需氧和兼性厭氧球菌的鑒定PPT課件

1、微生物學(xué)檢驗(yàn)微生物學(xué)檢驗(yàn)微生物學(xué)檢驗(yàn)微生物學(xué)檢驗(yàn)國(guó)家衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會(huì)規(guī)劃教材國(guó)家衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會(huì)規(guī)劃教材 第 七 章 需氧和兼性厭氧球菌鑒定返回總目錄返回總目錄本 章 內(nèi) 容第一節(jié) 葡萄球菌屬2第二節(jié) 鏈球菌屬3第三節(jié) 腸球菌屬4第四節(jié) 奈瑟菌屬5概述1學(xué)習(xí)目標(biāo)及重點(diǎn)學(xué)習(xí)目標(biāo)： 1.掌握：葡萄球菌屬、鏈球菌屬、腸球菌屬和奈瑟菌屬的主要生物學(xué)特性和微生物學(xué)檢驗(yàn)，尤其是它們的鑒定依據(jù)和鑒別要點(diǎn)2.熟悉葡萄球菌屬、鏈球菌屬、腸球菌屬和奈瑟菌屬的臨床意義本章重點(diǎn)： 1.葡萄球菌屬、鏈球菌屬、腸球菌屬和奈瑟菌屬的主要生物學(xué)特性和微生物學(xué)檢驗(yàn)2.葡萄球菌屬、鏈球菌屬、腸球菌屬和奈瑟菌屬的臨床意義

2、概述 球菌的種類很多，根據(jù)革蘭染色性不同分為革蘭陽性和革蘭陰性球菌。 致病性球菌稱病原性球菌主要引起化膿性炎癥又可稱為化膿性球菌第一節(jié) 葡萄球菌屬 葡萄球菌屬細(xì)菌為一類觸酶陽性的革蘭染色陽性球菌，因常堆聚成葡萄串狀而得名。廣泛分布于自然界并構(gòu)成人體的正常菌群。大多非致病，有少部分引起化膿性感染。主要包括金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌、溶血性葡萄球菌等35個(gè)種，17個(gè)亞種 一、生物學(xué)特性 1.形態(tài)與染色 本屬菌多為球形，直徑0515um。葡萄球菌無鞭毛，無芽胞、無莢膜 （1）在液體培養(yǎng)基上：呈單個(gè)、成雙或短鏈狀排列 （2）在固體培養(yǎng)基上：呈葡萄串狀排列 （3）膿汁標(biāo)本中：呈單個(gè)散在或

3、少數(shù)呈葡萄串狀排列 第一節(jié) 葡萄球菌屬金黃色葡萄球菌（膿汁）鏡下形態(tài)金黃色葡萄球菌純培養(yǎng)鏡下形態(tài)第一節(jié) 葡萄球菌屬 2.培養(yǎng)特性 營(yíng)養(yǎng)要求不高，在普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂（普皿）上生長(zhǎng)良好。在20%CO2中有利于毒素形成 （1）在液體培養(yǎng)基：呈均勻混濁生長(zhǎng) （2）在普皿上：形成12mm、圓形、光滑、邊緣整齊、不透明、有色菌落。不同菌株產(chǎn)生不同的脂溶性色素，如：金黃色、白色、檸檬色 金黃色葡萄球菌金黃色脂溶性色素第一節(jié) 葡萄球菌屬表皮葡萄球菌在普通瓊脂平皿上的白色色素表皮葡萄球菌在血平板上的白色色素2.培養(yǎng)特性第一節(jié) 葡萄球菌屬 （3）在血皿上 金黃色葡萄球菌和溶血性葡萄球菌，能產(chǎn)生溶血毒素，在血平板上產(chǎn)生

4、-溶血。其他葡萄球菌無此現(xiàn)象 金黃色葡萄球菌在血平板上24h菌落 2.培養(yǎng)特性 （4）在高鹽甘露醇平板上：大多數(shù)葡萄球菌耐鹽性強(qiáng)（10%15%g/L NaCl培養(yǎng)基中生長(zhǎng)）。此平板常作為選擇性培養(yǎng)基，菌可分解甘露醇使指示劑呈淡黃色。G-菌在此平板上不生長(zhǎng) 金黃色葡萄球菌在高鹽甘露醇平板上的淡黃色菌落 2.培養(yǎng)特性第一節(jié) 葡萄球菌屬第一節(jié) 葡萄球菌屬 （5）卵黃高鹽瓊脂平板：金黃色葡萄球菌產(chǎn)生卵磷脂酶，在此培養(yǎng)基上，菌落周圍可形成白色沉淀環(huán)。表皮葡萄球菌亦可生長(zhǎng)，但無白色沉淀環(huán)。 2.培養(yǎng)特性金黃色葡萄球菌和表皮葡萄球菌在卵黃平板上生長(zhǎng)現(xiàn)象第一節(jié) 葡萄球菌屬 3.生化反應(yīng)：葡萄球菌的生化活性強(qiáng)，

