防治寄生蟲瘧原蟲的論文(共2篇)

1、本文為網(wǎng)絡(luò)收集精選范文、公文、論文、和其他應(yīng)用文檔，如需本文，請(qǐng)下載防治寄生蟲瘧原蟲的論文（共2篇）本文從網(wǎng)絡(luò)收集而來(lái)，上傳到平臺(tái)為了幫到更多的人，如果您需要使用本文檔， 請(qǐng)點(diǎn)擊下載按鈕下載本文檔（有償下載），另外祝您生活愉快，工作順利，萬(wàn)事 如意！第1篇：延緩寄生蟲惡性瘧原蟲產(chǎn)生的研究瘧疾（Malaria）是全球性嚴(yán)重危害人類健康的重要 傳染病之一，目前全球有90多個(gè)國(guó)家和地區(qū)的20多 億人居住在瘧疾流行區(qū)。撒哈拉以南的非洲國(guó)家感染 瘧疾疫情最重，瘧疾是非洲兒童死亡的最主要原因之 一。東南亞的感染情況僅次于非洲，據(jù)世界衛(wèi)生組織 2008年的報(bào)告，全球30%的瘧疾發(fā)病率和8%的死亡 率集中在這

2、里。雖然2010年世界衛(wèi)生組織報(bào)告：瘧疾 發(fā)病案例由2005年億人次降到2009年億人次；死亡 人數(shù)由2000年萬(wàn)例降到2009年的萬(wàn)例，其中非洲地 區(qū)死亡人數(shù)雖然大幅下降，但是目前瘧疾仍然是世界 六大熱帶病和我國(guó)五大寄生蟲病之一，是威脅人類健 康的主要疾病，給疫區(qū)帶來(lái)沉重的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)，阻礙社 會(huì)的發(fā)展。由于惡性瘧發(fā)病兇險(xiǎn)，愈后差，其病死率 可高達(dá)50%,并且惡性瘧原蟲對(duì)多種抗瘧藥已存在耐 藥性，因此惡性瘧已經(jīng)成為一個(gè)嚴(yán)重的公共衛(wèi)生問(wèn)題。自上世紀(jì)60年代以來(lái)，全球范圍內(nèi)惡性瘧原蟲對(duì) 主要抗瘧藥物氯唾產(chǎn)生了抗藥性，瘧原蟲的抗藥性由 單一性向多藥抗性發(fā)展。惡性瘧原蟲抗藥株的不斷出 現(xiàn)已成為重大的公共

3、衛(wèi)生問(wèn)題，給瘧疾防治工作帶來(lái) 新的挑戰(zhàn)，瘧原蟲抗藥性研究迫在眉睫。鑒于全球惡 性瘧原蟲對(duì)傳統(tǒng)的氯唾、乙胺喀咤、甲氟唾等已產(chǎn)生 耐藥，由于具有抗藥性瘧原蟲會(huì)很快遍布所有惡性瘧 流行地區(qū)，抗藥強(qiáng)度會(huì)不斷增加，原蟲產(chǎn)生抗藥性的 速度遠(yuǎn)比新藥研發(fā)的進(jìn)度快得多，從保護(hù)青蒿素及其 衍生物的角度考慮，世界衛(wèi)生組織建議各國(guó)在青蒿素 及其衍生物的基礎(chǔ)上聯(lián)合其他藥物（ACTs）來(lái)治療惡 性瘧，以延緩瘧原蟲對(duì)青蒿素和其他藥物抗藥性的產(chǎn) 生。1青蒿素類藥物抗藥性的現(xiàn)狀青蒿素及其衍生物是一類全新結(jié)構(gòu)的抗瘧藥，自 其問(wèn)世以來(lái)即以高效、速效、低毒的抗瘧活性得到世 界公認(rèn)，對(duì)氯唾耐藥的惡性瘧依然有效。現(xiàn)在多重抗 藥的惡性瘧原

4、蟲株已在東南亞和南美洲等地廣泛流 行，雖然瘧原蟲已對(duì)多種藥物產(chǎn)生了抗藥性，青蒿素 類藥物仍能夠在幾天內(nèi)治愈超過(guò)90%的瘧疾患者，目 前被全世界公認(rèn)為是一種很有效的抗瘧新藥，但是目 前已有很多的研究提示青蒿素類藥物的敏感性正逐漸 下降，抗藥性的產(chǎn)生是難以避免的。世界衛(wèi)生組織曾 經(jīng)警告說(shuō)，如果失去了 ACTs,人們將再也沒有一個(gè)治 療瘧疾的辦法，或許至少要用十年的時(shí)間才能發(fā)現(xiàn)一 種新的抗瘧藥。迄今為止，還沒有文獻(xiàn)報(bào)道惡性瘧原蟲對(duì)青蒿素 類藥物出現(xiàn)普遍的耐藥性，但有報(bào)道稱用青蒿素類藥 物治療病人時(shí)已經(jīng)出現(xiàn)了敏感性下降，寄生蟲清除時(shí) 間出現(xiàn)延遲和幾周后再燃等情況。最近在柬埔寨西部 的Pailin和泰國(guó)

