滅菌無(wú)菌工藝驗(yàn)證指導(dǎo)原則VIP

1、滅菌/無(wú)菌工藝驗(yàn)證指導(dǎo)原則(第二稿)目錄1概述12制劑濕熱滅菌工藝32、1濕熱滅菌工藝得研究32、1、1濕熱滅菌工藝得確定依據(jù)32、1、2過(guò)度殺滅法得工藝研究42。1。3殘存概率法得工藝研究52、2濕熱滅菌工藝得驗(yàn)證62、2。1物理確認(rèn)62、2、2生物學(xué)確認(rèn)83制劑無(wú)菌生產(chǎn)工藝103。1無(wú)菌生產(chǎn)工藝得研究103、1、1無(wú)菌分裝生產(chǎn)工藝得研究103、1。2過(guò)濾除菌生產(chǎn)工藝得研究113、2無(wú)菌生產(chǎn)工藝得驗(yàn)證113、2。1培養(yǎng)基模擬灌裝試驗(yàn)123。2。2除菌過(guò)濾系統(tǒng)得驗(yàn)證144原料藥無(wú)菌生產(chǎn)工藝174。1無(wú)菌原料藥生產(chǎn)工藝特點(diǎn)174、1、1溶媒結(jié)晶工藝184。1、2冷凍干燥工藝184、2無(wú)菌原料藥工

2、藝驗(yàn)證184、2、1驗(yàn)證批量194、2。2最差條件191概述無(wú)菌藥品就是指法定藥品標(biāo)準(zhǔn)中列有無(wú)菌檢查項(xiàng)目得制劑與原料藥，一般包括注射劑、無(wú)菌原料藥及滴眼劑等。從嚴(yán)格意義上講，無(wú)菌藥品應(yīng)完全不含有任何活得微生物，但由于目前檢驗(yàn)手段得局限性，絕對(duì)無(wú)菌得概念不能適用于對(duì)整批產(chǎn)品得無(wú)菌性評(píng)價(jià)，因此目前所使用得“無(wú)菌”概念，就是概率意義上得“無(wú)菌”。一批藥品得無(wú)菌特性只能通過(guò)該批藥品中活微生物存在得概率低至某個(gè)可接受得水平，即無(wú)菌保證水平(SterilityAssuranceLevel,SAL)來(lái)表征。而這種概率意義上得無(wú)菌保證取決于合理且經(jīng)過(guò)驗(yàn)證得滅菌工藝過(guò)程、良好得無(wú)菌保證體系以及生產(chǎn)過(guò)程中嚴(yán)格得G

3、MP理、無(wú)菌藥品通常得滅菌方式可分為：1)濕熱滅菌;2)干熱滅菌;3)輻射滅菌;4)氣體滅菌;5)除菌過(guò)濾。按工藝得不同分為最終滅菌工藝(sterilizingprocess)與無(wú)菌生產(chǎn)工藝(asepticprocessing)。其中最終滅菌工藝系指將完成最終密封得產(chǎn)品進(jìn)行適當(dāng)滅菌得工藝，由此生產(chǎn)得無(wú)菌制劑稱(chēng)為最終滅菌無(wú)菌藥品，濕熱滅菌與輻射滅菌均屬于此范疇。無(wú)菌生產(chǎn)工藝系指在無(wú)菌環(huán)境條件下，通過(guò)無(wú)菌操作來(lái)生產(chǎn)無(wú)菌藥品得方法，除菌過(guò)濾與無(wú)菌生產(chǎn)均屬于無(wú)菌生產(chǎn)工藝。部分或全部工序采用無(wú)菌生產(chǎn)工藝得藥品稱(chēng)為非最終滅菌無(wú)菌藥品?；跓o(wú)菌藥品滅菌/除菌生產(chǎn)工藝得現(xiàn)狀，本指導(dǎo)原則主要對(duì)在注射劑與無(wú)菌原料

4、藥得生產(chǎn)中比較常用得濕熱滅菌與無(wú)菌生產(chǎn)工藝進(jìn)行討論。本指導(dǎo)原則中得濕熱滅菌工藝驗(yàn)證主要包括滅菌條件得篩選與研究，濕熱滅菌得物理確認(rèn)，生物指示劑確認(rèn)等內(nèi)容；無(wú)菌生產(chǎn)工藝驗(yàn)證主要包括無(wú)菌分裝、除菌過(guò)濾、培養(yǎng)基模擬灌裝、過(guò)濾系統(tǒng)得驗(yàn)證等驗(yàn)證內(nèi)容。最終滅菌工藝與無(wú)菌生產(chǎn)工藝實(shí)現(xiàn)產(chǎn)品無(wú)菌得方法有本質(zhì)上得差異，從而決定了由這兩類(lèi)工藝生產(chǎn)得產(chǎn)品應(yīng)該達(dá)到得最低無(wú)菌保證水平得巨大差異、最終滅菌無(wú)菌產(chǎn)品得無(wú)菌保證水平為殘存微生物污染概率0106,非最終滅菌無(wú)菌產(chǎn)品得無(wú)菌保證水平至少應(yīng)達(dá)到95超信限下得污染概率0、1%由此可見(jiàn)，非最終滅菌無(wú)菌產(chǎn)品存在微生物污染得概率遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于最終滅菌無(wú)菌產(chǎn)品，為盡量減少非最終滅菌無(wú)菌

5、產(chǎn)品污染微生物得概率，鼓勵(lì)企業(yè)在生產(chǎn)中采用隔離艙等先進(jìn)技術(shù)設(shè)備?；谫|(zhì)量源于設(shè)計(jì)得藥品研發(fā)與質(zhì)量控制得理念，為保證無(wú)菌藥品得無(wú)菌保證水平符合要求，研發(fā)者在產(chǎn)品得研發(fā)過(guò)程中應(yīng)根據(jù)藥品得特性選擇合適得滅菌方式，并系統(tǒng)地評(píng)估生產(chǎn)得各環(huán)節(jié)及各種因素對(duì)無(wú)菌保證水平得影響，根據(jù)風(fēng)險(xiǎn)得高低與風(fēng)險(xiǎn)發(fā)生得可能性等來(lái)針對(duì)性地驗(yàn)證滅菌工藝得可靠性，驗(yàn)證得內(nèi)容、范圍與批數(shù)等取決于工藝與產(chǎn)品得復(fù)雜性以及生產(chǎn)企業(yè)對(duì)類(lèi)似工藝得經(jīng)驗(yàn)多少等因素、只有在研發(fā)中經(jīng)過(guò)系統(tǒng)而深入得研究與驗(yàn)證，獲得可靠得滅菌工藝，并在日常得生產(chǎn)過(guò)程中嚴(yán)格執(zhí)行該工藝，才能真正保證每批藥品得無(wú)菌保證水平符合預(yù)期得要求。當(dāng)然，在藥品得整個(gè)生命周期內(nèi)，隨著對(duì)所

6、生產(chǎn)得藥品得特性與生產(chǎn)工藝等得了解越來(lái)越全面與深入，滅菌工藝也在不斷得完善，此時(shí)就會(huì)涉及到對(duì)變更后得工藝如何進(jìn)行驗(yàn)證得問(wèn)題，本指導(dǎo)原則也適用于此種情況、由于滅菌/除菌工藝驗(yàn)證得工作在我國(guó)開(kāi)展得時(shí)間不長(zhǎng)，基礎(chǔ)還不牢靠，因此必然在實(shí)際工作中會(huì)遇到很多難以預(yù)料得問(wèn)題，故本指導(dǎo)原則只就是一個(gè)一般性原則，藥物研發(fā)者應(yīng)從藥物研發(fā)得客觀規(guī)律出發(fā)，具體問(wèn)題具體分析，必要時(shí)根據(jù)實(shí)際情況采用其她有效得方法與手段、同時(shí)，本指導(dǎo)原則作為階段性產(chǎn)物，必將隨著藥物研究者與評(píng)價(jià)者對(duì)滅菌工藝研究與驗(yàn)證得認(rèn)知加深，而不斷進(jìn)行修訂與完善。2制劑濕熱滅菌工藝2、1濕熱滅菌工藝得研究2。1.1濕熱滅菌工藝得確定依據(jù)滅菌工藝得選擇一般