5、能分解多種糖類，蛋白質(zhì)和氨基酸，觸酶陽性。觸酶陽性陰性對(duì)照發(fā)酵葡萄糖第一節(jié) 葡萄球菌屬 4.細(xì)胞壁抗原 主要類型有下列兩種 蛋白抗原 *又稱為葡萄球菌A蛋白（SPA），具有種、屬特異性的完全抗原。 SPA可與人類的IgG的Fc段非特異性結(jié)合，而不影響Fab段與特異性抗原結(jié)合的功能， 它作為檢測(cè)多種微生物抗原的實(shí)驗(yàn)室技術(shù)的重要試劑，可進(jìn)行簡(jiǎn)單、快速的協(xié)同凝集試驗(yàn)多糖抗原 具有型特異性的半抗原。金黃色葡萄球菌-核糖醇磷壁酸；表皮葡萄球菌等凝固酶陰性葡萄球菌-甘油磷壁酸。檢測(cè)磷壁酸抗體有助于金黃色葡萄球菌感染的診斷和預(yù)后判斷第一節(jié) 葡萄球菌屬 5. 分類 葡萄球菌屬可根據(jù)DNA的同源性、色素、生化反

6、應(yīng)及是否產(chǎn)生凝固酶等不同方法進(jìn)行分類。 6.抵抗力 葡萄球菌是抵抗力最強(qiáng)的無芽胞細(xì)菌。*根據(jù)是否產(chǎn)生凝固酶分凝固酶陽性凝固酶陰性 葡萄球菌二、臨床意義第一節(jié) 葡萄球菌屬第一節(jié) 葡萄球菌屬微生物檢驗(yàn)程序標(biāo)本膿汁，血液，剩余食物，嘔吐物等直接涂片鏡檢革蘭陽性球菌分離培養(yǎng)生長(zhǎng)現(xiàn)象色素、溶血鑒定毒素測(cè)定藥物敏感試驗(yàn)生化反應(yīng)：血漿凝固酶、甘露醇、耐熱核酸酶幼貓?jiān)囼?yàn)報(bào)告形態(tài)染色：革蘭陽性球菌第一節(jié) 葡萄球菌屬 1.標(biāo)本：主要有血液、尿液、痰液、腦脊液、穿刺液和濃液等。三、微生物學(xué)檢驗(yàn) 2.直接涂片：標(biāo)本或增菌液直接涂片，革蘭染色鏡檢見革蘭陽性呈葡萄串狀排列球菌，即可做出 “查見革蘭陽性球菌，葡萄串狀排列，

7、疑為葡萄球菌”的初步報(bào)告。 第一節(jié) 葡萄球菌屬 3. 增菌培養(yǎng) 血液標(biāo)本增菌培養(yǎng)，24h培養(yǎng)后每日觀察增菌液變化。如無變化，需培養(yǎng)7d，其中盲目傳代2次，如無細(xì)菌培養(yǎng)可報(bào)“血液標(biāo)本經(jīng)7d培養(yǎng)無菌生長(zhǎng)”。如發(fā)生混濁、內(nèi)有膠胨樣凝塊等現(xiàn)象可進(jìn)行進(jìn)一步分離培養(yǎng)和革蘭染色專家提示 正常情況下無菌狀態(tài)的體液標(biāo)本如腦脊液，漿膜腔積液和關(guān)節(jié)腔抽出液等，直接涂片檢查具有重要價(jià)值，其他體液標(biāo)本伴有炎癥細(xì)胞也有參考價(jià)值4.分離培養(yǎng)（1）血平板：351824h （2）高鹽甘露醇平板或高鹽卵黃平板(*進(jìn)行葡萄球菌菌落特征復(fù)習(xí))第一節(jié) 葡萄球菌屬5.生化反應(yīng)： （1）觸酶試驗(yàn)：陽性。 （2）凝固酶試驗(yàn)：玻片法和試管法。

