熒光PCR法檢測GBS的臨床意義

1、THE CLINICAL SIGNIFICANCE OF TESTING GBS BY FQ-PCR熒光熒光PCR法檢測法檢測 GBS的臨床意義的臨床意義國家-地方聯(lián)合工程實驗室鐘菲菲B族鏈球菌的介紹GBS顯微鏡圖20世紀30年代國外學者 Fry報道了3例死于GBS引起的產后心內膜炎病例, 由此證實了GBS為人類致病菌。 20世紀60年代首次發(fā)現(xiàn)其可以導致嚴重的新生兒感染，引起新生兒死亡。 20世紀70年代，GBS已被證實為圍產期母嬰感染的主要致病菌之一，在圍產醫(yī)學中占有不可忽視的地位。表面蛋白質Ag莢膜多糖Ag(C抗原)肽聚糖磷壁酸B族鏈球菌(group B streptococcus,GB

2、S)學名無乳鏈球菌，為革蘭氏陽性球菌，寄居于陰道和直腸，屬于條件致病菌。B族鏈球菌的介紹根據(jù)其是否溶血分：不完全溶血、完全溶血、不溶血3種。根據(jù)其致病血清分：I a、I b、 I c、 II、 I V和V，其毒力莢膜多糖抗原、脂磷壁酸、神經氨酸酶等有關（發(fā)達國家（60%）發(fā)展中國家I bI b、 I c I c、 II II（74%74%）。）。健康女性1535% 1535% 的生殖道和消化道中存在GBSGBS菌落,而且種族、人群有明顯區(qū)別。GBS定植表現(xiàn)為一過性,間歇性或持久性,導致孕婦不同時期GBS檢測結果不同。性生活活躍,多次妊娠,妊娠期間糖尿病等因素更容易獲得GBS。B族鏈球菌流行病學

3、GBSGBS1 1（ 1535% 1535% ）一般健康良好的并不致病。2 2（約（約25%25%）早產，胎膜早破，泌尿系感染、胎膜感染、宮內膜感染和創(chuàng)傷感染。3 3（約（約50%50%）約約1 12%2%新生兒發(fā)病新生兒發(fā)病新生兒肺炎，敗血癥和腦膜炎，發(fā)育障礙，可導致新生兒聽力和視力受損以及腦癱等后遺癥。 B族鏈球菌危害GBS陽性的孕婦中新生兒感染率陽性的孕婦中新生兒感染率GBS對孕婦的危害抑制乳酸桿菌抑制乳酸桿菌生長，生長，pHpH值值升高，利于雜升高，利于雜菌。菌。胎膜早破羊膜腔胎膜早破羊膜腔感染，早產、晚感染，早產、晚期先兆流產。期先兆流產。GBSGBS對絨毛膜的對絨毛膜的吸附力及穿透

4、力最吸附力及穿透力最強，宮內感染的主要原因。強，宮內感染的主要原因。胎膜表胎膜表面張力面張力降低降低GBS炎性細胞炎性細胞吞噬作用吞噬作用細菌代謝細菌代謝蛋白質水蛋白質水解酶解酶“釋放釋放”磷酸酯酶磷酸酯酶A2，前前列腺素列腺素，細胞因子細胞因子IL- 1、IL- 6、IL- 8、IL- 12胎膜早破胎膜早破早產早產刺激子宮收縮 GBS對孕婦的危害關于263例高危孕婦的研究GBS感染患者治療后的情況如下: 早產62例中有13例GBS感染經治療后，其中6例至37周后分娩，時間最長1個月，新生兒體重達2 600 g；胎膜早破早產136例中有31例GBS感染經治療后，其中6例延長了孕周， 最長延長1

5、5天，達足月分娩；晚期先兆流產38例中有9例GBS感染，經過治療，4例早產，孕周增長最長的達6周（24周入院至302周剖宮產結束分娩，早產兒體重1 800 g經搶救存活，隨訪6個月目前情況良好）。：經經GBSGBS干預治療后干預治療后, ,可延長孕周可延長孕周, ,使胎兒獲得宮內生長機會，使胎兒獲得宮內生長機會，增加存活率和生存質量增加存活率和生存質量, ,降低極低出生體重兒和圍產兒死降低極低出生體重兒和圍產兒死亡率亡率, ,減少母嬰感染率及其并發(fā)癥。減少母嬰感染率及其并發(fā)癥。參考文獻：中國婦幼保健2009年第24卷 B族溶血性鏈球菌感染與胎膜早破、早產、晚期先兆流產的關系與干預劉劍等. GB