5、WangPha同時(shí)做了 一項(xiàng)治療無(wú)并發(fā)癥 的惡性瘧患者的研究，分為青蒿琥酯單藥組和青蒿琥 酯聯(lián)用甲氟唾組兩組，單藥治療組青蒿琥酯的劑量為 2mg/kg, d共7d,聯(lián)用組青蒿琥酯4mg/kg, d共3d, 以后給甲氟唾 25mg/kg,分兩次給藥。在柬埔寨的 Pailin寄生蟲清除時(shí)間為84h,泰國(guó)WangPha,為48h, 在過(guò)去幾十年的經(jīng)驗(yàn)表明青蒿素類的藥物可在兩天時(shí) 間內(nèi)迅速清除血液寄生蟲。排除了再次感染，在兩地 單用青蒿琥酯治療組幾周內(nèi)分別有 30%和10%的患者 出現(xiàn)了癥狀復(fù)發(fā)的情況，而聯(lián)合治療組分別有10%和5%的病人再燃。Pailin和WangPha真正的失敗率可能 分別高達(dá)和。

6、2004年柬埔寨第1次報(bào)告用青蒿素 治療惡性瘧出現(xiàn)耐藥以來(lái)，許多在泰國(guó)一緬甸邊境上 出現(xiàn)的 新感染瘧疾”病例，實(shí)際上很可能是再燃。在 緬甸南部還有另一項(xiàng)研究對(duì)青蒿琥酯治療無(wú)并發(fā)癥瘧 疾患者，治療72h后進(jìn)行寄生蟲清除半衰期的分析， 表明72h后有仍可檢測(cè)出原蟲。這是第一次報(bào)告青 蒿素耐藥性起源在緬甸境內(nèi)，這些研究提供的證據(jù)表 明在緬甸的惡性瘧原蟲很可能對(duì)青蒿素敏感性降低。 在泰國(guó)邊境，甲氟唾，青蒿琥酯在體內(nèi)的療效逐步下 降，有研究報(bào)告用青蒿琥酯治療惡性瘧病人，治療第 3d患者的外周血瘧原蟲陽(yáng)性率 2011年達(dá)到28%,而 2000年同樣用青蒿琥酯治療病人，3d后患者外周血瘧 原蟲陽(yáng)性率為0%。

7、惡性瘧原蟲于青蒿素類藥物治療 3d后血液中仍然可以觀察到較多寄生蟲，這就是 延 遲瘧原蟲轉(zhuǎn)陰時(shí)間”。還有研究表明，經(jīng)過(guò)在泰國(guó)青蒿 素治療后第2d、第3d可見瘧原蟲的比例約 30%和 15%,第28d有2%可見瘧原蟲。柬埔寨西部的Pailin, 患者經(jīng)青蒿琥酯單藥治療或甲氟唾， 青蒿琥酯治療2d 后外周血涂片見寄生蟲的比例高達(dá) 73%,治療3d后 患者外周血涂片見到瘧原蟲的比例為 55%。瘧原蟲清 除時(shí)間延長(zhǎng)在越南也有報(bào)道，但相關(guān)研究仍在繼續(xù)， 有待于進(jìn)一步監(jiān)測(cè)及證實(shí)。惡性瘧原蟲對(duì)青蒿素類藥物出現(xiàn)敏感性降低的現(xiàn) 象在亞洲比較突出，而在非洲則不同。在西非馬里共 和國(guó)(R6publiqueduMal

8、i)的研究指出，在這項(xiàng)青蒿素 耐藥性的研究患者外周血中瘧原蟲轉(zhuǎn)陰時(shí)間的中位數(shù) 為32h,遠(yuǎn)低于柬埔寨西部報(bào)告時(shí)間?？赡艿脑?yàn)轳R里2004年以后才廣泛使用青蒿素類藥物，而柬埔寨 使用這類藥物超過(guò)30年，在馬里瘧疾病人得到青蒿素 及衍生物治療的比例遠(yuǎn)低于柬埔寨西部，另外馬里大 量惡性瘧疾病例主要為輸入性病例，病人不會(huì)自行用 藥，這些因素可能使得馬里的瘧原蟲未對(duì)青蒿素類藥 物長(zhǎng)沙耐藥。2009年楊恒林等采用WHO推存的體外微量法做 了緬甸拉咱地區(qū)惡性瘧原蟲對(duì)青蒿琥酯等 7種藥物體 外半數(shù)抑制量（ID5。）測(cè)定，發(fā)現(xiàn)緬甸拉咱地區(qū)惡性 瘧原蟲對(duì)青蒿琥酯的ID5。為/L比1993年作者在該地 區(qū)做的IC

