實驗九產(chǎn)抗菌肽細菌的分離篩選

1、2010.05.012010.05.01了解抗菌肽相關(guān)知識掌握分離篩選產(chǎn)生抗菌肽細菌的方法學(xué)習(xí)抗菌肽的分離及抗菌譜分析抗菌肽抗菌肽是生物體內(nèi)經(jīng)誘導(dǎo)產(chǎn)生的一種具有生物活性的小分子具有生物活性的小分子多肽多肽，分子量在20007000Da左右，由2060個氨基酸殘基組成。這類活性多肽多數(shù)具有強堿性、熱穩(wěn)定性以及廣譜抗菌等特點。一般認為抗菌肽的殺菌機理是作用于細菌的細胞膜，破壞其作用于細菌的細胞膜，破壞其完整性并產(chǎn)生穿孔現(xiàn)象完整性并產(chǎn)生穿孔現(xiàn)象，造成細胞內(nèi)容物溢出胞外而死亡抗菌肽具有廣譜抗菌活性，并有抗真菌、抗寄生蟲及抗腫瘤等生物活性，有良好的應(yīng)用前景。1 1 昆蟲抗菌肽哺乳動物抗菌肽 植物抗菌肽

2、原核微生物抗菌肽：又稱細菌素(bacteriocin),包括陽離子肽和中性肽,革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌均可分泌。細菌中已發(fā)現(xiàn)的抗菌肽有桿菌肽(Bacitracin)、短桿菌肽S(Gramicidin S)、多粘菌素E(Polymyxin E)和乳鏈菌肽(Nisin)4種類型。樣品：樣品：新鮮土壤樣品（同學(xué)自備）。新鮮土壤樣品（同學(xué)自備）。培養(yǎng)基：培養(yǎng)基：牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基。牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基。無菌水：無菌水：帶有玻璃珠裝有帶有玻璃珠裝有20mL20mL無菌水無菌水三角瓶。三角瓶。其它：其它：無菌培養(yǎng)皿、無菌吸管、無菌無菌培養(yǎng)皿、無菌吸管、無菌離心管、電子天平、記號筆、玻璃涂離心管、電子天平、

3、記號筆、玻璃涂棒、酒精燈、火柴。棒、酒精燈、火柴。土壤樣品的采集土壤樣品的采集用取樣鏟，將表層5cm左右的浮土除去，取525cm處的土樣1025g，裝入事先準備好滅菌容器內(nèi)扎好。制備土壤稀釋液：制備土壤稀釋液：稱取土壤2g，放入18mL帶有玻璃珠的無菌水三角瓶中，振蕩5min，即為稀釋101的土壤懸液。然后在離心管中依次稀釋至102 、103 、104稀釋度。制備綠膿桿菌混菌平板：制備綠膿桿菌混菌平板：每組制3塊牛膏蛋胨培養(yǎng)基平板。具體制法為：在空培養(yǎng)皿內(nèi)先加入0.1mL的綠膿桿菌菌液；再按正常方法倒入融化好的牛膏蛋胨培養(yǎng)基（溫度為不燙手為宜）并輕輕搖晃混勻，置于桌面冷卻為平板。在無菌培養(yǎng)皿底部注明分離菌名、稀釋度、組別、班級。 制備普通牛膏蛋胨平板制備普通牛膏蛋胨平板每組制2塊牛膏蛋胨培養(yǎng)基平板，置于冷藏柜備用。吸取稀釋液吸取稀釋液無菌操作法分別吸取102、103 、104土壤稀釋液0.1mL，分別加在已制好的3塊混菌平板培養(yǎng)基上。涂板涂板用玻璃刮鏟將稀釋液在培養(yǎng)基上充分混勻鋪平，倒置于恒溫箱培養(yǎng)。培養(yǎng)培養(yǎng)置于5