8、第一節(jié) 葡萄球菌屬 5.生化反應(yīng) （3）耐熱DNA試驗(yàn) 表皮葡萄球菌耐熱DNA試驗(yàn) (-)性金黃色葡萄球菌耐熱DNA試驗(yàn) (+)性第一節(jié) 葡萄球菌屬 5.生化反應(yīng) 陽性反應(yīng) 陰性反應(yīng)Slidex Staph Plus可快速鑒定金黃色葡萄球菌（4）乳膠凝集試驗(yàn)此試驗(yàn)不僅可檢測(cè)金黃色葡萄球菌凝固酶，還可檢測(cè)葡萄球菌A蛋白（SPA）第一節(jié) 葡萄球菌屬乳膠凝集試驗(yàn)原理在紙板或玻片上滴加包被有人類纖維蛋白原和抗金黃色葡萄球菌單克隆IgG抗體的藍(lán)色膠乳顆粒，然后用接種環(huán)挑取待鑒定葡萄球菌的新鮮培養(yǎng)物與之混勻，待檢葡萄球菌如能產(chǎn)生結(jié)合的凝固酶，可作用于包被在藍(lán)色膠乳顆粒上的纖維蛋白原成為纖維蛋白，沉積在葡萄

9、球菌上使它們發(fā)生凝集；或待檢菌菌體（A蛋白）與吸附在藍(lán)色膠乳顆粒IgG的Fab結(jié)合，引起藍(lán)色膠乳顆粒被動(dòng)凝集，出現(xiàn)肉眼可見凝集團(tuán)塊為乳膠凝集試驗(yàn)陽性 第一節(jié) 葡萄球菌屬 5.生化反應(yīng) （6）腸毒素試驗(yàn)：現(xiàn)多采用免疫學(xué)方法快速檢測(cè)腸毒素，主要以ELISA為主。 （7）其他鑒定試驗(yàn)：臨床上常用商品化鑒定系統(tǒng)如 API葡萄球菌鑒定試劑盒。 API STAPH可鑒定試劑盒（5）甘露醇發(fā)酵試驗(yàn)：金黃色葡萄球菌陽性。第一節(jié) 葡萄球菌屬5.生化反應(yīng)（8）其它非培養(yǎng)鑒定或檢查方法： 1）免疫學(xué)方法：用ELISA或?qū)α髅庖唠娪痉椒z測(cè)金黃色葡萄球菌磷壁酸抗體 2）分子生物學(xué)方法：用商品化Accu探針對(duì)培養(yǎng)物進(jìn)行

10、鑒定，用脈沖場(chǎng)凝膠電泳法（PFGE）對(duì)葡萄球菌的質(zhì)粒和染色體進(jìn)行限制性核酸內(nèi)切酶分析等 第一節(jié) 葡萄球菌屬6.藥敏試驗(yàn) （1）藥敏鑒別試驗(yàn)-新生霉素敏感試驗(yàn) 金黃色葡萄球菌 S 表皮葡萄球菌 S 腐生葡萄球菌 R 第一節(jié) 葡萄球菌屬6.藥敏試驗(yàn)（2）藥敏試驗(yàn)（臨床上按CLSI選擇抗菌藥物進(jìn)行試驗(yàn)）第一節(jié) 葡萄球菌屬 （3）耐甲氧西林的葡萄球菌藥敏試驗(yàn)MRSA和非MRSA專家提示 當(dāng)臨床上檢測(cè)出MRSA，即使對(duì)頭孢菌素類的體外藥敏試驗(yàn)表現(xiàn)為“敏感”時(shí)，也不宜將這種假象向臨床報(bào)告，以免造成錯(cuò)誤導(dǎo)向。第一節(jié) 葡萄球菌屬 7.鑒定 按科屬種的順序 （1）科間鑒別 微球菌科、鏈球菌科和奈瑟菌科鑒別要點(diǎn)第

11、一節(jié) 葡萄球菌屬 7.鑒定 按科屬種的順序 （2）屬間鑒別 葡萄球菌屬與微球菌屬鑒別要點(diǎn)第一節(jié) 葡萄球菌屬菌名血漿凝固酶耐熱DNA酶脲酶甘露糖氧化新生霉素耐藥多粘菌素B耐藥金黃色葡萄球菌D表皮葡萄球菌溶血葡萄球菌腐生葡萄球菌人葡萄球菌d:不定 （3）種間鑒別 引起臨床感染的最常見的5種葡萄球菌鑒別要點(diǎn)第一節(jié) 葡萄球菌屬 金黃色葡萄球菌系毒力很強(qiáng)的致病菌，無論從任何標(biāo)本中分離出均應(yīng)及時(shí)鑒定，進(jìn)行藥敏試驗(yàn)和盡快報(bào)告臨床。 從輸液導(dǎo)管、人工植入組織中分離出表皮葡萄球菌和從尿液標(biāo)本中分離出腐生葡萄球菌應(yīng)視為病原菌 （葡萄球菌的尿液培養(yǎng)菌落計(jì)數(shù)應(yīng)考慮103104為陽性菌尿標(biāo)準(zhǔn)）。 其它凝固酶陰性葡萄球菌

