藥物分析實(shí)驗(yàn)資料

1、藥物分析實(shí)驗(yàn)2012年 9月實(shí)驗(yàn)一薄層色譜檢查雜質(zhì)（一 ） 薄層板的制備（二 ） 自制撲痛的雜質(zhì)檢查實(shí)驗(yàn)二阿司匹林片的分析實(shí)驗(yàn)三鹽酸普魯卡因注射液的分析實(shí)驗(yàn)四高效液相色譜法測(cè)定阿莫西林膠囊的含量實(shí)驗(yàn)五氣色譜法測(cè)定酊劑中乙醇含量附錄 13 藥品檢驗(yàn)操作標(biāo)準(zhǔn)原料藥檢驗(yàn)報(bào)告書(shū)成品檢驗(yàn)報(bào)告書(shū) 標(biāo)準(zhǔn)液配制及標(biāo)定記錄薄層色譜檢查雜質(zhì)一、目的1. 了解藥物雜質(zhì)檢查的意義。2. 掌握薄層色譜檢查雜質(zhì)的原理和方法。3. 掌握雜質(zhì)限量的計(jì)算方法。二、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容（ 一 ） 薄層板的制備1. 羧甲基纖維素鈉溶液的配制稱(chēng)取羧甲基纖維素鈉1-2g 備用。在帶有攪拌子的燒杯內(nèi)加入200-400ml 純凈水 （加入水量為羧甲基

2、纖維素鈉稱(chēng)取量的 200倍） ，在開(kāi)啟攪拌的情況下，將羧甲基纖維素鈉緩慢均勻地撒到燒杯內(nèi)的水中，不停攪拌，使羧甲基纖維素鈉和水充分融合，加完后于攪拌下加熱使羧甲基纖 維素鈉充分溶解，放涼，備用。2. 硅膠板的制作取硅膠H或GF254約2g,以玻棒攪動(dòng)下緩慢加入0.5 %竣甲基纖維素鈉水溶液適量 調(diào)成粘度適當(dāng)?shù)暮隣?，取少許硅膠糊均勻涂布于玻璃板（5 X 15cm）上，置水平臺(tái)上，在空氣中晾干（陰干），待板上濕圈消失后再于110烘0.5-1 小時(shí)，取出放置干燥器中備用。（ 二 ） 自制撲痛的雜質(zhì)檢查1. 展開(kāi)系統(tǒng)預(yù)測(cè)取撲熱息痛純品少許，加丙酮（或無(wú)水乙醇）完全溶解，取干燥薄層板點(diǎn)樣，以氯仿：丙酮：

3、甲苯（大約比例13 ： 5 ： 2 ）展開(kāi)，測(cè)定藥物斑點(diǎn) Rf,調(diào)整丙酮加入量使 Rf = 0.7 為佳，此時(shí)采用的即為合適展開(kāi)劑。2. 樣品雜質(zhì)觀(guān)察取自制撲痛少許，加丙酮（或無(wú)水乙醇）完全溶解，點(diǎn)樣，展開(kāi)，燈下觀(guān)察雜質(zhì)情況（多少、斑點(diǎn)位置及明暗程度等）。3. 雜質(zhì)限度檢測(cè)取自制撲痛少許，于5ml 容量瓶中加丙酮適量使全部溶解，以丙酮稀釋至刻度，即為樣品液。精密量取樣品液適量，采用不同規(guī)格容量瓶（3 個(gè)）以丙酮稀釋100、 150或 200倍，得參比液1、 2 或 3。干燥薄層板，同時(shí)取相同體積樣品液和參比液點(diǎn)樣，展開(kāi)，燈下觀(guān)察、比較，對(duì)比藥物主斑點(diǎn)與雜質(zhì)斑點(diǎn)。樣品雜質(zhì)斑點(diǎn)不深于參比液藥物主斑

