cè)和結(jié)果分析信號(hào)檢測(cè)和結(jié)果分析- -雜交反應(yīng)后的芯片上雜交反應(yīng)后的芯片上各個(gè)反應(yīng)點(diǎn)的熒光位置、熒光強(qiáng)弱經(jīng)過(guò)芯片掃各個(gè)反應(yīng)點(diǎn)的熒光位置、熒光強(qiáng)弱經(jīng)過(guò)芯片掃描儀和相關(guān)軟件可以分析圖像，將熒光轉(zhuǎn)換成描儀和相關(guān)軟件可以分析圖像，將熒光轉(zhuǎn)換成數(shù)據(jù)，即可以獲得有關(guān)生物信息。數(shù)據(jù)，即可以獲得有關(guān)生物信息。基因芯片的基本要素基因芯片的基本要素固相介質(zhì)固相介質(zhì) 有硅片、二氧化硅、玻璃

10、、尼龍膜、塑料等。有硅片、二氧化硅、玻璃、尼龍膜、塑料等。靶片段靶片段 DNADNA、寡核苷酸、寡核苷酸、RNARNA等。等。探探 針針 mRNAmRNA，或是以，或是以mRNAmRNA為模板合成的為模板合成的cDNAcDNA。標(biāo)記物標(biāo)記物 常采用熒光劑，如常采用熒光劑，如Cy3Cy3、Cy5Cy5， 同位素、地高辛等。同位素、地高辛等。1.1.支持物的預(yù)處理支持物的預(yù)處理（略）（略）(1)(1)原位合成芯片的制備原位合成芯片的制備 A.A.光引導(dǎo)原位聚合技術(shù)光引導(dǎo)原位聚合技術(shù)： 優(yōu)點(diǎn)：優(yōu)點(diǎn)： 合成效率高，點(diǎn)陣密度高；合成效率高，點(diǎn)陣密度高； 缺點(diǎn)：缺點(diǎn)： 設(shè)備昂貴，技術(shù)復(fù)雜，反應(yīng)產(chǎn)率低。設(shè)備

11、昂貴，技術(shù)復(fù)雜，反應(yīng)產(chǎn)率低。( (一一) )芯片的制備芯片的制備原位合成原位合成(In Situ Synthesis)(In Situ Synthesis)B.B.壓電打印法：壓電打印法：壓電毛細(xì)管噴射器壓電毛細(xì)管噴射器 優(yōu)點(diǎn)：優(yōu)點(diǎn)： 設(shè)備廉價(jià)，設(shè)備廉價(jià)，技術(shù)相對(duì)簡(jiǎn)單，反應(yīng)產(chǎn)技術(shù)相對(duì)簡(jiǎn)單，反應(yīng)產(chǎn)率高。率高。 缺點(diǎn)：缺點(diǎn)： 點(diǎn)陣密度低，點(diǎn)陣密度低，易產(chǎn)生交叉污染。易產(chǎn)生交叉污染。(2)DNA(2)DNA微集陣列的制備微集陣列的制備方式方式：預(yù)先合成寡聚核苷酸、：預(yù)先合成寡聚核苷酸、cDNAcDNA或或DNADNA基因組通過(guò)高速點(diǎn)樣打印到芯片上?；蚪M通過(guò)高速點(diǎn)樣打印到芯片上。A.DNAA.DNA

12、片段的制備片段的制備已克隆的基因片段已克隆的基因片段PCRPCR，RT-PCRRT-PCR擴(kuò)增的基因片段擴(kuò)增的基因片段人工合成的人工合成的DNADNA片段片段單鏈、雙鏈、單鏈、雙鏈、DNADNA或或RNA RNA 均可均可B. B. 打印打印噴墨打?。ǚ墙佑|式點(diǎn)樣）噴墨打?。ǚ墙佑|式點(diǎn)樣）優(yōu)點(diǎn)、缺點(diǎn)優(yōu)點(diǎn)、缺點(diǎn)針式打印針式打?。ń佑|式點(diǎn)樣）（接觸式點(diǎn)樣）優(yōu)點(diǎn)、缺點(diǎn)優(yōu)點(diǎn)、缺點(diǎn)點(diǎn)陣芯片的制作技術(shù)點(diǎn)陣芯片的制作技術(shù)DNADNA點(diǎn)陣芯片點(diǎn)陣芯片C.C.固化固化打印打印DNADNA片段后，需要將其固定在支持物表片段后，需要將其固定在支持物表面，同時(shí)也要封閉支持物上未打印區(qū)域面，同時(shí)也要封閉支持物上未打印區(qū)