12、引起感染流行或臨床治療失敗時(shí)，應(yīng)考慮將其鑒定到種。當(dāng)MRSA對(duì)頭孢菌素類的體外藥敏試驗(yàn)表現(xiàn)為“敏感”時(shí)，不能將這種假象向臨床報(bào)告，以免造成錯(cuò)誤導(dǎo)向。因?yàn)轶w內(nèi)活性試驗(yàn)已證實(shí)頭孢菌素類對(duì)MRSA無效。 專家提示返回章內(nèi)容返回章內(nèi)容第一節(jié) 葡萄球菌屬 第二節(jié) 鏈球菌屬 鏈球菌屬細(xì)菌為一類觸酶陰性的革蘭染色陽性球菌，廣泛分布于自然界、人及動(dòng)物腸道和健康人鼻咽部鏈球菌在光鏡下形態(tài)（革蘭染色）鏈球菌在電鏡下形態(tài) 1.形態(tài)與染色 G+球菌，直徑0.51um （1）液體培養(yǎng)基中鏈狀排列，長(zhǎng)短不一。短由48個(gè)菌組成，長(zhǎng)者可達(dá)2030個(gè)細(xì)菌組成 （2）在固體培養(yǎng)基或膿汁標(biāo)本中，呈短鏈、成雙或單個(gè)散在排列一、生物學(xué)

13、特性A群鏈球菌肺炎鏈球菌B群鏈球菌 第二節(jié) 鏈球菌屬 鏈球菌幼齡時(shí)可見莢膜，繼續(xù)培養(yǎng)莢膜消失 肺炎鏈球菌常常呈雙排列，故又稱為肺炎雙球菌。在動(dòng)物體內(nèi)它可形成較厚的莢膜 鏈球菌屬無鞭毛、無芽胞肺炎鏈球菌莢膜 第二節(jié) 鏈球菌屬 2.培養(yǎng)特性 營(yíng)養(yǎng)要求高，在5%10%CO2環(huán)境下生長(zhǎng)更好 （1）液體培養(yǎng)基（血清肉湯）：沉淀生長(zhǎng)（上清液澄清/微混） （2）血平板：菌落小，灰白色，半透明，不同菌種的溶血現(xiàn)象不同，有-溶血、-溶血和-溶血（不溶血） -溶血 -溶血 -溶血 第二節(jié) 鏈球菌屬 3.生化反應(yīng) 生化活性較活躍：觸酶陰性，葡萄糖+，菊糖 （1）A群鏈球菌：桿菌肽 S A、B和D群鏈球菌桿菌肽試驗(yàn)

14、A群桿菌肽 S 第二節(jié) 鏈球菌屬 3. 生化反應(yīng) （2）B群鏈球菌：CAMP+，馬尿酸鈉+ （3）D群鏈球菌：PYR+，七葉苷+B群CAMP+D群鏈球菌七葉苷+（上）A群鏈球菌七葉苷-（下）思考：CAMP原理？ 第二節(jié) 鏈球菌屬 3. 生化反應(yīng) （4）肺炎鏈球菌：Optochin S，膽汁溶菌+，菊糖+肺炎鏈球菌Optochin S膽汁溶菌（平板法）膽汁溶菌（試管法） 第二節(jié) 鏈球菌屬 4.分類 根據(jù)下述鏈球菌的溶血特征和Lancefield血清學(xué)等傳統(tǒng)的分類法，目前仍然是臨床實(shí)驗(yàn)室鑒定鏈球菌的常規(guī)使用方法。 （1）根據(jù)培養(yǎng)基上溶血特性分類：分類菌落特征甲型（）溶血性鏈球菌灰色、針尖狀菌落、周

15、圍有草綠色溶血環(huán)（ 溶血）乙型（）溶血性鏈球菌灰白色細(xì)小菌落、周圍有寬大透明溶血環(huán)（ 溶血 ）丙型（）鏈球菌灰白色小菌落、無溶血環(huán) 第二節(jié) 鏈球菌屬（2）根據(jù)抗原結(jié)構(gòu)分類：鏈球菌Ag結(jié)構(gòu)較復(fù)雜，含多種抗原，主要有：多糖抗原 *為群特異性抗原：位于細(xì)胞壁上，Lancefield將乙鏈（溶血性）分成A、B、C、D等20個(gè)群。蛋白抗原 *型特異性抗原：位于菌體表面，有M、T、R和S蛋白。 鏈球菌Ag群中，對(duì)人類致病者90%屬A群，B、C、D、F、G群也常感染致化膿性疾患。 第二節(jié) 鏈球菌屬（4）綜合溶血性、抵抗力、生化反應(yīng)性狀分類（3）根據(jù)鏈球菌對(duì)氧的需求 分為三類：需氧、厭氧、微需氧鏈球菌 第二節(jié)