4、點(diǎn)時(shí)即檢得雜質(zhì)限度。阿司匹林片的分析一、目的1. 掌握片劑分析的特點(diǎn)及賦形劑的干擾與排除方法。2. 掌握阿司匹林片鑒別、檢查、含量測(cè)定的原理及方法。二、操作 鑒別 1 . 取本品的細(xì)粉適量（約相當(dāng)于阿司匹林0.1g） ，加水 10ml 煮沸，放冷，加三氯化鐵試液1滴，即顯紫堇色。2 .取本品的細(xì)粉（約相當(dāng)于阿司匹林 0.5g）,加碳酸鈉試液10ml,振搖后，放置5分鐘，濾過(guò)，濾液煮沸2 分鐘，放冷，加過(guò)量的稀硫酸，即析出白色沉淀，并發(fā)生醋酸的臭氣。 檢查 游離水楊酸取本品的細(xì)粉適量（約相當(dāng)于阿司匹林0.1g） ， 加無(wú)水氯仿3ml， 不斷攪拌2分鐘， 用無(wú)水氯仿濕潤(rùn)的濾紙濾過(guò)，濾渣用無(wú)水氯仿洗

5、滌2次，每次1ml,合并濾液與洗液，在室溫下通風(fēng)揮發(fā)至干；殘?jiān)脽o(wú)水乙醇4ml 溶解后，移至100ml 量瓶中，用少量5乙醇洗滌容器、洗液并入量瓶中，加5%乙醇稀釋至刻度，搖勻，分取 50ml,立即加新制的稀硫酸鐵鏤溶液取鹽酸液（1mol/L）1ml ， 加硫酸鐵銨指示液2ml 后， 再加水適量使成100ml 1ml， 搖勻；30秒鐘內(nèi)如顯色，與對(duì)照液（精密稱(chēng)取水楊酸0.1g,置1000ml量瓶中，加冰醋酸1ml,搖勻，再加水適量至刻度， 搖勻，精密量取1.5ml,加無(wú)水乙醇2ml與5%乙醇使成50ml,再加上述新制的稀硫酸鐵鏤溶液 1ml,搖勻）比較，不得更深。 含量測(cè)定取本品 10 片，精

6、密稱(chēng)定，研細(xì)，精密稱(chēng)出適量（ 約相當(dāng)于阿司匹林0.3g） ，置錐形瓶中，加中性乙醇（對(duì)酚酬:指示液顯中性）20ml ,振搖，使阿司匹林溶解，加酚Mt指示液3滴，滴加氫氧化鈉滴定液（0.1mol/L） 至溶液顯粉紅色，再精密加氫氧化鈉滴定液（0.1mol/L）40ml ， 置水浴上加熱15 分鐘并時(shí)時(shí)振搖，迅速放冷至室溫，用硫酸滴定液（0.05mol/L） 滴定，并將滴定的結(jié)果用空白試驗(yàn)校正。每1ml 氫氧化鈉滴定液（0.1mol/L） 相當(dāng)于 18.02mg 的 C9H8O4。本品含阿司匹林（C9H8Q）應(yīng)為標(biāo)示量的95.0 105.0 %。三、說(shuō)明1 .楊酸與三氯化鐵試液顯紫堇色。2 .為消

7、除阿司匹林水解產(chǎn)物水楊酸，醋酸及穩(wěn)定劑枸椽酸、 酒石酸對(duì)含量測(cè)定的影響故采用兩步滴定法。第一次滴定:CH3COOH NaO+CH3COONa H2ONaOHNaOHH2O+ H2OCH 2COONa第二次滴定:+ 3NaOH HO C COONa + 3H 2CH 2cOONa四、思考題1 .簡(jiǎn)述鑒別試驗(yàn)的原理。2 .檢查游離的水楊酸時(shí)， 為防止阿司匹林水解，操作中應(yīng)注意哪些問(wèn)題 ？計(jì)算供試品中阿司匹林的限量。3 .含量測(cè)定時(shí)，為什么要作空白試驗(yàn)？空白試驗(yàn)的操彳如何進(jìn)行 ？為什么加中性乙醇溶解供試品？如何制備中性乙醇？4. 你認(rèn)為含量測(cè)定時(shí)，應(yīng)注意哪些問(wèn)題才可以獲得準(zhǔn)確的結(jié)果？鹽酸普魯卡因注射