9、50上升倍，提示青蒿琥酯對(duì)惡性的敏感性呈 下降趨勢(shì)。另一項(xiàng)研究用雙氫青蒿素脈唾片（每片含 雙氫青蒿素40mg,磷酸脈唾320mg）2d4次療法治療 緬甸拉咱市惡性瘧原蟲感染陽(yáng)性者 91例，64例全程 隨訪者中，尚有4例（）于服藥后第3d外周血中瘧 原蟲未轉(zhuǎn)陰，但因這4例病人腋溫小于（仍判為臨床 治療有效，這4例患者服藥后隨訪外周血無(wú)性體原蟲 轉(zhuǎn)陰時(shí)間為，比研究者在云南觀察的最長(zhǎng)無(wú)性體原蟲 轉(zhuǎn)陰時(shí)間（63h）長(zhǎng)，這可能與當(dāng)?shù)貝盒辕懺x對(duì)脈唾 和青蒿素類敏感性下降有關(guān)，推測(cè)當(dāng)?shù)夭糠謵盒辕懺?蟲可能對(duì)雙氫青蒿素脈唾片敏感性下降。2青蒿素類藥物抗藥性可能的機(jī)理耐多種抗瘧藥的惡性瘧原蟲是全球瘧疾控制的

10、一 個(gè)主要障礙。雖然青蒿素類藥物抗性關(guān)聯(lián)基因研究被 人們進(jìn)行很多探索，但是到現(xiàn)在為止仍然沒有明確的 結(jié)論。惡性瘧原蟲耐抗瘧藥乙胺喀喔、磺胺、氯陸與 特定的汐外和一 P/cri基因突變相關(guān)。然而，有相當(dāng)大 的爭(zhēng)議為新興突變的耐青蒿素類抗瘧藥衍生藥物標(biāo) 記。一些觀察表明青蒿素抑制惡性瘧原蟲胞漿網(wǎng)織鈣 依賴性ATP酶(sarco/endoplasmiccalcium-dependentATPase 6P/AT-, 有資料表明，青蒿素類藥物可以抑制在非洲爪蟾卵細(xì) 胞內(nèi)表達(dá)P/a的酶活性，如果在該酶的第三跨膜區(qū)引 入L263E這一突變，則解除了青蒿素類藥物對(duì)該酶的 抑制。jambOu等，報(bào)道了位于沿巴西

11、北部邊境的圭 亞那從惡性瘧患者體內(nèi)分離出的蟲株對(duì)蒿甲醛的IC5D值有所升高，通過(guò)測(cè)序，他們發(fā)現(xiàn) P/a的第 769位的絲氨酸突變?yōu)樘於０罚崾綪-/a基因的 突變可能會(huì)使瘧原蟲對(duì)青蒿素的敏感性降低。雖然這 種突變的意義還未確定，這些觀察可能表明S769N突 變可能是一個(gè)藥物抗性標(biāo)記。值得注意的是，大部分 的P/a突變是具有地域局限的?，F(xiàn)仍需要進(jìn)一步的研 究，找出能夠可靠預(yù)測(cè)的青蒿素耐藥性的分子標(biāo)記。 目前，對(duì)這個(gè)觀點(diǎn)持否定態(tài)度的有所增加。2010 年美國(guó)的一個(gè)學(xué)者提出， ACT(artemisi-nincombinationtherapy)療效的下降,和 P/TO影響惡性寄生蟲瘧原蟲紅內(nèi)期連

12、續(xù)培養(yǎng)的因素體外培養(yǎng)瘧原蟲的工作始于本世紀(jì)初。最早從事 這項(xiàng)工作的是Bass和Johns, 1912年他們報(bào)道了在加 有葡萄糖的全血內(nèi)觀察到惡性瘧原蟲可以從環(huán)狀體發(fā) 育到裂殖體。接著人們?cè)噲D建立瘧原蟲紅內(nèi)期的連續(xù) 培養(yǎng)，但一直到60年后，這一努力才獲得成功。兩個(gè) 獨(dú)立的研究組分別報(bào)道了惡性瘧原蟲在體外連續(xù)培養(yǎng) 成功，其中特別是Trager和Jen?sen的方法對(duì)于人瘧 的研究有著劃時(shí)代的意義，使各國(guó)科學(xué)工作者有機(jī)會(huì) 從事臨床上最重要的瘧原蟲的研究工作，同時(shí)也為研 究瘧疾的生物化學(xué)、寄生蟲學(xué)、免疫學(xué)和化學(xué)治療奠 定了基礎(chǔ)。雖然在60年代已能進(jìn)行鳥瘧的紅外期的連續(xù)培 養(yǎng)，但晡乳動(dòng)物紅外期培養(yǎng)一直到