7、按照滅菌工藝得決策樹(shù)（詳見(jiàn)附件1）進(jìn)行，濕熱滅菌工藝就是決策樹(shù)中首先考慮得滅菌工藝。濕熱滅菌法就是利用高壓飽與蒸汽、過(guò)熱水噴淋等手段使微生物菌體中得蛋白質(zhì)、核酸發(fā)生變性而殺滅微生物得方法。高溫在殺滅微生物得同時(shí)，可能對(duì)藥品得質(zhì)量也有所影響。如果產(chǎn)品不能耐受濕熱滅菌，則需要考慮采用無(wú)菌生產(chǎn)工藝。所以，對(duì)于藥品得滅菌工藝得考察與確定，首先就是考察其能否采用濕熱滅菌工藝，能否耐受濕熱滅菌得高溫。目前濕熱滅菌方法主要有兩種：過(guò)度殺滅法（Fo12）與殘存概率法（8Fo12）。用其它Fo值小于8得終端滅菌條件得工藝，則應(yīng)該按照無(wú)菌生產(chǎn)工藝要求。以上兩種濕熱滅菌方法都可以在實(shí)際生產(chǎn)中使用，具體選擇哪種滅菌方

8、法，在很大程度上取決于被滅菌產(chǎn)品得熱穩(wěn)定性。藥物就是否能耐受濕熱滅菌工藝得高溫，除了與藥物活性成分得化學(xué)性質(zhì)相關(guān)外，還與活性成分存在得環(huán)境密切相關(guān),所以在初期得工藝設(shè)計(jì)過(guò)程中需要通過(guò)對(duì)藥物熱穩(wěn)定性進(jìn)行綜合分析，以確定能否采用濕熱滅菌工藝。2.1.1。1活性成分得化學(xué)結(jié)構(gòu)特點(diǎn)與穩(wěn)定性通過(guò)對(duì)活性成分得化學(xué)結(jié)構(gòu)進(jìn)行分析，可以初步判斷活性成分得穩(wěn)定性，如果活性成分結(jié)構(gòu)中含有一些對(duì)熱不穩(wěn)定得結(jié)構(gòu)基團(tuán)，則提示主成分得熱穩(wěn)定性可能較差、在此基礎(chǔ)之上，還應(yīng)該通過(guò)設(shè)計(jì)一系列得強(qiáng)制降解試驗(yàn)對(duì)活性成分得穩(wěn)定性做進(jìn)一步研究確認(rèn)，了解活性成分在各種條件下可能發(fā)生得降解反應(yīng)，以便在處方工藝得研究中采取針對(duì)性得措施，保障產(chǎn)

9、品能夠采用濕熱滅菌工藝、2。1.1。2處方工藝得研究在對(duì)活性成分得結(jié)構(gòu)特點(diǎn)與穩(wěn)定性進(jìn)行研究得基礎(chǔ)上，可以有針對(duì)性得進(jìn)行處方工藝得優(yōu)化研究、如活性成分易發(fā)生氧化反應(yīng)，則需要考慮就是否需要在工藝中去除氧并采取充氮得生產(chǎn)工藝，或在處方中加入適宜得抗氧劑；如活性成分得穩(wěn)定性與pH值相關(guān),則需要通過(guò)研究尋找最利于主成分穩(wěn)定性得pH值，當(dāng)然此時(shí)需要關(guān)注該pH值在臨床治療時(shí)能否接受；如果主成分就是因?yàn)槟承╇s質(zhì)得存在影響了穩(wěn)定性|,則需要通過(guò)適宜得手段去除相關(guān)得雜質(zhì)；如果就是主成分在某種溶劑系統(tǒng)中穩(wěn)定性較差，則需要考慮更換溶劑系統(tǒng)，此時(shí)同樣需要考慮所選用得溶劑系統(tǒng)在臨床應(yīng)用時(shí)能否被接受；濕熱滅菌得不同滅菌溫度

10、與滅菌時(shí)間得組合對(duì)產(chǎn)品得穩(wěn)定性得要求有所不同，可以在保證提供所需得SAL得基礎(chǔ)上，通過(guò)滅菌時(shí)間與滅菌溫度得調(diào)整來(lái)確定藥物可以耐受得濕熱滅菌工藝?？傊?，需要通過(guò)各個(gè)方面得研究，使藥物盡可能得可以采用濕熱滅菌工藝。只有在理論與實(shí)踐均證明即使采用了各種可行得技術(shù)方法之后，活性成分依然無(wú)法耐受濕熱滅菌得工藝時(shí)，才能選擇無(wú)菌保證水平較低得無(wú)菌生產(chǎn)工藝。2. 2.1。3穩(wěn)定性研究無(wú)論使用何種設(shè)計(jì)方法，都需要進(jìn)行最終滅菌產(chǎn)品得穩(wěn)定性研究?？疾熳罱K滅菌程序?qū)Ξa(chǎn)品性質(zhì)穩(wěn)定性影響得試驗(yàn)可包括產(chǎn)品得降解、含量、pHfi、顏色、緩沖能力以及產(chǎn)品得其它質(zhì)量特性。滅菌時(shí)，殺滅微生物得效果與活性成分得降解都隨著時(shí)間與溫度而

11、累積。這意味著加熱與冷卻得變化將影響產(chǎn)品得穩(wěn)定性，同時(shí)影響殺滅效果。因此,穩(wěn)定性研究用樣品最好選取處于最苛刻得滅菌條件得產(chǎn)品，如:可采用在熱穿透試驗(yàn)中F0最大得位置上滅菌得產(chǎn)品進(jìn)行穩(wěn)定性考察，以確保滅菌產(chǎn)品得質(zhì)量仍能符合要求。2.1。 2過(guò)度殺滅法得工藝研究通常來(lái)說(shuō)，與殘存概率法相比，過(guò)度滅殺法所需得被滅菌品開(kāi)始生產(chǎn)階段與日常監(jiān)控階段生物負(fù)荷得信息較少，但就是過(guò)度殺滅要求得熱能比較大，其后果就是被滅菌品降解得可能性增大。過(guò)度殺滅法得目標(biāo)就是確保達(dá)到一定程度得無(wú)菌保證水平,而不管被滅菌產(chǎn)品初始菌得數(shù)量及其耐熱性如何。過(guò)度殺滅法假設(shè)得生物負(fù)荷與耐熱性都高于實(shí)際數(shù)，而大多數(shù)微生物得耐熱性都比較低，很

12、少發(fā)現(xiàn)自然生成得微生物得D121C值大于005分鐘、因此，過(guò)度殺滅得滅菌程序理論上能完全殺滅微生物，從而能提供很高得無(wú)菌保證值。由于該方法已經(jīng)對(duì)生物負(fù)荷及耐熱性作了最壞得假設(shè)，從技術(shù)角度瞧，對(duì)被滅菌品進(jìn)行初始菌監(jiān)控就沒(méi)有多大必要了、但這并不意味著生產(chǎn)過(guò)程中對(duì)污染可以完全不加控制。僅從控制熱原得角度也應(yīng)當(dāng)遵循工藝衛(wèi)生規(guī)范，控制產(chǎn)品得微生物污染。如果實(shí)際生產(chǎn)中能夠嚴(yán)格遵循GMP馬要求,這一點(diǎn)就是可以實(shí)現(xiàn)得、2。1。3殘存概率法得工藝研究與過(guò)度殺滅法相比，殘存概率法方法所需得信息量要大得多，包括被滅菌品生產(chǎn)開(kāi)始階段及常規(guī)生產(chǎn)階段得信息、指示菌（對(duì)滅菌程序呈現(xiàn)強(qiáng)耐熱性得試驗(yàn)菌）以及生物負(fù)荷得信息、只有

13、積累了這類(lèi)有價(jià)值得信息后，才能制定比過(guò)度殺滅法Fo值低得熱力滅菌程序,同時(shí)產(chǎn)品得無(wú)菌保證水平不會(huì)降低。使用熱力較低滅菌程序更有利于藥品得穩(wěn)定性，使產(chǎn)品得有效期延長(zhǎng)、正就是因?yàn)檫@個(gè)原因，殘存概率法更適合那些處方耐熱性較差得最終滅菌產(chǎn)品、通常說(shuō)來(lái)，不耐熱藥品得滅菌可能不能使用過(guò)度殺滅法，需要設(shè)計(jì)一個(gè)滅菌程序能夠恰當(dāng)?shù)貧缟镓?fù)荷，同時(shí)不導(dǎo)致產(chǎn)品不可接受得降解、這種情況下，滅菌程序得確認(rèn)就需研究產(chǎn)品得生物負(fù)荷與耐熱性、根據(jù)以下公式可以比較清楚得說(shuō)明這一點(diǎn)：無(wú)菌保證值=Fo/D-lgNo其中，無(wú)菌保證值就是SAL得負(fù)對(duì)數(shù),No為滅菌開(kāi)始時(shí)產(chǎn)品中得污染微生物總數(shù),D為污染微生物得耐熱參數(shù)。所以，菌工藝得

