泡桐叢枝病植原體保存體系建立技術(shù)規(guī)程

1、泡桐叢枝病植原體保存體系建立技術(shù)規(guī) 程 編制說明1、任務(wù)來源泡桐叢枝病植原體保存體系建立技術(shù)規(guī)程 ，由河南省 質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局 下達(dá) 2016 年第二批河南省地方標(biāo)準(zhǔn)制修訂 計(jì)劃的通知（豫質(zhì)監(jiān)標(biāo)發(fā) 2016 122 號文），列入 2016 年 第二批河南省地方標(biāo)準(zhǔn)制修訂計(jì)劃，計(jì)劃項(xiàng)目序號是110 。2、工作簡況泡桐叢枝病植原體保存體系建立技術(shù)規(guī)程 ，委托單位： 河南省林業(yè)廳科技處， 承擔(dān)單位： 河南農(nóng)業(yè)大學(xué)， 河南省林業(yè) 科學(xué)研究院。 主要起草人： 范國強(qiáng)、 翟曉巧、 趙振利、 鄧敏捷、 董焱鵬、曹喜兵、李永生；參加起草人：馬向陽、張變莉、馬 永亮、趙利新、牛蘇燕、劉玟杉。范國強(qiáng)全面負(fù)責(zé)技術(shù)規(guī)程

2、任 務(wù)的落實(shí)及關(guān)鍵技術(shù)問題的解決， 翟曉巧和趙振利負(fù)責(zé)技術(shù)規(guī) 程的泡桐叢枝病植原體的培養(yǎng)和規(guī)程的撰寫。 鄧敏捷、董焱鵬、 曹喜兵、 李永生負(fù)責(zé)泡桐叢枝病植原體的鑒定。 馬向陽、 張變 莉、馬永亮、 趙利新主要參與泡桐叢枝病植原體的培養(yǎng)。 牛蘇 燕、劉玟杉主要參與泡桐叢枝病植原體的保存工作。 主要實(shí)施 地點(diǎn)：河南農(nóng)業(yè)大學(xué)泡桐研究所。泡桐是我國重要的速生用材樹種之一， 在改善我國生態(tài)環(huán) 境和提高人民生活水平等方面具有重要的作用。 然而， 由植原 體感染引起的泡桐叢枝病 ,能導(dǎo)致泡桐幼樹過早死亡，大樹生 長緩慢、 蓄積量降低。 目前該病幾乎發(fā)生在我國所有的泡桐栽 培區(qū)。據(jù)報(bào)道， 由于泡桐叢枝病的危害

3、， 每年造成的直接經(jīng)濟(jì) 損失超過億元。 該病害不僅造成了巨大經(jīng)濟(jì)損失， 而且也嚴(yán)重 影響人們種植泡桐的積極性。自土居養(yǎng)二（ 1967 ）發(fā)現(xiàn)泡桐叢枝病的病原菌 植原體 以來，國內(nèi)外科技工作者雖然對泡桐叢枝病發(fā)病的機(jī)制及防治 方法進(jìn)行了大量的研究工作， 并初步明確了引起該病病原菌的 傳播方式、發(fā)生途徑和發(fā)病過程中的生理生化變化及防治方 法，但由于泡桐植原體無法體外培養(yǎng)， 嚴(yán)重制約了泡桐叢枝病 的研究。 克服植原體不能體外培養(yǎng)的研究瓶頸， 打破常規(guī)， 創(chuàng) 新思路， 另辟蹊徑才有可能有實(shí)效的推動泡桐叢枝病研究。河南農(nóng)業(yè)大學(xué)泡桐研究團(tuán)隊(duì)自 1994 年以來一直致力于泡桐叢枝 病的研究。在研究中發(fā)現(xiàn)由于

