雙向電泳培訓正式資料

1、雙向電泳實驗流程l 樣品制備（Sample preparation）l 固相預制膠條的水化（IPG strip rehydration）l 第一向等電聚焦（IEF）l 膠條的平衡（IPG strip equilibration）l 第二向SDS-PAGE電泳（SDS-PAGE electrophresis）l 凝膠的染色及檢測（Detection/Staining）l PDQuest軟件分析（Software analysis）l 質譜鑒定（Protein identification）目錄第一章雙向電泳1. 1 溶液配制1. 2 操作步驟1. 3 注意事項第二章訂貨信息附錄1雙向電泳完整的操

2、作步驟附錄2聚丙烯酰胺凝膠電泳凝膠的配置附錄3細胞樣品的一般處理步驟附錄4組織樣品的一般處理步驟第一章 雙向電泳1. 1 溶液配制水化上樣緩沖液（I）尿素8M4.805gCHAPS 4%0.4gDTT65mM0.098g（現(xiàn)加）Bio-Lyte0.2%(w/v)50ml（40%）（現(xiàn)加）溴酚藍0.001%10ml（1% 溴酚藍）MilliQ水定容至10ml分裝成10小管，每小管1ml，-20冰箱保存。水化上樣緩沖液（II）尿素7M4.2g硫脲2M1.52gCHAPS 4%0.4gDTT65mM0.098g（現(xiàn)加）Bio-Lyte0.2%(w/v)50ml（40%）（現(xiàn)加）溴酚藍0.001%10

3、ml（1% 溴酚藍）MilliQ水定容至10ml分裝成10小管，每小管1ml，-20冰箱保存。水化上樣緩沖液（III）尿素5M3.0g硫脲2M1.52gCHAPS 2%0.2gSB 3-10 2%0.2gDTT65mM0.098g（現(xiàn)加）Bio-Lyte0.2%(w/v)50ml（40%）（現(xiàn)加）溴酚藍0.001%10ml（1% 溴酚藍）MilliQ水定容至10ml分裝成10小管，每小管1ml，-20冰箱保存。膠條平衡緩沖液母液尿素6M36gSDS2%2gTris-HCl0.375M pH8.825ml（1.5M pH8.8 Tris-HCl）甘油20%20mlMilliQ水定容至100ml分

4、裝成10管，每管10ml，-20冰箱保存。膠條平衡緩沖液I膠條平衡緩沖液母液10mlDTT0.2g充分混勻，用時現(xiàn)配。膠條平衡緩沖液II膠條平衡緩沖液母液10ml碘乙酰胺0.25g 充分混勻，用時現(xiàn)配。低熔點瓊脂糖封膠液低熔點瓊脂糖0.5%0.5gTris25mM0.303g甘氨酸192mM1.44gSDS0.1%1ml（10% SDS）溴酚藍0.001%100ml（1%溴酚藍）MilliQ水定容至100ml加熱溶解至澄清，室溫保存。30% 聚丙烯酰胺貯液丙烯酰胺150g甲叉雙丙烯酰胺4gMilliQ水500ml濾紙過濾后，棕色瓶4冰箱保存。1.5mol/L Tris堿 pH8.8Tris堿9

5、0.75gMilliQ水400ml用1mol/L HCl調pH至8.8，加MilliQ水定容至500ml。4冰箱保存。10% SDSSDS10gMilliQ水100ml混勻后，室溫保存。10% ApAp0.1gMilliQ水1ml（用時加水溶解）溶解后，4冰箱保存。10×電泳緩沖液（1×= 25mM Tris，192mM glycine，0.1% SDS，pH8.3）Tris堿30g甘氨酸144gSDS10gMilliQ水1L混勻后，室溫保存。1. 2 操作步驟（一）第一向等電聚焦（用自制溶液）1. 從冰箱中取-20冷凍保存的水化上樣緩沖液（I）（不含DTT，不含Bio-L

6、yte）一小管（1ml/管），置室溫溶解。2. 在小管中加入0.01g DTT， Bio-Lyte按照如下表格1ml的量加，充分混勻。IPGpH RangeBio-Lyte Ampholyte(Stock)Range Conc.(w/v)Sample Solution VolumePer 1ml per 5ml per 50ml3-103-1040%5ul25ul250ul4-74-640%2.5ul12.5ul125ul5-740%2.5ul12.5ul125ul3-63-520%5ul25ul250ul4-640%2.5ul12.5ul125ul5-85-840%5ul25ul250ul7