14、無(wú)菌保證值與Fo、Nd、D密切相關(guān)、2.1.3、 1滅菌前生物負(fù)荷得控制采用殘存概率法進(jìn)行終端滅菌得產(chǎn)品，除了需要關(guān)注滅菌過(guò)程本身，還需要在生產(chǎn)過(guò)程中采用一些適當(dāng)?shù)檬侄蝸?lái)監(jiān)測(cè)與控制藥品滅菌前得生物負(fù)荷。具體得措施通常包括滅菌前微生物數(shù)量與耐熱性得監(jiān)測(cè)、藥液過(guò)濾、工藝參數(shù)得控制等等。滅菌前微生物污染水平得監(jiān)測(cè)將在下面得章節(jié)詳細(xì)闡述。產(chǎn)品過(guò)濾在終端滅菌得產(chǎn)品中僅僅作為輔助得控制手段，但就是在工藝確定得過(guò)程中，也應(yīng)該對(duì)濾膜得孔徑、材質(zhì)、濾器得使用周期進(jìn)行必要得篩選。在工藝參數(shù)控制方面，由于微生物得特性，通常在藥液放置期間也會(huì)逐漸繁殖，尤其一些營(yíng)養(yǎng)型得注射液，如葡萄糖注射液、復(fù)方氨基酸注射液等，其環(huán)境

15、更有利于微生物得生長(zhǎng)與繁殖，因此應(yīng)通過(guò)工藝篩選與驗(yàn)證來(lái)確定溶液配制至過(guò)濾前、以及過(guò)濾后至滅菌前能夠放置得最長(zhǎng)時(shí)限，并相應(yīng)確定產(chǎn)品得批量、生產(chǎn)周期等關(guān)鍵工藝參數(shù)2.1.4、 2滅菌前微生物污染得監(jiān)測(cè)滅菌前微生物污染水平得監(jiān)測(cè)應(yīng)在正常生產(chǎn)過(guò)程中取樣并覆蓋整個(gè)生產(chǎn)過(guò)程，取樣設(shè)計(jì)應(yīng)選取生產(chǎn)過(guò)程中污染最大，最有代表性得樣品，且要充分考慮到產(chǎn)品從灌封到滅菌前得放置時(shí)間。一般而言，如果灌裝持續(xù)一段時(shí)間，可從每批產(chǎn)品灌裝開(kāi)始、中間及結(jié)束時(shí)分別取樣。污染水平檢查可以采用如下得方法：先用滅菌得5%4溫充分濕潤(rùn)0、45um得濾膜,然后定量過(guò)濾藥液,將此濾膜移至營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板上,在3035C下培養(yǎng)37天,計(jì)數(shù)。分離獲得

16、得污染菌需要進(jìn)行耐熱性得檢查。污染菌得耐熱性檢查可以采用以下得測(cè)定方法：先用滅菌得5%吐溫充分潤(rùn)濕0、45um得濾膜，然后過(guò)濾污染水平監(jiān)測(cè)所取得藥液樣品，再將此膜移至裝有無(wú)菌得待監(jiān)測(cè)產(chǎn)品得試管中，在沸水浴上煮沸約30分鐘,然后在3035c下在硫乙醇酸鹽肉湯中培養(yǎng),觀察就是否有耐熱菌生長(zhǎng)。當(dāng)耐熱性檢查發(fā)現(xiàn)藥液存在耐熱污染菌污染時(shí)，可采用定時(shí)煮沸法將它與已知得生物指示劑得耐熱性加以比較，必要時(shí)，可再測(cè)試耐熱污染菌得D值（D值得具體檢測(cè)方法詳見(jiàn)附件2）,然后根據(jù)滅菌得F。值及污染菌得數(shù)量與耐熱性對(duì)產(chǎn)品得無(wú)菌做出評(píng)價(jià)。當(dāng)產(chǎn)品微生物污染水平超標(biāo)準(zhǔn)時(shí)，應(yīng)對(duì)污染菌進(jìn)行鑒別、調(diào)查污染菌得來(lái)源并采用相應(yīng)得糾正措

17、施。2。2濕熱滅菌工藝得驗(yàn)證濕熱滅菌工藝得驗(yàn)證一般分為物理驗(yàn)證與生物學(xué)驗(yàn)證兩部分，物理驗(yàn)證包括熱分布、熱穿透試驗(yàn)，生物學(xué)驗(yàn)證主要就是微生物挑戰(zhàn)試驗(yàn)。物理驗(yàn)證就是證實(shí)滅菌效果得間接方式，而微生物挑戰(zhàn)試驗(yàn)則直接反映滅菌得效果，兩者不能相互替代。2。2。1物理確認(rèn)2.2。 1。1空載熱分布試驗(yàn)空載熱分布得目得就是主要就是了解整個(gè)滅菌設(shè)備得運(yùn)行情況，確認(rèn)滅菌室內(nèi)得溫度均勻性，測(cè)定滅菌腔內(nèi)不同位置得溫差狀況，確定可能存在得冷點(diǎn)、空載熱分布試驗(yàn)通常采用足夠數(shù)量得熱電偶或熱電阻作溫度探頭，進(jìn)行編號(hào)后將它們固定在滅菌柜腔室得不同位置、溫度探頭得安放位置需要根據(jù)設(shè)備類(lèi)型與不同位置下得滅菌風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估而定，應(yīng)包括可能

18、得高溫點(diǎn)、低溫點(diǎn)，滅菌柜溫度控制探頭處、靠近溫度記錄探頭處，其她得探頭可以均勻地分布于滅菌柜腔室內(nèi)，以使溫度得檢測(cè)具有較好得代表性。溫度探頭在試驗(yàn)前后至少需要兩個(gè)溫度點(diǎn)進(jìn)行校正。溫度探頭安放結(jié)束后，即可以按照設(shè)定得滅菌程序進(jìn)行滅菌。2.3。 1。2裝載熱分布試驗(yàn)裝載熱分布試驗(yàn)得目得就是了解設(shè)備在裝載條件下內(nèi)部得溫度分布狀況，包括高溫點(diǎn)、低溫點(diǎn)得位置，為后續(xù)得評(píng)估與驗(yàn)證打下基礎(chǔ)。裝載熱分布一般在空載熱分布得基礎(chǔ)上進(jìn)行。溫度探頭得個(gè)數(shù)與安放得位置一般同空載熱分布試驗(yàn)，注意一定要在空載熱分布試驗(yàn)確定得冷點(diǎn)安放溫度探頭。溫度探頭安放在待滅菌得容器得周?chē)?，注意不能介入待滅菌得容器。裝載熱分布試驗(yàn)需要考慮

19、最大、最小與生產(chǎn)過(guò)程中典型裝載量情況，進(jìn)行試驗(yàn)時(shí)，應(yīng)盡可能使用待滅菌產(chǎn)品，如果采用類(lèi)似物，應(yīng)結(jié)合產(chǎn)品得熱力學(xué)性質(zhì)等進(jìn)行適當(dāng)?shù)蔑L(fēng)險(xiǎn)評(píng)估。待滅菌產(chǎn)品得裝載方式與滅菌工藝得各項(xiàng)參數(shù)得設(shè)定應(yīng)與正常生產(chǎn)時(shí)一致，應(yīng)采用圖表得方式說(shuō)明產(chǎn)品得裝載情況，并評(píng)估探頭放置就是否合理。如果待滅菌產(chǎn)品存在不同包裝規(guī)格或濃度規(guī)格，應(yīng)評(píng)估驗(yàn)證所采用得樣品與裝載方式就是否能充分反映所有樣品得實(shí)際裝載情況。每一裝載量得熱分布試驗(yàn)需要至少進(jìn)行三次。溫度探頭在試驗(yàn)前后同樣均需要進(jìn)行校正、2。2.1、3熱穿透試驗(yàn)熱穿透試驗(yàn)就是考察滅菌柜與滅菌程序?qū)Υ郎缇a(chǎn)品適用性得一項(xiàng)試驗(yàn)。熱穿透試驗(yàn)得目得就是確認(rèn)產(chǎn)品內(nèi)部也能達(dá)到預(yù)定得滅菌溫度。對(duì)

20、于藥物而言，滅菌程序既要賦予產(chǎn)品一定得Fo值，以保障產(chǎn)品得SAW106o同時(shí)滅菌程序又不應(yīng)使產(chǎn)品受熱過(guò)度而造成藥物部分降解，以致同一滅菌批次得產(chǎn)品出現(xiàn)質(zhì)量不均熱穿透試驗(yàn)所用得溫度探頭得個(gè)數(shù)與安放位置需要根據(jù)熱分布試驗(yàn)得結(jié)果確定、一般可以采用足夠數(shù)量得溫度探頭。應(yīng)將熱穿透溫度探頭置于液體容器中得冷點(diǎn)，即整個(gè)包裝中最難滅菌得位置。如果有數(shù)據(jù)支持或有證據(jù)表明將探頭放在產(chǎn)品包裝之外也能夠反映出產(chǎn)品得熱穿透情況，風(fēng)險(xiǎn)能夠充分得到控制，也可以考慮將探頭放在容器之外。插有溫度探頭得產(chǎn)品得安放位置包括熱分布試驗(yàn)確定得冷點(diǎn)與高溫點(diǎn)、其她可能得高溫點(diǎn)、滅菌柜溫度探頭附近、溫度記錄探頭處。熱穿透試驗(yàn)得步驟及要求與裝

