(完整word版)WatersXevoTQS液相色譜質(zhì)譜操作

1、文件類型研究所作業(yè)指導(dǎo)書化學(xué)所文件編號 NIM-ZY-HX-0000-YJ-117 第1頁共6頁Waters Xevo TQ-S 液相色譜 /質(zhì)譜聯(lián)用儀(三重串連四級桿質(zhì)譜 )操作指南1. 適用范圍：本使用規(guī)范適用于有機室所備有的Waters Xevo TQ-S 液相色譜 /質(zhì)譜聯(lián)用儀 (三重串連四級桿質(zhì)譜 )。2. 儀器設(shè)備的主要技術(shù)指標(biāo)：1) 梯度性能： 保留時間標(biāo)準(zhǔn)偏差（ SD） 0.047min。2) ESI 正離子靈敏度和精密度：測試樣品：磺胺二甲基噠嗪(Sulfadimethoxine)，濃度： 0.1pg/ l指標(biāo)要求：平均信噪比（ S/N）3000:1；平均峰面積 60000；

2、峰面積相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（ %RSD）3.0%；保留時間標(biāo)準(zhǔn)偏差（ SD）0.047min測試結(jié)果：信噪比（ S/N）:4500psi；峰面積： 120000；峰面積相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（ %RSD）：2.5%；保留時間標(biāo)準(zhǔn)偏差（ SD）： 0.00min，均符合指標(biāo)要求。3) ESI 負(fù)離子靈敏度和精密度：測試樣品：氯霉素 (chloramphenicol)，濃度： 0.05pg/ l指標(biāo)要求：平均信噪比（ S/N）400:1；平均峰面積 1000；峰面積相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（ %RSD）3.0%；保留時間標(biāo)準(zhǔn)偏差（ SD） 0.047min測試結(jié)果：信噪比（S/N） :520psi；峰面積： 1500；峰面積相

3、對標(biāo)準(zhǔn)偏差（ %RSD）：2.8%；保留時間標(biāo)準(zhǔn)偏差（ SD）： 0.00min，均符合指標(biāo)要求。4) 系統(tǒng)精密度（ TUV/PDA ）：峰面積相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（ %RSD） 0.5%；峰高相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（ %RSD） 0.9%。5) NanoFlow 正離子靈敏度7指標(biāo)要求：峰強（ m/z =785.8） 1 10，測試樣品：Glu-Fibrinopeptide B ，濃度： 100fmol/ l測試結(jié)果：峰強度（ m/z =785.8）： 1.48 107；符合指標(biāo)要求。6) TRIZAIC 正離子模式 MS 說明：測試樣品： ADH T19, PHO T33, ENL T4, BSA T59,

4、 ENL T43, ADH T17, BSA編寫李秀琴審核人批準(zhǔn)人日期2009.1文件類型研究所作業(yè)指導(dǎo)書化學(xué)所文件編號 NIM-ZY-HX-0000-YJ-117 第2頁共6頁T10, PHO T88指標(biāo)要求：保留時間標(biāo)準(zhǔn)偏差：0.25%測試結(jié)果： ADH T19 ：標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.02% (23.77min)；PHO T33：標(biāo)準(zhǔn)偏差為 0.03% (25.12min)；ENL T4 ：標(biāo)準(zhǔn)偏差為 0.02% (21.83min)；BSA T59：標(biāo)準(zhǔn)偏差為 0.01% (21.58min)；ENL T43 ：標(biāo)準(zhǔn)偏差為 0.04% (22.33min)；ADH T17 ：標(biāo)準(zhǔn)偏差為 0.0

5、3% (23.31min)；BSA T10：標(biāo)準(zhǔn)偏差為 0.02% (24.41min)；PHO T88：標(biāo)準(zhǔn)偏差為 0.03% (24.81min)7) 系統(tǒng)性能測試一維系統(tǒng)精密度測試： 測試樣品 17-OHP。一維保留時間重復(fù)性 (PDA) 指標(biāo)：保留時間標(biāo)準(zhǔn)偏差 (SD): 1.0s；一維峰面積重復(fù)性 (PDA) 指標(biāo)：峰面積相對標(biāo)準(zhǔn)偏差 (%RSD): 0.5%；一維峰高重復(fù)性 (PDA) 指標(biāo)：峰高相對標(biāo)準(zhǔn)偏差 (%RSD): 0.9%；二維系統(tǒng)精密度測試： 測試樣品 17-OHP。二維保留時間重復(fù)性 (PDA) 指標(biāo)：保留時間標(biāo)準(zhǔn)偏差 (SD): 1.0s；二維峰面積重復(fù)性 (PD

6、A) 指標(biāo)：峰面積相對標(biāo)準(zhǔn)偏差 (%RSD): 0.5%；二維峰高重復(fù)性 (PDA) 指標(biāo)：峰高相對標(biāo)準(zhǔn)偏差 (%RSD): 0.9%；所有檢測方式的回收率指標(biāo)： 90.0%3. 儀器設(shè)備的使用環(huán)境要求：1) 電力要求：儀器室電源要求相對穩(wěn)定，電壓變化要小，最好配備不間斷穩(wěn)壓電源，防止意外停電。2) 工作溫度： 19-22 度，不要超過 25，保持恒溫。3) 相對濕度： 50%-70%4. 操作程序：4.1 開機打開電腦，首先打開自動進樣器電源，再逐一打開質(zhì)譜電源和電源，各部件通過自檢后，雙擊工作站圖標(biāo)進入Masslynx工作站。UPLC各選擇 Instrument MS Tune進入調(diào)諧界面