4、大田里患叢枝病泡桐樹體高大且 生長狀態(tài)一致性差， 在患病機(jī)制和藥物防治研究中帶來很多不 變，影響實(shí)驗(yàn)的開展。 在探索研究中發(fā)現(xiàn)建立泡桐叢枝病植株 的無菌快速培養(yǎng)體系， 通過植原體檢測， 確保培養(yǎng)的是含有泡 桐叢枝病植原體的組織培養(yǎng)苗。 利用培養(yǎng)生長狀態(tài)一致的泡桐 叢枝病組織培養(yǎng)苗開展各種研究， 取得的成效顯著， 研究成果 曾獲得 2010 年國家科技進(jìn)步二等獎。 隨著現(xiàn)代分子技術(shù)的進(jìn) 一步發(fā)展，在泡桐 miRNA 、LncRNA 、CircRNA 、蛋白質(zhì)和次 生代謝物，并對相關(guān)基因進(jìn)行了克隆及功能驗(yàn)證中也正在發(fā)揮 重要的作用。植原體病害已經(jīng)在 1000 多種植物上被發(fā)現(xiàn)，將 泡桐叢枝病植原體

5、保存技術(shù)進(jìn)行規(guī)范話總結(jié)， 為泡桐叢枝病研 究和其他植原體病害研究都具有指導(dǎo)意義。3、編制原則本標(biāo)準(zhǔn)是根據(jù)我省泡桐叢枝病生產(chǎn)上發(fā)生嚴(yán)重和開展泡桐 叢枝病研究的實(shí)際需要制定的。 其規(guī)范了泡桐叢枝病保存過程 中的技術(shù)操作， 在叢枝病植原體研究中具有很強(qiáng)的規(guī)范指導(dǎo)和 借鑒意義，有利于推動危害我省的植原體病害在抗病機(jī)理和防 治藥物方面的進(jìn)一步深入研究。 本標(biāo)準(zhǔn)僅就泡桐植原體保存過 程中培養(yǎng)技術(shù)和鑒定技術(shù)提出了規(guī)定。 標(biāo)準(zhǔn)適用于河南省泡桐 叢枝病植原體的保存和研究。4、標(biāo)準(zhǔn)的主要內(nèi)容本標(biāo)準(zhǔn)制定了泡桐叢枝病植原體苗組培快繁技術(shù)的術(shù)語和 定義、 泡桐叢枝病植原體的培養(yǎng)、 鑒定、 保存和檔案管理等內(nèi) 容。包括泡

6、桐叢枝病苗芽的誘導(dǎo)、根的誘導(dǎo)，繼代培養(yǎng)，植原 體的鑒定和檔案管理。泡桐叢枝病植原體的培養(yǎng)中芽的誘導(dǎo)與根的誘導(dǎo)程序是泡 桐研究團(tuán)隊(duì)經(jīng)過反復(fù)篩選和驗(yàn)證建立的高效組織培養(yǎng)繁殖體 系，經(jīng)過近十年的應(yīng)用， 該方法在泡桐叢枝病研究中發(fā)揮了重 要的作用。研究成果發(fā)表在多家國內(nèi)外研究期刊上。泡桐叢枝病苗植原體的鑒定采用的 16S rRNA 巢式 PCR 檢測檢測，該方法是當(dāng)前泡桐叢枝病植原體檢測最常用的方法，運(yùn)用該方法開展的研究成果，得到國內(nèi)外同行的認(rèn)可。 泡桐叢枝病植原體的保存中泡桐叢枝病植原體苗的繼代培養(yǎng) 和鑒定方法也是經(jīng)過多年反復(fù)驗(yàn)證的，結(jié)果穩(wěn)定。5、采用國內(nèi)、國際標(biāo)準(zhǔn)情況目前泡桐叢枝病植原體保存還沒有明確的國際和國內(nèi)標(biāo) 準(zhǔn)。在泡桐植原體鑒定中采用了國內(nèi)外植原體研究中鑒定方 法。6、與有關(guān)現(xiàn)行法律、法規(guī)和強(qiáng)制性國家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)的關(guān) 系本標(biāo)準(zhǔn)符合現(xiàn)行國家法律、法規(guī)之規(guī)定。目前還沒有強(qiáng)制 性國家標(biāo)準(zhǔn)和行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)。7、重大分歧意