13、1981年才獲得成功對(duì)伯氏瘧方面的這些研究目前也已應(yīng)用于人類間 日瘧原蟲的紅外期培養(yǎng)，瘧原蟲抱子增殖各期均能在 體外發(fā)育，成熟的有感染性的配子體也可從體外培養(yǎng) 得到。但完整的連續(xù)的抱子增殖階段的體外培養(yǎng)至今 尚未成功，紅內(nèi)期無(wú)性體的體外培養(yǎng)。一、體外培養(yǎng)瘧原蟲紅內(nèi)期的研究在1976年前僅限于人和一些動(dòng)物 瘧原蟲的短期保存，尚不能連續(xù)培養(yǎng)。早期的探索雖 然應(yīng)用的原則如稀釋和連續(xù)流灌等方法和以后成功的 方法相似，但有很多不同。Trager和Jensen認(rèn)為下述條件為惡性瘧原蟲培養(yǎng) 成功所必需，一個(gè)人紅細(xì)胞薄層（例如，10%紅細(xì)胞懸 浮液1ml置于？面積內(nèi)所形成的薄層），一層3mm厚的 RP-MI-

14、1640培養(yǎng)液（每升培養(yǎng)液內(nèi)含100mJ與紅細(xì)胞 相應(yīng)的血清），25%,和510%的混合氣體，間斷 或緩慢連續(xù)地更新培養(yǎng)液及隨瘧原蟲率的增加補(bǔ)充新 鮮正常紅細(xì)胞。這些條件可以由許多途徑來(lái)獲得，最簡(jiǎn)單的是用 Petri培養(yǎng)皿在蠟燭缸內(nèi)培養(yǎng)。但使用這一方法每天至 少要人工換液1次，原蟲率超過(guò)5%時(shí)甚至需要多次。 Osisanya等指出如果培養(yǎng)液內(nèi)葡萄糖濃度增加 1倍， 混合氣體比例為5%CO,和5%0,使用TES緩沖液, 則換液次數(shù)可以減少？Trager的連續(xù)流灌培養(yǎng)法可以 獲得連續(xù)的較穩(wěn)定的原蟲率。這種方法使培養(yǎng)液在固 定的紅細(xì)胞薄層上流動(dòng)，培養(yǎng)液貯存瓶一周換一次即 可。目前已進(jìn)一步改進(jìn)設(shè)計(jì)出一

15、些復(fù)雜程度不等的半 自動(dòng)設(shè)備，這些培養(yǎng)系統(tǒng)內(nèi) PH值可以恒定，并可以 自動(dòng)清除廢物及提供新鮮培養(yǎng)液。懸浮培養(yǎng)法連續(xù)培養(yǎng)可以提高原蟲率，相應(yīng)減少 勞力。Butcher和Zoly等聲稱用懸浮培養(yǎng)法獲得的最 終原蟲率比靜止法高。他們認(rèn)為這是由于懸浮法培養(yǎng) 時(shí)紅細(xì)胞重復(fù)感染減少及原蟲感 gle或Hanks鹽溶液 的199培養(yǎng)液進(jìn)行了比較，發(fā)現(xiàn)對(duì)于培養(yǎng)惡性瘧原蟲 來(lái)說(shuō)RPMI164比兩種199培養(yǎng)液好，與Ham氏F-12 液的效果相等。瘧原蟲體外培養(yǎng)時(shí)PH值保持在間很重要。惡性 瘧原蟲培養(yǎng)的成功需要有一恒定的 pH環(huán)境，這一 pH 值是瘧原蟲代謝產(chǎn)生大量乳酸所引起的整個(gè)和局部 PH改變的總和。兩個(gè)成功培