16、 鏈球菌屬二、臨床意義 第二節(jié) 鏈球菌屬 溶血毒素O：耐熱，含-SH基的蛋白質(zhì)，對(duì)氧敏感，易被氧化成-S-S，失去溶血能力 溶血毒素S：多肽，分子量少，對(duì)氧穩(wěn)定，血平板上的溶血現(xiàn)象由它引起 檢測(cè)抗“O”抗體，可輔助診斷鏈球菌性疾病如風(fēng)濕熱及鏈球菌感染后的腎小球腎炎 友情提示 第二節(jié) 鏈球菌屬 第二節(jié) 鏈球菌屬微生物檢驗(yàn)程序標(biāo)本血液、尿液、創(chuàng)傷標(biāo)本、膿性分泌物等 直接涂片鏡檢分離培養(yǎng)*注意與葡萄球菌屬、腸球菌屬鑒別，鏈球菌分群鑒定生長(zhǎng)現(xiàn)象溶血類型生化反應(yīng)：觸酶、PYR、七葉苷、菊糖、膽汁溶菌等形態(tài)染色：革蘭陽性球菌藥敏試驗(yàn)報(bào)告血清學(xué)試驗(yàn)抗“O”試驗(yàn)Lancefield分群 第二節(jié) 鏈球菌屬 1.

17、 標(biāo)本采集：標(biāo)本類型有血液、尿液、創(chuàng)傷標(biāo)本、膿性分泌物等 三、微生物學(xué)檢驗(yàn) 2.直接涂片：標(biāo)本或增菌液直接涂片，革蘭染色鏡檢見革蘭陽性呈鏈狀排列球菌，或見革蘭陽性矛頭狀球菌成雙排列，菌體周圍有透明環(huán)，即可做出 “查見革蘭陽性球菌，鏈狀排列，疑為鏈球菌”；或“查見革蘭陽性矛頭狀球菌，成雙排列，疑為肺炎鏈球菌”的初步報(bào)告 第二節(jié) 鏈球菌屬三、微生物學(xué)檢驗(yàn)3增菌培養(yǎng)：下列生長(zhǎng)現(xiàn)象有助于區(qū)別不同鏈球菌一般菌培養(yǎng)7天，無現(xiàn)象則要盲目傳代2次亞急性細(xì)菌性心內(nèi)膜炎血培養(yǎng)4周，每周移種平板一次。如有生長(zhǎng)，轉(zhuǎn)種血瓊脂平板 第二節(jié) 鏈球菌屬 4.分離培養(yǎng) 培養(yǎng)條件：需加血清、血液等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。 需氧、厭氧各一塊培養(yǎng)

18、經(jīng)37培養(yǎng)12天。觀察菌落特征、溶血現(xiàn)象。注意要點(diǎn)培養(yǎng)條件培養(yǎng)基溶血性檢查初代分離應(yīng)置510的CO2環(huán)境下，可用二氧化碳孵箱或燭缸。血平板羊血平板：有助于其溶血特征的識(shí)別和進(jìn)一步鑒定。A群鏈球菌大多產(chǎn)生溶血毒素“S”，一般鏈球菌只產(chǎn)生溶血毒素“O”。 第二節(jié) 鏈球菌屬 5鑒定實(shí)驗(yàn) 鏈球菌屬細(xì)菌的鑒定應(yīng)根據(jù)其菌體形態(tài)、菌落形態(tài)和溶血特征，結(jié)合以下鑒定試驗(yàn)進(jìn)行。 （1）與其他革蘭氏陽性球菌鑒別： 檢查溶血毒素“O”時(shí)，要降低氧分壓如厭氧培養(yǎng)，傾注倒板或穿刺接種，這樣可使只產(chǎn)生溶血毒素“O”的鏈球菌也表現(xiàn)出-溶血現(xiàn)象 第二節(jié) 鏈球菌屬 5鑒定實(shí)驗(yàn) （2）屬內(nèi)鑒定： 1）分類（復(fù)習(xí)） 2）生化反應(yīng) 3

