動物細(xì)胞融合與單克隆抗體 (2)

1、(1)(1)(2)(3)(4)(5)植物體細(xì)胞雜交過程示意圖植物體細(xì)胞雜交過程示意圖 如果將奶牛的細(xì)胞與植物細(xì)胞雜如果將奶牛的細(xì)胞與植物細(xì)胞雜交，得到綠色的小奶牛，那豈不是只交，得到綠色的小奶牛，那豈不是只要曬曬太陽就可以擠出牛奶嗎？要曬曬太陽就可以擠出牛奶嗎？動物細(xì)胞也能融合嗎？動物細(xì)胞也能融合嗎？A細(xì)胞細(xì)胞B細(xì)胞細(xì)胞人工誘導(dǎo)人工誘導(dǎo)1.1.動物動物細(xì)胞融合的概念細(xì)胞融合的概念雜交細(xì)胞雜交細(xì)胞 動物細(xì)胞融合（也稱細(xì)胞雜動物細(xì)胞融合（也稱細(xì)胞雜交）：是指兩個或多個細(xì)胞融交）：是指兩個或多個細(xì)胞融合形成一個細(xì)胞的過程。合形成一個細(xì)胞的過程。三、動物細(xì)胞融合三、動物細(xì)胞融合特點(diǎn)：特點(diǎn)：融合后的細(xì)胞

2、具有融合后的細(xì)胞具有原來兩個或者多個細(xì)胞的遺原來兩個或者多個細(xì)胞的遺傳信息的傳信息的單核單核細(xì)胞。細(xì)胞。舉例：舉例： 兩個正在融合的雞血細(xì)胞兩個正在融合的雞血細(xì)胞 受精作用受精作用誘導(dǎo)方法動物細(xì)胞融合過程電激滅活的病毒PEG誘導(dǎo)方法誘導(dǎo)方法誘導(dǎo)方法誘導(dǎo)方法誘導(dǎo)方法滅活喪失感染性，保留融合活性。原理：融合后細(xì)胞的類型：細(xì)胞膜的流動性五種AA、AB、BB（A、B）融合后的細(xì)胞進(jìn)行有絲分裂，形成完整的雜交細(xì)胞用滅活的病毒誘導(dǎo)動物細(xì)胞融合過程細(xì)胞核病毒顆粒細(xì)胞核細(xì)胞膜的流動性細(xì)胞膜的流動性細(xì)胞的全能性細(xì)胞的全能性細(xì)胞膜的流動性細(xì)胞膜的流動性 物理方法物理方法（離心、振蕩、電激）離心、振蕩、電激） 化學(xué)

3、方法（化學(xué)方法（PEG）物理、化學(xué)方法物理、化學(xué)方法滅活的病毒滅活的病毒獲得雜種植株獲得雜種植株制備單克隆抗體制備單克隆抗體纖維素酶、果膠酶纖維素酶、果膠酶去去除細(xì)胞壁后誘導(dǎo)原生除細(xì)胞壁后誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合質(zhì)體融合胰蛋白酶胰蛋白酶使細(xì)使細(xì)胞分散后誘導(dǎo)胞分散后誘導(dǎo)細(xì)胞融合細(xì)胞融合1.3 1.3 比較動、植物細(xì)胞雜交技術(shù)比較動、植物細(xì)胞雜交技術(shù)抗體：能夠與抗原發(fā)生特抗體：能夠與抗原發(fā)生特異性結(jié)合的異性結(jié)合的免疫球蛋白免疫球蛋白。能產(chǎn)生抗體的細(xì)胞是能產(chǎn)生抗體的細(xì)胞是漿細(xì)漿細(xì)胞（即效應(yīng)胞（即效應(yīng)B細(xì)胞）。細(xì)胞）。二、單克隆抗體二、單克隆抗體抗體的傳統(tǒng)生產(chǎn)方法：抗體的傳統(tǒng)生產(chǎn)方法：抗原抗原 反復(fù)注射動物反

4、復(fù)注射動物從動物的從動物的血清血清中分離抗體中分離抗體該法制備抗體的缺點(diǎn)：該法制備抗體的缺點(diǎn)：產(chǎn)量低、純度低，且產(chǎn)量低、純度低，且抗體的特異性差、靈抗體的特異性差、靈敏度低。敏度低。四、單克隆抗體四、單克隆抗體一個一個B B淋巴細(xì)胞只分泌一種特異性抗體淋巴細(xì)胞只分泌一種特異性抗體 骨髓瘤細(xì)胞能無限增殖骨髓瘤細(xì)胞能無限增殖雜交瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)設(shè)計方案：設(shè)計方案：動物細(xì)胞融合技術(shù)動物細(xì)胞融合技術(shù)單克隆單克隆抗體抗體 既能產(chǎn)生特異性抗體，既能產(chǎn)生特異性抗體， 又能大量增殖的細(xì)胞又能大量增殖的細(xì)胞 利用利用B B淋巴細(xì)胞產(chǎn)生抗體的功能。淋巴細(xì)胞產(chǎn)生抗體的功能。 利用骨髓

