阿霉素對人胃癌細(xì)胞GSTπ表達(dá)的影響

1、.DOC格式論文，方便您的復(fù)制修改刪減阿霉素對人胃癌細(xì)胞GST表達(dá)的影響（作者:_單位: _郵編: _）作者：蔣麗娜 張從勝 齊效勇 薄愛華 張曉麗【摘要】 目的：探討阿霉素對人胃癌細(xì)胞的殺傷作用及致GST表達(dá)的變化。方法：利用人胃癌BGC823細(xì)胞株，CO2培養(yǎng)箱進(jìn)行培養(yǎng)過程中，加入阿霉素注射液繼續(xù)培養(yǎng)5h或10h。然后用HE和免疫組化染色。光鏡下觀察并進(jìn)行圖象分析。結(jié)果：實驗組BGC823細(xì)胞變形，GST表達(dá)位置和灰度有明顯變化。結(jié)論：阿霉素作用5h可對胃癌細(xì)胞有殺傷作用，使胃癌細(xì)胞形態(tài)和GST基因表達(dá)有明顯變化。 【關(guān)鍵詞】 阿霉素;胃腫瘤/細(xì)胞;谷胱甘肽s轉(zhuǎn)移酶;免疫組織化學(xué)【ABST

2、RACT】 Objective:To study the killing function of Adriamycin to human gastric carcinoma cells and its influence to the expression of GST.Methods：While BGC823 gastric carcinoma cells were educated in CO2 training box，Adriamycin was injected in human gastric carcinomal cells to educate continuously for

3、 5h or 10h，then stained with HaematoxylinEosinc（HE）and dyed with immunohistochemical method.The result was observed and analyzed with optical microscope.Results：BGC823 cells was deformed in experimental group,and expressive location and ash degree of GST had obvious changes.Conclusion：Adriamycin has

4、 killing function on carcinoma cells and it can make Gastric carcinoma cells deformed and change the expression of GST.【KEY WORDS】 Adriamycin（ADM）;Stomach neoplasms/Cell;GST;Immunohistochemical阿霉素（Adria mycin，ADM或Doxovubicin ，DOX）又稱多柔比星，是一類在臨床上廣泛使用的具有光譜高效抗癌活性的薏環(huán)類抗生素1，在多種癌瘤的化療方案中可見到阿霉素，如治療白血病、乳腺癌、肺癌及

5、惡性淋巴瘤等的方案中。目前，人們對ADM的抗癌機制報道很多，但關(guān)于ADM對基因表達(dá)的影響很少報告。為探討ADM對谷胱甘肽s轉(zhuǎn)移酶（GST）表達(dá)的影響，我們利用細(xì)胞培養(yǎng)和SP免疫組化的技術(shù)，觀察了ADM對人胃癌BGC823細(xì)胞株GST表達(dá)的影響，為深入認(rèn)識ADM的作用途徑和癌細(xì)胞耐藥機制提供參考依據(jù)。1 材料與方法1.1 材料 AMD由深圳市萬樂藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，BGC823胃癌細(xì)胞株由北京腫瘤研究所提供。SP免疫組織化學(xué)試劑盒及鼠抗人單克隆抗體GST、DAB顯色劑由中杉金橋生物技術(shù)有限公司提供。1.2 方法 將5×104個cell/mL濃度的BCG823胃癌細(xì)胞，裝入無菌96孔板中，

6、置37 5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h，細(xì)胞貼壁爬片(蓋玻片)，對照組不加AMD培養(yǎng),實驗組加入ADM注射液15L(含AMD 0.0015mg)，然后繼續(xù)培養(yǎng)5h或10h,取出貼壁細(xì)胞,4%多聚甲醛固定30min,然后用PBS(pH7.2)清洗,其中一片滴抗,室溫過夜,常規(guī)SP法,抗、抗分別37孵育30min。陰性對照PBS代替I抗，陽性對照用已知胃癌陽性切片。1.3 統(tǒng)計學(xué)處理 利用彩色圖象分析系統(tǒng)，每組計數(shù)50個陽性細(xì)胞檢測其著色灰度，以灰度表示著色深淺（深者即含量高者灰度值低，淺者灰度值高說明含量越低）。通過SPSS軟件分析，計算方差值，再進(jìn)行獨立樣本t檢驗。2 結(jié)果2.1 HE染色后光鏡