19、）多糖抗原分群（群特異性抗原） Lancefield 分群試劑盒 第二節(jié) 鏈球菌屬LancefieldLancefield血清學(xué)凝集試驗(yàn)血清學(xué)凝集試驗(yàn) 第二節(jié) 鏈球菌屬甲型溶血性鏈球菌和丙型鏈球菌鑒定到肺炎鏈球菌、D群鏈球菌，其他的統(tǒng)稱為草綠色鏈球菌。 乙型溶血性鏈球菌鑒定到抗原群（A、B、C、G）。 1類：乙型溶血性鏈球菌：A、B、C、D、F、G群 第二節(jié) 鏈球菌屬 青霉素 6.5%NaCL肉湯生長(zhǎng) D群鏈球菌 S - 腸球菌 R + 3類：其它草綠色溶血性鏈球菌 2類：膽汁七葉苷水解陽性 鳥鏈：Q群+，其它D群+ 第二節(jié) 鏈球菌屬 （3）其他鑒定試驗(yàn) 1）鏈激酶 A群+ 2）牛乳美藍(lán)試驗(yàn)

20、糞鏈、乳鏈不被抑制 3）馬尿酸鈉水解試驗(yàn) B群+ 4）肺炎鏈球菌 莢膜腫脹試驗(yàn)+ 抗“O”試驗(yàn)原理：中和試驗(yàn)方法：間接凝集結(jié)果：效價(jià)大于400單位意義：風(fēng)濕熱及其活動(dòng)性的輔助診斷6.血清學(xué)診斷 第二節(jié) 鏈球菌屬 鏈球菌侵入體內(nèi)產(chǎn)生SLO，刺激機(jī)體產(chǎn)生相應(yīng)抗體ASO，當(dāng)兩者中和后，在加入SLO乳膠試劑，因病人血清中ASO量很多，未被中和掉的抗體ASO與乳膠試劑反應(yīng)，產(chǎn)生清晰凝集，為抗“O”試驗(yàn)陽性；無凝集，為陰性。 7. 藥敏試驗(yàn) （1）藥敏鑒別試驗(yàn) （2）藥敏試驗(yàn) 抗“O”試驗(yàn)原理返回章內(nèi)容返回章內(nèi)容 第二節(jié) 鏈球菌屬 第三節(jié) 腸球菌屬 腸球菌屬原屬于鏈球菌D群（血清學(xué)分類），1984年從鏈球

21、菌屬分離出，成為獨(dú)立的菌屬，廣泛分布在自然界，是人類、動(dòng)物腸道和女性生殖道的正常菌群，既往認(rèn)為腸球菌對(duì)人類無致病作用，但近年研究已證實(shí)了腸球菌是需氧和兼性厭氧球菌中僅次于葡萄球菌的重要醫(yī)院內(nèi)感染致病菌，多見于尿路感染、腹腔感染和菌血癥 一、生物學(xué)特性 1.形態(tài)與染色 G+球菌，呈單、成雙或短鏈狀排列。無芽胞，無莢膜，無鞭毛 2.培養(yǎng)特性 營(yíng)養(yǎng)要求高，某些菌株在選擇性培養(yǎng)基如麥康凱平板上可生長(zhǎng)。在高鹽（6.5%NaCl）、堿性（pH9.6）、高膽汁（40%）培養(yǎng)基上能生長(zhǎng)。在10和45均能生長(zhǎng)腸球菌血平板24小時(shí)培養(yǎng)物鏡下染色 第三節(jié) 腸球菌屬 一、生物學(xué)特性 在血瓊脂平板上經(jīng)35培養(yǎng)1824h

22、后，可形成灰白色、直徑0.51.0mm大小的圓形、不透明、表面光滑的菌落，不溶血或-溶血，少數(shù)出現(xiàn)-溶血 不同菌株的腸球菌在血平板上生長(zhǎng)現(xiàn)象不溶血-溶血 第三節(jié) 腸球菌屬 3.生化反應(yīng) 觸酶-、多種糖+ ，膽汁七葉苷試驗(yàn)+、PYR試驗(yàn)+ 4.抵抗力 弱，是天然耐藥菌株，對(duì)氨基糖苷類、萬古霉素、替考拉寧耐藥呈獲得性耐藥 5.分類 腸球菌屬歸類鏈球菌科，在Lancefield血清分類上屬于D群。臨床標(biāo)本分離的多屬于腸球菌屬群，分離率最高的是糞腸球菌，其次是屎腸球菌膽汁七葉苷試驗(yàn)?zāi)c球菌陽性，陰性對(duì)照 第三節(jié) 腸球菌屬 二、臨床意義。 第三節(jié) 腸球菌屬微生物檢驗(yàn)程序標(biāo)本血液、尿液、創(chuàng)傷標(biāo)本、膿性分泌物