13、域以防止核酸樣品的非特異性固定。以防止核酸樣品的非特異性固定。( (二二) )測(cè)定樣品的準(zhǔn)備測(cè)定樣品的準(zhǔn)備1.1.樣品的分離純化樣品的分離純化DNA , mRNADNA , mRNA2.2.擴(kuò)增擴(kuò)增PCR, RTPCR, RTPCRPCR，固相，固相PCRPCR3.3.標(biāo)記等過(guò)程標(biāo)記等過(guò)程熒光標(biāo)記（常用熒光標(biāo)記（常用Cy3Cy3、Cy5Cy5），生物素），生物素, ,放射性標(biāo)放射性標(biāo)記記4.4.標(biāo)記后樣品的純化標(biāo)記后樣品的純化16 economical and sensitivie fluorescent dye alternatives scanned with ScanArray 5000

14、.多種熒光染料多種熒光染料( (三三) )分子雜交分子雜交樣品與樣品與DNADNA芯片上的陣列進(jìn)行雜交。芯片上的陣列進(jìn)行雜交。與經(jīng)典分子雜交的區(qū)別：與經(jīng)典分子雜交的區(qū)別：1.1.雜交時(shí)間短，雜交時(shí)間短，3030分鐘內(nèi)完成；分鐘內(nèi)完成；2.2.可同時(shí)平行檢測(cè)許多基因序列。可同時(shí)平行檢測(cè)許多基因序列。影響雜交反應(yīng)的因素：影響雜交反應(yīng)的因素：鹽濃度、溫度、反應(yīng)時(shí)間、鹽濃度、溫度、反應(yīng)時(shí)間、DNADNA二級(jí)結(jié)構(gòu)二級(jí)結(jié)構(gòu)芯芯片片合合成成程程序序( (四四) )檢測(cè)分析檢測(cè)分析1.1.激光激發(fā)使含熒光標(biāo)記的激光激發(fā)使含熒光標(biāo)記的DNADNA片段發(fā)射熒片段發(fā)射熒光光2.2.激光掃描儀或激光共聚焦顯微鏡采集各

15、雜激光掃描儀或激光共聚焦顯微鏡采集各雜交點(diǎn)的信號(hào)交點(diǎn)的信號(hào)3.3.軟件進(jìn)行進(jìn)行圖象分析和數(shù)據(jù)處理軟件進(jìn)行進(jìn)行圖象分析和數(shù)據(jù)處理芯片信息采集：芯片信息采集：熒光標(biāo)記熒光標(biāo)記雙波長(zhǎng)掃描雙波長(zhǎng)掃描激光激發(fā)光源激光激發(fā)光源共聚焦掃描共聚焦掃描計(jì)算機(jī)處理計(jì)算機(jī)處理ScanArray Lite三、三、DNADNA芯片技術(shù)的應(yīng)用芯片技術(shù)的應(yīng)用（一）應(yīng)用之一：基因表達(dá)（一）應(yīng)用之一：基因表達(dá)譜（譜（gene expression patterngene expression pattern) )紅色紅色 上調(diào)上調(diào)黃色黃色 不變不變綠色綠色 下調(diào)下調(diào)基因表達(dá)譜芯片基因表達(dá)譜芯片 應(yīng)用最為廣泛，技術(shù)上也最成熟。這

16、種應(yīng)用最為廣泛，技術(shù)上也最成熟。這種芯片可以檢測(cè)整個(gè)基因組范圍的眾多基芯片可以檢測(cè)整個(gè)基因組范圍的眾多基因在因在mRNAmRNA表達(dá)水平的變化。它能對(duì)來(lái)源表達(dá)水平的變化。它能對(duì)來(lái)源于不同個(gè)體、不同組織、不同細(xì)胞周期、于不同個(gè)體、不同組織、不同細(xì)胞周期、不同發(fā)育階段、不同分化階段、不同生不同發(fā)育階段、不同分化階段、不同生理病理、不同刺激條件下的組織細(xì)胞內(nèi)理病理、不同刺激條件下的組織細(xì)胞內(nèi)基因表達(dá)情況進(jìn)行對(duì)比分析。從而對(duì)基基因表達(dá)情況進(jìn)行對(duì)比分析。從而對(duì)基因群在個(gè)體特異性、組織特異性、發(fā)育因群在個(gè)體特異性、組織特異性、發(fā)育特異性、分化特異性、疾病特異性、刺特異性、分化特異性、疾病特異性、刺激特異性