7、下觀察，可見對照組BGC823細(xì)胞呈梭形、多邊形；胞核圓形呈紫蘭色，邊界清晰，核仁可見，胞質(zhì)均勻，多呈弱嗜酸性，實驗組5h組823癌細(xì)胞的胞質(zhì)突消失，菱形細(xì)胞減少，很多細(xì)胞周邊多呈毛刺狀，胞質(zhì)空泡增多；胞核多呈固縮狀態(tài)，著色較深，實驗10h組，大部分癌細(xì)胞胞質(zhì)消失，少部分癌細(xì)胞胞質(zhì)水腫，HE染色時胞核固縮。2.2 免疫組化結(jié)果表1 阿霉素對胃癌細(xì)胞GST表達(dá)的影響 （灰度值）注：*與對照組和10h組比較有顯著性差異（P0.01）3 討論阿霉素是一種廣譜、高效的抗腫瘤抗生素，在多種腫瘤的化學(xué)治療中占有重要的地位。關(guān)于阿霉素的藥理作用機制，目前主要有兩種觀點：一種觀點認(rèn)為ADM直接與DNA相互作用

8、（即經(jīng)典的嵌入結(jié)合）而導(dǎo)致對DNA復(fù)制及轉(zhuǎn)錄過程的抑制2；另一種觀點認(rèn)為ADM可誘導(dǎo)氧自由基的形成，從而導(dǎo)致對核酸的切割3。近有學(xué)者采用DNA修飾的金電極表面電化學(xué)方法對AMD與DNA相互作用進(jìn)行了研究4，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在酸性溶液中，AMD帶正電荷，dsDNA帶負(fù)電荷，兩者之間的相互作用主要是靜電結(jié)合，隨著pH值的增加，在中性溶液中，AMD與dsDNA的相互作用是嵌入結(jié)合。BGC823細(xì)胞突起消失，胞質(zhì)中空泡增多，可能與AMD與癌細(xì)胞中的DNA作用所致。GST是由一系列同工酶組成的一個家族,可分為5種基因家族，其中有4種在胞漿中,為、。另一種為結(jié)合在胞膜上的微粒體GST5。GST不僅能夠催化一系列

9、的疏水親電子化合物，如膽紅素、膽酸、類固醇激素、致癌物質(zhì)與谷胱甘肽（GSH）進(jìn)行結(jié)合，以促進(jìn)這些化合物的轉(zhuǎn)變、代謝、解毒和排泄，而且GST本身還可以與親脂性細(xì)胞毒藥物結(jié)合增加其水溶性，促進(jìn)其排泄，降低抗腫瘤化療藥物的細(xì)胞毒作用，保護(hù)免受細(xì)胞毒的損害6。GST與惡性腫瘤的關(guān)系最為密切，其減弱化療藥物對腫瘤細(xì)胞的殺傷作用，是在腫瘤組織中通過催化方式降解藥物，并且還可抑制烷化劑等化療藥物引起的癌細(xì)胞DNA交聯(lián)，從而造成癌細(xì)胞耐藥，其高表達(dá)對化療耐藥有重要影響7。在本實驗中，ADM作用5h或10h后胞質(zhì)GST灰度無明顯變化，其灰度與對照組相比雖然稍降低，但二者相比較無顯著性差異（P0.05）。ADM對

10、胞核中GST的影響明顯，作用5h胞核中GST含量增高甚至比對照組中胞核含量還要高，10h組含量明顯降低（P0.05）。實驗結(jié)果說明，ADM對蛋白質(zhì)代謝和基因功能有明顯影響并隨時間變化，胞核中GST含量變化較明顯，阿霉素抗腫瘤作用機理復(fù)雜，有待于進(jìn)一步研究。【參考文獻(xiàn)】1 馮碩，李正平，張淑紅,等.阿霉素與DNA相互作用的研究初探J.河北職工醫(yī)學(xué)院學(xué)報,2004，21（2）:4344 2 Frederick CA，William SLD，Vghettv G，et al.Strctural comparison of anticancer drugDNA complexes Adria mycin

11、 and dannomy cinJ.Biochemistry，1990，29（10）：25382549 3 Powis G.Free vadical formation by antitumor quinwonesJ.Free Rad Biol Med，1989，6（）：6365 4 Zhou XL，Zhang HM.DNA modified gold surface electronchemical method for determining the interaction of adriamycin with DNAJ.中國分子心臟學(xué)雜志，2004，4（4）:199203 5 Chipe