6、S對孕婦的危害GBS對新生兒的危害早發(fā)型：0-6 天遲發(fā)型：7-89 天癥狀包括呼吸窘迫，呼吸暫停，以敗血癥最癥狀包括呼吸窘迫，呼吸暫停，以敗血癥最常見，肺炎和腦膜炎是早發(fā)型的形式常見，肺炎和腦膜炎是早發(fā)型的形式早期病死率高達早期病死率高達5050，近年來，為，近年來，為4-64-6無癥狀帶菌母親分娩傳播。無癥狀帶菌母親分娩傳播。主要為足月兒主要為足月兒 和和 近近 足足 月兒月兒 。早發(fā)型感染危害早發(fā)型感染危害James Hanley. Neonatal infections: group B streptococcusJ. Clinical Evidence. GBS對新生兒的危害新生兒B

7、族鏈球菌感染死亡1例分析 新生兒出生后3h吃奶差，反應欠佳； 出生后8h情況加重，四肢微涼、體溫正常； 出生后13h呼吸急促、反應低下、刺激不哭。以敗血癥、呼吸功能不全、新生兒肺炎急轉兒科； 出生后21h病情進一步加重，提示嚴重感染、酸中毒、低鈣及心肌受損； 出生后38h出現(xiàn)呼吸表淺、暫停等； 出生后41h呼吸首先停止，然后心跳停止，經搶救無效死亡。資料來源：資料來源：中國實用婦科與產科雜志2008年10月第24卷第10期 新生兒B族鏈球菌感染死亡1例分析北京兒童醫(yī)院新生兒肺炎死亡病例中B族鏈球菌的檢測收集200 例1953年至2004年間新生兒肺炎死亡病例回顧研究。死亡的200例肺炎患兒，有

8、130例查實GBS陽性感染，高達65%。130例GBS陽性患兒，有74名7d，56名7d。早發(fā)型中29名為早產兒。200例患兒中，75例有完整臨床資料。其中35例可查到一項或多項與GBS感染有關的危險因素，如早產，低體重，胎膜早破，羊水異常等，GBS檢測結果均為陽性。結論：GBS是新生兒肺炎死亡病例中的重要病原，尤其在早發(fā)型肺炎病例中GBS感染占很大比重。中華兒科雜志2006年11月第44卷第11期新生兒肺炎死亡病例中B族鏈球菌的檢測新生兒誤診分析1例 西南某三甲軍區(qū)醫(yī)院 政委孫女出生后出現(xiàn)感染，經臨床科室、檢驗科經驗判斷，疑似MRSA感染，建議臨床使用萬古霉素。政委不認可該結果。 后經過熒光

9、PCR法快速檢測，確診為B族鏈球菌感染，而臨床的癥狀與鏈球菌感染表現(xiàn)相近，經過B族鏈球菌治療方案后，2天即痊愈。GBS對新生兒的危害 常表現(xiàn)為隱匿發(fā)病，最初為腦膜炎，常表現(xiàn)為隱匿發(fā)病，最初為腦膜炎，如發(fā)燒，昏睡嘔吐等，多伴敗血癥如發(fā)燒，昏睡嘔吐等，多伴敗血癥 病死率約病死率約15%15%，但存活者，但存活者30%-50%30%-50%嚴重后遺癥，癡呆、腦積水，智力障礙等。嚴重后遺癥，癡呆、腦積水，智力障礙等。 感染一般系醫(yī)院內感染，感染一般系醫(yī)院內感染，90%90%主要是主要是型引起型引起 發(fā)病多為產科并發(fā)癥的早產兒和低體重發(fā)病多為產科并發(fā)癥的早產兒和低體重兒，發(fā)病率是足月的兒，發(fā)病率是足月的