8、液的分析一、目的1. 掌握用薄層層析法檢查鹽酸普魯卡因注射液中對(duì)氨基苯甲酸限量的原理及方 法。2. 掌握用分光光度法測(cè)定鹽酸普魯卡因含量的原理及方法。二、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容（ 一 ） 鑒別取本品適量（ 約相當(dāng)于鹽酸普魯卡因50mg）， 加稀鹽酸1ml， 加 0.1mol/L亞硝酸鈉溶液數(shù)滴，滴加堿性B-茶酚試液數(shù)滴，生成橙紅色沉淀。（ 二 ） 對(duì)氨基苯甲酸的檢查薄層層析法：精密量取本品，加乙醇稀釋成每 1ml中含鹽酸普魯卡因2.5mg的溶液, 作為供試品溶液，另取對(duì)氨基苯甲酸對(duì)照品，加乙醇制成每1ml含30g的溶液，作為對(duì)照品溶液，吸取上述兩種溶液各10仙l ,分別點(diǎn)于含有竣甲基纖維素鈉為粘合 劑的硅膠

9、H薄層板上，用苯一冰醋酸一丙酮一甲醇（14 ： 1 ： 1 ： 4）為展開(kāi)劑，展開(kāi)后, 取出晾干，用對(duì)一二甲氨基苯甲醛溶液2對(duì)一二甲氨基苯甲醛乙醇溶液100ml，加入冰醋酸5ml 制成噴霧顯色。供試溶液如顯與對(duì)照品相應(yīng)的雜質(zhì)斑點(diǎn)，與對(duì)照品溶液的主斑點(diǎn)比較，不得更深。（ 三 ） 含量測(cè)定精密量取本品1ml 于 100ml 量瓶中， 加水至刻度，搖勻， 精密量取此稀釋液10ml于另一 100ml量瓶中，加水至刻度（即每1ml含鹽酸普魯卡因10仙g）,搖勻，照分光 1光度法在290nm的波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度，按C3HHQ HCl的吸收系數(shù)（E為680計(jì)算，即得。三、說(shuō)明1.鹽酸普魯卡因，對(duì)氨基苯甲酸在冰

10、醋酸中與對(duì)二甲氨基苯甲醛縮合而呈色。2H 5)2 . HCH3C.+ H3CCHO H-2CH2N(C 2H 5)2四、思考題計(jì)算用TLC法檢查對(duì)氨基苯甲酸的限量。高效液相色譜法測(cè)定阿莫西林膠囊含量、目的1 .熟悉HPLCt測(cè)定的原理及操作；2掌握外標(biāo)法測(cè)定阿莫西林膠囊含量。、操作1鑒別取本品內(nèi)容物適量，在含量測(cè)定項(xiàng)下記錄的色譜圖中，供試品主峰的保留時(shí)間應(yīng)與對(duì)照品主峰的保留時(shí)間一致。2含量測(cè)定（ 1） 譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以磷酸鹽緩沖液（pH5.0）（取磷酸二氫鉀13.6g,加水溶解后稀釋到2000ml,用 8mol/L氫氧化鉀溶液調(diào)節(jié)pH值至5.0

11、77;0.1 ）-乙月青（96 ： 4）為流動(dòng)相；流 速為每分鐘約1.0ml ;檢測(cè)波長(zhǎng)254nm理論板數(shù)按阿莫西林峰計(jì)算應(yīng)不低 于 1700。（2）對(duì)照溶液配制：取阿莫西林對(duì)照品約 30mg精密稱(chēng)定,置50ml量瓶 中，加磷酸鹽緩沖液（pH5.0）溶解并稀釋至刻度，搖勻即得。（ 3） 樣品測(cè)定：取裝量差異項(xiàng)下的內(nèi)容物，混合均勻，精密稱(chēng)取適量，加磷酸鹽緩沖液（pH5.0）溶解并稀釋成每ml中約含0.6mg的溶液，濾過(guò)，取 續(xù)濾液20仙L注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另取阿莫西林對(duì)照溶液同法測(cè) 定。按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算出樣品中阿莫西林（C9HwNQS）的含量。本品含阿莫西林（019Hl9NOS）應(yīng)

12、為標(biāo)示量的90.0%110.0%。三、說(shuō)明1 .阿莫西林結(jié)構(gòu)如下:fj 110H乂3依CuHiOjS SH我國(guó)藥典收載的相關(guān)制劑主要有片劑、膠囊劑及注射用阿莫西林鈉。氣相色譜法測(cè)定酊劑中乙醇含量一、 目的：1. 熟悉氣相色譜法中內(nèi)標(biāo)加校正因子測(cè)定含量的方法。2. 了解氣相色譜法在藥物分析中的應(yīng)用。二、操作：1. 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：用直徑為0.250.18mm的二乙烯苯（為橫紅）乙烯苯型高分子高孔小球作為載體，柱溫為120150C；精密量取無(wú)水乙醇4、5、6ml,分別精密加入正丙醇 5ml,加水稀釋成100ml,混勻（必要時(shí)進(jìn)一步稀釋?zhuān)?，取上述三份溶液適量，各進(jìn)樣5次，應(yīng)符合下述要求：用正丙醇計(jì)算