12、r DI，Wagen mans MJ，Peters WH,et al，Gluththione Stransferases in gastric epithelium；immunohistochemical and biochemical analysesJ.Anticancar Res，1996,16（16B）：37213724 6 董繼俊，耿振宏，李方廣,等.P糖蛋白，GST及TOPOII在胃癌組織中的表達(dá)及意義J.山東醫(yī)藥雜志，2003，43（15）：4445 7 劉麗梅，閆曉初，郭德玉,等.耐藥表型GST、Pgp及TopoII在大腸癌中的表達(dá)及其臨床意義J.消化外科雜志，2004，3（2

13、）:1181212.2 免疫組化結(jié)果表1 阿霉素對胃癌細(xì)胞GST表達(dá)的影響 （灰度值）注：*與對照組和10h組比較有顯著性差異（P0.01）3 討論阿霉素是一種廣譜、高效的抗腫瘤抗生素，在多種腫瘤的化學(xué)治療中占有重要的地位。關(guān)于阿霉素的藥理作用機制，目前主要有兩種觀點：一種觀點認(rèn)為ADM直接與DNA相互作用（即經(jīng)典的嵌入結(jié)合）而導(dǎo)致對DNA復(fù)制及轉(zhuǎn)錄過程的抑制2；另一種觀點認(rèn)為ADM可誘導(dǎo)氧自由基的形成，從而導(dǎo)致對核酸的切割3。近有學(xué)者采用DNA修飾的金電極表面電化學(xué)方法對AMD與DNA相互作用進(jìn)行了研究4，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在酸性溶液中，AMD帶正電荷，dsDNA帶負(fù)電荷，兩者之間的相互作用主要是靜

14、電結(jié)合，隨著pH值的增加，在中性溶液中，AMD與dsDNA的相互作用是嵌入結(jié)合。BGC823細(xì)胞突起消失，胞質(zhì)中空泡增多，可能與AMD與癌細(xì)胞中的DNA作用所致。GST是由一系列同工酶組成的一個家族,可分為5種基因家族，其中有4種在胞漿中,為、。另一種為結(jié)合在胞膜上的微粒體GST5。GST不僅能夠催化一系列的疏水親電子化合物，如膽紅素、膽酸、類固醇激素、致癌物質(zhì)與谷胱甘肽（GSH）進(jìn)行結(jié)合，以促進(jìn)這些化合物的轉(zhuǎn)變、代謝、解毒和排泄，而且GST本身還可以與親脂性細(xì)胞毒藥物結(jié)合增加其水溶性，促進(jìn)其排泄，降低抗腫瘤化療藥物的細(xì)胞毒作用，保護(hù)免受細(xì)胞毒的損害6。GST與惡性腫瘤的關(guān)系最為密切，其減弱化

15、療藥物對腫瘤細(xì)胞的殺傷作用，是在腫瘤組織中通過催化方式降解藥物，并且還可抑制烷化劑等化療藥物引起的癌細(xì)胞DNA交聯(lián)，從而造成癌細(xì)胞耐藥，其高表達(dá)對化療耐藥有重要影響7。在本實驗中，ADM作用5h或10h后胞質(zhì)GST灰度無明顯變化，其灰度與對照組相比雖然稍降低，但二者相比較無顯著性差異（P0.05）。ADM對胞核中GST的影響明顯，作用5h胞核中GST含量增高甚至比對照組中胞核含量還要高，10h組含量明顯降低（P0.05）。實驗結(jié)果說明，ADM對蛋白質(zhì)代謝和基因功能有明顯影響并隨時間變化，胞核中GST含量變化較明顯，阿霉素抗腫瘤作用機理復(fù)雜，有待于進(jìn)一步研究。【參考文獻(xiàn)】1 馮碩，李正平，張淑紅

16、,等.阿霉素與DNA相互作用的研究初探J.河北職工醫(yī)學(xué)院學(xué)報,2004，21（2）:4344 2 Frederick CA，William SLD，Vghettv G，et al.Strctural comparison of anticancer drugDNA complexes Adria mycin and dannomy cinJ.Biochemistry，1990，29（10）：25382549 3 Powis G.Free vadical formation by antitumor quinwonesJ.Free Rad Biol Med，1989，6（）：6365 4 Zhou XL，Zhang HM.DNA modified gold surface electronchemical method for determining the interaction of adriamycin with DNAJ.中國分子心臟學(xué)雜志，2004，4（4）:199203 5 Chiper DI，Wagen mans MJ，Peters WH,et al，Gluththione