7、-107-940%2.5ul12.5ul125ul8-1020%5ul25ul250ul3. 從小管中取出400ml水化上樣緩沖液，加入100ml樣品，充分混勻。其中水化緩沖液與樣品的比例不得小于4:1。具體的上樣體積如下表，ReadyStripTM IPG膠條的長度上樣體積7 cm125ul-250ul11cm185ul-370ul17cm300ul-600ul18cm315ul-630ul24cm410ul-820ul其中蛋白質的上樣量與染色相關。具體的蛋白質上樣量如下表，IPG膠條的長度分析型的上樣量（銀或SYPRO Ruby染色）制備型的上樣量（考馬斯亮藍染色）7 cm10-100ug

8、蛋白200-500ug蛋白11cm50-200ug蛋白250-1,000ug蛋白17cm100-300ug蛋白1-3mg蛋白4. 從冰箱取-20冷凍保存的IPG預制膠條，于室溫放置10分鐘。5. 沿著聚焦盤或水化盤中槽的邊緣至左而右線性加入樣品。在槽兩端各1cm左右不要加樣，中間的樣品液一定要連貫。注意：不要產生氣泡。否則影響到膠條中蛋白質的分布。6. 當所有的蛋白質樣品都已經加入到聚焦盤或水化盤中后，用鑷子輕輕的去除預制IPG膠條上的保護層。7. 分清膠條的正負極，輕輕地將IPG膠條膠面朝下置于聚焦盤或水化盤中樣品溶液上，使得膠條的正極（標有+）對應于聚焦盤的正極。確保膠條與電極緊密接觸。不

9、要使樣品溶液弄到膠條背面的塑料支撐膜上，因為這些溶液不會被膠條吸收。同樣還要注意不使膠條下面的溶液產生氣泡。如果已經產生氣泡，用鑷子輕輕地提起膠條的一端，上下移動膠條，直到氣泡被趕到膠條以外。8. 在每根膠條上覆蓋礦物油，防止膠條水化過程中液體的蒸發(fā)。需緩慢的加入礦物油，沿著膠條，使礦物油一滴一滴慢慢加在塑料支撐膜上。IPG膠條的長度礦物油體積7 cm1 ml11cm2 ml17cm3 ml18cm3ml24cm5ml9. 對好正、負極，蓋上蓋子。設置等電聚焦程序。7cm膠條水化12小時（17）被動水化S1250V慢速25分鐘除鹽S21000V快速60分鐘除鹽S34000V線性3小時升壓S44

10、000V快速24,000伏小時聚焦S5500V快速任意時間保持l 選擇所放置的膠條數(shù)。l 設置每根膠條的極限電流。（30-50mA/根）l 設置等電聚焦時的溫度。（17）11cm膠條水化12小時（17）被動水化S1250V慢速25分鐘除鹽S21000V快速60分鐘除鹽S37000V線性4小時升壓S47000V快速40,000伏小時聚焦S5500V快速任意時間保持l 選擇所放置的膠條數(shù)。l 設置每根膠條的極限電流。（50mA/根）l 設置等電聚焦時的溫度。（17）17cm膠條水化12小時（17）被動水化S1250V慢速25分鐘除鹽S21000V快速2小時除鹽S38000V線性5小時升壓S4800

11、0V快速60,000伏小時聚焦S5500V快速任意時間保持l 選擇所放置的膠條數(shù)。l 設置每根膠條的極限電流。（50-70mA/根）l 設置等電聚焦時的溫度。（17）18cm膠條水化12小時（17）被動水化S1250V慢速25分鐘除鹽S21000V快速2小時除鹽S38000V線性5小時升壓S48000V快速60,000伏小時聚焦S5500V快速任意時間保持l 選擇所放置的膠條數(shù)。l 設置每根膠條的極限電流。（50-70mA/根）l 設置等電聚焦時的溫度。（17）24cm膠條水化12小時（17）被動水化S1250V慢速25分鐘除鹽S21000V快速2小時除鹽S310000V線性5小時升壓S410

