高效液相色譜法測定葡萄酒中檸檬酸含量(精)

1、2009 年第 3 期9 月出版摘要運用磷酸、甲醇溶液作為流動相，采用高效液相色譜法測定了葡萄酒中檸檬酸含量，實驗結(jié)果表明，該方法有很好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)為 0.9998，最低檢出濃度為 0.03mg/L，加標回收率在 93.8 106.2，相對標準偏差 RSD<3%，該方法簡便快捷、準確度高、重現(xiàn)性好。關(guān)鍵詞檸檬酸；高效液相色譜；葡萄酒Abstract A reversed-phase high performance liquid chromatographic method wasintroduced for determining the content of citric a

2、cids in wine with phosphate andmethanol solution as mobile phase.The result shows that this method takes on good linearrelation ，its correlative connection is 0.9998， the lowest detection concentration is0.03mg/L， the average recoveries ranged from 93.8%to 106.2%with the relativestandard deviation i

3、s less than 3%.This method is simpleness, speediness and highveracity and good fidelity. keywordscitric acid ； high performance liquid chro-matography ；wine檸檬酸作為一種食品添加劑廣泛應(yīng)用于食品加工領(lǐng)域，但其使用范圍是受到嚴格限制的，在葡萄酒標準中有限量要求，即干、半干、半甜葡萄酒中要求檸檬酸含量 1.0g/L，甜葡萄酒中要求檸檬酸含量 2.0g/L。檸檬酸的測定方法有電位滴定法、離子色譜法、阻抑動力學熒光法和高效毛細管電泳法等。本文采用高

4、效液相色譜反相 C 18 柱，磷酸二氫鉀溶液作流動相，測定葡萄酒中的檸檬酸，并對測試條件進行了研究，建立了一種簡便、準確的分析方法。1 材料與方法1.1 儀器LC-10ATvp 高效液相色譜儀（日本島津）；SPD-10Avp 紫外檢測器（日本島津）； KQ5200DE 型數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；PHS-3C 型數(shù)字酸度計（雷磁儀器廠）；AP-9925 型真空泵（天津奧特賽恩斯儀器有限公司）； AB104-S 型分析天平梅特勒 -托利多儀器（上海）有限公司。1.2 試劑無水檸檬酸、磷酸、氫氧化鈉、甲醇（色譜純）、磷酸二氫鉀、實驗用水為超純水。除另有規(guī)定外，試劑均為分析純。 1

5、.3 溶液的配制流動相的配制體積濃度1%磷酸溶液的配制：準確量取磷酸10mL ，用超純水定容至1000mL 。張素娟 *（國家農(nóng)副加工產(chǎn)品及白酒質(zhì)量監(jiān)督檢驗中心，山西省食品質(zhì)量監(jiān)督檢驗中心，太原 030012）高效液相色譜法測定葡萄酒中檸檬酸含量Determination of citric acids content in wine byhigh performance liquid chromatography* 張素娟，女 1975 年出生， 2003年畢業(yè)于吉林大學分析化學專業(yè)，碩士，工程師。收稿日期： 2009-07-20ZHANG Su-juan *(NationalFarm Pr

6、oducts and Liquor Quality Supervision and Inspection Center, Shanxi Province Foodstuff Quality Supervision andInspection Center，Taiyuan 030012， China 食·品分析 ·食品工程FOOD ENGINEERING482009 年第 3 期 9 月出版樣品本底值g/LRSD 1.000g/L 檸檬酸加入量 mL 測得值 g/L 回收率 10.9681.551.374101.5磷酸甲醇溶液的配制：量取甲醇50mL ，用體積濃度 1%磷酸溶

7、液定容至1000mL ，混勻，再經(jīng) 0.45 m濾膜過濾、超聲波脫氣后備用。0.02mol/L 磷酸二氫鉀溶液（ pH2.9）：準確稱量 2.72g 磷酸二氫鉀，用超純水定容至 1000mL ，用磷酸調(diào) pH 值到 2.9，再經(jīng) 0.45 m濾膜過濾、超聲波脫氣后備用。標準溶液的配制檸檬酸儲備液：稱取無水檸檬酸 0.10g ，精確至 0.0001g ，用 0.01mol/L 氧化鈉溶液溶解并定容至 100mL ，此溶液含檸檬酸 1.000g/L。1.4 試樣的制備吸取 10.00mL 樣品（液溫 20）于 100mL 容量瓶中，加超純水定容，經(jīng)0.45 m微孔濾膜過濾后，備用。1.5 色譜條件