16、養(yǎng)例子中，采用的瘧原蟲 密度都較低，只有早先不成功的1/4-1/2,這就明顯減 少了培養(yǎng)時(shí)的乳酸鹽產(chǎn)物。止匕外，使用了一種兩性離 子緩沖液HEPES,可以對(duì)CO, /NaHCO,緩沖系起輔 助作用。HEPES和TES都是良好的緩沖劑，因?yàn)樵?37 C時(shí)它們的Pk,分別為和，與瘧原蟲生長(zhǎng)的最適 PH十分接近。兩性離子緩沖劑還有一個(gè)優(yōu)點(diǎn)，即在瘧 原蟲生長(zhǎng)需要較高，濃度環(huán)境下可以保持培養(yǎng)物的 PH 值穩(wěn)定。三、氣體相氣體相的組成對(duì)于瘧原蟲的發(fā)育也是一個(gè)關(guān)鍵。2-5匆CO,濃度對(duì)連續(xù)培養(yǎng)中瘧原蟲生長(zhǎng)無(wú)顯著影響，但濃度過(guò)高對(duì)培養(yǎng)有抑制作用。這可能是直接影響了 正常PH范圍的維持，因?yàn)?RPMI1640培

17、養(yǎng)液內(nèi)有一 組CO, /NaHCO,緩沖系。其他哺乳動(dòng)物瘧原蟲在代 謝過(guò)程中有結(jié)合，現(xiàn)象，所以惡性瘧原蟲也可能利用 CO,進(jìn)行代謝。510%,濃度適合于瘧原蟲連續(xù)培養(yǎng)，但高濃度 的氧（相當(dāng)于空氣中的氧濃度卻有抑制作用，雖然 這種作用有時(shí)需要幾天后才能觀察到。氧對(duì)于瘧原蟲 代謝的作用還不清楚，似乎低氧張力有利于培養(yǎng)過(guò)程 中低氧化還原勢(shì)的維持。各種維持低氧化還原勢(shì)劑對(duì) 于短期培養(yǎng)的作用是很不相同的。然而有趣的是 Haynes和他的助手所用的改良的199培養(yǎng)液中卻含有 2種還原劑2-琉基乙醇和維生素E。但瘧原蟲在完全 無(wú)氧環(huán)境中連續(xù)培養(yǎng)沒有成功過(guò)。為了使PH值相對(duì)恒定及保持低氧化還原勢(shì)，培 養(yǎng)皿內(nèi)氣

18、相與液相間需要有足夠的交換。所以氣體在 培養(yǎng)液內(nèi)的溶解度，培養(yǎng)液的深度，紅細(xì)胞的濃度（也 即細(xì)胞層的厚度和氣體溶解度對(duì)于保證充分交換是 至關(guān)重要的。惡性瘧原蟲培養(yǎng)的成功與這些互為相關(guān) 的因素所起的作用分不開。在高原地區(qū)藥物敏感性的 微量測(cè)試所以失敗，可能與以上這些因素有關(guān)。四、血清成功的惡性瘧原蟲紅內(nèi)期連續(xù)培養(yǎng)使用了含 150mI/LAB型人血清的完全培養(yǎng)液。所以選用這一型 血清是由于它不與猴紅細(xì)胞發(fā)生凝集。其實(shí)只要與培 養(yǎng)所用的紅細(xì)胞相適應(yīng) 其他任何型血清都可以應(yīng)用。 150ml/LAB型血清對(duì)于建立新分離株的培養(yǎng)是很必 要的，但在維持已建立的培養(yǎng)時(shí)這一濃度并不是不可 變的。Jensen發(fā)現(xiàn)

19、人血清支持瘧原蟲生長(zhǎng)的能力不一， 有些情況下只端要50ml/L濃度或更低。最近Divo和 Jense而甘出如果 將20個(gè)或20個(gè)以上志愿者的血清收 集在起，那么50mI/L的血清就足以獲得最佳的原蟲生 長(zhǎng)率。含25moL混合血清的培養(yǎng)液也可應(yīng)用于連續(xù)培 養(yǎng)，但獲得的生長(zhǎng)率只有最佳率的 50%左右。從當(dāng)?shù)?血庫(kù)或新鮮收集來(lái)的血清都應(yīng)該貯存于-20 C或凍干, 但反復(fù)凍融的血清不利于培養(yǎng)。Druilhe等認(rèn)為臍帶是 培養(yǎng)瘧原蟲血清的最好來(lái)源，Jensen也證實(shí)了這一點(diǎn)， 但獲得這種血清需與當(dāng)?shù)蒯t(yī)院產(chǎn)科部門密切合作，使 用人血清雖然可以使連續(xù)培養(yǎng)的惡性瘧原蟲生長(zhǎng)達(dá)到 最佳狀態(tài)，但這種對(duì)人血清的依賴也

