鹽酸氟西汀驗證實例

1、徐禾豐分析方法驗證鹽酸氟西汀驗證實例現(xiàn)代驗證系列簡介 美國某公司生產(chǎn)10mg和20mg鹽酸氟西汀兩種相膠囊 其重量與配方相同,僅鹽酸氟西汀與輔料比例不同 所驗證方法是公司內(nèi)部對美國和歐盟市場產(chǎn)品產(chǎn)品放行和穩(wěn)定性研究中使用的含量和雜質(zhì)分析的方法 該分析方法已經(jīng)建立2含量與雜質(zhì)的分析方法基本一致驗證項目清單1. 精密度2. 線性3. 范圍4. 準確性5. 低濃度鹽酸氟西汀驗證6. m-鹽酸氟西汀驗證7. 選擇性8. 耐用性3精密度項目:1.系統(tǒng)重復性2.方法重復性3.中間精密度4系統(tǒng)重復性方法 按照分析方法要求,配制鹽酸氟西汀標準溶液 重復進樣5次計算 峰面積平均值 相對標準偏差5目的是檢查系統(tǒng)是

2、否可靠方法重復性方法 按照分析方法要求,分別配制20mg鹽酸氟西汀樣品溶液6個 分別進樣計算 含量相對標準偏差6目的是檢查分析方法本身是否可靠中間精密度方法 由另外一個分析員 在不同日期 另外的儀器上 按照分析方法要求 分別配制20mg鹽酸氟西汀樣品溶液6個計算 含量及相對標準偏差7目的是檢查分析方法對不同人,日期,儀器是否可靠線性方法 正常含量分析用標準溶液濃度的50%到200%范圍內(nèi) 均勻選擇5個點 配制相應濃度的鹽酸氟西汀含量標準溶液 分別進樣計算 線性回歸分析 相關系數(shù) 斜率 Y軸截距8范圍方法 正常20mg樣品含量分析濃度50%到200%范圍內(nèi) 均勻選5個點 并配制鹽酸氟西汀樣品溶液

3、 分別進樣計算 線性回歸分析 相關系數(shù) 斜率 Y軸截距9準確性項目:1. 標準品準確性2. 樣品準確性10標準品準確性方法 按照分析方法要求 配制鹽酸氟西汀標準溶液 重復進樣5次計算 準確性 測定濃度值用峰面積按照回歸方程進行計算11樣品準確性方法 按照產(chǎn)品的標示量 在70%到180%正常標示量選均勻選擇4個點 混合輔料與及鹽酸氟西汀 每點3個樣品 分別進樣計算 回收率 測定濃度值用峰面積按照回歸方程進行計算12低濃度鹽酸氟西汀驗證項目:1. 線性2. 準確性3. 系統(tǒng)重復性4. 定量限度5. 檢測限度13線性方法 按照分析方法要求 均勻選擇6個點 配制標示量的0.02%到1.0%含量標準溶液

4、 分別進樣計算 線性回歸分析 相關系數(shù) 斜率 Y軸截距14準確性方法 配制雜質(zhì)濃度的標準溶液 進樣6次計算 按峰面積用回歸線性方程來計算測量濃度 平均值 相對標準偏差15系統(tǒng)重復性方法 配制工作濃度的0.02%和0.05%標準溶液 分別進樣6次計算 峰面積的平均值 相對標準偏差16定量限度用系統(tǒng)重復性實驗中的標準偏和線性回歸方程中的斜率差計算17檢測限度用系統(tǒng)重復性實驗中的標準偏和線性回歸方程中的斜率差計算18m-鹽酸氟西汀驗證項目:1. 線性2. 檢測限度3. 定量限度4. 準確性5. 精密度 方法重復性 中間精密度19m-鹽酸氟西汀簡介m-鹽酸氟西汀是產(chǎn)品中的一個雜質(zhì)m-鹽酸氟西汀在0.0

5、5%1.0%區(qū)間呈線性相對響應因子(對鹽酸氟西汀):F=132.73952/74859534=1.820定量限度根據(jù)鹽酸氟西汀定量限度相對響應值計算鹽酸m-氟西汀定量限度21檢測限度根據(jù)鹽酸氟西汀檢測限度相對響應值計算鹽酸m-氟西汀檢測限度22回收方法: 分別6個標空白中加0.05%的m-鹽酸氟西汀進樣計算: 回收率 實際檢測值用峰面積按照回歸線性方程計算23準確性方法: 在已知m-鹽酸氟西汀含量的樣品中分別在0.4%,0.5%和0.6%3個水平加入m-鹽酸氟西汀標準品 每組3個樣品中計算: 回收率 實際檢測值用峰面積按照回歸線性方程計算24重復性項目:1. 方法重復性2. 中間精密度25方法

6、重復性方法: 按照要求配制溶液 反復進樣6次計算: 平均值 標準偏差 相對標準偏差26中間精密度方法: 另外一個分析員 在不同日期 另外的儀器上按照方法重復性方法 配制溶液6次 并分別進樣計算: 含量 相對標準偏差27選擇性降解原樣酸降解堿降解氧化降解日光降解溶液加熱降解粉末加熱降解系統(tǒng)適應性空白28簡介 降解產(chǎn)物的選擇性試驗是分析方法穩(wěn)定性指示性驗證的一個重要部分 主要目的是通過試驗證明各種降解的產(chǎn)物與所要分析的物質(zhì)可以完全分開 本試驗中的主要設備是二極管矩陣檢測器 并通過計算純度角,匹配角,純度閾值,匹配閾值,含量來證明峰的純度29原樣品方法 20mg膠囊按照規(guī)定的方法進樣分析 標準品按照