10、7 7倍，若發(fā)生膿毒血癥，倍，若發(fā)生膿毒血癥，病死率高。病死率高。晚發(fā)型感染危害晚發(fā)型感染危害新生兒B族鏈球菌腦膜炎13例臨床分析和隨訪溫州某醫(yī)院2005年至2013年5月收治的13例新生兒B族鏈球菌腦膜炎的臨床資料進行回顧性分析。13例患兒治愈7例，好轉自動出院4例，因嚴重并發(fā)癥死亡2例。出院1個月后1例早發(fā)型伴腦積水早產兒在家中死亡。 7例隨訪至1024個月：3例早發(fā)型患兒中，生長發(fā)育正常2例，運動發(fā)育落后1例；4例晚發(fā)型患兒，生長正常發(fā)育1例，運動發(fā)育落后2例，癲癇發(fā)作1例。結論：新生兒GBS腦膜炎住院時間長，死亡率高，易出現(xiàn)神經系統(tǒng)并發(fā)癥和后遺癥。中華兒科雜志2014年2月第52卷第2

11、期90年代美國新生兒的發(fā)病率第一組委會第一組委會AAP的報表的報表CDC準則草案公布準則草案公布共識準則共識準則B組鏈球菌協(xié)會成立組鏈球菌協(xié)會成立1996年GBS的預防共識準則1996年預防GBS的共識準則概述了兩種方法，對確定需要的IAP婦女?；A篩查：在35-37周的胃腸道，泌尿生殖道基于風險的方法： 早產，胎膜早破18小時 或產時發(fā)熱T38C美國CDC預防共識準則2010年美國疾病預防控制中心對早發(fā)性B族鏈球菌病的預防指南指出：1、在35-37孕周的孕婦的普遍篩查2、青霉素是首選藥物，氨芐青霉素也可進行替代3、不推薦分娩期間常規(guī)使用抗生素預防感染基數(shù)大，正常寄居產婦影響新生兒：早發(fā)、晚發(fā)

12、疾病；死亡率高糾紛、風險及時篩查干預美國：發(fā)病率、死亡率大幅下降中國開展推廣2011年2014年2010年2015年孕前和孕期保健指南（第一版）：建議在孕35-37周進行B族鏈球菌的篩查。圍產期GBS預防指南：所有孕婦于35-37周篩查。早產臨床診斷與治療指南：篩查宮頸陰道GBS感染有可能預防早產。胎膜早破的診斷與處理指南：明確指出胎膜早破是B 族溶血性鏈球菌上行性感染的高危因素，是導致孕婦產時及產褥期感染、胎兒感染及新生兒感染的重要病原菌，應重視GBS感染的防治。中華醫(yī)學會婦產科學分會美國疾病預防控制中心建議權威指南共識權威指南共識全球常規(guī)篩查GBS的地區(qū)中國部分省份及香港，日本等中國部分省

13、份及香港，日本等德國、法國、西班牙、波蘭、瑞士、德國、法國、西班牙、波蘭、瑞士、意大利、比利時、捷克、斯諾文尼亞意大利、比利時、捷克、斯諾文尼亞等等美國、加拿大美國、加拿大澳大利亞澳大利亞肯尼亞肯尼亞阿根廷阿根廷方法方法原理原理優(yōu)點優(yōu)點缺點缺點培養(yǎng)法培養(yǎng)法細菌培養(yǎng)細菌培養(yǎng), ,形態(tài)鑒定形態(tài)鑒定, ,生化鑒定生化鑒定易開展易開展耗時長耗時長,48h,48h以上以上,GBS,GBS培培養(yǎng)難度高養(yǎng)難度高, ,靈敏度差，靈敏度差，容易漏檢容易漏檢免疫方法免疫方法彩色乳膠免疫層析法彩色乳膠免疫層析法膠體金膠體金快速、簡便，無快速、簡便，無需任何輔助儀器需任何輔助儀器設備設備靈敏度和特異性較差靈敏度和特異

14、性較差 只取一個部位，易漏只取一個部位，易漏檢檢微生物自動微生物自動分析鑒定系分析鑒定系統(tǒng)統(tǒng)生物與計算機的聯(lián)合生物與計算機的聯(lián)合應用應用全面的自動化全面的自動化時間長，成本高，設備時間長，成本高，設備昂貴昂貴熒光熒光PCRPCR采用采用PCRPCR技術結合分技術結合分子熒光標記探針技術，子熒光標記探針技術，快速、準確地檢測快速、準確地檢測GBSGBS快速快速4h4h內出結果內出結果 靈敏度高靈敏度高特異性強特異性強重復性高重復性高需有需有PCRPCR實驗室實驗室GBS檢測方法檢測方法 在羊血培養(yǎng)基上培養(yǎng)48h后的GBS菌落 ： 形成灰白、光滑、圓形突起小菌落 有明顯的溶血圈。GBS培養(yǎng)法培養(yǎng)法