12、000V快速80,000伏小時聚焦S5500V快速任意時間保持l 選擇所放置的膠條數(shù)。l 設置每根膠條的極限電流。（50-70mA/根）l 設置等電聚焦時的溫度。（17）10.聚焦結束的膠條。立即進行平衡、第二向SDS-PAGE電泳，否則將膠條置于樣品水化盤中，-20冰箱保存1到2天。（二）第二向SDS-PAGE電泳1. 配制10%的丙烯酰胺凝膠兩塊。將溶液分別注入玻璃板夾層中，上部留0.5cm的空間，用MilliQ水、乙醇或水飽和正丁醇封面，保持膠面平整。聚合30分鐘。一般凝膠與上方液體分層后，表明凝膠已基本聚合。 2. 待凝膠凝固后，倒去分離膠表面的MilliQ水、乙醇或水飽和正丁醇，用M

13、illiQ水沖洗。3. 從-20冰箱中取出的膠條，先于室溫放置10分鐘，使其溶解。4. 配制膠條平衡緩沖液I。5在桌上先放置干的厚濾紙，聚焦好的膠條膠面朝上放在干的厚濾紙上。將另一份厚濾紙用MilliQ水浸濕，擠去多余水分，然后直接置于膠條上，輕輕吸干膠條上的礦物油及多余樣品。這可以減少凝膠染色時出現(xiàn)的縱條紋。6. 將膠條轉移至溶漲盤中，每個槽一根膠條，在有膠條的槽中加入膠條平衡緩沖液I。膠條的長度7cm11cm17cm18cm24cm膠條平衡緩沖液I2.5ml4ml6ml6ml8ml膠條平衡緩沖液II2.5ml4ml6ml6ml8ml將樣品水化盤放在水平搖床上緩慢搖晃15分鐘。7. 配制膠條

14、平衡緩沖液II。8. 第一次平衡結束后，徹底倒掉或吸掉樣品水化盤中的膠條平衡緩沖液I。并用濾紙吸取多余的平衡液（將膠條豎在濾紙上，以免損失蛋白或損壞凝膠表面）。再加入膠條平衡緩沖液II，繼續(xù)在水平搖床上緩慢搖晃15分鐘。9. 用濾紙吸去SDS-PAGE聚丙烯酰胺凝膠上方玻璃板間多余的液體。將處理好的第二向凝膠放在桌面上，長玻璃板在下，短玻璃板朝上，凝膠的頂部對著自己。10.將瓊脂糖封膠液進行加熱溶解。11.將10×電泳緩沖液，用量筒稀釋10倍，成1×電泳緩沖液。趕去緩沖液表面的氣泡。12.第二次平衡結束后，徹底倒掉或吸掉樣品水化盤中的膠條平衡緩沖液II。并用濾紙吸取多余的平

15、衡液（將膠條豎在濾紙上，以免損失蛋白或損壞凝膠表面）。13.將IPG膠條從樣品水化盤中移出，用鑷子夾住膠條的一端使膠面完全浸末在1×電泳緩沖液中。然后將膠條膠面朝上放在凝膠的長玻璃板上。其余膠條同樣操作。14.將放有膠條的SDS-PAGE凝膠轉移到灌膠架上，短玻璃板一面對著自己。在凝膠的上方加入低熔點瓊脂糖封膠液。15.用鑷子、壓舌板或是平頭的針頭，輕輕地將膠條向下推，使之與聚丙烯酰胺凝膠膠面完全接觸。注意不要在膠條下方產生任何氣泡。在用鑷子、壓舌板或平頭針頭推膠條時，要注意是推動凝膠背面的支撐膜，不要碰到膠面。16.放置5分鐘，使低熔點瓊脂糖封膠液徹底凝固。17.在低熔點瓊脂糖封膠