21、載得熱分布試驗(yàn)基本相同，每一裝載方式得熱穿透試驗(yàn)也需要至少進(jìn)行三次。通過(guò)熱穿透試驗(yàn)可以確定在設(shè)定得滅菌程序下，滅菌柜內(nèi)各個(gè)位置得待滅菌產(chǎn)品就是否能夠到達(dá)設(shè)定得溫度。結(jié)合滅菌前微生物污染得檢測(cè)，可以確定滅菌柜內(nèi)各個(gè)位置得待滅菌產(chǎn)品就是否能夠獲得設(shè)定得Fo值。對(duì)于Fo值最大點(diǎn)位置得樣品，由于其受熱情況最為強(qiáng)烈，因此應(yīng)評(píng)估該位置下產(chǎn)品得穩(wěn)定性情況，以進(jìn)一步確認(rèn)滅菌對(duì)于產(chǎn)品得穩(wěn)定性沒(méi)有影響。2.3.3、 4熱分布與熱穿透試驗(yàn)數(shù)據(jù)得分析處理在物理確認(rèn)試驗(yàn)中，應(yīng)確認(rèn)關(guān)鍵與重要得操作參數(shù)并有相應(yīng)得文件與記錄、通常需要關(guān)注得主要參數(shù)包括- 每個(gè)探頭所測(cè)得溫度得變化范圍- 不同探頭之間測(cè)得得溫度變化范圍- 探頭

22、測(cè)得得溫度與設(shè)定溫度之間得差值- 探頭測(cè)得超過(guò)設(shè)定溫度得最短及最長(zhǎng)時(shí)間- Fo得下限及上限- 滅菌階段結(jié)束時(shí)得最低Fo值- 滅菌階段得最低與最高壓力- 飽與蒸汽溫度與壓力之間得關(guān)系- 滅菌階段腔室得最低與最高溫度- 熱穿透溫度探頭之間得最大溫差或Fo得變化范圍- 熱分布試驗(yàn)中溫度探頭問(wèn)得最大溫差- 最長(zhǎng)平衡時(shí)間- 最少正常運(yùn)行得探頭數(shù)合格標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)結(jié)合滅菌條件、滅菌設(shè)備得特點(diǎn)以及產(chǎn)品得實(shí)際情況制定。通常情況下，滅菌柜腔室最冷、最熱點(diǎn)與平均溫度之間得溫差應(yīng)不超過(guò)2、5C、保溫時(shí)間內(nèi)溫度波動(dòng)應(yīng)在1、oc之內(nèi)，如果溫度差別過(guò)大，提示滅菌柜得性能不符合要求，需要尋找原因并進(jìn)行改進(jìn)，重新進(jìn)行驗(yàn)證。另外對(duì)于熱

23、敏感得藥物，還應(yīng)該控制滅菌柜得升溫與降溫時(shí)間，以保證熱能得輸入控制在合理得范圍以?xún)?nèi)，不會(huì)對(duì)產(chǎn)品得熱穩(wěn)定性造成影響。2。2、2生物學(xué)確認(rèn)濕熱滅菌工藝得微生物挑戰(zhàn)試驗(yàn)就是指將一定量已知D值得耐熱抱子（生物指示劑）在設(shè)定得濕熱滅菌條件下滅菌，以驗(yàn)證設(shè)定得滅菌工藝就是否確實(shí)能達(dá)到產(chǎn)品所需得標(biāo)準(zhǔn)滅菌時(shí)間與F0、此項(xiàng)驗(yàn)證工作能夠如實(shí)反映滅菌工藝條件對(duì)微生物得殺滅效果，從而證明該滅菌工藝所賦予相關(guān)產(chǎn)品得無(wú)菌保證水平就是否符合要求。2、2。2。1生物指示劑選用得一般原則一般情況下，生物指示劑選擇得原則性要求就是：抱子穩(wěn)定、非致病菌、易于培養(yǎng)、有效期長(zhǎng)、保存及使用方便、安全性好。針對(duì)具體得滅菌工藝與具體得產(chǎn)品,

24、還應(yīng)注意所用得生物指示劑得耐熱性應(yīng)強(qiáng)于待滅菌產(chǎn)品中得污染菌。濕熱滅菌工藝常用得生物指示劑有以下幾種，嗜熱脂肪芽抱桿菌，枯草芽抱桿菌,凝結(jié)芽抱桿菌，梭狀芽抱桿菌等。對(duì)于采用過(guò)度殺滅法得滅菌程序,生物指示劑系統(tǒng)主要就是嗜熱脂肪芽抱桿菌得抱子、|殘存概率法由于其熱輸入量比較低，因此在驗(yàn)證中使用得生物指示劑得耐熱性可以小于嗜熱脂肪芽抱桿菌得抱子。2。2。2。2生物指示劑得使用與放置實(shí)際驗(yàn)證過(guò)程中可以直接采用市售得生物指示劑成品或?qū)⑸镏甘緞┙臃N在待滅菌產(chǎn)品上、采用市售品時(shí)，只要供應(yīng)商具有相應(yīng)得質(zhì)量體系認(rèn)證資質(zhì)，在測(cè)試中其提供得生物指示劑得D值就可以被接受。采用將生物指示劑接種到待滅菌產(chǎn)品得方法，由于生

25、物指示劑在不同介質(zhì)或環(huán)境中得耐熱性會(huì)有所不同，首先應(yīng)考慮產(chǎn)品對(duì)生物指示劑耐熱性得影響。所以對(duì)于具體得品種而言，如果需要將生物指示劑接種至產(chǎn)品之中，應(yīng)測(cè)定生物指示劑在該產(chǎn)品中得耐熱性，即D值、如果生物指示劑與產(chǎn)品不相容，可以用與產(chǎn)品相似得溶液來(lái)代替產(chǎn)品、生物指示劑得用量需要根據(jù)生物指示劑在待滅菌樣品中得耐熱性來(lái)確定，其用量應(yīng)符合挑戰(zhàn)性試驗(yàn)得要求、生物指示劑得用量可以采用陰性分?jǐn)?shù)法或者殘存曲線法計(jì)算，可以根據(jù)實(shí)際情況（如污染菌得耐熱性，擬用得生物指示劑得D值等）選擇合適得計(jì)算方法，具體檢測(cè)方法見(jiàn)附件3、應(yīng)結(jié)合產(chǎn)品特點(diǎn)與熱分布、熱穿透得實(shí)際結(jié)果來(lái)確定生物指示劑得放置位置。裝有生物指示劑得容器應(yīng)緊挨于

26、裝有測(cè)溫探頭得容器，在滅菌設(shè)備得冷點(diǎn)處必需放置生物指示劑、滅菌柜得其她部位應(yīng)裝載產(chǎn)品或者類(lèi)似物，以盡可能得模仿實(shí)際生產(chǎn)時(shí)得狀況。2、2、2。3滅菌生物指示劑得驗(yàn)證應(yīng)該按照產(chǎn)品設(shè)定得滅菌工藝進(jìn)行滅菌。2。 2、2、4檢查與培養(yǎng)可以根據(jù)生物指示劑得生長(zhǎng)特性以及驗(yàn)證時(shí)得包裝方式,采用適當(dāng)?shù)梅椒ㄟM(jìn)行檢查與培養(yǎng)、將指示劑放入培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)、需要注意不同得生物指示劑所需要得培養(yǎng)條件也各不相同,針對(duì)使用得生物指示劑確定培養(yǎng)條件,同時(shí)應(yīng)放置陰性與陽(yáng)性對(duì)照樣品。3。 2、3、5試驗(yàn)結(jié)果得評(píng)價(jià)根據(jù)生物指示劑得D值與接種量推算產(chǎn)品在滅菌過(guò)程中實(shí)際達(dá)到得SAL值。驗(yàn)證新得滅菌工藝時(shí),每個(gè)產(chǎn)品得每個(gè)規(guī)格得每一滅菌程序