13、的塔板數(shù)應(yīng)大于700；乙醇與正丙醇兩峰的分離度應(yīng)大于2；上述 3 份溶液各進(jìn)樣5 次，所得15 個(gè)校正因子變異系數(shù)不得大于2.0。2. 標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備精密量取恒溫至20c的無(wú)水乙醇和正丙醇各 5ml,加水稀釋成100ml,混勻，即得。3. 供試溶液的制備精密量取恒溫至20c的從試品適量（相當(dāng)于乙醇約5ml）和正丙醇5ml,加水稀釋 成100ml,混勻，即得。上述兩種溶液必要時(shí)可進(jìn)一步稀釋。4. 測(cè)定法取標(biāo)準(zhǔn)溶液與試溶液適量，分別連續(xù)注樣3 次， 并計(jì)算出校正因子和供試品的乙醇含量，取3 次計(jì)算的平均值作為結(jié)果。三、說(shuō)明：1 .在不含內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的供試溶液的色譜圖中，內(nèi)標(biāo)物質(zhì)峰的位置處應(yīng)不出現(xiàn)雜質(zhì)

14、峰。2 .標(biāo)準(zhǔn)溶液與供試溶液連續(xù) 3次注樣所得各次校正因子和乙醇含量與其相應(yīng)的 平均值的相對(duì)偏差，均不得大于1.5%,否則應(yīng)重新測(cè)定。3 .選用其他載體時(shí)，系統(tǒng)適用性驗(yàn)必須符合本法規(guī)定。4 .色譜柱的理論塔板數(shù)（n）計(jì)算公式為：n=5.54（t mJ其中：tR為供試品主成分或內(nèi)標(biāo)物質(zhì)峰的保留時(shí)間，W/2為半高峰寬。5 .分離度（R）的計(jì)算公式為：式中：tR2為相鄰后一峰的保留時(shí)間tR1為相鄰前一峰的保留時(shí)間W1、W為此相鄰二峰的基線(xiàn)峰寬除另有規(guī)定上，分離度應(yīng)大于1.5。6 .拖尾因子（T）的計(jì)算公式為：T=W0p5h式中：W05h為0.05峰高處的峰寬；d 1為0.05峰高處峰極大至峰前沿之間

15、的距離。除另有規(guī)定外，T應(yīng)在0.951.05問(wèn)。7 .校正因子 的計(jì)算公式為：式中：As為內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的峰面積或峰高；Ar為對(duì)照品的峰面積或峰高；ms為加入內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的量；mr為加入對(duì)照品的量。8 . 含量計(jì)算公式為：含量(mi)=f x式中： f 為校正因子；Ai 為供試品( 或其雜質(zhì)) 峰面積或峰高；As 為內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的峰面積或峰高；m s 為加入內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的量。四、思考題1. 氣相色譜分析中有哪幾種定量方法?試簡(jiǎn)單闡述各方法的優(yōu)缺點(diǎn)。2. 色譜系統(tǒng)適用試驗(yàn)的目的與指標(biāo)是什么?3. 內(nèi)標(biāo)法定量時(shí)，內(nèi)標(biāo)的選擇原則有哪些?附1中華人民共和國(guó)專(zhuān)業(yè)標(biāo)準(zhǔn)ZBC 10001 10007-8藥品檢驗(yàn)操作標(biāo)準(zhǔn)原料藥檢驗(yàn)報(bào)告書(shū)編號(hào):品 名包裝規(guī)格進(jìn)廠(chǎng)編號(hào)廠(chǎng)牌來(lái)源數(shù) 量取樣日期 年 月 日取樣件數(shù)報(bào)告日期 年 月 日依 據(jù)用料車(chē)間檢驗(yàn)結(jié)果:判定:質(zhì)檢科長(zhǎng)復(fù)核員檢