8、色譜分離柱：反相C 18（ 150mm×4.6mm i.d ， 5 m）；流動相：磷酸甲醇溶液；柱溫： 25；流速： 1.0mL/min ；檢測波長： 214nm ；進樣量： 10L。2 結(jié)果與討論2.1 標準曲線的繪制將 0.01mol/L 檸檬酸儲備液配制成一系列濃度為0.05mol/L ，0.10mol/L ，0.20mol/L ，0.40mol/L ，0.80g/L 的標準系列溶液。樣品測定液和標準溶液經(jīng)0.45 m水系濾膜過濾，分別進樣，估算出樣品溶液的濃度范圍；根據(jù)檢測到的樣品濃度作適當?shù)南♂專蛊錆舛仍跇藴是€的范圍內(nèi)；從標準曲線中求出樣品的檸檬酸含量。 2.2 流動相

9、的選擇檸檬酸為弱酸，在水系流動相中易解離，需在流動相中加入一些添加劑，以改善其在非極性固定相上的分離選擇性、色譜峰的峰形和色譜峰的重復性。故本實驗選用磷酸甲醇溶液和0.02mol/L 的磷酸二氫鉀溶液（ pH=2.9）作流動相，測定同一標準溶液和樣品溶液進行比較，兩種流動相具有很好的分離效果，并能避免樣品中的雜質(zhì)干擾。但0.02mol/L 的磷酸二氫鉀溶液（ pH=2.9）作為流動相不僅配制時操作繁瑣、 pH 稍有變化對數(shù)據(jù)的影響也很大，而且容易滋生細菌，必須每天現(xiàn)用現(xiàn)配，否則造成賭塞色譜柱，縮短柱子的壽命。而磷酸甲醇溶液作為流動相由于有甲醇的存在可抑制細菌的繁殖，能用一定的時間。因此本實驗最

10、終選用磷酸甲醇溶液作為流動相。2.3 標準色譜圖在最佳色譜條件下，分析檸檬酸標準溶液的保留時間為8.78min 。見圖 1。圖 1 檸檬酸標準色譜圖2.4 回歸方程和線性范圍的測定用 6 次測定的平均值計算回歸方程得到Y(jié) =541498x，檸檬酸含量在0.05g/L1.00g/L 范圍內(nèi)呈線性關(guān)系，標準曲線的線性相關(guān)系數(shù)r 2=0.99979。2.5 方法的精密度與回收率將 5 種檸檬酸含量不同的葡萄酒樣品分別取 6 份平行樣，按所選色譜條件下進行測定，測得 5 種樣品的相對標準偏差（ RSD ）；同時在分析樣品時， 5 種樣品平行取樣，各取 10.0mL 樣品于 25mL 容量瓶中，分別加入

11、 1.000g/L 的標準溶液2.0mL 、10mL ，以超純水定容至刻度。超出線性以外的加標溶液進行適當稀釋，再進行測定。測得5 種樣品加標的回收率結(jié)果見表1。表 1 試樣測定的精密度與回收率實驗結(jié)果（n 6）由表 1 可看出，該法的相對標準偏差（RSD ）<3.0，回收率為 93.8%106.2。 2.6 干擾試驗和最低檢出限選線性范圍中段質(zhì)量濃度123456789101112t/minA /m A U（下轉(zhuǎn)第 54 頁）張素娟，等：高效液相色譜法測定葡萄酒中檸檬酸含量492009 年第 3 期9 月出版收購的區(qū)域進行實地調(diào)查，了解果樹農(nóng)用化學品使用情況，收集農(nóng)用化學品的種類、使用劑