5、瘤細(xì)胞無限增殖的特性。利用骨髓瘤細(xì)胞無限增殖的特性。 利用細(xì)胞融合的技術(shù)將兩種細(xì)胞融合利用細(xì)胞融合的技術(shù)將兩種細(xì)胞融合獲得具有獲得具有B B淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞特性的淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞特性的雜交瘤細(xì)胞。雜交瘤細(xì)胞。 利用動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)大量培養(yǎng)雜交利用動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)大量培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞。瘤細(xì)胞。BB 、B瘤 、瘤瘤 （B、瘤）（一選）選擇性培養(yǎng)基：只有雜交瘤細(xì)胞才能存活獲得產(chǎn)生相應(yīng)抗體的B細(xì)胞（二選）克隆化培養(yǎng)和抗體檢測：選能產(chǎn)生所需專一抗體的雜交瘤細(xì)胞小小鼠鼠抗原抗原B淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞骨髓細(xì)胞骨髓細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞動物細(xì)胞培養(yǎng)（50代后）融合融合雜交細(xì)胞雜交細(xì)胞一選：選擇培養(yǎng)基一選：

6、選擇培養(yǎng)基雜交瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞動物細(xì)胞培養(yǎng)動物細(xì)胞培養(yǎng)大量雜交瘤細(xì)胞大量雜交瘤細(xì)胞二選：抗原二選：抗原-抗體雜交抗體雜交能產(chǎn)生特異性抗體的雜交瘤細(xì)胞體外：培養(yǎng)基體外：培養(yǎng)基體內(nèi)：小鼠腹腔內(nèi)體內(nèi)：小鼠腹腔內(nèi)單克隆抗體的制備過程單克隆抗體的制備過程1 1、注射抗原的目的是什么？、注射抗原的目的是什么？2 2、誘導(dǎo)其融合的方法有哪些？、誘導(dǎo)其融合的方法有哪些？3 3、融合后培養(yǎng)液中有幾種細(xì)胞？、融合后培養(yǎng)液中有幾種細(xì)胞？4 4、第一次篩選的方法和目的、第一次篩選的方法和目的5 5、第二次篩選的方法和目的、第二次篩選的方法和目的6 6、雜交瘤細(xì)胞有什么特點(diǎn)？、雜交瘤細(xì)胞有什么特點(diǎn)？ 單克隆抗體制備過程

7、示意圖單克隆抗體制備過程示意圖單抗制備過程分哪幾步？請用箭頭把以下代表單克隆抗體制備過程步驟的圖解的字母按正確順序連接起來。順序是？ 單克隆抗體的制備原理：雜交瘤細(xì)胞具有兩個親本的特性，即能迅速大量增殖，又能產(chǎn)生專一的抗體。單克隆抗體的優(yōu)點(diǎn)：特異性強(qiáng)、靈敏度高、可大量制備2.3單克隆抗體的應(yīng)用單克隆抗體的應(yīng)用1、診斷試劑診斷試劑最廣泛應(yīng)用最廣泛應(yīng)用準(zhǔn)確、高效、簡易、快速準(zhǔn)確、高效、簡易、快速單克隆抗體最主要的優(yōu)點(diǎn)：單克隆抗體最主要的優(yōu)點(diǎn)：特異性強(qiáng)，特異性強(qiáng)，靈敏度高，并能大量制備。靈敏度高，并能大量制備。“生物導(dǎo)彈生物導(dǎo)彈” 單克隆抗體藥物單克隆抗體藥物 單抗導(dǎo)向，藥物為彈頭單抗導(dǎo)向，藥物為彈

