大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練計劃項目結(jié)題報告書(模板)

1、附表四：大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練計劃項目結(jié)題報告書 項目名稱： 黔北麻羊GHSR基因外顯子2多態(tài)性及其與體重體尺的關(guān)聯(lián) 項目負責人： 李 達 項目主持單位： 貴州大學(xué)動物科學(xué)學(xué)院 指導(dǎo)教師： 羅衛(wèi)星 簽訂時間： 2012年9月6日 貴州大學(xué)教務(wù)處制項目名稱黔北麻羊GHSR基因外顯子2多態(tài)性及其與體重體尺的關(guān)聯(lián)分析項目等級國家級 省級級 校級 項目編號項目類別創(chuàng)新訓(xùn)練項目 創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練項目 創(chuàng)業(yè)實踐項目負責人姓名李達班級09動科a班聯(lián)系方式項目組其他成員序號姓名班級項目分工2韋國渠09動科a班資料收集3趙英09動科a班樣品采集整理4宋桃偉研二指導(dǎo)實驗校內(nèi)導(dǎo)師羅衛(wèi)星職稱（職務(wù)）教師研究方向遺傳育種企業(yè)導(dǎo)師職

2、稱（職務(wù)）所屬單位資助經(jīng)費1500元支出經(jīng)費3000元立項時間2012年9月6日完成時間2013年4月28日項目實施情況（1500字以內(nèi)）：概要：本研究以黔北麻羊為試驗對象，采用DNA池結(jié)合PCR產(chǎn)物直接測序及PCR-SSCP技術(shù)對GHSR基因進行單核苷酸多態(tài)性檢測。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在黔北麻羊GHSR基因外顯子2處檢測到1個錯義突變位點G200A，氨基酸由甘氨酸變?yōu)榻z基酸，表現(xiàn)為3種基因型，分別命名為GG、GA和AA，其頻率分別為：、和，等位基因G、A頻率分別為和。2檢驗表明，黔北麻羊GHSR基因G200A位點分布符合Hardy-Weinberg平衡（）?；蛐团c體重體尺的關(guān)聯(lián)分析顯示，GG和GA基

3、因型個體的體重極顯著高于AA基因型個體（），而其余6個指標差異不顯著（）。用軟件自行設(shè)計2對引物，擴增山羊GHSR基因目的序列，引物送上海生工生物工程合成。1.4 PCR反應(yīng)體系及條件 DNA池PCR PCR反應(yīng)體系為DNA模板4 mL，上下游引物(10 pmol/mL)各3 mL，2Taq PCR MasterMix 25 mL，加雙蒸水至50 mL。PCR反應(yīng)條件：94 預(yù)變性4 min，94 變性40 s， 退火45 s，72 延伸45 s，35個循環(huán)，72 再延伸10 min，最后4 保存。 1.4.2 PCR-SSCP PCR反應(yīng)體系為15 mL，包括DNA模板2 mL，上下游引物(

4、10 pmol/mL)各1 mL，2Taq PCR MasterMix 7.5 mL，雙蒸水3.5 mL。PCR反應(yīng)條件：94 預(yù)變性4 min，94 變性30 s，61.7 退火35 s，72 延伸35 s，30個循環(huán)，72 再延伸10 min，最后4 保存。單鏈構(gòu)象多態(tài)性PCR產(chǎn)物用10%的聚丙烯酰胺凝膠（PAGE膠）電泳檢測。5 mL PCR產(chǎn)物中加入8 mL變性劑（95%去離子甲酰胺，25 mmol/L EDTA，0.025%二甲苯青，0.025%溴酚藍），于100 沸水浴中變性15 min，置于20 冰箱中保存15 min，同時將10%的PAGE膠進行250 V電壓預(yù)電泳30 min