20、有許多缺點(diǎn)，首 先人血清代價(jià)較大，獲得不易，而且在瘧疾流行區(qū)得 到的血清往往含有某些免疫抑制因子，此外盡管不是 十分重要，需提及的是接觸血清有感染肝炎病毒和其 他病原的危險(xiǎn)。因此尋求人血清的替代品顯得十分重本文為網(wǎng)絡(luò)收集精選范文、公文、論文、和其他應(yīng)用文檔，如需本文，請(qǐng)下載本文為網(wǎng)絡(luò)收集精選范文、公文、論文、和其他應(yīng)用文檔，如需本文，請(qǐng)下載要。最初企圖用現(xiàn)有的商品動(dòng)物血清替代人血清，但 沒有成功。然而Ifediba和Vander-berg卻報(bào)道了可以 用商品小牛血清加100ml/L再生蛋白腺或豚腺150g/L 代替人血清。但瘧原蟲對(duì)這一新環(huán)境需要有9個(gè)月的適應(yīng)過(guò)程。用加入小羊和豬血清的培養(yǎng)液培

21、養(yǎng)瘧原蟲 時(shí)僅觀察到少數(shù)幾代增殖，不能連續(xù)培養(yǎng)。而經(jīng)熱滅 活的馬、小牛和新西蘭白兔血清可以維持連續(xù)培養(yǎng)。 Butcher曾報(bào)道一株實(shí)驗(yàn)室惡性瘧原蟲經(jīng)過(guò)一段適應(yīng) 過(guò)程在用100ml/L馬血清的EPMI1640培養(yǎng)液中培養(yǎng) 了 4個(gè)月。Sax和Rieckmann也認(rèn)為在使用50m/L庫(kù) 存兔血清連續(xù)培養(yǎng)時(shí)需要有一適應(yīng)過(guò)程；但用庫(kù)存的 小牛血清加次黃嗯吟建立蘇丹惡性瘧原蟲分離株連續(xù) 培養(yǎng)前毋需適應(yīng)過(guò)程，最近報(bào)道越南 Smith和馬來(lái)亞 Camp惡性瘧原蟲株可以在無(wú)血清的培養(yǎng)液內(nèi)連續(xù)培 養(yǎng)4周。用含有脂肪酸（即順-十八烯酸、油酸和亞油 酸）和無(wú)脂肪酸小牛血清白蛋白培養(yǎng)液培養(yǎng)瘧原蟲， 雖然生長(zhǎng)率較用血清

22、的為低，但可連續(xù)傳代用含有其 他脂肪酸包括硬脂酸培養(yǎng)液培養(yǎng)瘧原蟲是否會(huì)產(chǎn)生同 樣結(jié)果，有待進(jìn)一步觀察。五、缸細(xì)胞ABO型紅細(xì)胞皆適于連續(xù)培養(yǎng)惡性瘧原蟲，但在 研究紅細(xì)胞表面裂殖子受體時(shí)發(fā)現(xiàn)與血紅蛋白型有關(guān) 的各種因子、各種基本的酶及膜的一些特征在連續(xù)培 養(yǎng)過(guò)程中對(duì)裂殖子的粘附和瘧原蟲的存活起著決定性 作用。因此，可以推測(cè)只要用無(wú) Rh蛋白的，不屬于 Kell、Jk、Tn、Ge和S-s血型的紅細(xì)胞培養(yǎng)惡性瘧原 蟲都可獲得相同的生長(zhǎng)率。相反，缺乏較多的紅細(xì)胞 唾液酸糖蛋白、血型糖蛋白的紅細(xì)胞，例 En陰性紅 細(xì)胞就不能應(yīng)用于培養(yǎng)，因?yàn)橛眠@種紅細(xì)胞短期培養(yǎng) 時(shí)惡性瘧原蟲再侵入率減少。最近還觀察到惡性

23、瘧原 蟲連續(xù)培養(yǎng)多代后可以適應(yīng)于缺乏 6-磷酸葡萄糖脫氫 幅的紅細(xì)胞。早期的研究表明用于惡性瘧原蟲連續(xù)培養(yǎng)的紅細(xì) 胞應(yīng)置于4C冰箱內(nèi)，貯存于檸橡酸葡萄糖（ACD）和 檸橡酸磷酸葡萄糖（CPD）中，并認(rèn)為用這種方法貯存4 周的紅細(xì)胞比新鮮紅細(xì)胞更有利于原蟲生長(zhǎng)?，F(xiàn)在看 來(lái)情況并非如此，只要紅細(xì)胞內(nèi)三磷酸腺昔 （ATP的 水平在正常范圍內(nèi)，新鮮紅細(xì)胞與貯存紅細(xì)胞同樣適 于連續(xù)培養(yǎng)。最近還發(fā)現(xiàn)無(wú)免疫供血者的白細(xì)胞不影 響瘧原蟲體外發(fā)育，因此，可以不必去除它們。有些 去除白細(xì)胞的方法，例如 WhatmanCF-11纖維素柱的 應(yīng)用可能反而對(duì)培養(yǎng)不利。六、瘧原蟲分離株自1976年以來(lái)，世界上不同地區(qū)的許