16、液完全凝固后。將凝膠轉移至電泳槽中。18.在電泳槽加入電泳緩沖液后，接通電源，起始時用的低電流或低電壓，待樣品在完全走出IPG膠條，濃縮成一條線后，再加大電流（或電壓），待溴酚藍指示劑達到底部邊緣時即可停止電泳。IPG膠條的長度起始電流加大后電流7 cm5mA/gel15-20mA/gel17cm5mA/gel20-30mA/gel19.電泳結束后，輕輕撬開兩層玻璃，取出凝膠，并切角以作記號（戴手套，防止污染膠面）。20.進行染色（按照伯樂染色試劑盒上的操作步驟）。1. 3 注意事項（一）等電聚焦1. 配好的尿素儲液必須馬上使用，或用mixed-bed離子交換樹脂，清除長時間放置時尿素溶液中形

17、成的氰酸鹽，預防蛋白質的甲?；?。2. 將水化上樣緩沖液分裝后再儲存于-20。用時，只要解凍需要量，其余繼續(xù)儲存。水化上樣緩沖液一旦溶解不能再冷凍。3. 將水化上樣緩沖液加入蛋白樣品中，終溶液中urea的濃度需6.5M。4. 等電聚焦溶脹緩沖液和樣品溶液中都要加入兩性電解質，它能夠幫助蛋白質溶解。兩性電解質的選擇取決于IPG膠條的pH范圍。下圖可提供參考。IPGpH RangeBio-Lyte Ampholyte(Stock)Range Conc.(w/v)Sample Solution VolumePer 5ml per50ml3-103-1040%25ul250ul4-74-640%12.5

18、ul125ul5-740%12.5ul125ul3-63-520%25ul250ul4-640%12.5ul125ul5-85-840%25ul250ul7-107-940%12.5ul125ul8-1020%25ul250ul5. 下表顯示的是通常推薦使用的雙向電泳第一向蛋白上樣量。因為樣品和樣品之間存在差異，所以這種上樣量僅提供參考。對于窄pH范圍的IPG膠條，需要比寬pH范圍的IPG膠條上更多的樣品，這是因為pI值不在此范圍內的蛋白質在等電聚焦的過程中會走出膠條。單pH范圍IPG膠條的上樣量是通常的4-5倍還多，這樣就可以很好的檢測低豐度的蛋白質。IPG膠條的長度分析型的上樣量（銀或SY

19、PRO Ruby染色）制備型的上樣量（考馬斯亮藍染色）7 cm10-100ug蛋白200-500ug蛋白11cm50-200ug蛋白250-1,000ug蛋白17cm100-300ug蛋白1-3mg蛋白6. 樣品溶液的上樣體積見下表。這樣就可以使膠條溶脹至它們原來的厚度（0.5mm）。膠條最少需要經過11小時的溶脹。即使看上去所有的緩沖液都已經被吸收，也一定要確保膠條在槽中溶脹充分的時間。只有在IPG凝膠的孔徑已經溶脹充分后，才可以吸收大分子量蛋白質，否則大分子量蛋白質無法進入膠條。ReadyStripTM IPG膠條的長度上樣體積7 cm125ul-250ul11cm185ul-370ul1

20、7cm300ul-600ul7. 如果在等電聚焦過程中，聚焦盤中還有很多的溶液沒有被吸收，留在膠條的外面，這樣就會在膠條的表面形成并聯(lián)的電流通路，而在這層溶液中蛋白質不會被聚焦。這就會導致蛋白的丟失或是圖像拖尾。為了減少形成并聯(lián)電流通路的可能性，可以先將膠條在溶脹盒中進行溶脹，然后再將溶脹好的膠條轉移到聚焦盤中。在轉移過程中，要用濕潤的濾紙仔細地從膠條上吸干多余的液體。8. 帶上手套用鑷子去除IPG膠條上的保護層。將IPG膠條仔細的置于溶脹緩沖液上，膠面朝下，確保整個膠面都能被浸濕。9. 在樣品溶液中加入痕量的溴酚藍對觀察溶脹過程很有幫助。在覆蓋礦物油之前，可以讓膠條先吸收1小時的液體。IPG