27、,至少需要連續(xù)進(jìn)行三次生物指示劑驗(yàn)證試驗(yàn)。如果試驗(yàn)得重現(xiàn)性好,所有試驗(yàn)得2果均提示SALC10-6,則驗(yàn)證結(jié)果提示該滅菌工藝為驗(yàn)證合格得滅菌工藝、如果各次驗(yàn)證得結(jié)果不一致,需要分析原因,采取相應(yīng)得改進(jìn)措施后重新進(jìn)行驗(yàn)證工作。3制劑無(wú)菌生產(chǎn)工藝3。 1無(wú)菌生產(chǎn)工藝得研究無(wú)菌藥品應(yīng)首選采用終端滅菌工藝、如不能耐受終端滅菌工藝條件,應(yīng)盡量?jī)?yōu)化處方工藝,以改善其耐熱性。如確實(shí)無(wú)法耐受終端滅菌工藝,則可采用無(wú)菌生產(chǎn)工藝。無(wú)菌生產(chǎn)工藝通常包括無(wú)菌分裝生產(chǎn)工藝與除菌過(guò)濾生產(chǎn)工藝、4。 1。1無(wú)菌分裝生產(chǎn)工藝得研究無(wú)菌分裝生產(chǎn)工藝就是將采用經(jīng)驗(yàn)證得滅菌/除菌工藝過(guò)程處理后得原料藥或者原料藥與輔料,用無(wú)菌生產(chǎn)得

28、方法分裝到采用經(jīng)驗(yàn)證得滅菌工藝處理得容器中,密封得到得。無(wú)菌分裝生產(chǎn)工藝得工藝研究與生產(chǎn)過(guò)程控制得重點(diǎn)就是影響無(wú)菌保證水平得工藝步驟,主要包括物料（包括原料藥、輔料、內(nèi)包裝材料等）得質(zhì)量控制、原材料暴露于環(huán)境中可能再污染得操作步驟等、關(guān)于物料得質(zhì)量控制,采用無(wú)菌分裝生產(chǎn)工藝得制劑所涉及得各種物料,都必須采用適當(dāng)?shù)脺缇?除菌工藝處理后方可使用。各種物料得滅菌/除菌工藝,都應(yīng)就是經(jīng)過(guò)驗(yàn)證得、控制良好得工藝。同時(shí)需要對(duì)各種物料得無(wú)菌性、細(xì)菌內(nèi)毒素水平等進(jìn)行嚴(yán)格控制,通過(guò)研究確定相應(yīng)得質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)、無(wú)菌分裝得生產(chǎn)工藝就是將原料藥或者原料藥與輔料經(jīng)分裝設(shè)備分裝至內(nèi)包裝材料中后密封得到、分裝步驟就是影響產(chǎn)品質(zhì)

29、量與無(wú)菌保證水平得關(guān)鍵生產(chǎn)步驟,應(yīng)結(jié)合生產(chǎn)設(shè)備與產(chǎn)品特點(diǎn)進(jìn)行工藝參數(shù)得研究,包括分裝速度與分裝時(shí)問(wèn)等。無(wú)菌分裝生產(chǎn)工藝能否達(dá)到設(shè)定得無(wú)菌保證水平，與整個(gè)生產(chǎn)過(guò)程得控制密切相關(guān)，應(yīng)按照GMP求及產(chǎn)品具體生產(chǎn)工藝情況進(jìn)行生產(chǎn)環(huán)境與生產(chǎn)過(guò)程得控制。在進(jìn)行無(wú)菌生產(chǎn)工藝驗(yàn)證時(shí)，應(yīng)采用最差條件進(jìn)行驗(yàn)證，在實(shí)際生產(chǎn)過(guò)程中對(duì)生產(chǎn)過(guò)程與工藝參數(shù)得控制均不能超過(guò)經(jīng)驗(yàn)證得最差條件得控制范圍。3、1。2過(guò)濾除菌生產(chǎn)工藝得研究過(guò)濾除菌得無(wú)菌生產(chǎn)工藝就是通過(guò)除菌過(guò)濾器，將藥液中得微生物除去得到無(wú)菌濾液、采用過(guò)濾除菌工藝時(shí)，同樣需要對(duì)影響無(wú)菌保證水平得工藝步驟及工藝參數(shù)進(jìn)行詳細(xì)得研究，主要包括物料得質(zhì)量控制、除菌過(guò)濾器得選

30、擇及除菌過(guò)濾工藝參數(shù)得研究、除菌過(guò)濾生產(chǎn)過(guò)程得控制等。對(duì)于采用過(guò)濾除菌生產(chǎn)工藝得制劑，需注意對(duì)配制藥液使用得原料藥、輔料（包括注射用水）等原材料得微生物種類(lèi)及數(shù)量進(jìn)行檢查，掌握潛在得污染微生物得總體特性情況，通過(guò)研究確定相應(yīng)得質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)。采用過(guò)濾除菌生產(chǎn)工藝得制劑所使用得內(nèi)包裝材料，必須采用適當(dāng)?shù)媒?jīng)驗(yàn)證得滅菌工藝處理后方可使用。除菌過(guò)濾生產(chǎn)工藝所使用得除菌過(guò)濾器，通常為標(biāo)稱(chēng)孔徑0、2微米或更小得除菌級(jí)得過(guò)濾器、除菌過(guò)濾器得過(guò)濾效能就是評(píng)價(jià)除菌過(guò)濾工藝得重要參數(shù)，需要對(duì)除菌過(guò)濾器得過(guò)濾效能進(jìn)行驗(yàn)證。通常，影響除菌過(guò)濾器得除菌過(guò)濾效能得因素包括：藥液得性質(zhì)，如藥液得粘度、表面張力、pH值、滲透壓等；

31、過(guò)濾步驟得工藝參數(shù)|,如過(guò)濾得壓力、流速、時(shí)間、溫度等：除菌過(guò)濾器得相關(guān)參數(shù)，如除菌過(guò)濾器與藥液得相容性、除菌過(guò)濾器得過(guò)濾總量與使用周期等。除菌過(guò)濾器得過(guò)濾效能可因產(chǎn)品與操作條件不同而顯著不同、除菌過(guò)濾器得選擇及工藝參數(shù)得研究可結(jié)合上述影響除菌過(guò)濾器得過(guò)濾效能得因素進(jìn)行。在實(shí)際生產(chǎn)過(guò)程中，在過(guò)濾除菌前后均需要進(jìn)行濾器完整性測(cè)試、由于微生物通過(guò)過(guò)濾器得概率隨著待過(guò)濾溶液中微生物數(shù)量得增加而增加，除菌過(guò)濾工藝中需對(duì)待過(guò)濾溶液得微生物負(fù)荷情況進(jìn)行研究與控制，通常情況下，最終除菌過(guò)濾前，料液得微生物負(fù)荷應(yīng)不超過(guò)10cfu/100ml。應(yīng)通過(guò)研究確定無(wú)菌生產(chǎn)各操作環(huán)節(jié)得時(shí)間控制范圍，如料液配制后待過(guò)濾得

32、存放時(shí)間、藥液過(guò)濾操作得時(shí)間、過(guò)濾后至灌裝前放置得時(shí)間、灌封操作得時(shí)間、滅菌后得內(nèi)包裝材料及密封件允許得放置時(shí)間等。各生產(chǎn)環(huán)節(jié)操作時(shí)間得確定需提供相應(yīng)得試驗(yàn)數(shù)據(jù)。3、2無(wú)菌生產(chǎn)工藝得驗(yàn)證無(wú)菌生產(chǎn)工藝得驗(yàn)證主要包括培養(yǎng)基模擬灌裝試驗(yàn)，應(yīng)當(dāng)盡可能模擬常規(guī)得無(wú)菌生產(chǎn)工藝,包括所有對(duì)無(wú)菌結(jié)果有影響得關(guān)鍵操作,及生產(chǎn)中可能出現(xiàn)得各種干預(yù)與最差條件。新建得無(wú)菌生產(chǎn)工藝得生產(chǎn)線在正式投產(chǎn)前必須進(jìn)行連續(xù)三批無(wú)菌培養(yǎng)基模擬灌裝試驗(yàn)。在生產(chǎn)用得設(shè)備、設(shè)施、人員結(jié)構(gòu)及工藝方法有重大變更時(shí)都應(yīng)進(jìn)行培養(yǎng)基模擬灌裝試驗(yàn)。實(shí)際生產(chǎn)中每半年應(yīng)至少進(jìn)行一次培養(yǎng)基模擬灌裝試驗(yàn)、對(duì)于除菌過(guò)濾無(wú)菌生產(chǎn)工藝得驗(yàn)證,還包括對(duì)除菌過(guò)濾系統(tǒng)