17、的變化特征和規(guī)律進(jìn)行描述。激特異性的變化特征和規(guī)律進(jìn)行描述。應(yīng)用舉例：應(yīng)用舉例：檢測(cè)人正常肝細(xì)胞與肝癌細(xì)胞中差別表達(dá)的基因檢測(cè)人正常肝細(xì)胞與肝癌細(xì)胞中差別表達(dá)的基因?qū)?0964096條人條人cDNAcDNA制備成表達(dá)芯片。制備成表達(dá)芯片。 （15001500條為已知基因，條為已知基因，25482548未知，未知，1616個(gè)陰性個(gè)陰性 對(duì)照基因，對(duì)照基因，3232個(gè)空白點(diǎn)。）個(gè)空白點(diǎn)。）提取人正常肝和肝癌組織提取人正常肝和肝癌組織mRNAmRNA，逆轉(zhuǎn)錄成，逆轉(zhuǎn)錄成cDNAcDNA。將將Cy3Cy3和和Cy5Cy5熒光分別標(biāo)記到兩種來(lái)源的熒光分別標(biāo)記到兩種來(lái)源的cDNAcDNA。與芯片雜交、掃

18、描。與芯片雜交、掃描。計(jì)算機(jī)數(shù)據(jù)處理，判斷差別表達(dá)的基因。計(jì)算機(jī)數(shù)據(jù)處理，判斷差別表達(dá)的基因。 標(biāo)準(zhǔn)：標(biāo)準(zhǔn)：1 1、Cy3Cy3與與Cy5Cy5表達(dá)差別表達(dá)差別22。 2 2、Cy3Cy3或或Cy5Cy5信號(hào)值信號(hào)值10001000。（二）（二）DNADNA測(cè)序：測(cè)序：雜交測(cè)序（雜交測(cè)序（SBHSBH）TCGGATCGCGGATCGAGGATCGACGATCGACTATCGACTTTCGGATCGCGGATCGAGGATCGACGATCGACTATCGACTTTCGGATCGACTTAGCCTAGCTGAA6553665536個(gè)八核苷酸陣列個(gè)八核苷酸陣列 生物芯片能為現(xiàn)代醫(yī)學(xué)科學(xué)及醫(yī)學(xué)診斷生物

19、芯片能為現(xiàn)代醫(yī)學(xué)科學(xué)及醫(yī)學(xué)診斷學(xué)的發(fā)展提供強(qiáng)有力的手段，促進(jìn)醫(yī)學(xué)從學(xué)的發(fā)展提供強(qiáng)有力的手段，促進(jìn)醫(yī)學(xué)從“系統(tǒng)、血管、組織和細(xì)胞層次系統(tǒng)、血管、組織和細(xì)胞層次”(”(通常稱通常稱之為之為“第二階段醫(yī)學(xué)第二階段醫(yī)學(xué)”)”)向向“DNADNA、RNARNA、蛋蛋白質(zhì)及其相互作用層次白質(zhì)及其相互作用層次”(”(第三階段醫(yī)學(xué)第三階段醫(yī)學(xué)) )過(guò) 渡 ， 使 之 快 速 進(jìn) 入 實(shí) 際 應(yīng) 用 。過(guò) 渡 ， 使 之 快 速 進(jìn) 入 實(shí) 際 應(yīng) 用 。（三）臨（三）臨 床床 診診 斷斷（四）基因診斷：（四）基因診斷：尋找和檢測(cè)與疾病相關(guān)的尋找和檢測(cè)與疾病相關(guān)的基因及在基因及在RNARNA水平上檢測(cè)致病基因的

20、表達(dá)水平上檢測(cè)致病基因的表達(dá)（五）藥物研究與開(kāi)發(fā)（五）藥物研究與開(kāi)發(fā)： 1.1.藥物篩選藥物篩選 2.2.合理用藥合理用藥 3.3.中草藥鑒定中草藥鑒定（六）癌癥研究（六）癌癥研究基因芯片的優(yōu)點(diǎn)：基因芯片的優(yōu)點(diǎn)：1.高通量高通量2.大規(guī)模大規(guī)模3.高度平行性高度平行性4.快速高效快速高效5.高靈敏度高靈敏度6.高度自動(dòng)化高度自動(dòng)化基因芯片的缺點(diǎn)基因芯片的缺點(diǎn)不不能對(duì)待檢測(cè)基因在多細(xì)胞類型能對(duì)待檢測(cè)基因在多細(xì)胞類型組織中的精確定位進(jìn)行判斷。組織中的精確定位進(jìn)行判斷。內(nèi)容提要內(nèi)容提要第一節(jié)第一節(jié) 基因芯片基因芯片第二節(jié)第二節(jié) 蛋白質(zhì)芯片蛋白質(zhì)芯片第三節(jié)第三節(jié) 芯片實(shí)驗(yàn)室芯片實(shí)驗(yàn)室l固定于載體上的固