21、膠條上一定要覆蓋礦物油，否則緩沖液會蒸發(fā)，使得溶液濃縮，導致尿素沉淀。作為防止緩沖液蒸發(fā)的預防措施，礦物油必須緩緩地加在每個槽內，確保完全的覆蓋住每一根膠條。10. 下面的表格給出了建議使用的IPG膠條運行的總volt-hours。這僅提供參考，不同的樣品需要的volt-hours不同。當聚焦過程無法達到最高電壓時，只要最后能達到總的volt-hours，且7cm膠條電壓不低于3000伏，11cm膠條電壓不低于5000伏，17cm膠條電壓不低于7000伏，也能對樣品進行充分的聚焦，24cm膠條電壓不低于8500伏，也能對樣品進行充分的聚焦。ReadyStripIPG膠條的長度最高電壓建議的Vo

22、lt-Hours7 cm8,000V8,000-20,000V-hr11cm8,000V20,000-40,000V-hr17cm10,000V30,000-60,000V-hr18cm10,000V30,000-60,000V-hr24cm10,000V60,000-80,000V-hr11. 為使樣品進入膠的效率增加，采用50V低電壓溶脹；繼續(xù)以低電壓梯度（250V，500V，1000V各一個小時）進行電泳，最后達到10000V進行聚焦。12. 處理預制IPG膠條時，一定要始終帶著手套。注意預防角蛋白污染。13. 水化上樣緩沖液的成分由不同的樣品決定。14. 每根膠條蛋白質的總上樣量由特定

23、的樣品，膠條的pH范圍，及最終的檢測方式決定。下表是進行銀氨染色時的蛋白質上樣參考。ReadyStrip7cm11cm17cm3-105-100ug20-200ug50-300ug4-710-150ug40-200ug80-300ug3-610-150ug40-200ug80-300ug5-810-150ug40-200ug80-300ug7-1020-200ug50-300ug100-300ug15. 所有包含尿素的溶液加熱溫度不超過30，否則會發(fā)生蛋白氨甲?；?。引起蛋白質pI值的偏移。16.主動水化過程，會幫助大分子量的蛋白質進入膠條，但會丟失部分小分子量蛋白。17.當樣品中含鹽量較高時，

24、建議選用慢速升壓。當樣品中含鹽量一般時，選用線性升壓。當樣品中含鹽量很少時，可以選用快速升壓，這樣可以節(jié)省聚焦時間。18.雖然儀器中每根膠條的極限電流可以設為99mA/根。但一般7cm膠條的極限電流不超過50mA/根，17cm膠條的極限電流不超過75mA/根，最好都在30mA/根以下。19.可以在聚焦盤或水化盤的兩端電極處搭上鹽橋，這可以幫助除鹽。但需注意的是，鹽橋必須是濕潤的但水不能太多，必要時需用濾紙吸去多余的水份。保持鹽橋與電極的緊密接觸。20. 程序設置中的除鹽步驟，可根據(jù)具體情況進行設置，如果樣品中含鹽量較高可設置多步除鹽，并加長除鹽時間。但這種方法只能除去很少量的鹽離子，所以最好是

25、在上樣前，對樣品進行除鹽處理。（二）膠條的平衡1.不同長度的膠條，選用不同體積的膠條平衡緩沖液?？蓞⒖枷卤?。膠條的長度7cm11cm17cm18cm24cm膠條平衡緩沖液I2.5ml4ml6ml6ml8ml膠條平衡緩沖液II2.5ml4ml6ml6ml8ml2. 從冰箱中取出得膠條一定要先解凍。3. 膠條平衡緩沖液I和膠條平衡緩沖液II都要現(xiàn)配，因為DTT和碘乙酰胺在室溫的半衰期很短。4. 平衡過程導致蛋白丟失約5%-25%，還會使分辨率降低，平衡30分鐘時，蛋白帶變寬40%，所以平衡時間不可過長。如果不經平衡，把等電聚焦凝膠直接放在第二向凝膠上會導致高分子量蛋白的紋理現(xiàn)象，并且等電聚焦凝膠會

26、粘在SDS膠上。縮短平衡時間可以減少擴散，但同時會減少向第二向的轉移。所以平衡時間要充分長（至少2×10分鐘），但也不要超過（2×15分鐘）。5平衡緩沖液包括Tris-HCl（pH8.8），SDS（2%），高濃度尿素（6M）和甘油（20%）提高蛋白的溶解度并減少電內滲。第一部加入DTT（1%）是為了使蛋白去折疊；第二步加入碘乙酰胺是為了去除多余的DTT（銀染過程中，DTT會導致電脫尾）。6.對于非常疏水的蛋白或含有二硫鍵的蛋白，相對于DTT和碘乙酰胺，TBP（tributylphosphine）更有效。（三）膠條的轉移1在瓊脂糖中加入少量的溴酚藍，可以觀察到電泳的進程。2瓊