15、 熒光PCR儀給出客觀的判別標準陽性弱陽陰性PCR檢測方法檢測方法B族鏈球菌核酸檢測試劑盒（熒光族鏈球菌核酸檢測試劑盒（熒光PCR法）法）優(yōu)點：簡便快捷、靈敏度高（物理破碎）重復性好、特異性強（分子信標）閉管操作、避免污染國內首家，發(fā)明專利 GBS核酸檢測試劑盒適用核酸檢測試劑盒適用生殖道分泌物生殖道分泌物和直腸分泌物和直腸分泌物標本類型標本類型熒光PCR法的取材方法新生兒鼻咽拭子的取材方法新生兒鼻咽拭子的取材方法GBS感染檢查時機及治療方案新生兒：新生兒：母親陽性、母親陽性、出生后出生后有高危疑似有高危疑似GBS感感染癥狀、染癥狀、同產房內同產房內有陽性者有陽性者不需要干預不需要干預GBS（

16、+）對癥治療對癥治療GBS（-）產時高危產時高危因素：因素：分娩時分娩時37 周，周，產時發(fā)熱產時發(fā)熱38 ,胎膜早破胎膜早破12小時小時,進行進行GBS檢測檢測 不需要干預不需要干預GBS（+）立即干預立即干預GBS（-）不需要干預不需要干預孕孕3537周周取陰道和直取陰道和直腸拭子檢測腸拭子檢測上次新生兒上次新生兒GBS感染史感染史本次妊娠有菌尿癥本次妊娠有菌尿癥GBS（+）立即干預立即干預產前干預產前干預有癥狀有癥狀無癥狀無癥狀GBS（-）2010 GBS預防醫(yī)療指南：抗生素治療方案有無青霉素過敏有無青霉素過敏青霉素青霉素G G，首次劑量，首次劑量500500萬單萬單位位, ,然后每然后

17、每4 4小時小時250250300300萬單萬單位，直至分娩或者氨芐西林，位，直至分娩或者氨芐西林，首次劑量首次劑量2g2g，然后每，然后每4 4個小時個小時1g1g，直到分娩，直到分娩病人在接受青霉素或頭孢病人在接受青霉素或頭孢菌素時有無出現(xiàn)下列任一菌素時有無出現(xiàn)下列任一癥狀？癥狀？過敏癥、血管性水腫、呼過敏癥、血管性水腫、呼吸窘迫、蕁麻疹吸窘迫、蕁麻疹頭孢唑啉，首次劑量頭孢唑啉，首次劑量2G2G，然后每，然后每8 8個小時個小時1g1g，直到分娩直到分娩是否對紅霉素和克林是否對紅霉素和克林霉素敏感霉素敏感萬古霉素每萬古霉素每1212小時小時1g1g（靜脈注射）直至分娩（靜脈注射）直至分娩克

18、林霉素每克林霉素每8 8小時小時900mg900mg（靜脈注射）直至分娩（靜脈注射）直至分娩國內治療推薦國內治療推薦321中華醫(yī)學會婦產科學分會產科學組青霉素青霉素G G 首次劑量首次劑量480 480 萬單萬單位靜脈滴注位靜脈滴注,240 ,240 萬單位萬單位/4 h /4 h 直至分娩。直至分娩?；虬逼S青霉素或氨芐青霉素, ,負荷量負荷量2 g 2 g 靜靜脈滴注脈滴注, ,然后每然后每4 4 小時小時1 g 1 g 的的劑量靜脈滴注直至分娩劑量靜脈滴注直至分娩對青霉素過敏者則選對青霉素過敏者則選用頭孢唑啉用頭孢唑啉,2 g ,2 g 作為起作為起始劑量靜脈滴注始劑量靜脈滴注, ,然后然后每每8 8 小時小時1 g 1 g 直至分娩。直至分娩。對頭孢菌素類過敏者對頭孢菌素類過敏者則用紅霉素則用紅霉