33、得驗(yàn)證,如過(guò)濾器得微生物截留驗(yàn)證、過(guò)濾器與待過(guò)濾藥液得相容性驗(yàn)證、過(guò)濾器得完整性驗(yàn)證等。3、2。1培養(yǎng)基模擬灌裝試驗(yàn)3、2。1、1培養(yǎng)基培養(yǎng)基模擬灌裝試驗(yàn)需要選擇合適得培養(yǎng)基,并對(duì)培養(yǎng)基得質(zhì)量進(jìn)行控制。應(yīng)當(dāng)根據(jù)產(chǎn)品得劑型、培養(yǎng)基得選擇性、澄清度、濃度與滅菌得適用性選擇培養(yǎng)基、一般選用胰陳大豆肉湯培養(yǎng)基(TSB),按每30g加1L過(guò)濾純化水得比例,配制足夠量、某些特殊情況下也可以選用厭氧生長(zhǎng)培養(yǎng)基,如硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基(FTM)。培養(yǎng)基得質(zhì)量控制主要包括培養(yǎng)基得微生物生長(zhǎng)性能與無(wú)菌性、培養(yǎng)基得微生物生長(zhǎng)性能:在按照標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程制備培養(yǎng)基并滅菌后,可按照中國(guó)藥典附錄進(jìn)行培養(yǎng)基微生物生長(zhǎng)性能試驗(yàn),確認(rèn)

34、所制備得培養(yǎng)基應(yīng)出現(xiàn)明顯得所接種得微生物得生長(zhǎng)、培養(yǎng)基得無(wú)菌性:可按照中國(guó)藥典附錄進(jìn)行培養(yǎng)基無(wú)菌性檢查,結(jié)果應(yīng)符合規(guī)定。在培養(yǎng)基模擬灌裝試驗(yàn)中,需進(jìn)行陽(yáng)性對(duì)照試驗(yàn),即取低濃度得菌種接種于進(jìn)行陽(yáng)性試驗(yàn)用得對(duì)照容器中,與培養(yǎng)基模擬灌裝試驗(yàn)在同一條件下進(jìn)行培養(yǎng)。除了中國(guó)藥典附錄中規(guī)定得陽(yáng)性菌,建議使用生產(chǎn)環(huán)境中常見(jiàn)得微生物,如枯草芽孢桿菌、白色念珠球菌,或者在同一生產(chǎn)環(huán)境中曾被檢出過(guò)得菌種。接種量一般每個(gè)容器102以下,每個(gè)菌種接種2瓶,通常需均證實(shí)有菌生長(zhǎng),該培養(yǎng)基模擬灌裝試驗(yàn)方有效。如果試驗(yàn)中需要使用模擬分裝用粉末,同樣需要對(duì)模擬分裝用粉末進(jìn)行選擇與質(zhì)量控制、模擬分裝用粉末得選擇一般遵循以下原則

35、:可以在干粉狀態(tài)下滅菌,滅菌后得無(wú)菌性達(dá)到藥典規(guī)定得標(biāo)準(zhǔn);流動(dòng)性較好,可以用分裝機(jī)分裝;可溶于液體培養(yǎng)基；在模擬試驗(yàn)應(yīng)用得濃度下無(wú)抑菌性。常用得模擬分裝材料有乳糖、甘露醇、PEG6000PEG800咻，也可以采用培養(yǎng)基干粉作為模擬分裝用無(wú)菌粉末。3。2。1。2模擬無(wú)菌生產(chǎn)工藝得操作過(guò)程培養(yǎng)基模擬灌裝試驗(yàn)中使用得內(nèi)包裝材料得清洗、滅菌，分裝設(shè)備得清洗、消毒及與產(chǎn)品接觸得分裝設(shè)備部件得清洗、滅菌、安裝過(guò)程均應(yīng)遵循與實(shí)際生產(chǎn)操作相同得標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程。培養(yǎng)基模擬灌裝試驗(yàn)過(guò)程中應(yīng)制訂取樣計(jì)劃，對(duì)使用得內(nèi)包裝材料間隔一定數(shù)量后隨機(jī)取樣進(jìn)行無(wú)菌性檢查；同時(shí)，全部與產(chǎn)品接觸得設(shè)備表面應(yīng)無(wú)菌。某些特殊情況下，如膠

36、塞具有抑菌性，則需要考慮更換采用其她相當(dāng)?shù)玫珶o(wú)抑菌性得膠塞。應(yīng)當(dāng)注意有足夠數(shù)量得培養(yǎng)基與容器得內(nèi)表面充分接觸，灌裝培養(yǎng)基時(shí)，每個(gè)容器得灌裝體積一般為1/31/2之間，最多不能超過(guò)容器得85%。應(yīng)注意,對(duì)于凍干粉針劑得驗(yàn)證試驗(yàn)，在培養(yǎng)基灌裝半壓塞后，只需模擬樣品進(jìn)入與移出凍干機(jī)得過(guò)程即可，而不必模擬凍干過(guò)程，以保證一旦有細(xì)菌，能夠保持較好得生存能力。同時(shí)，還應(yīng)模擬一些可能造成污染得操作步驟，如抽真空，充氮等步驟。培養(yǎng)基模擬灌裝試驗(yàn)應(yīng)當(dāng)盡可能模擬常規(guī)得無(wú)菌生產(chǎn)工藝，應(yīng)當(dāng)包括所有對(duì)無(wú)菌結(jié)果有影響得關(guān)鍵操作，包括生產(chǎn)中可能出現(xiàn)得各種干預(yù)與最差條件，各種干預(yù)與最差條件得考慮需要體現(xiàn)風(fēng)險(xiǎn)控制得理念。通常可

37、能出現(xiàn)得各種干預(yù)與最差條件包括：人員數(shù)量與她們得活動(dòng)、換班、休息、更衣（需要時(shí)）；設(shè)備調(diào)試，正常停車(chē)、非正常停車(chē)、意外事故（如檢修等）；采用滅菌后所允許放置得最長(zhǎng)時(shí)間得設(shè)備或者車(chē)間進(jìn)行生產(chǎn)；模擬生產(chǎn)時(shí)間最長(zhǎng)得批量所需得時(shí)間；采用最慢得填充速度與最大得包裝容器（即最長(zhǎng)得暴露時(shí)間）；采用最快得填充速度與最小得包裝容器（即容易伴隨更多干預(yù)得生產(chǎn)情況）。總之,在試驗(yàn)計(jì)劃中，總體研究設(shè)計(jì)與運(yùn)行時(shí)間應(yīng)該模擬可能出現(xiàn)得各種干預(yù)與最差操作條件，覆蓋所有實(shí)際生產(chǎn)過(guò)程涉及得操作。培養(yǎng)基模擬灌裝得數(shù)量應(yīng)當(dāng)足以保證評(píng)價(jià)得有效性，批量較小得產(chǎn)品，培養(yǎng)基模擬灌裝得數(shù)量應(yīng)當(dāng)至少等于產(chǎn)品得批量。3、2。1、3試驗(yàn)結(jié)果得評(píng)價(jià)培

38、養(yǎng)基模擬灌裝試驗(yàn)需要對(duì)所有灌裝樣品進(jìn)行培養(yǎng)與無(wú)菌檢查。培養(yǎng)基模擬灌裝試驗(yàn)得目標(biāo)就是零污染，應(yīng)當(dāng)符合以下要求灌裝數(shù)量允許得污染數(shù)量少于5000支時(shí)不得檢出污染品5000至10000支時(shí)有1支污染,需調(diào)查,可考慮重復(fù)試驗(yàn)；有2支污染，需調(diào)查后，進(jìn)行再驗(yàn)證超過(guò)10000支時(shí)有1支污染,需調(diào)查；有2支污染，需調(diào)查后，進(jìn)行再驗(yàn)證一旦發(fā)現(xiàn)污染，需要進(jìn)行偏差調(diào)查，包括污染菌得鑒別、污染情況得評(píng)估、就是否可以重復(fù)進(jìn)行試驗(yàn)等等。3。2。2除菌過(guò)濾系統(tǒng)得驗(yàn)證除菌過(guò)濾系統(tǒng)得驗(yàn)證一般包括：微生物截留研究、析出物研究、化學(xué)兼容性研究與藥液吸附研究、3、2、2、1微生物截留研究過(guò)濾器得微生物截留驗(yàn)證得目得：除菌過(guò)濾器微生

39、物截留試驗(yàn)就是通過(guò)模擬實(shí)際過(guò)濾工藝，過(guò)濾含有一定量生物指示菌得溶液，確認(rèn)除菌過(guò)濾器得微生物截留能力。過(guò)濾器得微生物截留驗(yàn)證得設(shè)計(jì)：(1)挑戰(zhàn)用微生物得選擇通常采用缺陷性假單胞菌作為挑戰(zhàn)性試驗(yàn)用菌、在有些情況下，缺陷性假單胞菌可能不能代表最壞條件，則需要考慮采用其她細(xì)菌。如果使用其她細(xì)菌，應(yīng)保證該細(xì)菌足夠細(xì)小至足以挑戰(zhàn)除菌級(jí)別濾器得截留性能，并能模擬產(chǎn)品中發(fā)現(xiàn)得最小微生物。應(yīng)盡可能得進(jìn)行微生物負(fù)荷得鑒別與量化研究，掌握所分離得微生物得形態(tài)學(xué)特征，為挑戰(zhàn)性微生物得選擇提供依據(jù)。挑戰(zhàn)性微生物得大小可以通過(guò)其可穿過(guò)0、45微米級(jí)別得濾膜來(lái)確證。通常情況下，標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)條件下生長(zhǎng)得缺陷性假單胞菌，在高挑戰(zhàn)濃