12、量、作業(yè)方法等相關(guān)信息，同時對種植區(qū)域內(nèi)農(nóng)用化學品的銷售流通環(huán)節(jié)進行調(diào)查，了解農(nóng)藥化學品銷售的種類、數(shù)量、來源、流向，核查銷售和使用的農(nóng)用化學品在種類、數(shù)量等方面是否吻合，必要時可采集原料樣品進行檢測驗證。采集種植區(qū)域的土壤樣品進行檢測，了解土壤中重金屬污染以及農(nóng)藥殘留情況。將調(diào)查的結(jié)果按區(qū)域、時間進行分類管理，并以此作為判斷原料是否安全的主要依據(jù)，對原料種植區(qū)域進行分類，確定原料的合格采購區(qū)域。 2.3 加強原料的入廠驗收作好原料入廠驗收工作，逐車查驗原料的來源地，堅決杜絕非合格種植區(qū)域內(nèi)的原料進入生產(chǎn)線。對來自合格種植區(qū)域的原料檢測其包裝、運輸?shù)男l(wèi)生條件以及其腐爛情況，對不符合要求的予以絕

13、收。對合格的原料按區(qū)域分類存放，并按時間順序進入生產(chǎn)線進行加工，保證產(chǎn)品的可追溯性。 2.4 積極配合監(jiān)管企業(yè)積極配合中央、地方各級政府及主管部門，切實加強監(jiān)管力度，認真貫徹落實國家新的食品安全法各項條款，建立起統(tǒng)一的、明確的、行之有效的、與國際接軌的安全質(zhì)量規(guī)則標準體系和產(chǎn)品安全質(zhì)量預警制度。做到企業(yè)在為客戶和消費者負責的同時，也要為國家更要為企業(yè)自己的信譽負責。各級政府監(jiān)管部門在處理質(zhì)量事故時找出問題和差距的同時，尋求解決的辦法，幫助企業(yè)提早預防和克服不安全隱患。作為企業(yè)，要理性看待和接受政府監(jiān)管部門的檢查、批評、指導，一旦發(fā)現(xiàn)問題，要自覺地及早的克服，以防影響企業(yè)長遠發(fā)展。2.5 規(guī)范農(nóng)

14、用化學品的生產(chǎn)及銷售農(nóng)用化學品的生產(chǎn)、銷售企業(yè)也應(yīng)建立健全農(nóng)產(chǎn)品的檔案管理制度，利用現(xiàn)代科學技術(shù)力量大力發(fā)展低濃度、低殘留的農(nóng)用化學品，始終保持與國際農(nóng)用化學品接軌?？傊a(chǎn)品的安全，關(guān)系到果汁加工企業(yè)的長足發(fā)展，關(guān)系到眾多消費者的身體健康。企業(yè)要花大力氣，把好每個質(zhì)量關(guān)，真正從源頭上消除不安全隱患的發(fā)生。要做到這些，要有長遠打算，不能急功近利，務(wù)必以一流的管理和技術(shù)水準作為實施產(chǎn)品安全質(zhì)量強有力的后盾。參考文獻1大陶 . 有機果汁 安全級別最高的飲品 J . 食品與健康，2005（2）： 16-18.2陳敏 . 梨濃縮清汁生產(chǎn)工藝研究J . 食品工程， 2008（2）：40-41.（0.

15、40mg/mL）進行干擾實驗，選常見的食品添加劑苯甲酸、山梨酸、糖精鈉、安賽蜜、雙乙酸鈉、丙酸鈣等物質(zhì)在 10 倍濃度范圍內(nèi)，在確定的色譜條件下進行標樣的測定。試驗結(jié)果表明在本實驗條件下不產(chǎn)生干擾（測定值相對偏差小于5%，即認為無干擾）。本方法按儀器的 3 倍噪聲計算，檸檬酸的最低檢出質(zhì)量濃度為 0.03mg/L。以儀器的 10 倍噪音計算，檸檬酸的最低定量檢出濃度為0.10mg/L。3 結(jié)論本文采用高效液相色譜法測定葡萄酒中檸檬酸含量，該方法有很好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)為0.9998，其最低檢出濃度為0.03mg/L，回收率為 93.8%106.2，具有簡便靈敏、準確、干擾少等優(yōu)點，可適用于葡萄酒樣品中檸檬酸的檢測分析。參考文獻1陳雪湘 . 電位滴定法測定檸檬酸鈉含量J