27、脂糖的溫度不能太高，熱的瓊脂糖會加速平衡緩沖液中尿素的分解。3當用瓊脂糖覆蓋膠條時，常會在膠條的下面或背面形成氣泡。這些氣泡會干擾蛋白質的遷移，所以必須去除。通常在剛加入瓊脂糖后，趕快用鑷子、壓舌板或平頭針頭輕壓膠條塑膠支撐膜的上方，驅趕氣泡。4如果選用的是普通瓊脂糖，先將膠條推進玻璃板中，使之與第二向凝膠緊密接觸，然后再加入瓊脂糖封膠液。這是因為普通瓊脂糖熔點較高，凝固較快。（四）SDS-PAGE凝膠電泳1玻璃板一定要清洗干凈，否則在染色時會有不必要的凝膠背景。2過硫酸銨（Ap）要新鮮配制。40%的過硫酸銨儲存于冰箱中只能使用2-3天，低濃度的過硫酸銨溶液只能當天使用。3蛋白質從一向（IPG

28、膠條）到二向（SDS凝膠）的轉移為避免點脫尾和損失高分子量蛋白，應緩慢進行（場強小于10V/cm）。4. 用Mini Protein 3電泳槽時，以電流為標準，開始進樣的低電流為5mA/gel，待樣品在濃縮膠部分濃縮成一條線后，再加大電流到10-15mA/gel；以電壓為標準，開始進樣的低電壓為50-75V/gel，待樣品在濃縮膠部分濃縮成一條線后，再加大電壓到150-200V /gel。用Protein II電泳槽時，以電流為標準，開始進樣的低電流為10mA/gel，待樣品在濃縮膠部分濃縮成一條線后，再加大電流到20-30mA/gel；以電壓為標準，開始進樣的低電壓為75-100V /gel

29、，待樣品在濃縮膠部分濃縮成一條線后，再加大電壓到300-400V/gel。第二章 訂貨信息樣品制備和蛋白質定量樣品制備試劑盒163-2130ReadyPrep 2-D Cleanup Kit1 kit163-2090163-2086ReadyPrep Reduction Alkylation KitReadyPrep protein extraction Kit(total protein)1 kit1 kit163-2089ReadyPrep Protein Extraction Kit (Cytoplasmic/Nuclear)1 kit163-2088163-2084ReadyPrep

30、Protein Extraction Kit (Membrane I)ReadyPrep Protein Extraction Kit (Membrane II)1 kit1 kit163-2087163-2085ReadyPrep Protein Extraction Kit (Signal)ReadyPrep Protein Extraction Kit (soluble/insoluble)1 kit1 kit163-2100ReadyPrep Sequential Extraction Kit, includes 1 vial of reagent 1 (to make 50 ml),

31、 3 vials of reagent 2 (to make 10 ml each), 2 vials of reagent 3 (to make 10 ml each),1 vial containing 0.6 ml of 200 mM TBP1 kit163-2103ReadyPrep Sequential Extraction Kit Reagent 2, reconstitutes to 10 ml1 vial163-2104ReadyPrep Sequential Extraction Kit Reagent 3, reconstitutes to 10 ml1 vial732-6

32、701Aurum Serum Protein Mini Kit, 10 preps, includes 10 serum protein columns, 10 clear 12 x 75 mm polystyrene tubes, 30 sample collection tubes, 10 column tips, 50 ml binding buffer, protocol overview, instructions1 kit163-2105ReadyPrep 2-D Starter Kit, includes protein sample and reagents sufficien

33、t to rehydrate, focus, and transfer to the second-dimension gel six 17 cm, ten 11 cm, or sixteen 7 cm ReadyStrip IPG strips1 kit163-2106ReadyPrep 2-D Starter Kit Rehydration/Sample Buffer, reconstitutes to 10 ml1 vial163-2110E. coli Protein Sample, lyophilized2.7mg樣品制備試劑161-0730Urea250 g161-0731Urea