7、。從調(diào)諧界面選擇Vacuun編寫李秀琴審核人批準(zhǔn)人日期2009.1文件類型研究所作業(yè)指導(dǎo)書化學(xué)所文件編號 NIM-ZY-HX-0000-YJ-117 第3頁共6頁pump，打開真空泵，開始抽真空。機械泵和渦輪分子泵開始工作。質(zhì)譜上的真空燈開始閃爍， 當(dāng)系統(tǒng)達(dá)到真空狀態(tài)， 燈變?yōu)榫G色， 不再閃爍，同時觀察調(diào)諧界面 Diagnostics Turbo Speed泵轉(zhuǎn)速達(dá)到 100%即可，達(dá)到實驗狀態(tài)大約要抽真空 4小時（注意：真空規(guī)，測量工具，無異常狀況通常無需打開，尤其在剛開始抽真空時不要打開。）氣源壓力設(shè)置：氮氣： 90-100psi。氬氣： 0.05Mpa，不超過 0.1Mpa（實驗前確認(rèn)氬

8、氣瓶壓力，低于1Mpa時需更換氬氣。）4.2 準(zhǔn)備 UPLC 系統(tǒng)準(zhǔn)備流動相： 用0.22 m的膜過濾緩沖液， 所有的緩沖液和超純水都要新配制，超純水和緩沖液使用不得超過二天。 緩沖鹽一定要可揮發(fā)的， 而且濃度在 2mM-5mM 之間，不要超過 10mM （注：若流動相含有緩沖鹽，用完需使用大比例水相長時間沖洗系統(tǒng)和色譜柱，若流動相含有酸，必須為揮發(fā)性酸， 濃度范圍為 0.01%-0.1%，進樣器高壓密封墊要求 PH2，不能使用三氟乙酸、七氟丁酸等離子對試劑）。有機相要使用原裝進口的色譜純。（ 2） SW+Purge（弱洗：10%ACN+90% 純水或者與流動相梯度初始比例相同）用于清洗泵頭和

9、密封清洗；Wash（強洗： 90%ACN+10% 純水）；（3）準(zhǔn)備樣品：所有樣品最好都要用流動相初始梯度比例的溶劑來溶解，并用0.22 m的膜過濾。初始化 UPLC 泵：在 Masslynx主頁面上點擊 MS Console，進入系統(tǒng)控制界面，點擊左邊 Quaternary Solvent Manager選擇 CONTROL Prime A/B/C/Dsolvent，選擇 A/B/C/D 輸入 1min，如果更換了流動相則輸入3min，按 start。初始化 UPLC 自動進樣器： UPLC控制臺上選擇 Sample Manager，選擇Control Prime syrings，灌注進樣器

10、和洗針系統(tǒng)。選擇 Sample syringe and syringes， Number of cycles 一般選 1，但在更換洗針溶液后選 3。完成后， UPLC 自動進樣器準(zhǔn)備好。灌注完泵和自動進樣器后UPLC準(zhǔn)備好。4.3 建立一個 Project如果在已有的 Project 下進行試驗，此步可以不做。編寫李秀琴審核人批準(zhǔn)人日期2009.1文件類型研究所作業(yè)指導(dǎo)書化學(xué)所文件編號 NIM-ZY-HX-0000-YJ-117 第4頁共6頁從 Masslynx 主窗口選擇 FileProject Wizard，出現(xiàn)對話窗口，點擊 Yes，輸入 Project Name，選擇 Create u

11、sing existing project as template.點擊 Browse 選擇project 的模板。4.4 準(zhǔn)備質(zhì)譜如果在已有的 Project 下進行試驗，此步可以不做。MS Tune，首先打開氮氣，再開高壓（紅色表示高壓已關(guān)，綠色表示高壓已開）。（注：一定要打開氮氣和高壓才能開流動相，關(guān)閉流動相后才能關(guān)高壓和氮氣 ）。點擊 ES+ Source. 輸入以下各參數(shù) : Capillary (kV): 3；Cone (V): 30；DesolvationTemp ( ): 550；Desolvation(L/hr): 800 ；Cone (L/Hr): 50 ；以下參數(shù)最好直接

12、使用 intellistart 自動校正儀器質(zhì)量數(shù)時自動生的參數(shù)：LM Resolution 1: 3；HM Resolution 1: 15；Ion Energy 1: 0.5；LM Resolution 2: 3；HM Resolution 2: 15；Ion Energy 2: 0.5； Collision: 2 。4.5 ESI 調(diào)諧調(diào)出目標(biāo)化合物的最佳質(zhì)譜參數(shù)。把調(diào)諧液放入 A/B/C 號位（注： 濃度在 0.1-1ppm 之間，根據(jù)實際的靈敏度調(diào)整樣品濃度 ）。把流動相的流速設(shè)為 0.2ml/min ，有機相和水相比例為 1:1。點擊 Tune 界面下的 Fluidics，點擊 P