24、多分離株已 在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)建立。雖然大部分分離株的培養(yǎng)是成功的， 但并不是所有株都容易適應(yīng)于體外生長(zhǎng)。有些地區(qū)的 原蟲株建立培養(yǎng)相當(dāng)困難。Trager認(rèn)為這并不是由于 瘧原蟲的遺傳特性不同而可能是技術(shù)不過(guò)關(guān)造成的。建立培養(yǎng)可以用新鮮感染血，也可以用4 c貯存一段時(shí)間的含蟲血或用-70 C甘油低溫保存的除去保 護(hù)液的含蟲血來(lái)進(jìn)行，一般來(lái)說(shuō)從已建立培養(yǎng)的瘧原 蟲來(lái)進(jìn)行再培養(yǎng)較直接培養(yǎng)現(xiàn)場(chǎng)分離株要容易些。瘧 原蟲分離與建立培養(yǎng)之間的時(shí)間，含蟲血的原蟲率， 運(yùn)輸?shù)姆绞郊皸l件和低溫保存及復(fù)蘇的方法和操作， 這些因素對(duì)建立培養(yǎng)均有影響。不管怎樣，直接自病人血取原蟲建立培養(yǎng)，都需 時(shí)46周，這一適應(yīng)時(shí)間與真核組

25、織細(xì)胞的培養(yǎng)相似。惡性瘧原蟲紅內(nèi)期無(wú)性體體外連續(xù)培養(yǎng)后形態(tài)保 持正常。在培養(yǎng)時(shí)可見到各發(fā)育階段的原蟲，這是因 為瘧原蟲失去了體內(nèi)同步發(fā)育的特征。這對(duì)某一特定 階段的免疫學(xué)和生物化學(xué)研究帶來(lái)一些困難。然而可 以用生理膠、明膠或聚蔗糖等簡(jiǎn)單方法收集成熟的紅 內(nèi)期原蟲，用50g/L山梨醇溶液洗滌感染紅細(xì)胞可獲 得環(huán)狀體。山梨醇能溶解含成熟原蟲的紅細(xì)胞，但對(duì) 環(huán)狀體感染的紅細(xì)胞無(wú)作用。用上述方法分離獲得的 原蟲，繼續(xù)培養(yǎng)時(shí)至少能保持23代的同步發(fā)育，但 以后又變得不同步了。所以目前有必要研究長(zhǎng)期維持 同步的方法。沒有跡象表明體外長(zhǎng)期培養(yǎng)后瘧原蟲會(huì)喪失感染 性，瘧原蟲在幾個(gè)培養(yǎng)系內(nèi)體外培養(yǎng) 3年后仍可感

26、染 夜裝。此外也瞥報(bào)道惡性瘧原蟲 FCR-3株培養(yǎng)大約4 年后偶然感染了人。然而有證據(jù)表明在培養(yǎng)期間原始分離株的一些特 征可能發(fā)生改變。此外，某些分離株需一定時(shí)間適應(yīng) 體外培養(yǎng)的事實(shí)表明，可能是經(jīng)歷一個(gè)選擇過(guò)程。這 并不奇怪，因?yàn)槠渌婧思?xì)胞在體外培養(yǎng)時(shí)也有類似 情況發(fā)生。例如FCK株剛分離時(shí)和體外培養(yǎng)年后對(duì) 氣唾是敏感的，然而經(jīng)4年培養(yǎng)后，發(fā)現(xiàn)該分離株雖 沒有處于氣唾的壓力，但經(jīng)體內(nèi)外證實(shí)，卻對(duì)氣唾產(chǎn) 生了抗性，然而其機(jī)理是在培養(yǎng)過(guò)程中發(fā)生了抗性突 變，或者存在于原始株的抗氯唾克隆由于體外生長(zhǎng)的 生物學(xué)優(yōu)勢(shì)，隨時(shí)間的推移而迅速增長(zhǎng)的緣故，目前 還不清楚。在連續(xù)培養(yǎng)條件下，發(fā)現(xiàn)惡性瘧原蟲可出現(xiàn)