34、1 kg161-0610Dithiothreitol (DTT)1 g161-0611Dithiothreitol (DTT)5 g163-2101Tributylphosphine (TBP), 200 mM0.6 ml161-0460CHAPS1 g161-0407Triton X-100500 ml163-1112Bio-Lyte® 3/10 Ampholyte, 40% (w/v)10 ml163-1132Bio-Lyte 3/5 Ampholyte, 20% (w/v) 10 ml163-1142Bio-Lyte 4/6 Ampholyte, 40% (w/v) 10 ml

35、163-1152Bio-Lyte 5/7 Ampholyte, 40% (w/v) 10 ml163-1172Bio-Lyte 7/9 Ampholyte, 40% (w/v) 10 ml163-1182Bio-Lyte 8/10 Ampholyte, 20% (w/v) 10 ml163-1192Bio-Lyte 5/8 Ampholyte, 40% (w/v) 10 ml163-2093100x ReadyStrip 710 Buffer1 ml163-2094100x Bio-Lyte 3/10 Ampholyte1 ml163-2095100x ReadyStrip 6.38.3 Bu

36、ffer1 ml163-2096100x ReadyStrip 5.56.7 Buffer1 ml163-2097100x ReadyStrip 4.75.9 Buffer1 ml163-2098100x ReadyStrip 3.95.1 Buffer1 ml161-0404Bromophenol Blue10 g161-0716Tris500 g161-0719Tris1 kg142-6425AG 501-X8 (D) Mixed Bed Resin500 g732-6221Micro Bio-Spin 6 Columns, in 10mM Tris buffer, pH 7.425 co

37、lumns732-6222Micro Bio-Spin 6 Columns, in 10mM Tris buffer, pH 7.4100 columns732-6225Micro Bio-Spin 6 Columns, in 10mM Tris buffer, pH 7.41000 columns蛋白質定量試劑盒500-0001Bio-Rad Protein Assay Kit I, contains 450 ml dye reagent concentrate and a bovine g-globulin standard, based on method of Bradford1 ki

38、t500-0002Bio-Rad Protein Assay Kit II, contains 450 ml dye reagent concentrate and a bovine serum albumin standard, based on method of Bradford1 kit500-0111DC Protein Assay Kit I, contains 250 ml alkaline copper tartrate solution, 2 L dilute Folin reagent, 5 ml surfactant solution, bovine g-globulin

39、 standard1 kit500-0112DC Protein Assay Kit II, contains 250 ml alkaline copper tartrate solution, 2 L dilute Folin reagent, 5 ml surfactant solution, bovine serum albumin standard1 kit500-0121RC DC Protein Assay Kit I, includes RC reagents package, DC protein assay reagents package, bovine g-globuli

40、n standard, 500 standard assays1 kit500-0122RC DC Protein Assay Kit II, includes RC reagents package, DC protein assay reagents package, bovine serum albumin standard, 500 standard assays1 kit等電聚焦等電聚焦163-2129Mineral Oil500 ml預制膠條163-2000ReadyStrip IPG Strip, 7 cm, pH 31012163-2002ReadyStrip IPG Stri

41、p, 7 cm, pH 310 (NL)12163-2001ReadyStrip IPG Strip, 7 cm, pH 4712163-2003ReadyStrip IPG Strip, 7 cm, pH 3612163-2004ReadyStrip IPG Strip, 7 cm, pH 5812163-2005ReadyStrip IPG Strip, 7 cm, pH 71012163-2028ReadyStrip IPG Strip, 7 cm, pH 3.95.112163-2029ReadyStrip IPG Strip, 7 cm, pH 4.75.912163-2030Rea

42、dyStrip IPG Strip, 7 cm, pH 5.56.712163-2031ReadyStrip IPG Strip, 7 cm, pH 6.38.312163-2014ReadyStrip IPG Strip, 11 cm, pH 31012163-2016ReadyStrip IPG Strip, 11 cm, pH 310 (NL)12163-2015ReadyStrip IPG Strip, 11 cm, pH 4712163-2017ReadyStrip IPG Strip, 11 cm, pH 3612163-2018ReadyStrip IPG Strip, 11 c