13、urge syringe 灌注注射器。 設(shè)置 Infusion 流速 5uL/min ，根據(jù)靈敏度可適當(dāng)調(diào)整。設(shè)置 Flow State 模式（ Infusion:直接進樣； Combined: 液相和樣品混合進樣； LC: 液相進樣； Waste:廢液）。選擇 Xevo TQ-S MS Detector 下面的 IntelliStart ：Sample Tune and Develop Method 點擊 Start，調(diào)出界面，輸入各參數(shù)，系統(tǒng)開始自動優(yōu)化目標(biāo)化合物的質(zhì)譜參數(shù)。4.6 建立質(zhì)譜的 MRM 方法。選擇 InstrumentMS Method 進入質(zhì)譜方法編輯界面。 打開新建質(zhì)譜

14、方法窗口，再點擊 MRM ，按調(diào)諧結(jié)果輸入下列參數(shù)：離子模式、化合物名稱、母離子質(zhì)量編寫李秀琴審核人批準(zhǔn)人日期2009.1文件類型研究所作業(yè)指導(dǎo)書化學(xué)所文件編號 NIM-ZY-HX-0000-YJ-117 第5頁共6頁數(shù)、子離子質(zhì)量數(shù)、離子駐留時間、錐孔電壓、碰撞能量和MRM運行時間等。4.7 建立UPLC方法。選擇 Instrument Inlet Method 進入 UPLC 方法編輯界面。逐一編輯泵的方法、自動進樣器的方法和紫外檢測器的方法等。最后把UPLC 的方法命名保存。4.8 建立樣品運行序列表，運行采集數(shù)據(jù)。在 Masslynx 主界面上點擊 FileNew，新建序列表，輸入文件

15、名、注釋、質(zhì)譜方法、液相方法、瓶號、進樣體積等參數(shù)，最后把編輯好的序列表命名保存。4.9 處理數(shù)據(jù)。4.10 關(guān)機一般質(zhì)譜儀部分不需要關(guān)機，不用時只要保持在Standby 狀態(tài)下即可。但如果長時間不用，或是對儀器進行清洗和維修時需要關(guān)機。首先停止液相色譜流速， 如果還需要沖洗色譜柱， 可以將液相色譜管路從質(zhì)譜移開到廢液瓶。點擊 MS Tune進入調(diào)諧窗口，點擊 Standby，關(guān)閉高壓，讓 MS進入待機狀態(tài)時，指示燈會由綠色變成紅色。等脫溶劑氣溫度降到常溫，關(guān)閉氮氣。選擇 OptionVent ，這時質(zhì)譜開始泄真空，待機械泵停止運行，同時觀察調(diào)諧界面 Diagnostics Turbo Spe

16、ed泵轉(zhuǎn)速為 0時即可關(guān)閉質(zhì)譜電源。5. 儀器基本維護與使用注意事項：5.1 儀器室要保持整潔、干凈、無塵；配套設(shè)施布局合理。5.2 開高壓之前一定要先開氮氣，關(guān)氮氣之前一定要先關(guān)高壓。5.3 溶劑和流動相的要求，所有的流動相都要用 0.22 m的濾膜過濾，水相要用前新配，并不得超過兩天。 樣品必須使用 0.22 m的濾膜過濾 。5.4 ESI 離子化與溶劑密切相關(guān)，在使用某些溶劑和添加物需要注意以下幾個方面：三氟乙酸（TFA ）多用于蛋白質(zhì)和多肽分析， 但對 ESI 離子化有抑制效應(yīng)：三乙胺（TEA ）在 m/z 102 處有較強的 M+H+ 峰，有可能會抑制某些堿性化合物編寫李秀琴審核人批

17、準(zhǔn)人日期2009.1文件類型作業(yè)指導(dǎo)書文件編號NIM-ZY-HX-0000-YJ-117研究所化學(xué)所第6頁共6頁在正離子ESI 條件下的離子化，也有可能會增強某些堿性化合物在負(fù)離子ESI條件下的響應(yīng)。注意！下列的溶劑添加劑會產(chǎn)生嚴(yán)重的離子化抑制，建議禁用：強酸強堿、不揮發(fā)性酸及相應(yīng)的鹽（如磷酸鹽、硼酸鹽、檸檬酸鹽等）、表面活性劑、離子對試劑。5.5 定期清洗樣品錐孔：關(guān)閉隔斷閥，取下樣品錐孔，先用甲醇：水：甲酸（ 45:45:10）的溶液超聲清洗 20min，然后分別用超純水和甲醇各溶液超聲清洗10分鐘，待曬干后再安裝到儀器上。當(dāng)靈敏度下降時，需要清洗Ion Block 、二級錐孔和 RF lens。5.6 實驗完畢要清洗進樣針、進樣閥等，用過含酸的流動相后，色譜柱、離子源都要用甲醇 /水沖洗，延長儀器壽命