5、，待點樣完成先進行250 V電壓預(yù)電泳15 min，后改為120 V電壓電泳10-12 h，最后銀染并判型。1.5 PCR產(chǎn)物測序 利用1%的瓊脂糖凝膠電泳檢測PCR產(chǎn)物。選取特異性好、產(chǎn)量高的PCR產(chǎn)物送北京諾賽基因組研究中心（雙向）測序。1.6 統(tǒng)計分析 統(tǒng)計基因型頻率和等位基因頻率，并進行適合性卡方檢驗。構(gòu)建單因素最小二乘模型：Yijk=m+marker+eijk。其中，Yijk為性狀表型值，m為總體均數(shù)，marker為標記基因型效應(yīng)，eijk表示隨機殘差。采用統(tǒng)計軟件GLM模型對基因多態(tài)性與性狀間的相關(guān)性進行最小二乘分析，統(tǒng)計結(jié)果均以平均值標準差表示。項目創(chuàng)新點與特色（包括使用了什么樣

6、的創(chuàng)新方法、手段，項目的科學(xué)意義和應(yīng)用價值等，500字以內(nèi)）： 運用DNA池和測序技術(shù)篩查SNP具有方便快捷、切實有效等優(yōu)點。李穩(wěn)等9運用DNA池檢測到了豬Dppa5基因的多態(tài)位點并利用單鏈構(gòu)象多態(tài)性技術(shù)進行了驗證。淮永濤10先采用PCR-SSCP技術(shù)檢測了牛SIX3和SIX6基因在5個牛群體中的部分SNPs，后根據(jù)DNA池進行了對比，結(jié)果一致。而在李敬瑞的豬五個候選基因的遺傳變異研究碩士論文中，也可以看到該技術(shù)檢測SNP位點的準確性11。本試驗采用該方法首次在黔北麻羊GHSR基因外顯子2處檢測到1個SNP位點G200A，針對G200A位點，設(shè)計一對特異引物，采用SSCP技術(shù)對其進行檢測，結(jié)果

7、顯示該位點處確實存在突變位點G200A，這一結(jié)果驗證了運用DNA池技術(shù)篩查SNP位點的可靠性。DNA池作為一種快速篩查SNP位點的檢測方法，以其時間段和成本低等優(yōu)點必將在分子生物學(xué)領(lǐng)域受到更廣泛的運用項目詳細成果：包括發(fā)表論文（應(yīng)注明論文題目、發(fā)表刊物、發(fā)表時間、作者、是否被SCI、EI收錄等詳細信息）、專利（專利申請及獲批、專利名稱、專利號、申請人、獲得日期等信息）、實物、軟件、圖紙、獲獎證書等。項目申請書中的預(yù)期成果及成果提交方式：1. 對貴州山羊品種的指標進行測量，進行體測與體重的相關(guān)分析2 . 在核心期刊上發(fā)表論文12篇。項目結(jié)題時取得的成果：1. 本試驗采用運用DNA池和測序技術(shù)篩查

8、SNP方法首次在黔北麻羊GHSR基因外顯子2處檢測到1個SNP位點G200A，針對G200A位點，設(shè)計一對特異引物，采用SSCP技術(shù)對其進行檢測，結(jié)果顯示該位點處確實存在突變位點G200A，這一結(jié)果驗證了運用DNA池技術(shù)篩查SNP位點的可靠性。DNA池作為一種快速篩查SNP位點的檢測方法，以其時間段和成本低等優(yōu)點必將在分子生物學(xué)領(lǐng)域受到更廣泛的運用。2. 在貴州農(nóng)業(yè)科學(xué)2013年第十期發(fā)表核心期刊論文一篇。項目實施的收獲與體會（1000字以內(nèi)）： 已有研究表明，GHSR是調(diào)節(jié)機體體重和能量平衡的一個重要組成部分，GHSR與其前體GHRL的結(jié)合具有促進GH分泌的功能3。Lei M等12研究發(fā)現(xiàn)G

9、HSR基因外顯子1上的G18790036A位點變異與雞皮下脂肪帶寬度極顯著相關(guān)。Shuto Y等7發(fā)現(xiàn)GHSR功能缺失的轉(zhuǎn)基因大鼠與對照組相比體重降低、脂肪組織減少。Pantel等13研究了2個身高矮小家族GHSR基因多態(tài)性，發(fā)現(xiàn)選擇性損害GHSR活性導(dǎo)致了機體的生長障礙。目前，國內(nèi)外鮮見關(guān)于山羊GHSR基因的相關(guān)報道。本試驗采用PCR-SSCP技術(shù)檢測了黔北麻羊GHSR基因第2外顯子多態(tài)性，發(fā)現(xiàn)G200A位點存在2種等位基因G和A，等位基因頻率分別為和，3種基因型GG、GA和AA，其頻率分別為、和，G為優(yōu)勢等位基因，GG為優(yōu)勢等位基因型。群體遺傳結(jié)構(gòu)分析顯示，該位點多態(tài)信息含量表現(xiàn)為中度多態(tài)