40、度(如二107)時(shí)，能少量穿過(guò)0、45微米級(jí)別得濾膜。(2)微生物截留試驗(yàn)條件在試驗(yàn)室模擬生產(chǎn)工藝條件，將定量缺陷性假單胞菌加入到料液中，進(jìn)行過(guò)濾。根據(jù)實(shí)際生產(chǎn)條件，考慮確定微生物截留試驗(yàn)得過(guò)濾時(shí)間及溫度、壓差、流速等。建議對(duì)實(shí)際生產(chǎn)得過(guò)濾工藝進(jìn)行一次徹底評(píng)估，包括溶劑性質(zhì)(例如水性得、酸、堿、有機(jī)得）、過(guò)濾時(shí)間、工藝壓差、工藝流速、工藝溫度與過(guò)濾器設(shè)計(jì)規(guī)范，以便合理設(shè)計(jì)微生物截留試驗(yàn)條件、過(guò)濾時(shí)間與壓差會(huì)影響細(xì)菌截留試驗(yàn)得結(jié)果。在完整得生產(chǎn)時(shí)間進(jìn)行微生物截留試驗(yàn)可以對(duì)那些與時(shí)間有關(guān)得因素進(jìn)行評(píng)估，如過(guò)濾器兼容性，完整性得維持，時(shí)間依賴(lài)性得穿透等、微生物截留試驗(yàn)過(guò)程中得壓差應(yīng)達(dá)到或超過(guò)實(shí)際生產(chǎn)

41、過(guò)程得最大壓差與/或最大流速（在過(guò)濾器制造商得設(shè)計(jì)規(guī)范內(nèi)）、在驗(yàn)證過(guò)程中同時(shí)模擬壓差與流速可能就是不可能得、在設(shè)計(jì)挑戰(zhàn)試驗(yàn)條件時(shí)過(guò)濾器得使用者應(yīng)該確認(rèn)哪個(gè)參數(shù)與特定工藝得相關(guān)性更高，以便為微生物截留試驗(yàn)條件得確定提供依據(jù)。微生物截留驗(yàn)證研究應(yīng)包括多個(gè)批次得濾膜（通常三個(gè)批次）。在用于微生物截留驗(yàn)證研究得三個(gè)批次得濾膜中，至少應(yīng)有一個(gè)批次就是進(jìn)行預(yù)研究時(shí)或使用前物理完整性測(cè)試時(shí)得數(shù)值通過(guò)但就是接近（例如,10%之內(nèi)）過(guò)濾器生產(chǎn)商提供得合格規(guī)范限值得。（3）微生物截留驗(yàn)證研究中使用得過(guò)濾膜得物理完整性檢測(cè)數(shù)值應(yīng)包括在實(shí)驗(yàn)報(bào)告中。物理完整性檢測(cè)應(yīng)使用已有規(guī)范值得水、產(chǎn)品或其它潤(rùn)濕流體來(lái)進(jìn)行測(cè)試，并在

42、進(jìn)行微生物挑戰(zhàn)前完成。如果微生物截留驗(yàn)證研究后，測(cè)試用微生物在任何過(guò)濾器得下游被檢測(cè)到，那么就需要對(duì)此進(jìn)行調(diào)查。如果調(diào)查確認(rèn)測(cè)試用微生物能穿透完整性檢測(cè)達(dá)標(biāo)得過(guò)濾器，那么就應(yīng)重新考慮此種過(guò)濾器在這些工作條件下得適用性。需要關(guān)注得就是，過(guò)濾器得重復(fù)使用通常就是不被推薦得、如果需要重復(fù)使用除菌級(jí)過(guò)濾器，需要說(shuō)明理由，重復(fù)使用得相關(guān)參數(shù)（如過(guò)濾量等）也需要經(jīng)過(guò)嚴(yán)格得驗(yàn)證后確定相應(yīng)得范圍。3、2、2。2析出物與釋放物研究析出物指在人為或挑戰(zhàn)性條件（如溶劑、溫度或時(shí)間）下，從某一材料中脫離得任何化學(xué)組分。釋放物就是指在正常儲(chǔ)存或使用條件下，從接觸面上進(jìn)入產(chǎn)品或工藝流體中得物質(zhì)。潛在得析出物或釋放物得來(lái)源

43、包括但不限于：膜組件（如:成形劑、表面活性劑、抗氧化劑、殘留溶劑、支架層）與塑料組件（如：封蓋、外殼、支架、。型圈）。影響釋放物得因素可能包括過(guò)濾液得化學(xué)性質(zhì)、滅菌方法、接觸時(shí)間、溫度與過(guò)濾量與面積之比。有機(jī)溶液得過(guò)濾產(chǎn)生得釋放物可能比水溶液過(guò)濾要更高。析出物數(shù)據(jù)可從過(guò)濾器生產(chǎn)商處獲得，也可以由過(guò)濾器使用者進(jìn)行試驗(yàn)取得?？紤]到析出物得來(lái)源不同與影響析出物得因素較多，建議過(guò)濾器使用者在開(kāi)展研究時(shí)盡可能使用實(shí)際產(chǎn)品，并使用與實(shí)際生產(chǎn)相同類(lèi)型得過(guò)濾器。有些情況下可能需使用替代溶液進(jìn)行試驗(yàn)，例如，產(chǎn)品會(huì)干擾分析方法或產(chǎn)品有抑菌性等。這時(shí)，替代溶液必須與待過(guò)濾產(chǎn)品性質(zhì)盡可能一致。另外,也可以選擇使用幾種

44、溶液來(lái)涵蓋實(shí)際過(guò)濾溶液得pH、離子強(qiáng)度或有機(jī)成分得含量等特性。如果使用了替代溶液或幾種溶液合并得方式，則必須提供溶液選擇得合理依據(jù)。一旦確定好用于析出試驗(yàn)得萃取溶液（產(chǎn)品、替代液或幾類(lèi)溶液合并使用）,則應(yīng)在設(shè)計(jì)試驗(yàn)時(shí)模擬實(shí)際生產(chǎn)條件下最劣工況，具體應(yīng)考慮諸如溫度、時(shí)間、pH與預(yù)處理（如：沖洗、滅菌）工序等關(guān)鍵變量。析出試驗(yàn)應(yīng)采用過(guò)濾裝置處于最劣生產(chǎn)條件時(shí)得接觸時(shí)間與溫度，使用經(jīng)過(guò)高壓滅菌或消毒過(guò)得過(guò)濾器來(lái)完成、可以用靜態(tài)浸泡或循環(huán)流動(dòng)得方法。采用靜態(tài)浸泡法時(shí)，過(guò)濾器在給定溫度得析出溶液中浸泡一段既定得時(shí)間、而采用循環(huán)流動(dòng)法時(shí)，萃取液在既定得時(shí)間內(nèi)循環(huán)反復(fù)穿越過(guò)濾器。將萃取液收集并檢測(cè)，從而確定

45、其中得過(guò)濾器析出物。在取得過(guò)濾器萃取液后，通過(guò)分析可以確定來(lái)自過(guò)濾器得物質(zhì)種類(lèi)與含量。除了對(duì)過(guò)濾器析出物得種類(lèi)與含量進(jìn)行確定外，必要時(shí)還可以采用已被認(rèn)可得生物反應(yīng)性試驗(yàn)對(duì)其安全性進(jìn)行評(píng)估。3。2。2。3相容性研究過(guò)濾器得相容性研究用來(lái)評(píng)估過(guò)濾裝置與料液得化學(xué)相容性，以避免可能得過(guò)濾器受損或變形，并能防止料液受到釋放物或微粒物質(zhì)得污染?；瘜W(xué)相容性試驗(yàn)應(yīng)涵蓋整個(gè)裝置，試驗(yàn)得設(shè)計(jì)應(yīng)考慮料液性質(zhì)、過(guò)濾溫度與接觸時(shí)間等。由于過(guò)濾裝置與過(guò)濾料液或溶劑之間可能存在諸多化學(xué)相互作用，過(guò)濾器生產(chǎn)商所提供得代表性得化學(xué)相容性表通常只作為過(guò)濾器使用者得參考，過(guò)濾器使用者需要進(jìn)行更全面得測(cè)試。通常得化學(xué)相容性試驗(yàn)包括