8、頭 主要用于治療主要用于治療癌癥治療癌癥治療，單克隆抗體作為載體，單克隆抗體作為載體，運(yùn)載抗癌藥物，形成運(yùn)載抗癌藥物，形成“生物導(dǎo)彈生物導(dǎo)彈”，準(zhǔn)確殺傷癌變細(xì)準(zhǔn)確殺傷癌變細(xì)胞。胞。兩個過程兩個過程動物細(xì)胞融合過程動物細(xì)胞融合過程單克隆抗體制備過程單克隆抗體制備過程三個三個“一一”一個誘導(dǎo)細(xì)胞融合的新方法一個誘導(dǎo)細(xì)胞融合的新方法 滅活病毒滅活病毒一個新細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞一個新細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞一個優(yōu)勢單克隆抗體特異性一個優(yōu)勢單克隆抗體特異性 強(qiáng)、靈敏度高的優(yōu)勢強(qiáng)、靈敏度高的優(yōu)勢小結(jié)：動物細(xì)胞融合小結(jié)：動物細(xì)胞融合過程過程動物細(xì)胞動物細(xì)胞A A動物細(xì)胞動物細(xì)胞B B誘導(dǎo)，融合誘導(dǎo)，融合篩選篩選雜交雜交細(xì)胞

9、細(xì)胞ABAB有絲分裂有絲分裂注意：注意： 動物細(xì)胞的融合也需要把多個兩種細(xì)動物細(xì)胞的融合也需要把多個兩種細(xì)胞放在一起，讓它們隨機(jī)融合后，再從中胞放在一起，讓它們隨機(jī)融合后，再從中篩選雜交細(xì)胞。篩選雜交細(xì)胞。小結(jié)：單克隆抗體的制備過程小結(jié)：單克隆抗體的制備過程B淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞誘導(dǎo)誘導(dǎo)融合融合B-B細(xì)胞細(xì)胞B-瘤細(xì)胞瘤細(xì)胞瘤瘤-瘤細(xì)胞瘤細(xì)胞選擇培養(yǎng)選擇培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞（ B-瘤細(xì)胞）瘤細(xì)胞）克隆化培養(yǎng)克隆化培養(yǎng)專一抗體檢測專一抗體檢測能產(chǎn)生特異能產(chǎn)生特異性抗體的雜性抗體的雜交瘤細(xì)胞交瘤細(xì)胞體外培養(yǎng)體外培養(yǎng)小鼠腹腔內(nèi)增殖小鼠腹腔內(nèi)增殖單克隆抗體單克隆抗體【例例1】能使動

10、物細(xì)胞融合的特有的誘導(dǎo)因子是能使動物細(xì)胞融合的特有的誘導(dǎo)因子是 （ ）A.離心離心 B.滅活的病毒滅活的病毒 C.電刺激電刺激 D.振動振動【例例2】融合后的雜交細(xì)胞的遺傳物質(zhì)有何特點(diǎn)（融合后的雜交細(xì)胞的遺傳物質(zhì)有何特點(diǎn)（ ）具有原來兩個或多個細(xì)胞的遺傳信息具有原來兩個或多個細(xì)胞的遺傳信息 B.能無限增殖能無限增殖 C.可形成新個體可形成新個體 D.培養(yǎng)過程會貼壁培養(yǎng)過程會貼壁【例例3】動物細(xì)胞融合的作用中最重要的是（動物細(xì)胞融合的作用中最重要的是（ ）A.克服遠(yuǎn)源雜交不親和克服遠(yuǎn)源雜交不親和 B.制備單克隆抗體制備單克隆抗體 C.培育新物種培育新物種 D.生產(chǎn)雜種細(xì)胞生產(chǎn)雜種細(xì)胞 BBA【例

11、例4 4】科學(xué)家用小鼠骨髓瘤細(xì)胞與某種細(xì)胞融科學(xué)家用小鼠骨髓瘤細(xì)胞與某種細(xì)胞融合，得到雜交細(xì)胞，經(jīng)培養(yǎng)可產(chǎn)生大量的單合，得到雜交細(xì)胞，經(jīng)培養(yǎng)可產(chǎn)生大量的單克隆抗體，與骨髓瘤細(xì)胞融合的是（克隆抗體，與骨髓瘤細(xì)胞融合的是（ ）A.A.經(jīng)過免疫的經(jīng)過免疫的B B淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞 C.C.經(jīng)過免疫的經(jīng)過免疫的T T淋巴淋巴細(xì)胞細(xì)胞B.B.不經(jīng)過免疫的不經(jīng)過免疫的T T淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞 D.D.不經(jīng)過免疫的不經(jīng)過免疫的B B淋淋巴細(xì)胞巴細(xì)胞【例例5 5】單克隆抗體是由下列哪種細(xì)胞產(chǎn)生的單克隆抗體是由下列哪種細(xì)胞產(chǎn)生的 （ ）B B淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞 B BT T淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞 C C骨髓瘤細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞

12、 D D雜交瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞AD【例例6】用動物細(xì)胞工程技術(shù)獲取單克隆抗體，下用動物細(xì)胞工程技術(shù)獲取單克隆抗體，下列實(shí)驗步驟中列實(shí)驗步驟中錯誤錯誤的是（的是（ ）A A將抗原注入小鼠體內(nèi)，獲得能產(chǎn)生抗體的將抗原注入小鼠體內(nèi)，獲得能產(chǎn)生抗體的B B淋淋巴細(xì)胞巴細(xì)胞B B用纖維素酶處理用纖維素酶處理B B淋巴細(xì)胞與小鼠骨髓瘤細(xì)胞淋巴細(xì)胞與小鼠骨髓瘤細(xì)胞C C用聚乙二醇作誘導(dǎo)劑，促使能產(chǎn)生抗體的用聚乙二醇作誘導(dǎo)劑，促使能產(chǎn)生抗體的B B淋淋巴細(xì)胞與小鼠骨髓瘤細(xì)胞融合巴細(xì)胞與小鼠骨髓瘤細(xì)胞融合D D篩選雜交細(xì)胞，并從中選出能產(chǎn)生所需抗體的篩選雜交細(xì)胞，并從中選出能產(chǎn)生所需抗體的細(xì)胞群，培養(yǎng)后提取單克隆

13、抗體細(xì)胞群，培養(yǎng)后提取單克隆抗體B(1)(1)若若A A細(xì)胞是小鼠骨髓瘤細(xì)胞，則細(xì)胞是小鼠骨髓瘤細(xì)胞，則B B細(xì)胞是取自小鼠細(xì)胞是取自小鼠體內(nèi)的體內(nèi)的 細(xì)胞，細(xì)胞，從小鼠體內(nèi)提取分離該細(xì)胞之從小鼠體內(nèi)提取分離該細(xì)胞之前，應(yīng)給小鼠注射前，應(yīng)給小鼠注射_類物質(zhì)。類物質(zhì)。（2）d過程過程是一個是一個_過程，該過程的進(jìn)過程，該過程的進(jìn)行常用行常用_或或_的誘導(dǎo)。的誘導(dǎo)。(3)(3)假設(shè)僅考慮某兩個細(xì)胞的融合，則可形成假設(shè)僅考慮某兩個細(xì)胞的融合，則可形成 種種類型的類型的C C細(xì)胞，因此需用細(xì)胞，因此需用_培養(yǎng)基篩選出培養(yǎng)基篩選出D D細(xì)細(xì)胞用于培養(yǎng)，胞用于培養(yǎng)，D D細(xì)胞的名稱是細(xì)胞的名稱是 ，其特點(diǎn)

14、，其特點(diǎn)是是_。效應(yīng)效應(yīng)B抗原抗原細(xì)胞融合細(xì)胞融合聚乙二醇聚乙二醇 滅活的病毒滅活的病毒選擇性選擇性 3既能無限增殖又能產(chǎn)生特異性抗體既能無限增殖又能產(chǎn)生特異性抗體雜交瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞(4)(4)在培養(yǎng)時通過在培養(yǎng)時通過_分裂方式大量繁殖。分裂方式大量繁殖。D D細(xì)細(xì)胞體外培養(yǎng)需要注意的條件是（要求答胞體外培養(yǎng)需要注意的條件是（要求答5 5項）項）_。（5 5）單克隆抗體在疾病的診斷、治療和預(yù)防方面）單克隆抗體在疾病的診斷、治療和預(yù)防方面，與常規(guī)抗體相比，其特點(diǎn)是，與常規(guī)抗體相比，其特點(diǎn)是_。特異性強(qiáng)、靈敏度高特異性強(qiáng)、靈敏度高無菌、無毒的環(huán)境；充足的營養(yǎng)；適宜的溫度和無菌、無毒的環(huán)境；充足的營養(yǎng)；適宜的溫度和pHpH；適宜的氣體環(huán)境適宜的氣體環(huán)境14、右圖為某同學(xué)根據(jù)雜交瘤技術(shù)、右圖為某同學(xué)根據(jù)雜交瘤技術(shù)的方法，設(shè)計的生產(chǎn)破傷風(fēng)桿菌抗的方法，設(shè)計的生產(chǎn)破傷風(fēng)桿菌抗體的實(shí)驗方案。據(jù)圖回答：體的實(shí)驗方案。據(jù)圖回答：（1）該方案能達(dá)到預(yù)期效果嗎）該方案能達(dá)到預(yù)期效果嗎？。原因是。