7、規(guī)定的方法進樣分析30酸降解樣品 稱量大約等量20mg的樣品 轉(zhuǎn)移到50ml容量瓶中 加入20ml稀釋劑 并超聲處理10分鐘 加1ml的濃鹽酸 放置18小時 用10N氫氧化鈉中和到pH5.5 稀釋到刻度 過濾31酸降解標準品 稱量大約22mg的標準品 轉(zhuǎn)移到50ml容量瓶中 加入20ml稀釋劑,加2ml的鹽酸 放置18小時 用10N氫氧化鈉中和到pH5.5 稀釋到刻度32堿降解樣品 稱量大約等量20mg的樣品 轉(zhuǎn)移到50ml容量瓶中 加入20ml稀釋劑,并超聲處理10分鐘 加1ml的5N氫氧化鈉 放置18小時 用5N鹽酸中和到pH5.5 稀釋到刻度 過濾33堿降解標準品 稱量大約22mg的標準

8、品 轉(zhuǎn)移到50ml容量瓶中 加入20ml稀釋劑 加2ml的5N氫氧化鈉 放置18小時 用5N鹽酸中和到pH5.5 稀釋到刻度34氧化降解樣品 稱量大約等量20mg的樣品 轉(zhuǎn)移到50ml容量瓶中 加入20ml稀釋劑 并超聲處理10分鐘 加1ml的30%過氧化氫 放置5小時 稀釋到刻度 過濾35氧化降解標準品 稱量大約22mg的標準品 轉(zhuǎn)移到50ml容量瓶中 加入20ml稀釋劑 2ml的30%過氧化氫 放置5小時 稀釋到刻度36陽光降解樣品 稱量大約等量20mg的樣品 在500w/hr.cell下曝光1小時 設定BST35C,ACT45C37陽光降解標準品 稱量大約等量20mg的樣品 在500w/

9、hr.cell下曝光1.5小時 設定BST35C,ACT42C38溶液加熱降解樣品 稱量大約等量20mg的樣品 轉(zhuǎn)移到50ml容量瓶中 加入20ml稀釋劑 并超聲處理10分鐘 稀釋到刻度 取4ml溶液并轉(zhuǎn)移到坩堝內(nèi) 與105C加熱2小時 冷卻到室溫 過濾39溶液加熱降解標準品 4ml的工作標準液轉(zhuǎn)移到坩堝內(nèi) 與105C加熱2小時 冷卻到室溫 過濾40粉末加熱降解樣品 稱量大約等量20mg的樣品 轉(zhuǎn)移到合適的試管中 于100C加熱4小時 冷卻到室溫 轉(zhuǎn)移到50ml容量瓶 加入20ml稀釋劑 并超聲處理10分鐘 稀釋到刻度 過濾41粉末加熱降解標準品 稱量大約等量45mg的標準品 轉(zhuǎn)移到合適的試管

10、中 于100C加熱4小時 冷卻到室溫 轉(zhuǎn)移到100ml容量瓶 稀釋到刻度 過濾系統(tǒng)適應性 系統(tǒng)適應性按照規(guī)定方法進行 氟西汀與m-氟西汀間分離度應不小于2.0 氟西汀峰拖尾因子應不大于2.0 氟西汀的典型保留時間大約在9.5到10.0分之間43空白 分析兩個批號的空白與氟西汀,并分析混合樣品 沒發(fā)現(xiàn)干擾峰44標準與樣品溶液的穩(wěn)定性項目:1. 標準溶液2. 樣品溶液45標準溶液穩(wěn)定性方法 配制標準溶液 冷藏于4C8C放置30天以上 與兩個新配制的標準溶液一道測試46樣品溶液穩(wěn)定性方法 配制樣品溶液 冷藏放置48小時 重新分析47耐用性項目:1. 提取效率2. 析因設計48提取效率方法 取三個樣品

11、 按照要求配置溶液 但超聲分為5,10和15分鐘 每個樣品測定3次49析因設計因素項目規(guī)格柱Shandon, Hypersil BDS C-8, 5m, 1504.6mm流動相溶液A:溶液B(55:45)溶液A三乙胺緩沖液:乙腈:四氫呋喃(75:15:10)溶液B三乙胺緩沖液:乙腈:四氫呋喃(65:20:15)流量1.41.6mL/min溫度30C(2C)進樣量10mL檢測器UV detector l = 227nm, Flow Cell = 10mm.稀釋劑溶液B50析因設計參數(shù)1. 流動相構(gòu)成2. 流量參數(shù)3. 柱溫4. 柱生產(chǎn)商51柱生產(chǎn)商事件柱溫(C)流量(mL/min)溶液A(%)柱型號1301.555Shandon, Hypersil, BDS C-8, 5m, 150 x 4.6mm -1271.060Hypersil, BDS C-8, 5m, 150 x 4.6mm52析因設計序號溶液A(%)柱流量(ml/min