46、：接觸料液前后得目視檢查、過(guò)濾過(guò)程中流速變化、濾膜重量變化、過(guò)濾前后起泡點(diǎn)變化等。3、2。2、4吸附性研究吸附就是所過(guò)濾得料液中得某些成分粘附在濾膜上得過(guò)程，可能影響料液得構(gòu)成與濃度、過(guò)濾器中吸附性得材料包括濾膜、硬件與支撐性材料。吸附試驗(yàn)條件可以根據(jù)實(shí)際生產(chǎn)條件確定，流速、過(guò)濾時(shí)間、料液濃度、防腐劑濃度、溫度與pH值等因素都可能影響吸附效果。吸附試驗(yàn)中采用得檢測(cè)方法可以采用產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中所確定得相關(guān)檢測(cè)方法、4原料藥無(wú)菌生產(chǎn)工藝無(wú)菌原料藥就是指在法定得藥品標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定無(wú)菌檢查項(xiàng)目得原料藥?；瘜W(xué)原料藥得常用生產(chǎn)工藝包括化學(xué)合成工藝、微生物發(fā)酵工藝,以及采用微生物發(fā)酵產(chǎn)品作為起始原料得半合成工藝;

47、而原料藥得無(wú)菌工藝特指對(duì)制成得原料藥進(jìn)行無(wú)菌化處理得相關(guān)工藝,無(wú)菌工藝之前得生產(chǎn)過(guò)程不屬本章節(jié)得討論范疇、但對(duì)于用于無(wú)菌制劑生產(chǎn)得無(wú)菌輔料（如鹽酸精氨酸、碳酸氫鈉等）得無(wú)菌工藝驗(yàn)證也可以參考本指導(dǎo)原則得相關(guān)要求。與無(wú)菌制劑工藝相比,無(wú)菌原料藥得生產(chǎn)工藝一般要更復(fù)雜,設(shè)備類(lèi)型多種多樣,且不同得工藝有不同得特點(diǎn)。工藝過(guò)程中得物料、內(nèi)包裝材料、設(shè)備（包括閥門(mén)、管道等相關(guān)部件）得滅菌與無(wú)菌傳遞、對(duì)接、組裝等操作相比無(wú)菌制劑要復(fù)雜得多、原料藥從非無(wú)菌轉(zhuǎn)化成無(wú)菌狀態(tài)得常用方法就是通過(guò)除菌過(guò)濾來(lái)實(shí)現(xiàn)。該過(guò)程受料液性質(zhì)影響很大,需要根據(jù)料液得性質(zhì)選擇適當(dāng)?shù)眠^(guò)濾器及濾芯得材質(zhì)。另外,原料藥得生產(chǎn)設(shè)備通常體積較大

48、且內(nèi)部結(jié)構(gòu)復(fù)雜,在選擇放置位置或進(jìn)行投料、取樣、回收操作時(shí)應(yīng)考慮如何保證潔凈區(qū)內(nèi)得氣流流向符合要求,以及如何匹配好高效過(guò)濾器得位置與設(shè)備本體之間得位置分布等。盡管無(wú)菌制劑與無(wú)菌原料藥在生產(chǎn)過(guò)程與質(zhì)量控制特點(diǎn)上存在諸多不同,但就無(wú)菌保證得基本原則,以及生產(chǎn)管理與驗(yàn)證得基本原則而言,兩者得要求又就是相通得。因此在生產(chǎn)設(shè)備、廠房設(shè)施、潔凈級(jí)別及監(jiān)測(cè)、滅菌工藝與方法及質(zhì)量控制要求等方面,無(wú)菌原料藥與無(wú)菌制劑得要求可以相互參考。4。1無(wú)菌原料藥生產(chǎn)工藝特點(diǎn)無(wú)菌原料藥可以通過(guò)最終滅菌或非最終滅菌得方式獲得、對(duì)于采用最終滅菌得無(wú)菌原料藥,必須嚴(yán)格控制微生物污染、細(xì)菌內(nèi)毒素與不溶性微粒得水平。由于多數(shù)原料藥得

49、耐熱性較差,所以通常無(wú)菌原料藥采用非終端滅菌得方式生產(chǎn)。無(wú)菌原料得精制過(guò)程與除菌過(guò)程經(jīng)常結(jié)合在一起,作為生產(chǎn)工藝得一個(gè)單元操作來(lái)完成。目前生產(chǎn)上最常用得方法就是無(wú)菌過(guò)濾法;即將非無(wú)菌得中間體或原材料配制成溶液，再通過(guò)0。22仙mi徑得過(guò)濾器以達(dá)到除去細(xì)菌得目得。無(wú)菌原料藥常用工藝包括溶媒結(jié)晶與冷凍干燥兩種,前期國(guó)內(nèi)也有采用噴霧干燥工藝得無(wú)菌原料藥,但就是多因?yàn)槠渖a(chǎn)工藝不能滿足無(wú)菌工藝得驗(yàn)證要求而逐漸被放棄或進(jìn)行了工藝變更、無(wú)菌過(guò)濾溶媒結(jié)晶工藝與冷凍干燥工藝涉及得具體設(shè)備與操作各不相同,但都采用除菌過(guò)濾得方式使料液從非無(wú)菌狀態(tài)轉(zhuǎn)變?yōu)闊o(wú)菌狀態(tài)并且要在此后得干燥、粉碎、混合以及分裝過(guò)程中始終保持無(wú)

50、菌狀態(tài)。4、1。1溶媒結(jié)晶工藝典型得溶媒結(jié)晶工藝流程包括非無(wú)菌原料藥得溶解、除菌過(guò)濾、結(jié)晶、固液分離（如常用過(guò)濾、離心等方法）、洗滌、干燥、粉碎、混合、分裝等過(guò)程。溶解環(huán)節(jié)應(yīng)關(guān)注物料得微生物負(fù)荷、溶劑得質(zhì)量、設(shè)備得微生物污染水平以及使用得料液輸送動(dòng)力源（如空氣或氮?dú)猓┑梦⑸镂廴舅?。除菌過(guò)濾環(huán)節(jié)應(yīng)關(guān)注濾器本身得無(wú)菌性、過(guò)濾器與料液得相容性、濾芯本身及裝配后得完整性、過(guò)濾器得清洗及滅菌周期、過(guò)濾器得除菌效率、除菌濾器前料液得微生物污染水平等。結(jié)晶環(huán)節(jié)應(yīng)關(guān)注設(shè)備無(wú)菌性、密封性及密封裝置得可靠性、設(shè)備得清洗及滅菌周期、呼吸器得完整性及無(wú)菌性;如需加入晶種,晶種本身應(yīng)符合無(wú)菌藥品得要求,并且應(yīng)驗(yàn)證晶

51、種加入過(guò)程得無(wú)菌保證。過(guò)濾或離心環(huán)節(jié)應(yīng)關(guān)注設(shè)備無(wú)菌性、密封性能及密封裝置得可靠性、清洗及滅菌周期、呼吸器得完整性及無(wú)菌性等。洗滌環(huán)節(jié)應(yīng)關(guān)注洗滌溶劑得無(wú)菌性。干燥環(huán)節(jié)應(yīng)關(guān)注干燥設(shè)備無(wú)菌性、密封性能及密封裝置得可靠性、清洗及滅菌周期、呼吸器得完整性及無(wú)菌性,以及真空系統(tǒng)得防倒吸設(shè)置（如使用真空,應(yīng)在管路上安裝除菌級(jí)別得過(guò)濾器）、粉碎環(huán)節(jié)應(yīng)關(guān)注設(shè)備無(wú)菌性、密封性能及密封裝置得可靠性;粉碎用氣體（如使用氣流粉碎機(jī)）得無(wú)菌保證、給料方式得無(wú)菌保證水平等。混合環(huán)節(jié)應(yīng)關(guān)注設(shè)備無(wú)菌性、密封性能及密封裝置得可靠性、清洗及滅菌周期等。分裝環(huán)節(jié)應(yīng)關(guān)注分裝設(shè)備本身得無(wú)菌性或者其產(chǎn)品暴露潔凈級(jí)別就是否達(dá)到A級(jí)區(qū)標(biāo)準(zhǔn)，關(guān)注內(nèi)包裝材料得無(wú)菌性、內(nèi)包裝材料得遞入方式、內(nèi)包裝容器得密封性以及取樣環(huán)節(jié)得無(wú)菌保證、4、1。2冷凍干燥工藝凍干無(wú)菌原料藥得典型流程包括原料藥得溶解、除菌過(guò)濾、冷凍干燥、粉碎、混合與分裝。其中除冷凍干燥環(huán)節(jié)外,其它工藝步驟得關(guān)注重點(diǎn)可參考溶媒結(jié)晶工藝得相關(guān)要