23、等 直接涂片鏡檢分離培養(yǎng)鑒定生長(zhǎng)現(xiàn)象溶血類型、溫度生長(zhǎng)試驗(yàn)生化反應(yīng)：觸酶、PYR、膽汁七葉苷、6.5%NaCl形態(tài)染色：革蘭陽性球菌，短鏈狀排列藥敏試驗(yàn)報(bào)告Lancefield分群 第三節(jié) 腸球菌屬 1. 標(biāo)本采集：根據(jù)臨床癥狀及體征采集標(biāo)本，標(biāo)本類型有血液、尿液、創(chuàng)傷標(biāo)本、膿性分泌物等 三、微生物學(xué)檢驗(yàn) 2.直接涂片：形態(tài)與染色 膿性標(biāo)本、創(chuàng)傷標(biāo)本或增菌液直接涂片，革蘭染色鏡檢見革蘭陽性呈單、成雙或短鏈狀排列球菌，做出“查見革蘭陽性球菌”的初步報(bào)告 第三節(jié) 腸球菌屬三、微生物學(xué)檢驗(yàn) 3.增菌培養(yǎng)：24h培養(yǎng)后，每日觀察增菌液變化。如無變化，培養(yǎng)至7d。如發(fā)生混濁生長(zhǎng)現(xiàn)象可進(jìn)一步轉(zhuǎn)種，進(jìn)行分離

24、培養(yǎng) 4.分離培養(yǎng) （1）血平板：3518-24h （2）選擇性培養(yǎng)基 疊氮鈉膽汁七葉苷平板 麥康凱（MAC）平板腸球菌在MAC上生長(zhǎng)現(xiàn)象 第三節(jié) 腸球菌屬 6. 血清學(xué)試驗(yàn) Lancefield分群屬D群觸酶PYR膽汁七葉苷6.5%NaCl10生長(zhǎng)45生長(zhǎng)+5.生化反應(yīng) 7.藥敏試驗(yàn) 根據(jù)CLSI選擇抗菌藥物專家提示 頭孢菌素類、氨基糖苷類（除高水平篩選耐藥外），克林霉素、甲氧芐啶/磺胺甲噁唑（TMP/SMZ）在體外顯示活性，但臨床上無效，注意報(bào)告！返回章內(nèi)容 第三節(jié) 腸球菌屬 奈瑟菌屬是一群專性需氧革蘭陰性球菌，奈瑟菌屬中對(duì)人致病的只有腦膜炎奈瑟菌和淋病奈瑟菌，引起流行性腦脊髓膜炎和性病淋

25、病。 第四節(jié) 奈瑟菌屬奈瑟菌電鏡下形態(tài) 一、生物學(xué)特性腦膜炎奈瑟菌淋病奈瑟菌1. 形態(tài)與染色G雙球菌G雙球菌革蘭染色美蘭染色 第四節(jié) 奈瑟菌屬腦膜炎奈瑟菌淋病奈瑟菌2. 培養(yǎng)特性營(yíng)養(yǎng)要求高營(yíng)養(yǎng)要求高，初次培養(yǎng)需供給510%CO2及濕潤(rùn)的環(huán)境才能生長(zhǎng)。最適生長(zhǎng)溫度35 37， 40均不能生長(zhǎng)培養(yǎng)時(shí)間過長(zhǎng)，本菌可產(chǎn)生自溶酶 最適生長(zhǎng)溫度3537。37均不能生長(zhǎng) 巧克力平板血平板卵黃雙抗平板（EPV）血清肉湯 MNYC平板T-M平板（國(guó)外常用）巧克力平板血平板卵黃雙抗平板（EPV）血清肉湯 第四節(jié) 奈瑟菌屬巧克力平板上的腦膜炎奈瑟菌MNYC上的淋病奈瑟菌 2.培養(yǎng)特性 奈瑟菌菌落 第四節(jié) 奈瑟菌屬腦

26、膜炎奈瑟菌淋病奈瑟菌3. 生化反應(yīng)（1）氧化酶和觸酶試驗(yàn) + + 氧化酶試驗(yàn)（平板法）觸酶試驗(yàn)（試管法） 第四節(jié) 奈瑟菌屬 腦膜炎奈瑟菌 淋病奈瑟菌 3. 生化反應(yīng) （2）糖分解試驗(yàn)葡萄糖 麥芽糖 乳糖 蔗糖 指示劑：酚紅 腦膜炎奈瑟菌淋病奈瑟菌葡萄糖+、麥芽糖+、蔗糖-、乳糖-，其他糖-，蛋白質(zhì)-。葡萄糖+、麥芽糖-、蔗糖-、乳糖-，其他糖-。 第四節(jié) 奈瑟菌屬腦膜炎奈瑟菌淋病奈瑟菌4. 抗原結(jié)構(gòu)與分類根據(jù)莢膜多糖抗原分為13個(gè)血清群。較重要的是A、B、C、W-135和Y群。我國(guó)流行的菌株以A群為主?？乖壕?、外膜蛋白、LPS、H8蛋白分解酶、主要鐵調(diào)節(jié)蛋白等。分型：表型分類法、A/S分類