21、定于載體上的蛋白質(zhì)樣品蛋白質(zhì)樣品（靶蛋白）以（靶蛋白）以陣陣列方式列方式構(gòu)成，構(gòu)成，待待測(cè)測(cè)樣品樣品用熒光染料或同位素用熒光染料或同位素標(biāo)記標(biāo)記制備成探針制備成探針與芯片與芯片雜交雜交，雜交信號(hào)用激，雜交信號(hào)用激光掃描儀或放射光掃描儀或放射自自顯影檢測(cè)及計(jì)算機(jī)分析檢顯影檢測(cè)及計(jì)算機(jī)分析檢測(cè)結(jié)果。蛋白質(zhì)芯片適合于蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)、測(cè)結(jié)果。蛋白質(zhì)芯片適合于蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)、蛋白質(zhì)核酸（蛋白質(zhì)核酸（DNADNA、RNARNA）、蛋白質(zhì)小分）、蛋白質(zhì)小分子之間的相互作用分析；適合功能基因組、子之間的相互作用分析；適合功能基因組、蛋白組研究。蛋白組研究。第二節(jié)第二節(jié) 蛋白質(zhì)芯片蛋白質(zhì)芯片一、蛋白質(zhì)芯片特點(diǎn)一、蛋

22、白質(zhì)芯片特點(diǎn)l蛋白質(zhì)不能用擴(kuò)增方法提高拷貝數(shù)來(lái)達(dá)到蛋白質(zhì)不能用擴(kuò)增方法提高拷貝數(shù)來(lái)達(dá)到要求的靈敏度；要求的靈敏度；l蛋白質(zhì)與蛋白質(zhì)間的特異作用主要是抗原蛋白質(zhì)與蛋白質(zhì)間的特異作用主要是抗原抗體或配體受體的反應(yīng)；抗體或配體受體的反應(yīng)；l反應(yīng)的實(shí)質(zhì)是專一性，而非序列的特異性。反應(yīng)的實(shí)質(zhì)是專一性，而非序列的特異性。二、蛋白組研究動(dòng)態(tài)二、蛋白組研究動(dòng)態(tài)l雙向電泳雙向電泳l蛋白質(zhì)芯片蛋白質(zhì)芯片l雙鏈雙鏈DNADNA芯片與相關(guān)蛋白質(zhì)的作用芯片與相關(guān)蛋白質(zhì)的作用三、制備蛋白質(zhì)芯片三、制備蛋白質(zhì)芯片蛋白質(zhì)分子以共價(jià)結(jié)合蛋白質(zhì)分子以共價(jià)結(jié)合方式固定于玻片方式固定于玻片 固定固定封阻封阻醛基化（適醛基化（適合蛋白

23、質(zhì)分合蛋白質(zhì)分子）子）共價(jià)結(jié)合法：共價(jià)結(jié)合法：BSA-BSA-羥基琥珀?；u基琥珀?；ㄟm合多肽、小分（適合多肽、小分子蛋白）子蛋白）四、制備蛋白質(zhì)探針?biāo)?、制備蛋白質(zhì)探針l待測(cè)蛋白質(zhì)樣品經(jīng)熒光染料、生物素等標(biāo)記，制待測(cè)蛋白質(zhì)樣品經(jīng)熒光染料、生物素等標(biāo)記，制成探針。成探針。l熒光染料：熒光染料：熒光素、羅丹明、德克薩斯紅等；熒光素、羅丹明、德克薩斯紅等；l生物素標(biāo)記：生物素標(biāo)記：偶聯(lián)法標(biāo)記抗體、標(biāo)記蛋白質(zhì)；偶聯(lián)法標(biāo)記抗體、標(biāo)記蛋白質(zhì)；l金標(biāo)記：金標(biāo)記：以金粒的電子密度大的特點(diǎn)，與抗體偶以金粒的電子密度大的特點(diǎn)，與抗體偶聯(lián)，經(jīng)特異性的反應(yīng)，通過(guò)電子顯微鏡觀察膠體聯(lián)，經(jīng)特異性的反應(yīng)，通過(guò)電子顯微鏡觀察膠體金顆粒，顯示細(xì)胞、組織反