27、形態(tài) 變化。Langretli等首先報(bào)道了這一情況，他們觀察到 惡性瘧原蟲用蠟燭缸法培養(yǎng)18個(gè)月后發(fā)生了變異，這 種變異瘧原蟲寄生的紅細(xì)胞膜表面不再出現(xiàn)結(jié)節(jié)。Motyl和Reece還發(fā)現(xiàn)在培養(yǎng)日t不引起結(jié)節(jié)（K 一）的變 異瘧原蟲比引起結(jié)節(jié)（K+）的瘧原蟲蟲率高，與同位素 標(biāo)記的異亮氨酸結(jié)合較快，多重感染細(xì)胞的百分率也 較高。這樣看來(lái)瘧原蟲具有體外生長(zhǎng)的生物學(xué)優(yōu)勢(shì)。但每4周用一種能濃集有結(jié)節(jié)紅細(xì)胞（K+細(xì)胞的明 膠技術(shù)配合山梨醇的溶解，就幾乎能完全保持細(xì)胞上 有結(jié)節(jié)的K+原蟲系。惡性瘧原蟲在生物學(xué)特性方面的異質(zhì)性問(wèn)越，最 早是Carter和voller提出的。他們發(fā)現(xiàn)非洲和東南亞 病人的陽(yáng)性血

28、內(nèi)有一些變異酶。很明顯，認(rèn)識(shí)這種異 質(zhì)性在流行病學(xué)上很重要，對(duì)近來(lái)體外研究瘧原蟲克 隆化也很有幫助。惡性瘧原蟲的克隆可以用有眼稀釋 技術(shù)獲得，這一點(diǎn)已由顯微鏡觀察稀釋的培養(yǎng)物微滴 和最近的微量操作技術(shù)所證實(shí)。用Oduok方法在1小 時(shí)內(nèi)可以分離單個(gè)感染細(xì)胞5 10次。這種方法經(jīng)連續(xù) 培養(yǎng)建立克隆的成功率為30?50%,由單個(gè)感染細(xì)胞建 立的克隆大約在培養(yǎng)21天內(nèi)可從吉氏液染色的血片 上發(fā)現(xiàn)原蟲，Thaithong應(yīng)用這一方法證實(shí)了一個(gè)抗氣 唾、乙胺喀陡和周效磺胺-乙胺喀陡合劑的惡性瘧原蟲 T分離株。七、藥物抗性和群體內(nèi)傳播機(jī)制的遺傳學(xué)研究藥物抗性問(wèn)題是瘧疾控制的主要障礙，但關(guān)于抗 性出現(xiàn)及其在

29、人群中傳播的機(jī)制目前還不清楚?？赡?有許多機(jī)制包括瘧原蟲對(duì)藥物的非遺傳性適應(yīng)或在藥 物作用下遺傳性的改變等等。目前遺傳學(xué)方面的研究 主要用鼠瘧為模型在體內(nèi)進(jìn)行。體外培養(yǎng)技術(shù)和具有 多種抗藥性的惡性瘧原蟲克隆的研究表明來(lái)源于不同 國(guó)家的瘧原蟲遺傳學(xué)上是相似的，這可能是存在著一 種世界范圍內(nèi)的種間雜交群。用培養(yǎng)的方法還證實(shí)抗氣唾株瘧原蟲比 敏感株具有生物學(xué)優(yōu)勢(shì)，抗性分離株包含著藥敏程度 不同的許多克隆，當(dāng)然也包括了敏感克隆。至于藥物 敏感株中是否含有抗性克隆，尚有待于進(jìn)一步證實(shí)。目前，培養(yǎng)技術(shù)和重組 DNA分析及基因克隆正 被應(yīng)用于藥物抗性遺傳學(xué)基礎(chǔ)的研究。止匕外，由于紅 內(nèi)期和紅外期體外培養(yǎng)的成功，可以得到對(duì)蚊蟲有感 染性的瘧原蟲，這樣就有可能開展一些典型的孟德爾 方法的遺傳學(xué)工作。八、抗原產(chǎn)生雖然瘧原蟲培養(yǎng)并不是用作今后瘧疾疫苗抗原的 來(lái)源，但紅內(nèi)期的培養(yǎng)確實(shí)為免疫診斷提供了很有價(jià) 值的抗原。實(shí)驗(yàn)室用能夠保持人瘧原蟲的猴子作為抗 原來(lái)源，一則化費(fèi)太大，再則獲得的材料也太少。瘧 原蟲全蟲抗原可以由同步培養(yǎng)的血片獲得，可溶性抗 原則可以經(jīng)瘧原蟲溶解或收集培養(yǎng)上清液獲得。目前 在標(biāo)準(zhǔn)條件下惡性瘧原蟲是唯一能在體外獲得大量抗 原的人瘧原蟲，但應(yīng)當(dāng)記住各分離株間可能存在著不 同的抗原。很有必要研究其他的人拒原蟲體外培養(yǎng)方 法。在缺乏