27、法（自學(xué)為主）弱。對(duì)溫度極為敏感，對(duì)青霉素敏感。5. 抵抗力弱。對(duì)溫度極為敏感，對(duì)各種消毒劑敏感。 第四節(jié) 奈瑟菌屬 二、臨床意義 1.致病性腦膜炎奈瑟菌 淋病奈瑟菌致病物質(zhì)內(nèi)毒素、莢膜、菌毛菌毛、外膜蛋白、內(nèi)毒素、IgA1蛋白酶 傳染源攜帶者、病人攜帶者、病人傳播途徑呼吸道傳播性接觸傳播、產(chǎn)道流行季節(jié)冬春季節(jié)無明顯季節(jié)性2.所致疾病流行性腦脊髓膜炎（流腦）淋病新生兒急性眼結(jié)膜炎 第四節(jié) 奈瑟菌屬 單純淋?。校?單純淋?。ㄅ?2.所致疾病新生兒淋球菌性結(jié)膜炎淋球菌性眼結(jié)膜炎（膿漏眼） 第四節(jié) 奈瑟菌屬 三、微生物學(xué)檢驗(yàn) 第四節(jié) 奈瑟菌屬 （1）標(biāo)本采集 根據(jù)臨床癥狀和體征不同采集不同標(biāo)本，

28、如血液、瘀斑滲出液、腦脊液、鼻咽分泌物。 1. 腦膜炎奈瑟菌微生物學(xué)檢驗(yàn)用藥前采集無菌生理鹽水沖洗采菌部位，禁用消毒藥采集分泌物時(shí)應(yīng)避免碰到粘膜，以免正常菌群污染床邊接種，立即培養(yǎng)，培養(yǎng)基應(yīng)預(yù)溫，送檢時(shí)注意保溫注意事項(xiàng) 第四節(jié) 奈瑟菌屬 （2）直接涂片，染色鏡檢：腦脊液離心沉淀涂片，或刺破瘀斑血或組織液印片，革蘭染色鏡檢，發(fā)現(xiàn)中性粒細(xì)胞內(nèi)、外革蘭陰性雙球菌，呈腎形成雙排列，可做出“查見革蘭陰性球菌”的初步報(bào)告 （3）增菌培養(yǎng)：血液或腦脊液先在葡萄肉湯增菌，24h培養(yǎng)后每日觀察增菌液變化。如無變化，培養(yǎng)至第7d。如發(fā)生混濁生長(zhǎng)現(xiàn)象可轉(zhuǎn)種巧克力平板進(jìn)行分離培養(yǎng) 第四節(jié) 奈瑟菌屬 （4）分離培養(yǎng)：其

29、他標(biāo)本直接分離于血瓊脂平板、巧克力平板或EPV平板，置5%10% CO2環(huán)境中，經(jīng)3537培養(yǎng)18h24h后觀察菌落特征（5）鑒定： 推測(cè)性鑒定：主要根據(jù)選擇性和非選擇性培養(yǎng)基上菌落特征、結(jié)合涂片中的菌體形態(tài)，氧化酶+、觸酶+ 第四節(jié) 奈瑟菌屬腦膜炎奈瑟菌A群?jiǎn)蝺r(jià)血清凝集試驗(yàn)左側(cè)為陽性反應(yīng)，右側(cè)生理鹽水對(duì)照 確定性鑒定：通過糖發(fā)酵試驗(yàn)和菌群凝集試驗(yàn)，再參考普通瓊脂上不生長(zhǎng)，血瓊脂平板放置22 不生長(zhǎng)等特點(diǎn)作出確定性鑒定。 第四節(jié) 奈瑟菌屬青霉素 S、利福平 S、磺胺 R青利磺（6）藥敏試驗(yàn) 結(jié)果報(bào)告 應(yīng)重視腦脊液和瘀點(diǎn)穿刺物的直接涂片染色鏡檢，這是最快速確證腦膜炎奈瑟菌感染的簡(jiǎn)便方法。 第四節(jié) 奈瑟菌屬 三、微生物學(xué)