10、且分布符合Hardy-Weinberg平衡，說明該位點能夠提供比較合理的遺傳信息。多態(tài)性與體重體尺性狀間的關(guān)聯(lián)分析表明，GG和GA基因型個體的體重極顯著優(yōu)于AA基因型個體（），而其他各性狀各基因型間差異未達到顯著性水平（），這提示了GHSR基因可能是影響黔北麻羊生長性狀的候選基因，但該位點能否作為黔北麻羊體重指標選擇的遺傳標記而用于指導(dǎo)地方山羊品種選育有待進一步研究。通過本實驗老師的認真指導(dǎo)與師兄的耐心引導(dǎo)，使我們一組的同學(xué)充分感受到了研究學(xué)術(shù)的氛圍，為我們今后從事各種工作追求真理與刻苦鉆研提供良好的經(jīng)驗，本次實驗對于我即將走進研究生更是意義重大，我將把它當做我研究生開始科研項目的第一步，總結(jié)

11、經(jīng)驗在今后的實驗中努力學(xué)習，不斷提高，使自己真正在學(xué)術(shù)方面有所成就。再次，非常感謝學(xué)校有這樣的創(chuàng)新型項目讓我們又自我提升的機會，同時再次感謝導(dǎo)師的指導(dǎo)。經(jīng)費使用情況序號經(jīng)費科目金額（元）1資料打印費1502樣品采集費40033、進行實驗階段 DNA提取用藥品材料，PCR化學(xué)試劑測序所需試劑，實驗試劑盒購買8004論文撰寫與發(fā)表版面費1650合計3000項目組承諾：我保證上述填報內(nèi)容的真實性，經(jīng)費使用規(guī)范合理，項目成果無弄虛作假情況。主持人簽名： 項目組其他成員簽名：日 期：指導(dǎo)教師意見（手寫）： 簽名： 年 月 日學(xué)院意見： 主管領(lǐng)導(dǎo)簽字（蓋章）： 年 月 日學(xué)校意見：綜合評價：（ ）優(yōu) （

12、）良 （ ）中 （ ）合格 （ ）不合格 簽字（蓋章） 年 月 日附錄一：項目總結(jié)報告項目名稱：黔北麻羊GHSR基因外顯子2多態(tài)性及其與體重體尺的關(guān)聯(lián)分析總結(jié)報告撰寫要求一、結(jié)構(gòu)總結(jié)報告一般分題目、參加人姓名、參加人所在學(xué)院、指導(dǎo)教師姓名及職稱、摘要、關(guān)鍵詞（以上均需中、英文）、正文、感悟與寄語、參考文獻等幾個部分。其中：正文：（1）理工農(nóng)類，應(yīng)由選題背景、方案論證、材料與方法、結(jié)果與分析、創(chuàng)新點、討論等部分組成；（2）經(jīng)管文法類，應(yīng)由選題背景、方案論證、研究方法、研究內(nèi)容、研究結(jié)果、討論等幾個部分組成；（3）藝術(shù)、體育及其它按照學(xué)科專業(yè)特點參照以上畢業(yè)設(shè)計、論文、創(chuàng)作闡釋等撰寫。參考文獻：總結(jié)報告中引用他人成果、結(jié)論、觀點的文字，文中需有參考文獻標識。參考文獻作者3人以上時，必須寫齊前3人姓名，超過3人時，其后加“，等”。二、格式具體格式參考貴州大學(xué)本科畢業(yè)論文（設(shè)計）指南撰寫規(guī)范。三、字數(shù)總結(jié)報告不少于3000字。附錄二：項目成果（具體成果材料附后）成果