43、m, pH 5812163-2019ReadyStrip IPG Strip, 11 cm, pH 71012163-2024ReadyStrip IPG Strip, 11 cm, pH 3.95.112163-2025ReadyStrip IPG Strip, 11 cm, pH 4.75.912163-2026ReadyStrip IPG Strip, 11 cm, pH 5.56.712163-2027ReadyStrip IPG Strip, 11 cm, pH 6.38.312163-2007ReadyStrip IPG Strip, 17 cm, pH 31012163-2009

44、ReadyStrip IPG Strip, 17 cm, pH 310 (NL)12163-2008ReadyStrip IPG Strip, 17 cm, pH 4712163-2010ReadyStrip IPG Strip, 17 cm, pH 3612163-2011ReadyStrip IPG Strip, 17 cm, pH 5812163-2012ReadyStrip IPG Strip, 17 cm, pH 71012163-2020ReadyStrip IPG Strip, 17 cm, pH 3.95.112163-2021ReadyStrip IPG Strip, 17

45、cm, pH 4.75.912163-2022ReadyStrip IPG Strip, 17 cm, pH 5.56.712163-2023ReadyStrip IPG Strip, 17 cm, pH 6.38.312163-2032ReadyStrip IPG Strip, 18 cm, pH 31012163-2033ReadyStrip IPG Strip, 18 cm, pH 310 (NL)12163-2034ReadyStrip IPG Strip, 18 cm, pH 4712163-2035ReadyStrip IPG Strip, 18 cm, pH 3612163-20

46、36ReadyStrip IPG Strip, 18 cm, pH 5812163-2037ReadyStrip IPG Strip, 18 cm, pH 71012163-2038ReadyStrip IPG Strip, 18 cm, pH 3.95.112163-2039ReadyStrip IPG Strip, 18 cm, pH 4.75.912163-2040ReadyStrip IPG Strip, 18 cm, pH 5.56.712163-2041ReadyStrip IPG Strip, 18 cm, pH 6.38.312163-2042ReadyStrip IPG St

47、rip, 24 cm, pH 31012163-2043ReadyStrip IPG Strip, 24 cm, pH 310 (NL)12163-2044ReadyStrip IPG Strip, 24 cm, pH 4712163-2045ReadyStrip IPG Strip, 24 cm, pH 3612163-2046ReadyStrip IPG Strip, 24 cm, pH 5812163-2047ReadyStrip IPG Strip, 24 cm, pH 71012第二向 預制膠適用于17cm的預制膠條，PROTEAN II電泳槽161-1450Ready Gel Tr

48、is-HCl Gel for PROTEAN II Cell, 10%, IPG well, 1.0 mm thick, 18.3 x 19.3 cmeach161-1451Ready Gel Tris-HCl Gel for PROTEAN II Cell, 12%, IPG well, 1.0 mm thick, 18.3 x 19.3 cmeach161-1452Ready Gel Tris-HCl Gel for PROTEAN II Cell, 1020%, IPG well, 1.0 mm thick, 18.3 x 19.3 cmeach161-1453Ready Gel Tri

49、s-HCl Gel for PROTEAN II Cell, 816%, IPG well, 1.0 mm thick, 18.3 x 19.3 cmeach適用于11cm的預制膠條，Criterion電泳槽345-0013Criterion Tris-HCl Gel, 10% resolving, 4% stacking geleach345-0018Criterion Tris-HCl Gel, 12.5% resolving, 4% stacking geleach345-0031Criterion Tris-HCl Gel, 415%each345-0036Criterion Tris

50、-HCl Gel, 420%each345-0041Criterion Tris-HCl Gel, 816% resolving, 4% stacking geleach345-0046Criterion Tris-HCl Gel, 1020% resolving, 4% stacking geleach適用于7cm的預制膠條，Mini Protein電泳槽161-1390Ready Gel Tris-HCl Gel, 10% resolving, 4% stacking geleach161-1391Ready Gel Tris-HCl Gel, 12% resolving, 4% stacking geleach161-1392Ready Gel Tris-HCl Gel, 415%each161-1393Ready Gel Tris-HCl Gel, 420%each161-1394Ready Gel Tris-HCl Gel, 816% resolving, 4% stacking gel each161-1395Ready G